衣霉素逆转CD147介导的结肠癌细胞株SW620/5-FU耐药性的实验研究

目的:探讨衣霉素对结肠癌5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药细胞株(SW620/5-FU)耐药性的逆转作用及机制。方法:采用药物浓度梯度递增法诱导建立结肠癌耐药细胞株SW620/5-FU;MTT法检测细胞药物敏感性变化;流式细胞术和Lection blot检测N-糖链结构差异;Western blot检测糖蛋白CD147 N-糖基化水平。进一步采用衣霉素作用于SW620/5-FU,观察细胞耐药性状的改变。结果:成功建立结肠癌耐药细胞株SW620/5-FU,其细胞表面N-糖链合成增加,高糖基化CD147表达上升;衣霉素可阻断SW620/5-FU细胞中CD147 N-糖链合成,实现其5-FU耐药性的逆转。结论:衣霉素通过抑制N-糖链合成从而逆转CD147介导的结肠癌细胞株SW620/5-FU的耐药性。     

蟾皮华蟾毒配基组分体外对肿瘤及正常细胞株的抑制作用

[目的]测定蟾皮第18组分(F18)的化学成分并考察其体外对不同细胞株的抑制作用。[方法]通过质谱法对已分离的F18进行测定,采用噻唑蓝法(MTT法)检测F18对人SW480、SW620、BGC823肿瘤细胞株、人L02、CIK正常细胞株及鼠C26、CT26、4T1肿瘤细胞株的抑制作用,CCK-8法检测F18对SW620、L02、CIK在不同时间点的细胞存活率,最后流式细胞术检测F18对SW620细胞周期的影响。[结果]经鉴定蟾皮F18的主要成分为华蟾毒配基,故将蟾皮F18命名蟾皮华蟾毒配基组分(CFSB)。CFSB对SW480、SW620、BGC823、L02、CIK、C26、CT26、4T1细胞的IC_(50)值分别为1.10、1.15、1.55、4.85、2.63、21.22、31.39、20.75 mg/L,对SW620、L02、CIK细胞存活率呈时间依赖性。流式细胞术测定浓度在2 mg/L的CFSB干预SW620细胞24 h后其S期、G_2/M期细胞比例分别由36.41%增至55.73%、10.89%增至16.95%。[结论]CFSB对肿瘤细胞和正常细胞的增殖均有抑制作用,可使SW620细胞周期阻滞在S期和G_2/M期。     

miR-28-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的影响

目的探究miR-28-5p对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用qRT-PCR检测miR-28-5p在正常结肠细胞NCM460与结肠癌细胞HCT116、SW480、SW620中表达量的差异。将HCT116、SW480、SW620各分为三组:对照组,过表达组,沉默组。对照组不予特殊处理,其余两组分别转染miR-28-5p mimic和miR-28-5p inhibitor,采用qRT-PCR验证转染效率,采用CCK8法检测三组细胞的增殖能力,采用划痕实验检测三组细胞的的迁移能力。结果miR-28-5p在结肠癌细胞HCT116、SW480、SW620中低表达,与正常结肠细胞NCM460比较差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,过表达组细胞增殖和迁移能力均降低(P<0.05),沉默组细胞增殖和迁移能力均增强(P<0.05)。结论miR-28-5p在结肠癌细胞中低表达且有调控结肠癌细胞增殖和迁移的作用。     

