不同水平干预对AngⅡ作用心肌细胞活力的影响

目的：通过使用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)两种亚型受体AT1-R、AT2-R拮抗剂(Valsartan和CGP42112A)及丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)特异阻断剂，观察对心肌细胞活力的影响，探讨从受体和MAPK信号不同水平的阻断是否能有效干预心肌细胞能量代谢，为寻找新的心衰预防与治疗药物提供实验依据。方法：应用MTT比色法测定AngⅡ对培养心肌细胞活力的影响和AngII受体拮抗剂及MAPK抑制剂的干预作用。结果：AngⅡ刺激心肌细胞在10^-8～10^-5mol／L浓度范围，一定时间内呈浓度依赖性增加心肌细胞活力变化；使用Valsartan、PD98059可有效抑制AngII引起的心肌细胞活力改变；CGP42112A干预后对AngⅡ作用无明显影响。结论：AngⅡ的作用主要通过AT1-R介导；与细胞增殖、分化密切相关的ERK信号介入了心肌细胞能量代谢的过程，这对了解AngⅡ在心功能不全代偿和心力衰竭发生中的作用及临床上探讨细胞信号系统不同层面对心衰进行干预具有重要参考价值。     

PD098059抑制血管紧张素Ⅱ对心肌细胞活力的影响

目的 :观察分裂酶原激活的蛋白激酶系统 (MAPK)特异阻断剂PD0 980 5 9对心肌细胞活力与增殖能力的影响 ,探讨细胞内信号传递通路的阻断是否能有效地干预细胞能量代谢 ,为寻找新的心衰的预防与治疗药物提供实验依据。方法 :利用培养的乳鼠心肌细胞 ,根据活细胞线粒体在能量代谢过程中可作用于MTT产生蓝紫色结晶产物formazan这一原理 ,应用比色法测定血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对培养心肌细胞的活力的影响和PD0 980 5 9的干预作用。结果 :与对照组相比 ,AngⅡ在 12h之内使formazan产物的OD值逐渐上升 ,12h达到高峰 ,此后开始下降 ,至 2 4h已低于正常水平 ,它们的OD值之间均有显著的统计学差异 (P <0 0 5或 0 0 1) ,PD0 980 5 9可以显著的拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响。 结论 :该结果提示PD0 980 5 9可以显著的拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响。这对了解AngⅡ在心功能不全代偿和心衰发生中的作用及临床上应用细胞内信号系统阻断剂治疗和预防心衰具有重要参考价值     

高甲状腺素模型心室组织中血管紧张素转化酶及血管紧张受体的表达

目的 研究甲状腺功能亢进(简称甲亢)性心肌病兔心室组织血管紧张素转化酶(ACE)及血管紧张受体表达,探讨甲亢性心肌病的发病机制.方法 健康成年新西兰大白兔40只,随机分为4组:对照组,左旋甲状腺素(L-thy) 组,咪哒普利组(L-Thy+Imidapril),缬沙坦组(L-Thy+Valsartan).L-Thy[45 μg/(kg·d)×28 d]腹腔注射建立甲亢动物模型,测定左右心室心肌肥厚指数、心肌细胞直径,Masson′s 染色测定胶原容积分数,放免法检测血浆及组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度,RT-PCR半定量检测ACE、血管紧张素受体1(AT1R)、血管紧张素受体2(AT2R) mRNA表达,Western blot检测ACE、AT1R、AT2R蛋白表达.结果 L-Thy可诱导心肌肥厚及心肌纤维化,血浆与局部组织AngⅡ浓度升高, ACE mRNA及蛋白表达上调,AT1R、AT2R mRNA及蛋白表达上调.咪哒普利和缬沙坦均可显著抑制L-Thy诱导的心肌细胞肥厚和纤维化,咪哒普利可降低血浆与局部心肌组织AngⅡ水平,对AT1R、AT2R和ACE的表达无影响.缬沙坦显著升高血浆AngⅡ浓度,但不升高组织AngⅡ浓度;且显著上调AT1R、AT2R mRNA表达,对ACE的表达无影响.结论 甲亢性心肌病兔有循环和组织AngⅡ浓度升高,AT1R、AT2R和ACE 表达上调,肾素-血管紧张素系统(RAS)可能参与甲亢性心肌病的发病机制.咪哒普利和缬沙坦可以改善L-Thy诱导的心肌重构.     

