几种化学合成免疫调节剂免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染研究

目的观察不同剂量的几种化学免疫调节剂免疫小鼠诱导抗弓形虫感染作用。方法不同剂量匹多莫德、沙利度胺、匹多莫德加沙利度胺分别灌胃小鼠,共免疫14次,对照组用PBS灌胃,检测其免疫效果,并观察其受到弓形虫攻击感染后的生存情况。结果匹多莫德、匹多莫德加沙利度胺使小鼠IFN—r、CD4^＋细胞数量升高（P〈0．01）,CD4^＋与CD8^＋比值增加,各组均未检测到IL-4;沙利度胺使小鼠CD8^＋细胞数量明显增加（P〈0．01）,CD4^＋与CD8^＋比值减少,各组T细胞增殖活性与PBS对照组比较明显增强（P〈0．05）,且匹多莫德20mg加沙利度胺1．0mg组T细胞增殖活性最明显。小鼠攻击试验表明,20mg匹多莫德加1．0mg沙利度胺组小鼠存活时间明显长于匹多莫德、沙利度胺以及PBS对照组。结论匹多莫德20mg加沙利度胺1．0mg可诱导更有效的抗弓形虫感染保护作用。     

尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入Hela细胞的影响

目的：观察刚地弓形虫速殖子在来源于安徽省南部地区的尖吻蝮蛇蛇毒的作用下侵入Hela细胞的数量，探讨尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入Hela细胞的作用。方法：以不同浓度尖吻蝮蛇毒加入分孔培养的细胞中，于不同时间观察感染弓形虫速殖子细胞的数量。结果：尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入细胞有明显的促进作用，弓形虫速殖子在蛇毒的作用下在同一时间内对宿主细胞侵入的数量均高于对照组(P＜0．05——P＜0．01)，但不同剂量的尖吻蝮蛇毒对弓形虫速殖子侵入细胞的作用差异无显著性(P＞0．05)。5．0μg/ml和0．25μg/ml的剂量分别比对照组平均提高了125．49％和81．37％。结论：尖吻蝮蛇毒可以明显增加弓形虫速殖子对宿主细胞的感染率。     

金诺芬通过促进自噬对弓形虫增殖的影响

目的：金诺芬对弓形虫速殖子的作用及对弓形虫感染小鼠的自噬初步探讨。方法：透射电子显微镜观察用药前后刚地弓形虫超微结构的变化;采用免疫荧光、免疫组化和免疫印迹法检测感染有弓形虫的脑组织中自噬蛋白LC3的变化。HE染色观察金诺芬作用前后小鼠脑部的弓形虫速殖子变化。结果：透射电镜显示10 ?滋g/mL组（B组）的弓形虫速殖子内部结构被破坏,虫体细胞膜破裂,细胞质均质样改变,20 ?滋g/mL组（C组）的虫体内容物溢出,线粒体及粗面内质网消失,核固缩,核膜断裂,细胞质出现许多空泡,严重者虫体崩解呈均质样改变。免疫荧光结果显示实验组（77.49±15.68）的LC3蛋白的表达量较对照组（53.81±15.24）明显增加（P=0.001）。免疫组化结果显示用药后（1 208.55±580.07）的LC3蛋白表达量比对照组（544.54±225.04）明显增高（P=0.000）。免疫印迹法检测结果显示用药后（41 738.52±0.00）的LC3蛋白表达量比对照组（25 383.88±607.34）明显增高（P=0.000）。用药后（218.80±21.17）寄生在小鼠脑部的弓形虫速殖子增殖数量明显少于对照组（495.40±31.91）（P=0.000）。结论：金诺芬在体外有破坏弓形虫速殖子的作用,同时金诺芬可以提高弓形虫感染小鼠的自噬水平从而抑制弓形虫增殖。     

