电化学法检测HBV-M与荧光定量检测HBV-DNA的相关性观察

目的：探讨电化学法定量检测乙肝病毒血清标志物（HBV-M）与荧光定量PCR检测HBV-DNA的相关性。方法：采用荧光定量PCR法和电化学发光免疫测定（ECLIA）检测330例乙肝患者血清HBV-DNA和HBV-M。结果；在HBV-M的不同阳性模式中HBeAg阳性组HBV-DNA阳性率明显高于HBeAb阳性组，且HBV-DNA拷贝数有显著性差异；在HBeAg阳性血清中，随着HBV-DNA拷贝数的下降，HBeAg COI值也趋于下降，且有显著性差异（P〈0．01）。结论：ECLIA技术灵敏度高，特异性强，快速定量，可以对病情的发展进行跟踪，随时监测，尤其在HBeAg定量检测上可以为临床提供重要的依据；荧光定量PCR技术检测HBV-DNA能反映病毒的复制状态，也为临床诊断和疗效观察提供依据。     

HCV抗体阳性样品核酸及核心抗原检测分析

目的 对90份临床检测为丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)阳性样品检测其核心抗原(HCV-cAg)、荧光定量PCR,观察3者间的相关性.方法 采集临床诊断为HCV-Ab阳性样品90份,分别用市售的HCV-cAg检测试剂盒、荧光定量PCR 检测试剂盒、HCV-Ab检测试剂盒进行3种指标的检测复核.结果 90份临床HCV-Ab阳性样品,检出HCV-cAg阳性 25份(27.8%),荧光定量PCR检出67份阳性(74.4%),抗体复核阳性的75份(83.33%);检出率HCV-Ab(83.33%)>荧光定量(74.4%)>HCV-cAg(27.8%).结论 丙肝的3种标志物之间存在一定的联系,但不同试剂的检测结果间存在明显差异.     

两种解脲支原体DNA荧光定量检测试剂的比较

目的:比较及评价两种解脲支原体UU-DNA荧光定量PCR试剂特异性、灵敏度及检测结果的相关性.方法:使用两种不同试剂对质控血清、标准品及本院132份UU培养阳性的病人标本进行平行检测,比较两种试剂检测结果的特异性、灵敏度及结果的相关性.结果:试剂D与试剂K的特异性均为100%,灵敏度分别为93.62%和89.79%;对强阳性、临界阳性标本,试剂D重复性试验批内CV值为3.38%,5.59%,批间CV值为3.74%,7.22%,试剂K批内CV值为3.81%,5.10%,批间CV值为4.20%,7.57%;两种试剂对临床标本的检测结果相关性良好(r=0.94、P<0.01).结论:试剂D性能较优于试剂K.为保证检测质量,实验室应选择符合本实验室要求并与仪器相匹配的试剂.     

两种HBV—DNA荧光定量PCR检测试剂比较

目的比较及评价两种HBV—DNA荧光定量PCR试剂特异性、灵敏度、重复性及检测结果的相关性。方法用深圳匹基生物工程有限公司生产的两种HBV—DNA荧光定量PCR试剂（试剂A,试剂B）对已知结果的质控血清、标准品及本院154份HBsAg阳性的临床标本进行平行检测,比较两种试剂检测结果的特异性、灵敏度、重复性及结果的相关性。结果试剂A与试剂B的特异性均为100％,灵敏度分别为90．91％和95．45％,符合率分别为93．33％和96．67％;对强阳性、临界阳性标本,试剂A重复性试验批内CV值为3．16％、5．61％,批间为3．18％、6．32％。试剂B批内CV值为2．11％、5．36％,批间CV为3．58％、4．59％;两种试剂对临床标本的检测结果相关性良好（r=0．93、P〈0．01）,但试剂A检测的灵敏度和符合率均低于试剂B（P〈0．01）。结论试剂B总体性能优于试剂A,适于临床使用;试剂A有待校准及（或）改进。实验室必须选择质量好且符合自己实验室要求、与本实验室仪器相匹配的试剂以保证检验质量。     