p38-MAPK介导AT2R对低氧/复氧损伤后PC12细胞的保护作用研究

目的 探讨p38-丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)活化影响缺氧/复氧(H/R)损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞存活中的作用.方法 以连二亚硫酸钠(Na2S2O4)模拟细胞缺氧反应的环境,复制H/R损伤细胞模型(对照组),给予AT2R激动剂(CGP42112,CGP42112组)、p38-MAPK抑制剂(SB203580,SB203580组)和(或)AT2R抑制剂(PD123319)分别处理细胞,四氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Bax和Bcl-2 mRNA表达,Western blot检测磷酸化p38-MAPK(p-p38-MAPK)、Bax和Bcl-2蛋白表达.结果 与对照组比较,CGP42112组和SB203580组PC12细胞存活率升高(P<0.05).CGP42112可下调细胞中p-p38-MAPK蛋白表达,PD123319可上调p-p38-MAPK蛋白表达,且均呈浓度和时间依赖性(P<0.05).CGP42112组和SB203580组Bax mRNA及蛋白表达水平降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05).结论 AT2R活化可通过调控p38-MAPK信号通路而影响Bcl-2和Bax的表达,促进H/R损伤PC12细胞的存活.     

MAPKs阻断剂对乳鼠心肌细胞能量代谢的影响

目的 :在原代培养的心肌细胞上观察分裂酶原激活的蛋白激酶系统 (MAPKs)特异阻断剂PD0 980 5 9对心肌细胞活力与增殖能力的影响 ,旨在探讨细胞内信号传递通路的阻断是否能有效地干预细胞能量代谢 ,为寻找新的心衰预防与治疗药物提供实验依据 .方法 :利用培养的乳鼠心肌细胞 ,根据活细胞线粒体在能量代谢过程中可作用于MTT产生蓝紫色结晶产物formazan这一原理 ,应用比色法测定血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对培养心肌细胞的活力的影响和PD0 980 5 9的干预作用 .结果 :AngⅡ在 12h内使formazan产物的值逐渐上升 ,12h达到高峰 (A值 :0 .36 4 3± 0 .0 2 4 1) ,此后开始下降 ,至2 4h已低于正常水平 (A值 :0 .2 785± 0 .0 912 ) ,它们的值之间均有显著性统计学差异 (P <0 .0 5或 0 .0 1) ,PD0 980 5 9可以显著地拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响 .结论 :PD0 980 5 9可以显著地拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响     

AT2R基因可调控表达对体外培养VSMC纤维黏连蛋白表达的影响

目的 利用Dox-on可调控哺乳动物表达系统,建立起了受四环素类似物Doxycycline(Dox)紧密调控、表达AT2R基因的双重稳定血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC),在此基础上对纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)的表达受AngⅡ及其受体拮抗剂的影响进行研究.方法 建立Dox可调控表达AT2R基因的双重稳定大鼠VSMC细胞,观察该VSMC细胞中AT2R受调控表达情况,以及血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ,AngⅡ)及其1型、2型受体拮抗剂干预上述细胞后FN的mRNA及蛋白表达情况变化.结果 Dox-on可调控哺乳动物表达系统可成功介导AT2R基因在原代培养大鼠主动脉VSMC的表达,该表达受到Dox给予/去除的紧密调控;Dox干预可在48 h内迅速诱导该VSMC细胞表达AT2R,AT2R表达在Dox干预后72 h进一步增强(P＜0.01).AT2R基因的可调控表达抑制由于AngⅡ干预VSMC后引起FN表达的增强(P＜0.01).这一作用被AT1R拮抗剂CV-11974进一步增强(P＜0.01);而被加入AT2R拮抗剂干预而取消;同时给予AT1R拮抗剂和AT2R拮抗剂时FN的表达与基础状态时的情况一致.结论 AngⅡ干预增强FN的表达,该作用是通过AT1R介导的;经Dox 诱导表达AT2R基因可以明显抑制这一生物学作用,说明在这一生物学效应上,AT2R具有与AT1R相拮抗的生物学功能.     

