小鼠嗅黏膜中水通道蛋白1对嗅觉形成的作用

目的 研究水通道蛋白1(aquaporin 1, AQP1)在小鼠嗅黏膜中的表达模式及其对嗅觉形成的作用.方法 应用免疫荧光和免疫印迹技术研究野生型和AQP1基因敲除小鼠嗅黏膜中AQP1的表达差异;采用埋藏食物小球实验(含对照实验)、嗅觉迷宫实验(含对照实验)2种嗅觉行为学方法以及气体刺激性嗅觉电位记录(electroolfactogram,EOG)检测2组小鼠嗅觉功能的差异.结果 免疫荧光和免疫印迹结果均证实了AQP1基因敲除小鼠嗅黏膜中没有AQP1的表达;免疫荧光结果表明AQP1主要分布于嗅黏膜的血管内皮细胞和嗅神经束膜上.行为学检测结果显示,埋藏食物小球实验中第1、2天2组寻找食物时间差异具有统计学意义(P<0.05),而第3天和对照实验之间无明显差异(P>0.05);嗅觉迷宫实验中2组除对照实验外,寻找食物时间差异具有统计学意义(P<0.05).气体刺激性诱发电位结果显示,2组小鼠嗅黏膜在不同气压强度饱和Trithylamine作用下的嗅觉电位波形相似,波幅均随气压的逐渐增加而增大;而在相同气压作用下,AQP1基因敲除小鼠嗅觉电位的波幅低于野生型小鼠,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 AQP1主要分布在嗅黏膜的血管内皮细胞和嗅神经束膜上;AQP1基因敲除小鼠的嗅觉敏感性较野生型小鼠有一定程度的降低,但嗅神经元兴奋性没有差异.AQP1可能在嗅觉信号传递过程中发挥作用.     

嗅球摘除后丁香酚对昆明鼠水迷宫和自主活动行为的影响

目的 探讨药物丁香酚对鼠的神经行为学的影响及其途径。方法 通过嗅觉吸入的给药方法,并以完全摘除嗅球来对照,用水迷宫和自主活动箱分别测定小鼠学习记忆能力和自主活动能力。结果 丁香酚给药组的水迷宫潜伏期明显小于空白组的水迷宫潜伏期（P〈0．05）,而嗅球摘除后给药组与假手术组和模型组的水迷宫潜伏期差异无显著性。结论 丁香酚能够通过嗅觉给药的途径改善小鼠的学习记忆功能。     

AQP4参与卵巢激素对单胺类神经递质的调节作用

目的:探讨AQP4对卵巢激素调节神经递质作用的影响.方法:应用雌性AQP4基因敲除型CD1小鼠与野生型CD1小鼠,测定AQP4基因敲除对小鼠血浆中雌孕激素水平的影响;两种基因型小鼠实施卵巢去势手术(OVX),测定纹状体和皮层中单胺类神经递质的含量.结果:AQP4基因敲除型小鼠动情后期血浆雌、孕激素水平显著低于野生型小鼠;去势后野生型小鼠纹状体多巴胺(DA)及皮层去甲肾上腺素(NE)含量明显降低,但去势不影响AQP4基因敲除型小鼠脑内相应的递质水平.结论:AQP4参与了卵巢激素对单胺类神经递质的调节.     

单一嗅质(丁香酚)对新生期小鼠成年后行为学的影响

目的 探讨新生期小鼠在单一嗅质(丁香酚)环境中成长对其成年后嗅觉印迹及神经行为学的影响.方法 三组新生小鼠放置在在丁香酚环境下成长1、2、3周.空白组普通环境饲养.小鼠6周龄时,进行嗅觉识别实验,嗅觉辨别实验,六臂迷宫实验,Morris水迷宫实验.结果 与空白组比较,嗅觉识别实验:小鼠对丁香酚嗅质识别能力增强(P<0.01);嗅觉辨别和六臂迷宫实验显示:小鼠对丁香酚以外其他嗅质分辨、记忆能力下降(P<0.05)及嗅质引导的空间学习记忆能力下降(P<0.05);Morris水迷宫显示:小鼠空间学习记忆能力下降(P<0.01).结论 新生期小鼠在单一嗅质(丁香酚)环境中成长,成年后虽然可以引起对丁香酚的嗅觉印迹,但这种单一嗅质环境不利于嗅觉和大脑的发育.     