去氢木香内酯在内生真菌Y0液体发酵中的生物转化研究

目的 去氢木香内酯在内生真菌Y0液体发酵中的生物转化。方法 对内生真菌Y0纯化培养，采用色谱法及波谱技术对转化产物进行分离及结构鉴定，并采用MTT法评价其对结肠癌SW620细胞的毒性。利用网络药理学相关数据库获取化合物1、2以及结肠癌SW620细胞靶点信息，对化合物与结肠癌SW620细胞结合能较强的靶点做进一步的分子对接。结果 去氢木香内酯在Y0菌液中转化得到2个化合物，分别鉴定为 (1S, 3S, 5S, 6S, 7S, 11S)-3-hydroxyl-11, 13-dihydrodehydrocostuslactone和(1S, 3S, 5S, 6S, 7S, 11R)-3-hydroxyl-11, 13-dihydrodehydrocostuslactone。化合物1和2对结肠癌SW620细胞的IC50分别为 (42.82 ± 8.32) μg/mL, (29.23 ± 7.17) μg/mL。化合物1和2与结肠癌SW620细胞均有结合靶点。结论 化合物1和2为愈创木烷型倍半萜类化合物，化合物1与化合物2对SW620细胞毒性相比，化合物2的细胞毒性更强。     

人microRNA-339慢病毒载体的构建及其对结肠癌细胞SW620迁移的影响

目的 构建人microRNA-339(has-miR-339)慢病毒载体,并探讨miR-339-5p/3p对结肠癌细胞SW620迁移能力的影响.方法 由miRBase及NCBI数据库查找获得miR-339前体序列(pre-miR-339)及其侧翼序列,将pre-miR-339和PLVTHM载体经双酶切后连接,产生PLVTHM-pre-miR-339慢病毒载体,并经测序鉴定;以PLVTHM-pre-miR-339、psPAX2和pMD2.G三质粒包装系统共同转染293FT细胞,包装产生慢病毒.流式细胞仪筛选建立稳定过表达pre-miR-339的SW620细胞株,实时荧光定量RT-PCR检测miR-339-5p及miR-339-3p表达.利用细胞划痕实验进行细胞迁移能力检测.结果 成功构建PLVTHM-pre-miR-339慢病毒载体,测序证实所插入基因序列完全正确.倒置荧光显微镜下观察可见转染后的293FT细胞及SW620细胞均表达绿色荧光.在过表达pre-miR-339的SW620亚细胞系中,miR-3396p及miR-339-3p表达水平显著高于空载对照组.划痕实验结果显示:与SW620/PLVTHM-NC组相比,SW620/PLVTHM-pre-miR-339组细胞迁移减缓,划痕较宽.结论 成功构建了PLVTHM-pre-miR-339慢病毒载体和稳定过表达miR-3396p及miR-339-3p的SW620亚细胞系,并证实miR-339-5p/3p可抑制结肠癌细胞SW620的迁移能力.     

肿瘤相关巨噬细胞对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响

目的 研究肿瘤相关巨噬细胞(TAM)对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响.方法 采用白细胞介素(IL)- 4体外诱导人M2型巨噬细胞,Western blot检测其标志分子CD68、巨噬细胞甘露糖受体(MMR)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况.Transwell非接触式共培养TAM和SW620细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测TAM分泌的细胞因子IL-10、IL-12、IL-23和转化生长因子-β(TGF-β)水平;活性凝胶电泳迁移分析法(EMSA)检测SW620细胞中核因子-κB(NF-κB)活性;四氮甲唑蓝法(XTT)和荧光激活细胞分选术(FACS)双标记法分别检测培养后SW620细胞的增殖和凋亡情况.结果 IL- 4诱导的人M2型巨噬细胞可表达CD68和MMR,不表达iNOS.SW620与M2型巨噬细胞共培养24、48h后,培养上清液中M2型巨噬细胞分泌的IL-10和TGF-β水平较培养前明显升高(P均＜0.01),IL-12和IL-23水平与培养前差异无统计学意义(P均＞0.05).与M2型巨噬细胞共培养24、48h后,SW620的NF-κB DNA结合活性较培养前分别降低了72%和75%(P均＜0.01),细胞增殖活性分别下降了48%和59%(P均＜0.01);凋亡率分别为6.37%和7.68%,明显高于对照组的0.37%(P均＜0.01).结论 TAM可能通过抑制SW620细胞的NF-κB活性,抑制SW620细胞增殖,促进SW620细胞凋亡.     