丝裂素活化蛋白激酶参与AngII诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体的表达

目的　探讨丝裂素活化蛋白激酶在血管紧张素II(AngII)诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体 - β(PDGF - β)表达中的作用。 方法　分离纯化培养的乳鼠心肌细胞 ,以10 -7mol·L-1AngII刺激为AngII组 ;以 10 -5mol·L-1PD980 5 9(一种丝裂素活化蛋白激酶抑制剂 )预孵育 30min10 -7后再用AngII刺激为PD980 5 9组 ,以正常的乳鼠心肌细胞为对照组 ;免疫印迹法测定培养 2 4h时心肌细胞PDGF - β受体的含量。 结果　AngII刺激培养 2 4h的乳鼠心肌细胞PDGF - β受体表达增强 (P <0 .0 5 ) ,PD980 5 9可部分抑制AngII对PDGF - β受体表达的诱导作用。结论　丝裂素活化蛋白激酶参与AngII上调心肌细胞PDGF - β受体表达的信号转导途径     

血管紧张素Ⅱ预处理提高间充质干细胞耐缺氧能力

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)预处理对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)耐缺氧能力的影响。方法:分离培养大鼠MSCs,应用CD29、CD11b/c抗体进行细胞鉴定。对细胞以不同浓度AngⅡ预处理3 h,采用缺氧联合无血清(hypoxia/SD)的方法诱导缺氧损伤模型;应用血管紧张素1型受体(AT1)拮抗剂氯沙坦(losartan)、血管紧张素2型受体(AT2)拮抗剂PD123319进行干预。应用MTT和CCK-8法测定细胞活力以确定最佳刺激浓度,采用台盼蓝染色,CCK-8检测和流式细胞术测定各组细胞活力和凋亡率。结果:①MSCs表面抗原CD29阳性率>97%,CD11b/c阳性率<1%;②AngⅡ预处理显著提高MSCs的活力,减少细胞凋亡率;③AngⅡ对MSCs的预适应保护作用呈现一定的浓度依赖性,最佳浓度为10nmol/L;④氯沙坦可抑制AngⅡ的预适应细胞保护作用,而PD123319无此效应。结论:AngⅡ通过AT1受体发挥对MSCs的预适应保护作用。     

血管紧张素II受体与丝裂原激活蛋白激酶及对心血管系统的意义

血管紧张素II(Angiotensin II,AngII)是一种重要的心血管活性物质,其受体亚型的作用及信号途径各有特点,不同受体经同一信号途径的作用意义也不同。丝裂原激活的蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)是广泛存在于哺乳动物体内的信号途径,在各种应激反应中可被激活。AngII经其不同受体激活MAPK信号途径在心血管系统中可发挥重要的病理生理作用。     

AT2受体通过NO途径降低肾脏近曲小管AT1受体表达

目的研究AT2受体激动剂CGP42112对肾脏近曲小管上皮细胞(RPT)AT1受体表达的影响及其作用机制。方法以WKY(Wistar-Kyoto)大鼠的RPT细胞株为研究对象,采用免疫印迹法测定AT2受体激动剂CGP42112对AT1受体蛋白表达的影响,RT-PCR检测AT1受体mRNA表达水平的改变,硝酸还原酶法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)含量。结果 AT2受体激动剂CGP42112 10-7mol/L作用24 h可以明显抑制WKY大鼠RPT细胞AT1受体的蛋白与mRNA表达水平(P<0.05)。CGP42112对AT1受体表达的抑制作用可被AT2受体特异性拮抗剂PD123319(10-6mol/L)所阻断。与对照组比较,CGP42112刺激RPT细胞30 min后,NO的合成含量明显升高;NO合成酶抑制剂L-NAME(10-4mol/L)可以阻断CGP42112对AT1受体表达的抑制效应。结论 AT2受体能够抑制WKY大鼠RPT细胞AT1受体的表达水平,该作用可能与NO途径有关。     

ROLE OF CALCINEURIN IN ANGIOTENSIN II－INDUCED CARDIAC MYOCYTE HYPERTROPHY OF RATS

OBJECTIVE: The present study investigated the role of calcineurin in angiotensin II(AngII) -induced cardiac myocyte hypertrophy of rats. METHOD: The primary cardiac myocytes were cultured under the standard conditions. The calcineurin activity in AngII-treated cardiomyocytes was tested by using PNPP; protein synethsis rate was assessed by 3H-leucine incorporation; atrial natriuretic factor(ANF) mRNA level was determined by Northern blot analysis. Cell viability was estimated by lactate dehydrogenase (LDH) levels in cultured medium and by dyed cell numbers. RESULT: After stimulation of 10, 100 and 1 000 nmol/L of AngIi, calcineurin activities in the cardiomyocytes were increased by 13%, 57% (P < 0.05) and 228% (P < 0.01) respectively, compared with control group. Cyclosporin A(CsA), a specific inhibitor of calcineurin, markedly inhibited the calcineurin activity and decreased the 3H-leucine incorporation in AngII-treated cardiomyocytes in a dose-dependent manner. It was also found that CsA slightly reduced the mRNA level of ANF gene in AngII-stimulated cardiomyocytes. CONCLUSION: During AngII-induced cardiac myocyte hypertrophy, calcineurin signal pathway is activated, and inhibition of the pathway can attenuate AngII-induced cardiac myocyte hypertrophy, which suggests that the calcineurin signal pathway may play an important role in AngII-induced myocardial hypertrophy of rats.     