自拟抗弓形虫汤对小鼠急性弓形虫感染的治疗机制研究

目的 观察自拟抗弓形虫汤对急性弓形虫感染小鼠的治疗作用及其作用机理。方法 将昆明雌性小鼠随机分三组（A中药抗弓形虫汤组、B复方SMZ组、C模型组），将弓形虫RH株速殖子感染小鼠，2h后灌胃给药，A组给予中药配伍0．5ml（18mg／m1），B组给予0．5ml复方SMZ悬浊液（12mg／m1），治疗组疗程14d，观察至30d，记录小鼠存亡情况；肝组织病理切片采用HE染色；在感染后第3d、6d和第20d用羟胺法分别检测各组小鼠的血清、心、肝和肺组织超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果 A（16．55d）、B（23．20d）组小鼠存活时间均较C（7．85d）组差异有极显著性（P〈0．01），其中，A组与B组比较，差异有显著性（P〈0．05）；病理检查A组及B组有不同程度肝细胞肿大、炎症细胞浸润等病变，但与C组相比损伤程度明显减轻，差异有极显著性意义（P〈0．01），A组与B组比较，差异有显著性（P〈0．05）；A、B组小鼠各部位SOD活性较C组差异有极显著性（P〈0．01），但A组与B组比较，差异无显著性（P〉0．05）。结论 自拟抗弓形虫汤有显著的抗弓形虫作用，它从推迟小鼠死亡时间，保护肝细胞，增强抗氧化损伤等方面发挥重要作用。     

米诺环素体外抑制弓形虫增殖作用的研究

目的 评价米诺环素(MNC)体外抑制弓形虫速殖子的增殖作用.方法 体外在96孔板中用Hela细胞培养弓形虫速殖子,设置SMX给药组、MNC给药组和未给药组.观察各组弓形虫速殖子的增殖情况、形态变化,并对各组进行活虫计数.结果 给药后72 h,与未给药组比较,SMX给药组活虫计数显著减少[(2.08±0.40)vs(15.17±2.07),P<0.01],MNC给药组活虫数亦显著减少[(1.42±0.20)vs(15.17±2.07),P<0.01];给药后96 h,与未给药组相比,SMX给药组活虫计数显著减少[(1.42±0.20)vs(10.92±0.47),P<0.01],MNC给药组活虫数亦显著减少[(1.92±0.33)vs(10.92±0.47),P<0.01],差异均有统计学意义;给药后120 h,各组活虫计数比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 MNC在体外能够明显抑制弓形虫速殖子的增殖.     

利福平对兔脂肪干细胞增殖、成骨及黏附支架的影响

目的探讨利福平（rifampicin,RFP）对兔脂肪干细胞（rabbitadipose-derivedstemcells,rADSCs）增殖、成骨及黏附支架的影响,为后期RFP缓释系统与rADSCs的复合奠定实验基础。方法分离培养rADSCs,检测细胞周期及表面抗原CD44,成骨、成脂诱导后分别行茜素红及油红O染色。用利福平生长液干预rADSCs,按浓度分为0、10、20及30μg／ml4组,分别绘制细胞生长曲线、检测细胞凋亡率及碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）含量。制备同种异体脱钙骨支架,并复合各组rADSCs,计算细胞黏附率,扫描电子显微镜观察复合情况。结果rADSCs呈长梭形生长,G0／G1期占78．3％±4．2％,表面抗原CD44阳性表达。成骨诱导后茜素红染色及成脂诱导后油红O染色均为阳性。生长曲线示30μg／ml组第4-11天增殖能力较其他3组弱（P〈0．01）,细胞凋亡示30μg／ml组凋亡率高于其他3组（P〈0．01）,ALP检测示成骨诱导后第14天30μg／ml组ALP含量较其他3组少（P〈0．01）,细胞黏附率示30μg／ml组较其他3组低（P〈0．01）。扫描电镜观察30μg／ml组黏附的细胞数量少,形态松散。结论不影响rADSCs增殖、成骨及黏附支架的RFP临界浓度约为20μg／ml。     

脂质对小鼠肾足细胞增生影响

目的观察脂质对体外培养小鼠肾足细胞增生的影响。方法用不同浓度的低密度脂蛋白（LDL）和氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）对体外培养的小鼠肾足细胞进行不同时间的刺激干预,然后用四唑盐（MTT）法检测足细胞增生。结果LDL刺激足细胞24、48h后,从最低剂量6．25μg／ml组到25μg／ml组呈现剂量依赖性OD值增高（与正常组比较,P〈0．01）;24h25μg／ml组达到刺激足细胞增生的峰值、48h12．5μg／ml组达到刺激足细胞增生的峰值。OX—LDL刺激24h后,从12．5μg／ml组到100p,g／ml组呈现剂量依赖性OD值增高（与正常组比较,P〈0．01）。结论脂质LDL和OX—LDL在一定的剂量和时间条件下可以刺激足细胞增生。     