乙肝两对半定量、乙肝DNA定量与乙肝前S1抗原联合检测的临床意义

目的 探讨临床联合检测乙肝两对半定量、乙肝DNA定量与乙肝前S1抗原(Pre-S1)对乙肝患者的诊断和预后的临床意义.方法 选取2013年1月至2015年1月海南省农垦三亚医院收治的乙肝患者120例作为研究对象,空腹抽取静脉血液,采用酶联免疫吸附法及定量法对乙肝Pre-S1、乙肝两对半定量检测,采用荧光定量PCR法对乙肝病毒DNA(HBV-DNA)定量检测.结果 经检测,乙肝Pre-S1阳性率与HBV-DNA阳性率在不同乙肝两对半的模式下比较差异均无统计学意义(P>0.05);在55例HBeAg阳性患者中,乙肝pre-S1阳性检出率为81.8%(45/55),HBV-DNA阳性检出率为72.7%(40/55),两者阳性检出率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 临床选择乙肝两对半定量、乙肝DNA定量与乙肝Pre-S1进行联合检测,能够更好地反映乙肝患者的疾病进展与预后,值得临床推广应用.     

血清中不同基因型丙型肝炎病毒RNA含量的测定

目的了解血清中不同基因型丙型肝炎病毒HCVRNA的含量。方法用实时荧光定量RTPCR和逆转录型特异性引物PCR同时检测21例费城酒精依赖丙肝患者的血清HCVRNA拷贝数并分析HCV基因型。结果21份血清标本中,有17份为HCVRNA阳性。这些阳性血清的HCVRNA含量波动范围在104.60～106.20拷贝/ml。检测到1a和1b两种HCV基因型,其中1a型7例,RNA平均滴度为105.28±0.75拷贝/ml,1b型(9例)RNA平均滴度为105.28±0.28拷贝/ml。结论定性和定量检测结果有极佳的一致性,酒精依赖丙肝基因型1a和1b血清中HCV含量无显著性差异。     

荧光定量PCR及斑点杂交检测HBV DNA与血清HBV标志物的关系

目的　比较荧光定量PCR和斑点杂交检测血清HBVDNA与血清HBV标志物 (HBVM )的相互关系。方法　采用荧光定量PCR(FQ -PCR)、斑点杂交和酶联免疫吸附法 (ELISA)同时检测 2 13份肝炎患者血清 ,并对结果进行分析比较。结果　 2 13份肝炎患者血清中FQ -PCR及斑点杂交法检测HBVDNA阳性数分别为 12 5例、80例 ,阳性检出率分别为 58.7%和 3 7.6% ,2种方法阳性检出率有显著性差异 (P <0 .0 5)。除HBsAg、HBeAg阳性组和HBsAb阳性组FQ -PCR和斑点杂交HBVDNA阳性检出率相同外 ,其余各组FQ -PCRHBVDNA检出率明显高于斑点杂交 (P <0 .0 5) ,HBeAg阳性 2组的 2种方法HBVDNA检出率明显高于HBeAg阴性各组 (P <0 .0 5)。随着FQ -PCR检测HBVDNA拷贝数的增加 ,斑点杂交法阳性检出率也明显增加。结论　FQ -PCR和斑点杂交法检测HBVDNA均可直接反映乙肝患者HBV感染、复制及病程变化 ,而FQ -PCR能真实地反映病毒的负荷量 ,对乙肝临床诊断及抗病毒治疗疗效观察较斑点杂交与HBVM更具有指导意义     

多重实时荧光定量PCR检测急性肝炎患者HBV和HCV方法的建立与意义分析

目的建立一种新的可以快速筛查急性肝炎患者HBV和HCV感染的多重实时荧光定量PCR方法。方法收集596例急性肝炎患者血清或血浆样本,应用自主构建的多重实时荧光定量PCR方法同时检测HBV和HCV,同时应用HBV和HCV单管检测试剂进行检测分析。结果新建立的多重实时荧光定量PCR体系,可以有效地检测HBV和HCV的阳性质控品及阳性样本。多重实时荧光定量PCR体系特异性较好,检测HBV和HCV时,两者之间无交叉反应,且以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性;多重实时荧光定量PCR体系检测HBV、HCV的灵敏度分别为20 IU/ml、50 IU/ml;多重实时荧光定量PCR体系精密度好,检测HBV、HCV的CV值分别为0.11%、0.096%。在检测临床样本时,多重复合体系检测血清或血浆中HBV和HCV的检出率与单独检测HBV和HCV具有很好的一致性,且HBV和HCV的一致率分别达到97.7%(k=0.952)、98.8%(k=0.976);同时有6例样本出现HBV和HCV共感染。结论新型多重实时荧光定量PCR方法对快速检测及筛查HBV和HCV较快捷,而且特异性好、灵敏度高、精密度好。因此多重实时荧光定量PCR方法对2种肝炎病毒的检测具有重要意义。     

