严重急性呼吸综合征冠状病毒2受体血管紧张素转换酶2在人肺的表达

目的 研究人肺中严重急性呼吸综合征冠状病毒2（Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2）受体血管紧张素转化酶2（Angiotensin-converting enzyme 2, ACE2）的表达,探讨其在SARS-CoV-2感染中的意义。 方法 利用基因型-组织表达（Genotype-Tissue Expression, GTEx）数据库分析人体正常组织器官间ACE2的基因转录水平以及免疫组化法检测原代人肺组织中不同解剖部位ACE2的蛋白表达水平。 结果 人肺中ACE2基因及蛋白表达水平均较低,主要表达于肺泡组织中的少量Ⅱ型肺泡上皮细胞,而在血管内皮组织以及支气管、细支气管、终末细支气管、呼吸性细支气管等各级支气管组织中均未见表达。 结论 ACE2主要表达于少量Ⅱ型肺泡上皮细胞,表明人肺具有引起SARS-CoV-2感染及损伤的ACE2受体分子基础。然而,人肺中ACE2基因及蛋白的表达水平较低和部位局限并不支持SARS-CoV-2主要依赖于该受体在人肺中进行感染。     

男性新型冠状病毒肺炎患者生殖系统损伤机制研究进展

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在发病率和严重程度上存在显著的性别差异,同年龄段中男性患者多于女性患者。新型冠状病毒(SARS-CoV-2)利用血管紧张素转换酶(ACE)2受体进入人体细胞。由于ACE2在人类多个器官系统上有不同程度的表达,SARS-CoV-2除感染呼吸系统外,同样可以感染消化系统、神经系统、免疫系统等。睾丸为富含ACE2的器官之一,部分男性COVID-19患者精液中检出SARS-CoV-2,SARS-CoV-2可能损伤生殖系统。但SARS-CoV-2参与男性生殖系统损害的机制尚未完全阐明,目前研究主要集中在SARS-CoV-2对男性生殖的短期影响,并越来越重视其长期影响。本文总结了SARS-CoV-2介导男性COVID-19患者的生殖细胞损伤、性腺功能减退、睾丸炎症的可能机制,并指出目前研究存在的问题,为男性COVID-19患者生殖系统损伤的机制研究扩宽思路。     

SARS-CoV-2相关血管紧张素转化酶2表达异常与乳腺疾病的关系研究新进展

严重急性呼吸综合征冠状病毒-2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2引起的新型冠状病毒感染目前全世界已有超过6亿4 000万的确诊病例，其中血管紧张素转化酶2(ACE2)作为SARS-CoV-2入侵宿主细胞的最重要受体已经引起了广泛关注。ACE2在乳腺癌和乳腺炎中异常表达，并通过肾素-血管紧张素-醛固酮系统和炎症作用发挥作用。本文将对SARS-CoV-2造成的ACE2减少在乳腺癌和乳腺炎中的研究进展进行综述，旨在为预防SARS-CoV-2对乳腺的损害及ACE2与乳腺疾病发生的分子机制研究提供思路。     

血管紧张素转换酶2在SARS-CoV-2感染中的作用机制研究进展

引发新型冠状病毒肺炎的病原体SARS-CoV-2为单股正链RNA病毒,传染性强,已在世界范围内多个国家传播,成为全球关注的热点。研究表明血管紧张素转换酶2（angiotensin converting enzyme 2,ACE2）可能是SARS-CoV-2 感染宿主的受体,因而了解SARS-CoV-2作用于ACE2的不同机制对于开发治疗性药物和疫苗研发具有重要参考价值。本文综述了ACE2在机体不同组织表达情况与组织损伤的关系,ACE2参与免疫炎症的调节过程及年龄、性别、不同基础疾病等因素对ACE2表达和组织损伤的机制进展。     

血管紧张素转化酶2与新型冠状病毒感染的关系研究进展

新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染性强,人群普遍易感,可累及多个系统造成多脏器损伤。血管紧张素转化酶2(ACE2)是新发现的SARS-CoV-2受体,预测具有ACE2分布的组织器官均可能是SARS-CoV-2感染靶点。目前临床尚无针对性抗SARS-CoV-2药物。本文从ACE2组织分布及作用机制、SARS-CoV-2致组织损伤可能的发病机制、干预方法等方面作一综述,以期为临床治疗及药物研制提供参考。     