地塞米松对弓形虫感染小鼠细胞免疫的影响

目的通过测定T淋巴细胞转化率和细胞因子，观察地塞米松对弓形虫感染小鼠细胞免疫功能的影响。方法将小鼠分成正常对照组（不进行特殊处理），感染组（经口感染5×10^4个速殖子／只小鼠）和抑制感染组（在接种前48h开始肌肉注射地塞米松2mg／kg/d，48h后用5×10^4个速殖子／只小鼠经口感染小鼠），处理后0．5、10、15d采血。分别用MTTN、ELISA法测定T淋巴细胞转化率和细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4含量。结果抑制感染组T淋巴细胞转化率和细胞因子IFN-γ、IL之含量均低于感染组（P〈0．05）。结论地塞米松有抑制弓形虫感染小鼠细胞免疫功能的作用。     

不同浓度臭氧腰椎旁间隙注射治疗腰椎间盘突出症的临床观察

目的探讨不同浓度臭氧椎旁间隙注射在腰椎间盘突出症患者中的疗效。方法132例腰椎间盘突出症患者随机均分为A、B、C三组。每组44例,均给予臭氧腰椎旁间隙注射治疗,A组浓度为25μg／ml,B组为40μg／ml,C组为60／,g／ml,注射量均为10～15ml,对比i组患者治疗效果。结果B组患者术后3个月、6个月及12个月时的优良率均显著高于A、C丽组（P〈0．01）;三组患者治疗后视觉模拟评分法（visualanaloguescore,VAS）均显著低于治疗前（P〈0．01）;且B组显著低于A、C两组（P〈0．01或P〈0．05）。结论臭氧腰椎旁间隙注射治疗腰椎间盘突出症疗效确切,安全可靠,但40μg／ml浓度的臭氧对于该病的治疗效果更佳。     

咪喹莫特乳膏联合匹多莫德散治疗扁平疣

目的探讨咪喹莫特乳膏联合匹多莫德散治疗扁平疣的临床疗效。方法将收治的139例扁平疣患者随机分为观察组及对照组,观察组采用眯喹莫特乳膏联合匹多莫德散进行治疗,对照组单用咪奎莫特乳膏进行治疗。结果观察组的治疗效果优于对照组（P〈0．01）;复发率低于对照组（P〈0．05）。结论采用咪喹莫特乳膏联合匹多莫德散治疗扁平疣可提高疗效,减少复发率。     

匹多莫德对儿童哮喘患者血清白介素-4和γ-干扰素水平的影响及疗效观察

目的探讨匹多莫德对儿童哮喘患者血清白介素-4（IL-4）和γ-干扰素（IFN-γ）水平的影响及疗效观察。方法将2011年7月～2012年3月建德市第一人民医院就诊72例哮喘患儿随机分为匹多莫德组和对照组。两组患儿均按全球哮喘防治创议（GINA）制定的哮喘治疗方案进行治疗。匹多莫德组加用匹多莫德口服液0.4 g,1次/d,连用12周。观察并比较两组患儿治疗12周后血清IL-4和IFN-γ水平的变化及临床疗效。结果治疗12周后,两组患者血清IL-4水平[（0.94±0.25）、（1.23±0.36）μg/L]较治疗前[（1.87±0.51）、（1.91±0.46）μg/L]明显下降（t=3.13、2.31,P〈0.01、P〈0.05）,IFN-γ水平[（14.71±4.12）μg/L、（12.42±3.25）μg/L]较治疗前[（8.07±2.13）μg/L、（7.94±1.87）μg/L]明显上升（t=2.92、2.34,P〈0.01、P〈0.05）,且匹多莫德组下降或上升幅度较对照组更明显（t=2.29、2.14,均P〈0.05）;匹多莫德组的临床总有效率（91.67%）明显高于对照组（69.44%）（χ^2=5.67,P〈0.05）。结论匹多莫德治疗儿童哮喘的发作具有较好的临床疗效,作用机制与其能降低血清IL-4水平,提高血清IFN-γ水平,从而调节Th1/Th2细胞因子平衡偏移密切相关。     