荧光定量PCR检测丙型肝炎RNA结果分析

目的：分析丙型肝炎病毒RNA[HCV—RNA]与丙型肝炎抗体（抗-HCV）及转氨酶（ALT）之间的关系.方法：荧光定量PCR（FQ—PCR）、酶免化学发光法、全自动生化分析仪分别检测含量与ALT水平之间无明显相关性，但是HCV—RNA阳性率在ALT正常组与异常组之间差异有显著性（P〈0．005）。结论：在丙肝的诊断、治疗中，检测HCV—RNA含量有积极的意义。     

两种HBV-DNA定量测定方法的比较

目的考察实时荧光PCR定量法(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒DNA的准确性。方法通过对 56份血清进行HBV—DNA检测,其中包括一个10倍倍比稀释系列6份、阴性血清12份和阳性血清38份。比较两种方法的准确性及临床标本符合情况。结果微板核酸杂交定量法和实时荧光定量法的线性回归系统分别为0．977 和0．999。实时荧光定量法所检测的不同含量的样本批内变异系数均低于微板核酸杂交定量法。结论实时荧光定量法具有较好的灵敏度、特异性、重复性和线性,与微板核酸杂交定量法有良好的相关性。     

TT病毒对干扰素的敏感性及其临床意义分析

目的 :探讨各种肝病 TTV- DNA阳性的临床意义 ,并对丙型慢性肝炎的干扰素疗效及 TT病毒对干扰素敏感性进行研究。方法 :利用半套式 PCR方法检测 TTV- DNA。结果 :TTV- DNA阳性者非甲～丙型急性肝病 4 0 .9%、乙型急性肝病 30 %、非甲～丙型慢性肝病 2 5 %、乙型慢性肝病 37.5 %、丙型慢性肝病 39.6 %。对丙型慢性肝炎进行干扰素治疗的 TTV- DNA阳性 10 1例病例和阴性 15 4例间的年龄、性别、AL T、肝组织学及 HCV- RNA量差异无显著性 ,干扰素治疗后的 AL T变化和 HCV- RNA的消长是一致的 ,和 TT病毒无关。结论 :TT病毒和丙型肝炎病毒重复感染的慢性肝炎患者 ,肝损伤的主要原因是丙型肝炎病毒 ,与 TT病毒关系不大     

肝炎患者TTV感染情况及部分基因序列分析的研究

目的 :新发现的DNA病毒 (transfusiontransmittedvirus简称TTV)被认为是一种新的肝炎病毒。为了研究肝炎患者中TTV的感染情况 ,对 10 8例肝炎患者 (ALT >2 0 0IU/L)进行了TTVDNA的检测。方法 :利用巢式PCR方法扩增TTV基因 ,并对两例TTV分离株的部分基因进行克隆和序列分析。结果 :10 8中有 2 4例TTVDNA阳性 ,阳性率为 2 2 2 % ;在非甲～非庚型肝炎中TTV的阳性率为 3 4 6% ( 9/ 2 6) ;甲型肝炎病例中TTVDNA的阳性率为 9 1%( 1/ 11) ;乙型肝炎病例为 2 3 2 % ( 13 / 5 6) ;丙型肝炎病例 7 1% ( 1/ 14 )。两个TTV分离株 (TTVHN 1AF15 15 3 2 ,TTVHN 2AF15 1683 )的核酸序列与GenBank资料中TTV对应序列的核酸同源性高于 90 %。结论 :TTV病毒可能是非甲～非庚型肝炎的重要致病因子 ,并且能够与甲、乙、丙型肝炎病毒发生重叠感染     