布地奈德对变应性鼻炎嗅觉障碍干预作用的实验研究

目的观察变应性鼻炎(AR)对嗅觉功能的影响及布地奈德对AR嗅觉障碍的干预效果。方法应用卵清蛋白致敏并激发BALB/C小鼠,建立AR小鼠模型。应用埋藏小球实验(BFT)评估AR小鼠嗅觉功能。HE染色及免疫组化法观察AR小鼠嗅黏膜的组织形态学变化及嗅觉标记蛋白(OMP)表达的变化。鼻内滴用布地奈德对AR小鼠进行干预,分别在开始干预后第7天及第14天应用免疫组化方法检测小鼠嗅黏膜OMP表达的变化。结果对成功建模的AR小鼠进行嗅觉功能评估,42/55的AR小鼠在AR的基础上伴有嗅觉障碍。与对照组相比较,AR小鼠嗅黏膜的上皮层明显变薄,嗅感受神经元(ORNs)的层数减少,排列紊乱。AR小鼠嗅黏膜OMP表达较对照组减少。与不用药组相比较,布地奈德干预1组的小鼠嗅黏膜OMP表达增加,嗅上皮OMP染色阳性细胞数量增多,差异有统计学意义(P<0.05)。接近对照组OMP染色阳性细胞数量,与对照组相比较差异无统计学意义(P>0.05)。布地奈德干预2组OMP表达与布地奈德干预1组相似,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在本实验中,AR小鼠嗅黏膜上皮层变薄,ORNs层数减少,OMP表达减低,证明了AR引起嗅觉障碍的作用机制除鼻腔气道阻塞的原因外,嗅黏膜本身因炎症发生的变化也是重要的原因。糖皮质激素是临床治疗嗅觉障碍的常用药物,本实验对伴有嗅觉障碍的AR小鼠鼻内滴用布地奈德进行干预,观察到嗅上皮OMP表达明显增加,ORNs的数量增多,且干预效果可在停药后维持一段时间。因此,鼻内局部应用糖皮质激素可以对嗅黏膜产生影响,是治疗AR引发的嗅觉障碍的有效方法。     

C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠行为学实验研究

目的:通过水迷宫实验、自主活动实验、听源性惊厥实验和悬尾实验来研究C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠的行为学差异.方法:通过胚胎复苏获得3只雌性杂合的C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠后与C57BL/6小鼠进行繁殖,最终得到纯合的雌性和雄性C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠各10只进行行为学实...     

多巴胺D2受体缺失加剧MPTP诱导的小鼠帕金森病样改变

目的 探讨多巴胺D2受体与帕金森病的运动行为学及发病间的关系。方法 C57BL/6野生型及D2受体基因敲除小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备帕金森病模型,爬杆实验、游泳实验观察比较两组小鼠行为学的改变,免疫荧光染色法观察小鼠中脑黑质致密部TH阳性神经元数目的变化。结果 MPTP注射后,小鼠爬杆实验时间延长,游泳实验评分降低,中脑黑质致密部TH阳性神经元数目下降(P<0.05或P<0.01);且D2受体基因敲除小鼠的行为学改变及TH神经元数目的减少较野生型小鼠更为明显(P<0.05或P<0.01)。结论 多巴胺D2受体在小鼠肢体运动协调方面起着重要作用,D2受体缺失加剧了MPTP诱导的小鼠帕金森病样改变。     