白花蛇舌草与半枝莲复合提取物对膀胱癌YTS-1细胞系抑制作用的研究

目的探讨白花蛇舌草与半枝莲复合提取物对膀胱癌YTS-1细胞系的作用。方法常规方法培养膀胱癌YTS-1细胞株,取对数生长期细胞进行实验。采用MTT法观察不同浓度药物（0.25、0.5、1、2、4和8mg／ml）对细胞的生长抑制率;流式细胞技术观察2mg／ml药物作用24、48、72h后细胞周期的改变;克隆形成实验检测不同浓度药物（0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mg／m1）处理后细胞克隆形成率的变化。结果（1）不同浓度白花蛇舌草与半枝莲复合提取物作用于YTS-1细胞系24、48、72h后,在0.25-2mg／ml范围内随着药物浓度的增加和作用时间的延长,其对YTS-1细胞的生长抑制率也相应升高,抑制作用表现出良好的量效和时效依赖关系（P〈0.05）。（2）实验组2mg／ml白花蛇舌草与半枝莲复合提取物作用48h后,G2／M期细胞明显减少（P〈0.05）;作用72h后G2／M期细胞显著减少（P〈0.01）。在sub-G1区域出现了一个细胞峰,表明YTS-1出现了细胞凋亡迹象。（3）空白对照及025、0.5、1.0、20、40mg／ml的白花蛇舌草和半支莲复合提取物作用YTS-1细胞后克隆数分别为216.6±18.50、156.7±16.29、81.33±6.66、43.00±6.56、37.67±14.22、43.00±12.12,克隆形成率分别为10.8％、0.78％、0.41％、0.21％、0.18％、0.22％,除0.25mg／ml浓度处理组与空白对照组克隆形成率无明显差异外（P〉0.05）,其余各浓度处理组克隆形成率均显著低于空白对照组（P〈0.01）。结论白花蛇舌草和半支莲复合提取物可以抑制膀胱癌YTS-1细胞集落的形成,诱导细胞凋亡,具有明显的肿瘤抑制作用。     

弓形虫对HPB-ALL细胞及CNE-2Z细胞增殖的影响

目的：探讨弓形虫对HPB—ALL细胞及CNE-2Z细胞增殖的影响。方法：取培养至对数生长期的HPB—ALL细胞和CNE-2Z细胞分别接种于96孔培养板中,加入不同浓度（1×10^4、2×10^4、4×10^4、8×10^4、16×10^4／mL）的弓形虫速殖子作用48h,MTT法检测细胞增殖抑制率。结果：弓形虫对HPB—ALL细胞增殖抑制率依次为14％、20％、33％、38％和39％,除第1组外,其余4组的吸光度值与对照组比较．差异均有统计学意义（P〈0．05）,且实验3、4、5组吸光度值与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）;弓形虫对CNE-2Z细胞增殖抑制率分别是4％、9％、16％、20％和23％,其中实验4、5组吸光度与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：弓形虫逮殖子对体外培养的HPB—ALL细胞和CNE．2z细胞增殖有不同程度的抑制作用．     

苦参碱体外促进肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨苦参碱体外促进肿瘤细胞凋亡及其作用机制。方法将浓度为0.2 mg/ml、0.4 mg/ml、0.6 mg/ml的苦参碱作用于卵巢癌细胞株A21-2和骨肉瘤细胞株MG63,利用倒置相差显微镜观察不同浓度苦参碱作用后细胞的形态变化;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡周期、Caspase-3蛋白的表达。结果倒置相差显微镜观察表明,苦参碱能抑制MG63细胞和A21-2细胞的增殖;FCM分析发现,苦参碱与细胞作用72h后,C_0/G_1期前出现凋亡峰,与对照组比较,观察组不同浓度下凋亡率升高(P<0.01),且随浓度升高,凋亡率亦增高,差异有统计学意义(P<0.05),FCM分析显示,与对照组比较,观察组不同浓度下Caspase-3蛋白表达升高(P<0.01),且随浓度升高,Caspase-3蛋白表达亦升高,差异有统计学意义(P<005)。结论苦参碱能明显抑制A21-2细胞和MG63细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与促进Caspase-3蛋白的表达有关。     