西安地区病毒性肝炎患者TTV DNA的检测及临床意义

目的 调查西安地区不同类型肝炎患者输血传播病毒（ＴＴＶ）感染状况并探讨其临床意义。方法 在病毒ＯＲＦ１区设计内／外两对引物,采取ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ方法,检测病毒性肝炎患者１４７例和非病毒性肝炎患者１２８全血清中ＴＴＶ ＤＮＡ。结果 在肝炎组中,ＴＴＶ基因检测阳性率分别淡非甲非戊型肝炎６０．０％（９／１５）,庚型肝炎５０．０％（６／１２）,乙型肝炎２６．２％（２１／８０）,丙型肝炎１１．１％（３／     

输血传播病毒(TTV)重叠感染在慢性乙型肝炎病毒感染患者中的临床意义

目的：研究乙型肝炎病毒感染患者TTV重叠感染情况及初步探讨TTV的致病性。方法：在ORF1区设计特异性引物建立巢式多聚酶链式反应（PCR），检测乙型肝炎病毒感染患者血清中TTV DNA，对PCR产物进行分子克隆和测序。结果：献血员、慢性乙型肝炎病毒携带者、慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者TTV DNA阳性率分别为10％、11％、27％、48％。其中前两者与后两者比较均有显著差异，慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者相比也有显著差异（P＜0．05），乙型肝炎病毒感染者中其HBV感染复制指标的阳性率在TTV DNA阳性与TTV DNA阴性组之间无明显差异（P＞0．05）。慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者的ALT和TBIL在TTV DNA阳性病人组与TTV DNA阴性病人组之间比较有显著性差异（P＜0．05），TTV DNA阳性病人组明显高于TTV DNA阴性病人组。结论：献血员中存在TTV感染，乙型肝炎病毒感染患者重叠感染TTV较常见。慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者TTV DNA阳性率明显高于献血员和慢性乙型肝炎病毒携带者的阳性带，提示TTV的重叠感染可能是HBV感染病情加重因素之一，TTV重叠感染对HBV的复制可能不存在相互作用。     

献血员、肝炎患者TTV DNA检测及部分TTV基因序列分析

目的了解献血员、肝炎患者中的输血传递病毒(TTV)感染状况及基因型别。方法设计合成引物采用半套式聚合酶链反应（hemi-nestPCR）方法,对195份献血员血清、72份不同型别的肝炎患者血清进行了TTVDNA的PCR检测,并对部分阳性株进行序列测定及计算机分析。结果①在血清丙氨酸转氨酶（ALT）异常,HBsAg及抗HCV阴性的99份献血员血清标本中,检出TTVDNA阳性标本36份,阳性检出率为36.3%;而在ALT正常的96份献血员血清标本中,检出TTVDNA阳性标本16份,阳性检出率为16.6%,明显低于ALT异常献血者。②在72例不同肝炎患者中,共检出39例TTVDNA阳性血清,总检出率为54.16%,在非甲-非庚型肝炎患者中TTVDNA阳性率为87.5%,而在明确诊断为甲-庚型肝炎的患者中TTVDNA阳性率为50%,两组相比差异显著（P<0.05）。对8株阳性株序列分析结果显示,测序的8个分离株与9个G1、G2代表株核酸的同源性为60.4%～99.1%,氨基酸的同源性为55.4%～98.6%。经系统发育分析表明,这8个TTV分离株中有7株可分属于G1、G2两个基因型的5个亚型,而另1株为G1型的新亚型。结论①献血者中存在TTV感染,提示TTV可以导致感染个体的肝功能异常,TTV可能与HBV感染相似,亦存在“健康携带状态”。②非甲-非庚型肝炎患者的TTV感染率明显高于明确病原的甲-庚型肝炎患者,TTV感染与肝炎有关,可能是非甲-非庚型肝炎的病原之一。③8个TTV分离株中7个分属于G1、G2两个基因型中的5个亚型,另有1株为G1型的新亚型。     