GAD67-GFP基因敲入小鼠GFP与nNOS在嗅球中的表达和共存研究

目的:探究GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球各细胞层中GAD67阳性神经元的分布及与一氧化氮合酶(bNOS)的共存。方法:对该实验室繁育的成年GAD67-GFP基因敲入小鼠利用聚合酶链式反应(PCR)进行基因型等鉴定,取阳性GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球做冰冻切片进行尼氏染色、免疫荧光染色,观察GAD67阳性神经元在嗅球各细胞层中的分布比例及与bNOS共存。结果:GAD67阳性神经元在嗅小球层、僧帽细胞层、颗粒细胞层所占比例分别为:(42.98±0.92)%、(23.64±0.84)%、(77.75±0.84)%,bNOS阳性神经元在球旁细胞层、僧帽细胞层有强阳性分布,而在颗粒细胞层几乎没有分布。GAD67与bNOS仅在嗅小球层偶有共存。结论:GAD67阳性神经元主要分布于嗅小球层与颗粒细胞层,GAD67与bNOS仅少数共存于嗅小球层。     

嗅三针对阿尔茨海默病小鼠认知功能和海马Aβ、磷酸化JNK、ERK1/2、Tau蛋白表达的影响

目的探讨嗅三针治疗阿尔茨海默病(AD)小鼠的作用机理。方法 AD动物模型采用APP/PS1双转基因小鼠,随机分为模型组、嗅三针组、嗅神经切断嗅三针组和盐酸多奈哌齐组,正常组和假手术组采用同窝阴性小鼠。嗅三针组和嗅神经切断嗅三针组取印堂穴和双侧迎香穴进行电针治疗,盐酸多奈哌齐组取盐酸多奈哌齐进行灌胃治疗。Y迷宫检测各组小鼠认知功能,免疫组化、Western blot检测小鼠海马内Aβ和p-JNK、p-ERK1/2、p-Tau(Ser 396)蛋白表达情况。结果嗅三针组小鼠认知功能显著改善,有统计学意义(P0.05);模型组小鼠海马内Aβ和p-JNK、p-ERK1/2、p-Tau(Ser 396)蛋白表达显著高于正常组(P0.05),经嗅三针和盐酸多奈哌齐治疗后表达显著减少,均具有统计学意义(P0.05);嗅神经切断嗅三针组治疗后表达无显著变化。结论嗅三针可通过降低AD小鼠海马Aβ和p-JNK、p-ERK1/2、p-Tau(Ser 396)蛋白表达,改善认知功能,而嗅觉通路的完整性是其发挥治疗效果的作用途径。     

单鼻腔通气障碍小鼠模型嗅黏膜的组织学变化

目的 建立单鼻腔通气障碍的小鼠动物模型,并观察其嗅黏膜的组织学变化情况.方法取刚出生的昆明小鼠20只,显微镜下缝合小鼠左侧前鼻孔.在刚出生,出生后2周、4周、6周时分别取5只小鼠头部制成石蜡冠状位切片.以嗅标记蛋白(OMP)特异抗体对切片行免疫组织化学染色,对比观察小鼠两侧鼻腔嗅黏膜的厚度和嗅标记蛋白表达强度.结果 刚出生时小鼠两侧鼻腔嗅黏膜厚度、嗅标记蛋白表达强度大致相同(P＞0.05).第2周时,左侧鼻腔嗅黏膜略薄、嗅标记蛋白表达强度略低,但差异不显著(P＞0.05).第4周时,这种差异变得显著(P＜0.05).第6周时,这种差异变得非常显著(P＜0.01).结论 显微镜下缝合小鼠前鼻孔,可以作为构建单鼻腔通气障碍小鼠动物模型的可靠方法.鼻腔通气障碍单一因素即可以使嗅黏膜萎缩,成熟嗅感觉神经元的数量明显下降.     