叶下珠复方Ⅱ号对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡作用

目的探讨叶下珠复方Ⅱ号（CPUⅡ）对体外培养的人肝癌细胞Hep劬增殖和凋亡的作用。方法采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）,比较不同浓度的叶下珠复方在不同作用时间对体外培养的HepG2细胞增殖的影响;应用流式细胞术（FCM）结合AnnexinV—FITC,PI荧光双染法观察CPUⅡ诱导24h后人肝癌Hep晚细胞的凋亡率。结果MTT结果显示,人肝癌HepG2细胞经叶下珠复方Ⅱ号处理一定时间后,增殖比率明显下降,2．60mg／ml以上的叶下珠Ⅱ号对人肝癌HepG2细胞株的增殖有抑制作用（P〈0．01;48hP〈0．05）,且呈一定的量效关系;FCM结果显示,随着叶下珠复方Ⅱ号浓度的增加（2．6、26．0、130．0mg／ml）,细胞的凋亡率也逐渐增加,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论叶下珠复方Ⅱ号能够抑制人肝癌HepG2细胞生长和增殖,诱导人肝癌Hep岛细胞凋亡,呈明显的量效关系。     

苯对细胞增殖抑制率的影响及保护因素探讨

目的 探讨苯对骨髓单个核细胞增殖抑制率的影响,同时了解血清及氨磷汀能否作为保护因素减轻苯对细胞的影响.方法 实验分四组:空白对照组、(0.25、3.5、20μmol/L)苯组、(0.25、3.5、20μmol/L)苯+(2、10、50μg/mL)氨磷汀组、(0.25、3.5、20μmol/L)苯+血清组,通过细胞增殖检测(CCK-8法)并计算骨髓单个核细胞增殖抑制率.结果 高浓度苯组较低、中浓度苯组更能抑制细胞增殖(P＜0.01);(3.5、0.25μmol/L)苯+血清组细胞增殖抑制率均较相对应浓度的苯组减少(P＜0.05或P＜0.01);但20μmol/L苯+血清组与苯组间细胞增殖抑制率差异无统计学意义(P＞0.05).(0.25、3.5、20μmol/L)苯+(50、10、2μg/ml)氨磷汀,细胞增殖抑制率与相应浓度苯组比较,结果均具有显著性差异(P＜0.01或R＜0.05).结论 细胞增殖抑制率随苯剂浓度的增加而增加,苯毒性存在剂量依赖效应;血清及氨磷汀均能减轻苯对细胞的增殖毒性,可能可以作为苯中毒细胞的保护剂.     

4-乙酰氧基苯并恶唑-2-酮对大鼠肝星状细胞增殖抑制的影响

目的探讨4-乙酰氧基苯并恶唑-2-酮（AcO—BOA）对体外培养大鼠肝星状细胞（HSC—T6）增殖的影响。方法将HSC-T6细胞分别在实验组（AcO—BOA浓度分别为0．008、0．04、0．2、1．0、5．0mg／ml）及对照组（单纯培养液）中体外培养32h后,应用四甲基偶氮唑盐法（MTT法）检测细胞增殖情况;荧光倒置显微镜下观察两组HSC-T6细胞的形态学变化。结果实验组HSC—T6细胞的增殖率均低于对照组,浓度为0．008mg／ml的实验组与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;其他浓度的实验组分别与对照组比较差异有统计学意义（均P〈0．05）。AcO—BOA对HSC—T6细胞的增殖抑制率均随着药物作用浓度的升高而逐渐升高;经吖啶橙染色后,在荧光倒置显微镜下观察,均可见细胞数量减少、体积缩小、核破裂、核浓缩等变化,且随着作用浓度的增加变化更加明显。结论AcO-BOA对HSC—T6细胞具有抑制增殖的功效。     

半边旗提取物5F对人结肠腺癌细胞株SW620埃兹蛋白表达及活性影响

目的 观察半边旗提取物5F对人结肠腺癌细胞株SW620的埃兹(Ezrin)蛋白表达及活性影响.方法 采用四氮甲唑蓝[3-(4,5-dimethyhhiazol-2-yl)-2,5-diphenyhetrazolium bromide,MTT]检测5F对SW620细胞的增殖抑制作用,采用逆转录-聚合酶链反应(revers...