新型冠状病毒肺炎心脏损伤及其与血管紧张素转化酶Ⅱ的关系研究进展

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的疾病。COVID-19患者主要表现为发热、乏力、干咳等典型呼吸系统症状,但也有部分患者有心悸、胸闷等不适,出现心电图、心肌酶谱、心功能等改变,表现为心脏损害。血管紧张素转化酶Ⅱ(ACE2)作为SARS-CoV-2侵入细胞的受体,可能与COVID-19患者心脏损伤有密切联系。文章就COVID-19患者心脏损伤及其与ACE2的关系作一综述。     

醛固酮通过调节ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴诱导内皮细胞凋亡的研究

目的 探讨醛固酮对内皮细胞ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴的影响及其与凋亡的关系.方法 将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为对照组(DMEM/F12培养基)、醛固酮组(10、100、1 000 nmol/L醛固酮干预)和醛固酮拮抗组(100 nmol/L醛固酮+1μmol/L醛固酮受体拮抗剂共同干预).采用免疫荧光细胞化学染色法观察细胞ACE2蛋白的表达;Western blotting检测细胞中ACE2和Mas受体的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清中AngⅡ和Ang(1-7)蛋白的含量以及凋亡相关蛋白caspase-3的活性;流式细胞术结合FITC-Annexin V/PI荧光染色检测细胞凋亡.结果 与对照组比较,醛固酮组细胞ACE2和Mas受体的表达明显下调(P＜0.01),并呈浓度依赖性.在100 nmol/L醛固酮组,随着干预时间的延长,细胞ACE2和Mas受体的表达明显下调(P＜0.01),呈时间依赖性;而醛固酮拮抗组细胞ACE2和Mas受体的表达显著高于100 nmol/L醛固酮组(P＜0.01).ELISA检测结果显示,随着干预时间的延长,醛固酮组细胞培养上清中AngⅡ浓度和caspase-3活性均显著升高,而Ang(1-7)浓度降低.流式细胞术检测结果显示:醛固酮组细胞凋亡率显著高于对照组,醛固酮拮抗组细胞凋亡率显著低于醛固酮组(P＜0.05).结论 醛固酮具有调节ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴的作用,并可能通过此轴诱导内皮细胞凋亡.     

SARS-CoV-2S蛋白及其受体血管紧张素转换酶2的研究进展

正在世界各地暴发的新型冠状病毒肺炎疫情具有传染力强、传播范围广、死亡率及重症率高的特点,但目前仍无治疗新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染的特异性药物或疫苗。S蛋白在很大程度决定了SARS-CoV-2的组织嗜性和致病性,当前的研究热点主要集中在SARS-CoV-2S蛋白、血管紧张素转换酶2（ACE2）结构、S蛋白介进入宿主细胞机制及针对S蛋白开发的药物或疫苗等方面。本文对SARS-CoV-2S蛋白及受体ACE2最新研究进展作一综述。     

AT-1受体、ACE基因静默对肝星状细胞NF-κB 活性的影响

目的 探讨肝星状细胞血管紧张素Ⅱ1型(AT-1)受体及血管紧张素转换酶(ACE)基因静默对肝星状细胞NF-κB活性的影响.方法 采用HSC-T6细胞系.构建pSilencer/AT-1 α受体siRNA、pSilencer/ACE siRNA质粒,将其转染HSC-T6,予10-6 mol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)干预,设立对照组.凝胶电泳移动抑制实验(EMSA)检测NF-κB DNA结合活性.结果 EMSA显示:AngⅡ可刺激肝星状细胞NF-κB DNA 结合活性增强;pSilencer/AT-1 α受体siRNA 转染细胞后可显著抑制AngⅡ诱导的NF-κB DNA 结合活性增强.pSilencer/ ACE siRNA 转染细胞后可抑制NF-κB DNA 结合活性.结论 AT-1受体、ACE基因静默可抑制肝星状细胞NF-κB 的活性.     