模拟帕金森病的表达人α-synucleinA53T转基因小鼠的早期嗅觉功能观察

目的通过对表达人α-synucleinA53T的转基因小鼠嗅觉功能的检测和比较,确立一个可供研究帕金森病早期嗅觉障碍发病机制的模型。方法选取不同月龄的表达人α-synucleinA53T的转基因(TG)小鼠与同窝野生型(WT)对照小鼠;转棒试验评估10月龄TG小鼠随意运动功能是否发生变化;DAB法观察10月龄小鼠脑黑质多巴胺能神经元,进一步验证小鼠是否发生运动功能改变。通过气味鉴别及适应试验,观察小鼠对已熟悉的同种气味的短期记忆能力及适应能力,判断小鼠对陌生气味的辨别能力;通过长间隔记忆试验,检测小鼠对已经暴露过的气味在一定间隔时间后再次暴露的记忆能力;通过隐藏颗粒试验,检测小鼠对食物气味的感知能力,反映嗅觉阈值的水平。结果转棒试验和多巴胺能神经元观察结果均显示10月龄TG小鼠的随意运动功能尚未发生改变。6月龄TG小鼠出现对气味辨别能力的下降,对新旧两种气味的识别时间比较,差异无统计学意义(P=0.120);10月龄TG小鼠表现出更明显的气味识别缺陷(P=0.295)。6月龄TG小鼠寻找到食物的时限长于WT小鼠(P=0.015)。各年龄段小鼠短期记忆及适应能力均正常;但9月龄TG小鼠表现出长期(两次试验间隔时间60、80、100 min)记忆能力减退。结论表达人α-synucleinA53T的转基因小鼠在运动功能改变之前出现嗅觉障碍,表现在气味辨别、记忆、感知能力等方面,能够很好地模拟帕金森病早期嗅觉障碍的表现。     

水通道蛋白4与神经系统疾病

水通道蛋白(aquaporin,AQP)是一组特异通透水和某些特定小分子的细胞膜通道蛋白。水通道蛋白4 (aquaporin 4,AQP4)在大脑组织中表达丰富,脑星形胶质细胞、视网膜Müller细胞、内耳支持细胞、嗅觉上皮支持细胞中均有AQP4表达。AQP4具有两个蛋白亚型,M1和M23。M23在细胞膜能够形成正交排列结构。研究结果表明AQP4在脑组织中介导水的转运并可能在中枢神经系统生理功能中起重要作用。癫痫的发病过程中AQP4表达上调,AQP4促进细胞毒性脑水肿的发生,在血管源性脑水肿中辅助清除多余脑积水,并且AQP4参与视神经脊髓炎的发生。本文综述了AQP4在中枢神经系统的生理功能和在中枢神经系统疾病,包括癫痫、脑水肿、视神经脊髓炎等发病机制以及治疗方面的作用。     

50Hz磁场照射对小鼠嗅觉辨别能力的影响

目的:探讨长期磁场暴露对成年小鼠嗅觉辨别功能的影响.方法:采用习惯化-去习惯化模型,连续20 d每天1 h的1 mT、50 Hz磁场照射小鼠,观察对小鼠嗅觉辨别功能的影响.采用旷场行为检测小鼠的活动量和探究行为.结果:连续20 d每天1 h的1 mT、50 Hz磁场照射后,小鼠的运动能力、探究能力及嗅觉辨别功能没有显著性变化.结论:连续20 d每天1 h的1 mT、50 Hz磁场照射不影响嗅觉辨别能力.     

Discordance between olfactory psychophysical measurements and olfactory event related potentials in five patients with olfactory dysfunction following upper respiratory infection

Background Subjective olfactory tests are easy to perform and popularly applied in the clinic, but using only these, it is difficult to diagnose all disorders of the olfactory system. The olfactory event related potentials technique offers further insight into the olfactory system and is an ideal objective test. This analysis was of subjective and objective data on the olfactory function of twelve patients with loss of smell associated with an upper respiratory infection （URI）. Methods We tested the twelve patients with URI induced olfactory loss by medical history, physical examination of the head and neck, olfactory tests and medical imaging. Olfactory function was assessed by Toyota and Takagi olfactometry including olfactory detection and recognition thresholds and olfactory event-related potentials （OERPs） recorded with OEP-98C Olfactometer. Results An unusual phenomenon was observed in five patients in whom the subjective detection and recognition thresholds were normal, while the expected OERPs were not detectable. Conclusions We suggest that the discordance between olfactory psychophysical measurements and OERPs might be the results of abnormal electrophysiology related with olfactory neuropathy caused by viral URI. In addition, the measurement of OERPs might play a significant role in evaluating olfactory dysfunction.     