ROLE OF CALCINEURIN IN ANGIOTENSIN II INDUCED CARDIAC MYOCYTE HYPERTROPHY OF RATS

Objective. The present study investigated the role of calcineurin in angiotensin II(AngII) induced cardiac myocyte hypertrophy of rats. Method. The primary cardiac myocytes were cultured under the standard conditions. The calcineurin activity in AngII treated cardiomyocytes was tested by using PNPP;protein synethsis rate was assessed by 3H leucine incorporation; atrial natriuretic factor(ANF) Mrna level was determined by Northern blot analysis. Cell viability was estimated by lactate dehydrogenase(LDH) levels in cultured medium and by dyed cell numbers. Result. After stimulation of 10,100 and 1 000nmol/L of AngII, calcineurin activities in the cardiomyocytes were increased by 13％ ,57％ (P< 0.05) and 228％ (P< 0.01) respectively, compared with control group. Cyclosporin A(CsA), a specific inhibitor of calcineurin, markedly inhibited the calcineurin activity and decreased the 3H leucine incorporation in AngII treated cardiomyocytes in a dose dependent manner. It was also found that CsA slightly reduced the Mrna level of ANF gene in AngII stimulated cardiomyocytes. Conclusion. During AngII induced cardiac myocyte hypertrophy, calcineurin signal pathway is activated, and inhibition of the pathway can attenuate AngII induced cardiac myocyte hypertrophy, which suggests that the calcineurin signal pathway may play an important role in AngII induced myocardial hypertrophy of rats.     

PPAR-γ激动剂对AngⅡ刺激血管内皮细胞分泌血管活性因子的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂对AngⅡ刺激血管内皮细胞分泌血管活性因子的影响,并与AngⅡⅠ型受体(AT1R)拮抗剂losartan相对照,即从细胞水平进一步揭示PPARγ与高血压病的关系.方法 以脐静脉内皮细胞为研究对象,观察PPARγ激动troglitazone对内皮细胞分泌内皮素-1(ET-1)和NO的影响,及其对AngⅡ刺激内皮细胞分泌ET-1和NO的影响,并与losartan相对照.结果 10 μmol/L和50μmol/L troglitazone使人脐静脉内皮细胞分泌ET-1含量与对照组相比虽有下降但无统计学意义,而NO与对照组相比明显升高(P＜0.05);50μmol/L troglitazone可明显抑制AngⅡ(1×10-6 mol/L)刺激的ET的分泌(P＜0.05);两种浓度troglitazone均能抑制AngⅡ对内皮细胞生成NO的减低作用(P＜0.05);losartan抑制AngⅡ刺激内皮细胞合成和分泌ET-1增加和抑制AngⅡ减弱内皮细胞合成和分泌NO的作用比troglitazone更为明显(P＜0.05).结论 PPARγ激动剂troglitazone可抑制AngⅡ刺激内皮细胞合成和分泌ET-1的增加和NO的减少,但其作用并没有losartan明显,提示troglitazone通过影响血管活性因子的分泌而调节血压的作用并非完全是通过AT1R途径.     

线粒体外膜电压依赖性阴离子通道与心力衰竭

心力衰竭是各种心血管疾病发展的终末阶段 ,在其发展过程中 ,心功能不断恶化。目前 ,对心力衰竭中与心功能恶化有关的细胞和分子机制仍不十分清楚。多数学者认为心肌细胞能量代谢障碍及凋亡 (即程度性死亡 )是可能的机制 ,也是近年来的研究热点。电压依赖性阴离子通道 (VDAC)是位于心肌线粒体外膜上的一种蛋白 ,其在能量代谢及细胞凋亡过程中的作用已引起广泛重视。作者将目前VDAC的研究现状及其与心力衰竭的可能关系作一综述     