新型冠状病毒肺炎并发的凝血障碍

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在短短的半年内肆虐全球,至今在全世界已有3568万人感染,126万人死亡。本病的病因为新型冠状病毒(SARS-CoV-2),病毒通过刺突糖蛋白(S蛋白)与宿主细胞血管紧张素转化酶2(ACE2)结合从而入侵细胞,其结合能力甚至超过SARS病毒。ACE2主要存在于呼吸道与胃肠道,也广泛分布于心脏、肾脏、睾丸、脑组织与脂肪组织等。     

血管紧张素转化酶相关性羧肽酶在人及啮齿动物胰腺的表达

目的近几年发现的血管紧张素转化酶相关性羧肽酶(ACE2),是血管紧张素转化酶(ACE)的相关酶,新近被证实是SARS相关冠状病毒的一个功能性受体。我们的先前实验发现SARS患者的血糖水平比对照组显著升高,提示SARS冠状病毒可能侵袭胰腺并导致胰腺损伤。本文研究ACE2在人、大鼠和小鼠内外分泌腺的表达,为探讨糖尿病及SARS病毒感染后血糖升高的机制提供依据。方法通过免疫组化的方法检测ACE2在人、大鼠和小鼠胰腺的表达。分别提取人和大鼠胰腺组织的RNA,通过RT-PCR的方法检测ACE2在人、大鼠的表达。结果免疫组化:ACE2在人、大鼠、小鼠的胰腺内外分泌腺均有表达,ACE2在内分泌腺的表达均强于外分泌腺。RT-PCR:在人和大鼠的胰腺RNA经逆转录后均扩增出ACE2基因片段,提示ACE2在人和大鼠胰腺中均有表达。结论ACE2在胰腺内分泌腺表达,提示SARS病毒能通过胰岛细胞膜上的ACE2受体侵入胰岛细胞,引起胰岛细胞损伤。     

肾素-血管紧张素系统在SARS-CoV-2引起的急性肺损伤中的作用

2019-12月底,由新型冠状病毒(severe acute re-spiratory syndrome coronavirus 2 ,SARS-CoV-2 )引起的新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019 ,CO-VID-19 )在武汉暴发,截止2020-03 月,疫情已经波及到了包括中国在内的25个国家和地区,给世界公共卫生事业带来了巨大挑战.疫情发生后我国的研究者们立即对该病毒的结构和感染机制进行研究,发现SARS-CoV-2属于巢病毒目、冠状病毒科、β冠状病毒属,是线性单股正链 RNA 病毒,其可通过S蛋白RBD结构域与人体细胞表面的血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2 ,ACE2)受体结合而感染肺泡上皮细胞,从而证实 ACE2是病毒入侵人体的关键.与此同时,一系列研究结果提示, ACE2水平的下调,可通过过度活化肾素血管紧张系统(reninangiotensinsystem ,RAS) ,作用于肺脏,导致炎性细胞积聚增加、肺毛细血管通透性增加、肺泡和间质水肿,进而导致急性肺损伤(acute lung injury , ALI)甚至急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory dis-tress syndrome ,ARDS)[1-3].本文将结合近期相关国内外文献阐述RAS在SARS-CoV-2所致ALI中的作用及相关机制,以及靶向 RAS的药物干预在急性肺损伤和COVID-19中的应用前景,为后续的诊疗方案的制定以及以RAS为治疗靶点的新药研发提供理论依据.     

永生化神经前体细胞系hNPC-TERT体内外D2受体的表达

目的 验证神经前体细胞系hNPC-TERT移植入动物中枢神经系统前后多巴胺D2受体的表达.方法 免疫荧光定性鉴定体外培养hNPC-TERT的D2受体表达,并进一步应用放射受体分析方法测定hNPC-TERT细胞表达D2受体数量.实验组兔脊髓内移植3×106 hNPC-TERT,对照组动物脊髓内移植同等数量HeLa细胞,移植后第7天,以11C-raclopride为示踪剂,移植动物活体或处死动物剥离出脊髓进行D2受体PET显像,并行移植段脊髓切片免疫荧光染色,验证hNPC-TERT在体内的D2受体表达.结果 免疫荧光和放射受体分析显示体外培养hNPC-TERT细胞表面表达大量D2受体(Bmax=8×104).移植入兔脊髓后,D2受体显像显示移植部位有明显的放射性浓聚,经ROI半定量分析,与对照组差异显著(P=0.0017),离体脊髓PET显像、组织免疫荧光进一步证实了活体显像结果.结论 神经前体细胞系hNPC-TERT高表达多巴胺D2受体,并且在移植入体内后仍保持该特性,具有移植治疗帕金森综合征等D2受体缺乏性疾病的潜力.     