人腺病毒A41对昆明乳鼠肠道水通道蛋白1、4、8表达的影响

目的探讨人腺病毒A41攻击对昆明乳鼠肠道水通道蛋白(aquaporin,AQP)1、4、8 mRNA表达的影响。方法从腹泻病婴幼儿粪便中分离出腺病毒A41毒株,用A293细胞进行接种增殖,予腺病毒A41病毒液灌注5日龄昆明乳鼠,于接毒后24 h开始每天处死3只乳鼠,连续4 d。采用实时荧光定量PCR方法对乳鼠的空肠、回肠和近端结肠黏膜细胞的AQP 1、4、8 mRNA进行相对定量分析。结果腺病毒A41攻击昆明乳鼠后,乳鼠空肠、回肠和近端结肠黏膜AQP 1、4、8 mRNA表达量与空白对照乳鼠差异无统计学意义。结论腺病毒A41与昆明乳鼠肠道水通道蛋白AQP 1、4、8 mRNA的表达无关,腺病毒肠炎与AQP间可能存在的其他机制需进一步探讨。     

小鼠侧脑室注射卡介苗诱导NMO-IgG/AQP4抗体的表达

【目的】 通过小鼠侧脑室注射卡介苗(BCG)致中枢神经系统结核分枝杆菌(MTB)感染,检测小鼠血清中是否有视神经脊髓炎(NMO)-IgG/水通道蛋白4(AQP4)-Ab的表达? 【方法】 雌性C57BL/6J小鼠40只,6 ~ 8周,随机分为4组:5 × 106 CFU BCG组?1 × 106 CFU BCG组?0.01 mol/L PBS组?正常组?右侧侧脑室注射,注射后1周脑室注射追加1次?小鼠BCG注射后第7?14?21?28天,分别取血并检测血清中NMO-IgG/AQP4-Ab?注射后第28天处死小鼠行抗酸杆菌培养,并对脑和脊髓进行HE?抗酸?LFB髓鞘染色,免疫组化检测病灶处AQP4?GFAP的表达及C5b9沉积情况?【结果】 脑室注射后,BCG组小鼠行为活动降低,出现肢体瘫痪,甚至死亡,其中5 × 106 CFU BCG组表现严重,死亡率高?注射卡介苗21 d时小鼠血清检测发现5 × 106 CFU BCG组中2 只小鼠血清NMO-IgG/AQP4-Ab阳性,1 × 106 CFU BCG组中4只小鼠血清中抗体阳性?第28天时5 × 106 CFU BCG组的两只血清阳性的小鼠死亡,1 × 106 CFU BCG组中原抗体阳性的小鼠血清中抗体仍为阳性?病理检测显示脑和脊髓出现炎性细胞浸润,病灶处抗酸染色阳性,出现脱髓鞘改变?组织培养3周后可见MTB生长,免疫组化显示病灶区域AQP4?GFAP表达降低,部分炎性细胞及血管周围出现补体C5b9沉积?【结论】 中枢神经系统MTB直接感染可诱导产生NMO-IgG/AQP4-Ab?     

九香止泻片对湿热型泄泻肠易激综合征模型大鼠AQP4、PKA与cAMP表达的影响

目的探讨九香止泻片对湿热型泄泻肠易激综合征(IBS)模型大鼠肠道水通道蛋白4(AQP4)、cAMP依赖性蛋白激酶(PKA)与环腺苷酸(cAMP)的影响。方法 40只SD大鼠,随机分为空白组、模型组、九香止泻片组、盐酸洛哌丁胺对照组,每组10只,除空白组外,其余各组大鼠在造模成功后分别给予不同药物或蒸馏水连续灌胃7 d,腹腔麻醉取血处死后取结肠组织测定大鼠肠道AQP4、PKA表达与cAMP含量。结果与空白组比较,模型组肠道AQP4、PKA蛋白表达均显著降低(P<0.05),cAMP含量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,九香止泻片组和盐酸洛哌丁胺对照组肠道AQP4、PKA蛋白表达均显著增强(P<0.05),cAMP含量显著增加(P<0.05);九香止泻片组和盐酸洛哌丁胺对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论九香止泻片可能通过激活cAMP-PKA信号通路调控湿热型泄泻IBS模型大鼠肠道中AQP4的表达进而改善腹泻症状,是治疗湿热型泄泻IBS的有效方药。     