TT病毒与原发性肝细胞癌发病的关系

目的探讨TT病毒(TTV)感染与原发性肝细胞癌(HCC)之间的关系.方法使用第二代TTV PCR引物,从112例HCC患者、95例无HCC的慢性肝病(CLD)患者及30例健康志愿者血清中检测TTV,每份DNA样本均取自50μl血清.记录各组患者的临床特点(性别、年龄、肝功能、肿瘤特性、其他肝炎病毒指标和输血史),并分析其与TTV感染的关系.结果 (1)TTV DNA在HCC患者的阳性检出率为17.86%(20/112),与在无HCC的CLD患者中的阳性检出率15.78%(15/95)相比,差异无显著性,但均较正常对照组有显著差异(P＜0.05);(2)在输血史这一临床特征上,HCC和CLD组内,TTV DNA阳性与阴性组之间差异有显著性,分别为80.00%vs 35.87%(P＜0.05)和73.33% vs 27.50%(P＜0.05);(3)在HCC患者中,TTV DNA阳性组丙氨酸氨基转移酶(ALT)较阴性组有显著升高,[(93±27)IU/L vs (68±31)IU/L](P＜0.05),且TTV DNA的存在造成同时合并HBV和/或HCV感染的HCC患者ALT的显著升高(P＜0.05);(4)在CLD患者中,有无TTV DNA的存在,对HBV和/或HCV所致的肝功能损伤并无显著性影响.结论 TTV这种可能经过血液传播的肝炎病毒可造成HCC患者的肝功能损伤,但在CLD向HCC的转化中,似乎不起主导作用.     

输血传播病毒(TTV)基因变异的临床意义

目的 :研究TTV基因变异与其致病性的关系。方法 :采用巢式多聚酶链式反应 (PCR)扩增TTVDNA ,收集TTVDNA阳性病例 5 2例 ,其中献血员 4例 ,乙型肝炎病毒携带者 5例 ,慢性乙型肝炎患者 11例 ,慢性重型乙型肝炎患者 32例 ,采用单链构象多态性 (SSCP)方法进行TTV基因变异检测。结果 :献血员、乙型肝炎病毒携带者、慢性乙型肝炎、慢性重型乙型肝炎患者中 ,SSCP电泳条带数分别为 1.2 5± 0 .5 0 ,1.6 0± 0 .5 5 ,3.36± 1.36 ,4 .5 9± 1.83;慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者组中SSCP电泳条带数显著多于其他组 (P <0 .0 5 ) ;慢性重型乙型肝炎患者中SSCP电泳条带数显著多于慢性乙型肝炎患者 (P <0 .0 5 )。结论 :TTV存在基因变异 ,TTV基因变异株的复杂性或称准种感染的复杂性可能是TTV与HBV感染者重叠感染使病情加重的因素之一     

重型病毒性肝炎经输血传播病毒感染状况调查及其临床意义

目的：调查重型病毒性肝炎经输血传播病毒的感染状况。方法：设计ＴＴＶ基因的特异性引物,采用巢式ＰＣＲ法对３７例重型肝炎进行血清中ＴＴＶ ＤＮＡ的检测,并对ＴＴＶ ＤＮＡ阳性病例进行临床资料分析。结果：３７例重型肝炎中９例血清ＴＴＶ ＤＮＡ阳性（２４．３％）,其中７例重叠感染ＨＢＶ,１例重叠感染ＨＣＶ,１例为单纯ＴＴＶ感染,９例中急性重型肝炎,亚急性重型肝炎１例,亚急性重型肝炎６例,慢性重型肝炎２例;     

Prospective study of mono-strand DNA virus (TTV) transmission by blood transfusion

AlthoughsensitiveandspecificimmunoassayandmolecularbiologicaltechniquesoftheknownhepatitisA-Evirusareavailable,theetiologyofasubstantialfractionofpost-transfusionandcom-munity-acquiredhepatitiscaseshaveremainedun-defined[1'2],hepatitisGvirus(HGV)couldbetheagentsofpartnonA-Ehepatitis,butthepathogenicityofHGVisstillremainedtobeidenti-fied,suggestingtheexistenceofadditionalcausativeagentsL"'.'].Anewhumanhepatitisre-latedviruswasisolatedbyagroupofJapanesesci-entists[6.7]-Thenewvirusisprovisio…     

昆明地区TTV感染的临床流行病学监测

目的 了解昆明地区输血传播病毒(Transfusion Transnfited Virus,TTV)感染的流行情况。方法 对本科77例住院人的血清用聚合酶链反应(PCR)法进行TTV检测。结果 检出11例TTV阳性患。结论 昆明地区肝病病人中存在TTV感染,感染率低于国内外水平。感染途径包括非肠道途径和肠道途径。