ACE2、TMPRSS2表达与小鼠COVID-19易感年龄及潜在靶器官关系的探讨

目的 通过检测血管紧张素转换酶2(ACE2)、跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)在小鼠不同年龄阶段(新生期、幼龄期、成年期和老龄期)及不同组织(肺、小肠和心脏)中基因和蛋白的表达水平,探讨小鼠新型冠状病毒肺炎(COV-ID-19)的易感年龄与潜在靶器官.方法 借助生物信息学分析网站(Uniprot)分析ACE2、TMPRSS2在不同物种间保守性;RT-qPCR检测小鼠不同年龄组和不同组织中ACE2、TM-PRSS2 mRNA表达水平;Western blot检测小鼠不同年龄组与不同组织中ACE2、TMPRSS2蛋白表达水平.结果 ①人、小鼠间ACE2同源性达82.1％、TMPRSS2同源性达78.4％;②与新生组比较,幼龄组、成年组和老龄组小鼠肺和小肠组织中ACE2、TMPRSS2 mRNA表达水平均升高(P＜0.05);与新生组比较,幼龄组和成年组小鼠心脏组织中ACE2、TMPRSS2 mRNA表达水平升高(P＜0.05),而老龄组的表达水平下降(P＜0.05);③同龄组小鼠肺、小肠和心脏组织中ACE2、TM-PRSS2 mRNA表达水平差异有统计学意义(P＜0.05),且在肺组织中表达水平最高;④ACE2与TMPRSS2蛋白表达水平变化与mRNA具有一致性.结论 随着年龄增长,小鼠肺和小肠组织中ACE2、TMPRSS2表达也随之增加,这可能意味着高龄是小鼠乃至人感染新型冠状肺炎病毒(SARS-CoV-2)的独立危险因素之一;此外,同一年龄组小鼠肺组织中ACE2、TMPRSS2的高表达提示了肺部可能是SARS-CoV-2入侵机体的主要靶器官.     

M5毒蕈碱乙酰胆碱受体参与药物成瘾的研究进展

M5受体是毒蕈碱乙酰胆碱受体家族的一个新成员,是毒蕈碱乙酰胆碱受体家族(M1-M5亚型)最后一个被克隆出来的,属于G蛋白偶联受体.免疫沉淀和mRNA原位杂交实验表明M5受体在中枢神经系统中特定区域表达,包括海马、丘脑、黑质和中脑腹侧背盖区(VTA)部位)[1,2,3].可是和其他M受体比较,M5受体表达水平较低,在脑内占M1-M5受体总表达不到2%.近来,M5受体在一些外周组织和细胞中也检测到.     

P2受体与疼痛的实验研究

嘌呤与嘧啶受体(受体)分为P1和P2受体两大类。P1受体又称为腺苷受体；P2受体是ATP，UTP及其类似物激活的受体，其亚型分为P2X(离子通道型受体)和P2Y(G-蛋白偶联型受体)。P2受体通过与其内源性配体核苷酸结合，参与机体组织器官多种功能的调节，在疼痛病理状态(如神经病理性痛、急性疼痛、炎性痛及内脏痛等)，P2受体发挥着重要的介导作用。P2X3受体在感觉神经元中高度表达，通过P2X3受体基因敲除方法，P2X3受体反义寡核苷酸技术和一种新的选择性P2X3受体拮抗剂A-317491的应用，表明P2X3受体在痛觉中发挥重要作用；异聚体P2X2／3受体也涉及疼痛。P2Y受体的某些亚型在感觉神经元中高度表达及其介导的作用，也表明P2Y受体与痛觉有关。P2Y1和P2Y2受体能够引起类似于伤害性反应的细胞兴奋性，P2Y6受体可能是抗损伤。P2受体各亚型的激动剂和拮抗剂有可能为痛觉等病理状态发现新的治疗药物。     