Effect of Micardis on the Expression of Renal Medulla Aquaporin-2 in Diabetic Mice

In current study, the effect of angiotensin receptor blocker Micardis on the localization and expression of aquaporin-2 (AQP2) was investigated in the renal medullary collecting duct of mice with diabetic nephropathy (DN). Mice were divided into three groups:normal group, DN group and Micardis-treated group. Six weeks after establishment of STZ-induced DN model in mice, the expression of AQP2 in renal medulla was detected measured by semiquantitative immunofluorescence histochemistry and Western blot techniques, and the localization of AQP2 by confocal immunofluorescence laser scanning microscopy. The results showed that the urinary osmolality was decreased in DN group as compared with normal group (2.39±0.11 vs 3.16±0.16, P<0.05). Although the localization of AQP2 on the renal medulla was unchanged, the expression of AQP2 was increased significantly in DN group as compared with normal group. Micardis could partly attenuate above changes. It was concluded that treatment with Micardis could partly rectify the abnormal expression of AQP2 in renal medulla of DN mice, which suggested that rennin-angiotensin system (RAS) is implicated in the pathogenesis of DN by regulating the expression of AQP2.     

局部应用PLGA-缓释地塞米松对高温高湿环境下大鼠创伤性脑水肿治疗的研究

目的 研究高温高湿环境下局部应用聚乳酸羟基乙酸(Polylactide acid-glycolic acid copolymer,PLGA)-缓释地塞米松对实验大鼠颅脑损伤的治疗作用及可能机制.方法 成年健康雄性SD大鼠24只,随机分为局部PLGA-缓释地塞米松组,甘露醇组和空白对照组.采用Feeney自由落体法建立大鼠急性颅脑损伤模型后置入高温高湿环境中(35℃、RH 85％).甘露醇组动物分别于致伤后立即接受2g/kg剂量的静脉注射,并于6h后追加维持剂量1次.24h后以干湿重法测量脑含水量变化,免疫组化和原位杂交方法分析测定AQP4蛋白和mRNA的表达.结果 与空白对照组比较,大鼠颅脑损伤后PLGA地塞米松和甘露醇静脉注射组能显著降低AQP4的表达和脑组织含水量(P＜0.05),AQP4-mRNA的表达两组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 局部应用PLGA-地塞米松可减轻高温高湿环境下创伤性脑水肿的生成,能减少脑水肿周围AQP4及mRNA的表达,影响AQP4表达,从而改变创伤区周围水的转运,使脑创伤后脑组织水肿减轻.     

薄荷醇吸嗅对大鼠学习记忆及海马区乙酰胆碱酯酶及谷氨酸受体1表达的影响

目的研究薄荷醇吸嗅对大鼠学习记忆及海马区乙酰胆碱酯酶(AChE)及谷氨酸受体1(GluR1)表达的影响。方法 SD大鼠共20只,随机分为洁净空气吸嗅组(对照组)和薄荷醇吸嗅组,其中薄荷醇吸嗅组每天给予薄荷醇吸嗅1 h。通过Morris水迷宫实验检测两组大鼠的学习记忆能力,并利用免疫组织化学染色法观察对照组和薄荷醇吸嗅组海马中AChE和GluR1的表达情况。结果与对照组相比,薄荷醇吸嗅组大鼠空间学习记忆能力有所改善,并且海马区AChE和GluR1的蛋白表达均明显降低(P<0.01)。结论薄荷醇吸嗅可改善大鼠的学习记忆能力。