标准三联法联合缬沙坦、美托洛尔治疗充血性心力衰竭的临床疗效与安全性观察

目的观察标准三联法联合缬沙坦、美托洛尔治疗慢性充血性心力衰竭的临床疗效与安全性,探讨此方案的作用机制。方法将88例充血性心力衰竭患者按随机、对照、开放原则分为观察组44例和对照组44例,对照组进行标准的三联疗法,观察组在对照组基础上,增加美托洛尔、缬沙坦治疗。1个月为1个疗程,治疗前后观察患者临床症状和体征,检测彩色B超评价心功能的变化。结果观察组总有效率为95．45％,对照组总有效率为59．09％,观察组总有效率显著高于对照组,差异有高度统计学意义（P〈0．01）;治疗后,两组血压差异不明显,观察组心率、左室舒张末期内径（LVDD）明显低于对照组,左室射血分数（LVEF）明显高于对照组,差异有高度统计学意义（P〈0．01）。结论标准三联法联合缬沙坦、美托洛尔治疗慢性充血性心力衰竭临床疗效确切,能更好改善左室收缩功能。降低心率,改善心功能,提高治疗总有效率,逆转心室重朔,且患者耐受性好,使慢性心力衰竭患者获得较大的临床益处,是一种理想的治疗方案。     

缬沙坦在高血压病人防治心衰中的临床疗效研究

目的研究缬沙坦在防治高血压病人心衰的疗效及安全性。方法将120例心力衰竭合并有高血压的患者随机分成拉西地平组、贝拉普利组和缬沙坦组,每组各4O例。各组病人在常规接受洋地黄强心、利尿、扩血管药物的基础上每天分别口服一次拉西地平4～8mg、贝拉普利10～20mg、缬沙坦80～160mg,共治疗10个月。治疗前后测血压、左室舒张末期前后径（LVEDD）和左室射血分数（LVEF）,每搏输出量（SV）。结果治疗10个月后三组血压均明显下降（P〉0.05）,但彼此间差异无统计学意义（P＆gt;O.05）,LVEDD有不同程度缩小,差异无统计学意义（P〉0.05）,LVEF、SV增加显著（P〈0.05）。三组间血压、LVEDD、LVEF差异无统计学意义（P〉0.05）。副作用方面：拉西地平组出现个别病人有心衰加重和下肢、足踝部水肿表现,贝那普利组出现干咳、皮疹、血管神经性水肿等,缬沙坦组个别病人出现一过性皮疹,但总体副作用明显少于贝那普利组和拉西地平组。结论缬沙坦治疗慢性心力衰竭患者有较好的效果,病人依从性较好,且不良反应发生率低。     

厄贝沙坦对老年慢性充血性心衰患者心功能及脑钠肽的影响

目的:探讨厄贝沙坦对老年慢性充血性心衰患者心功能及脑钠肽的影响。方法:选择100例心功能Ⅰ~Ⅳ级的慢性充血性心力衰竭(CHF)患者,随机分为两组:对照组50例常规抗心衰治疗(应用强心剂、利尿剂、β受体阻滞剂等),治疗组50例在常规抗心衰基础上加用厄贝沙坦,观察两组治疗前、后心率、左室收缩功能及血浆脑钠肽(BNP)变化。结果:加用厄贝沙坦患者心率明显减慢,血压降低,左室舒张末期内径缩短,左室射血分数提高,BNP明显降低。结论:厄贝沙坦结合常规抗心衰治疗能够有效抑制慢性心力衰竭患者神经内分泌的过度激活,逆转心室重构,改善心功能,疗效优于单纯常规药物治疗,而动态监测患者血浆BNP水平可以帮助了解治疗效果及判断预后。     

缬沙坦联合美托洛尔治疗心力衰竭临床观察

目的　探讨缬沙坦联合美托洛尔治疗慢性充血性心力衰竭的临床效果。方法　选择 60例慢性充血性心力衰竭患者随机分为治疗组和对照组 ,每组 3 0例。两组均常规治疗 ,在此基础上治疗组加缬沙坦联合美托洛尔治疗。结果　治疗组的总有效率明显优于对照组 (χ2 =4.812 ,P <0 .0 5 ) ;治疗组治疗后心率、收缩压以及超声心动图各项指标均较对照组明显改善 ,P <0 .0 1。结论　缬沙坦联合美托洛尔治疗慢性充血性心力衰竭效果满意 ,值得临床推广应用。