严重急性呼吸综合征冠状病毒2的Spike蛋白点突变后与受体蛋白质及潜在抗病毒药物结合能力的同源建模分析

目的: 分析严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)的全长测序信息中,其刺突蛋白(Spike protein,S蛋白)的自发突变情况,以及S蛋白突变前后与宿主相关受体蛋白质和潜在抗病毒药物结合能力的变化。方法: 对SARS-CoV-2的一级序列进行生物信息学分析,确定高频突变位点,利用PolyPhen-2软件逐一对S蛋白突变后的功能进行预测和分析。使用SWISS-MODEL系统对突变后的S蛋白序列进行基于相似性的同源建模,利用ZDOCK程序对所建模型与血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)、二肽基肽酶-4(dipeptidyl peptidase-4,DPP4,又称CD26)以及氨基肽酶N(aminopeptidase N,APN,又称CD13)进行蛋白质对接,用FiPD软件对结合能力评价结果进行分析,最后采用AutoDock-Chimera 1.14对突变前后的S蛋白与潜在抗病毒药物的结合能力进行预测和比较分析。结果: S蛋白的某些特定区域发生突变能够更大程度地影响其功能,突变之后,S蛋白与ACE2的结合能力趋向于减弱,而与DPP4的结合能力趋向于增强,与APN的结合能力无显著变化。抗人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)药物aplaviroc与S蛋白的亲和能力显著高于其他候选小分子药物。结论: SARS-CoV-2在自然状态下发生突变,其S蛋白第400~1 100个氨基酸的区域为点突变高频区,突变趋势为与DPP4结合力增强,DPP4可能成为SARS-CoV-2感染细胞的新受体,aplaviroc可能成为一种SARS-CoV-2治疗药物的潜在选择。     

醛固酮通过调节ACE2-Ang (1-7)-Mas受体轴诱导内皮细胞凋亡的研究

目的 探讨醛固酮对内皮细胞ACE2—Ang (1-7)—Mas受体轴的影响及其与凋亡的关系。方法 将体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分为对照组（DMEM/F12培养基）、醛固酮组（10、100、1 000 nmol/L醛固酮干预）和醛固酮拮抗组（100 nmol/L醛固酮+1 μmol/L醛固酮受体拮抗剂共同干预）。采用免疫荧光细胞化学染色法观察细胞ACE2蛋白的表达;Western blotting检测细胞中ACE2和Mas受体的表达;酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞培养上清中AngⅡ和Ang (1-7)蛋白的含量以及凋亡相关蛋白caspase-3的活性;流式细胞术结合FITC-Annexin V/PI荧光染色检测细胞凋亡。结果 与对照组比较,醛固酮组细胞ACE2和Mas受体的表达明显下调（P<0.01）,并呈浓度依赖性。在100 nmol/L醛固酮组,随着干预时间的延长,细胞ACE2和Mas受体的表达明显下调（P<0.01）,呈时间依赖性;而醛固酮拮抗组细胞ACE2和Mas受体的表达显著高于100 nmol/L醛固酮组（P<0.01）。ELISA检测结果显示,随着干预时间的延长,醛固酮组细胞培养上清中AngⅡ浓度和caspase-3活性均显著升高,而Ang (1-7)浓度降低。流式细胞术检测结果显示：醛固酮组细胞凋亡率显著高于对照组,醛固酮拮抗组细胞凋亡率显著低于醛固酮组（P<0.05）。结论 醛固酮具有调节ACE2—Ang (1-7)—Mas受体轴的作用,并可能通过此轴诱导内皮细胞凋亡。     

大麻素2型受体在皮肤鳞状细胞癌的表达

目的探讨大麻素2型受体(CB2受体)在人正常皮肤与皮肤鳞状细胞癌中的表达规律及其意义。方法采用免疫组化、RT-PCR检测人正常皮肤和皮肤鳞状细胞癌组织中CB2受体在蛋白和mRNA不同水平的表达情况。结果CB2受体在人正常皮肤和鳞状细胞癌均有表达;皮肤鳞状细胞癌与正常皮肤表达CB2的强度间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论皮肤鳞状细胞癌中CB2受体在蛋白和基因水平表达均升高,皮肤鳞状细胞癌CB2受体表达强度明显大于正常皮肤,提示CB2与皮肤鳞状细胞癌的发生和发展关系密切。     

P2X2、P2X3受体与CGRP和calretinin在大鼠脊神经节内的共存

目的研究ATP受体P2X2、P2X3在大鼠脊神经节感觉神经元的表达、形态特点及与神经肽降钙素基因相关肽(CGRP)、钙结合蛋白calretinin的共存.方法应用激光共聚焦显微镜结合免疫组织化学双标技术.结果免疫组织化学显示脊神经节内可见大量P2X2 、P2X3受体阳性的细胞和神经纤维;P2X2受体亚型阳性细胞多为大、中、小型神经元,P2X3受体亚型阳性细胞为中、小型神经元;免疫组织化学双标显示有41.2±1.9%P2X2受体阳性细胞含有CGRP,而P2X3受体亚型与CGRP共存的细胞很难见到;有8.9±1.1%的P2X2免疫阳性神经元和7.2±1.3%P2X3受体阳性神经元分别含有calretinin.结论这一结果表明大鼠脊神经节内表达的ATP受体P2X2 、P2X3是不同的受体亚型.