As_2O_3联合丹参酮ⅡA对SW620细胞侵袭转移能力的影响

目的:探讨As_2O_3(arsenic trioxide,As_2O_3)联合运用丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)对结肠癌SW620细胞迁移和侵袭的影响,并探讨联合用药与单独用药的差异。方法:应用MTT法检测不同浓度As_2O_3、TanⅡA及两药的联合用药对人结肠癌SW620细胞的增殖抑制作用,确定最佳联合用药浓度;分别用As_2O_3和TanⅡA以及两药联合处理结肠癌SW620细胞,同时以未经药物处理的SW620细胞作为空白对照,5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)处理组为阳性对照组。应用Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:MTT试验结果表明,As_2O_3(2.5μg/m L)联合TanⅡA(10μg/m L)为最佳联合用药浓度。经As_2O_3和TanⅡA联合干预后,SW620细胞的迁移和侵袭能力比空白对照及单药组明显降低(P0.01)。结论:As_2O_3联合TanⅡA作用能够明显抑制人结肠癌SW620细胞的侵袭转移能力。     

KDR-CDglyTK融合基因系统对结肠癌细胞增值的影响

目的 探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系对人结肠癌细胞SW620增值的影响.方法 重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SW620细胞株和对照组不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciciovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine).观察该体系对SW620细胞生长增值的影响.结果 携带双自杀基因(CDglyTK)和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SW620和LS174T细胞中有GFP表达.已转染腺病毒的SW620和LS174T细胞同未转染的各自细胞在细胞生长方面无显著性差异(P>0.05).在前药应用下,已转染腺病毒的SW620和LS174T细胞表现出对前药不同的敏感性:表达KDR的SW620细胞对前药具有较高的敏感性,与前者相比,不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P<0.01).融合基因的疗效优于单一自杀基因(P<0.01).结论 KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人结肠癌SW620细胞,抑制其增值.     

麦冬皂苷B对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨麦冬皂苷B(OPB)对人结肠癌SW620细胞增殖、凋亡及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路的影响。方法采用含100 k U·L-1青霉素、100 mg·L-1链霉素、体积分数10%胎牛血清的RMPI-1640培养液体外培养结肠癌SW620细胞,取对数生长期细胞接种于96孔板中,细胞培养24 h后分为空白对照组、OPB低剂量组(5μmol·L-1)、OPB中剂量组(10μmol·L-1)和OPB高剂量组(20μmol·L-1),然后将各组细胞培养板移入培养箱中继续培养。取各组培养24、48、72 h的SW620细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SW620的细胞抑制率。取各组培养48 h的SW620细胞,采用流式细胞术检测SW620细胞周期及凋亡情况,酶联免疫吸附试验法检测SW620细胞中TGF-β1蛋白的表达,Western blot法检测SW620细胞中磷酸化Smad3(p-Smad3)、Smad4及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达。结果 OPB低、中、高剂量组SW620细胞抑制率显著高于空白对照组(P <0. 05),OPB中、高剂量组SW620细胞抑制率显著高于OPB低剂量组(P <0. 05),OPB高剂量组SW620细胞抑制率显著高于OPB中剂量组(P <0. 05)。与空白对照组比较,OPB低、中、高剂量组G2/M期SW620细胞比例下降,G0/G1和S期SW620细胞比例升高(P <0. 05)。与OPB低剂量组比较,OPB中、高剂量组G2/M期SW620细胞比例降低,G0/G1和S期SW620细胞比例升高(P <0. 05);与OPB中剂量组比较,OPB高剂量组G2/M期SW620细胞比例降低,G0/G1和S期SW620细胞比例升高(P <0. 05)。OPB低、中、高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于空白对照组(P <0. 05),OPB中、高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于OPB低剂量组(P <0. 05),OPB高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于OPB中剂量组(P <0. 05)。OPB低、中、高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于空白对照组(P <0. 05),OPB中、高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于OPB低剂量组(P <0. 05); OPB高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于OPB中剂量组(P <0. 05)。与空白对照组比较,OPB低、中、高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05);与OPB低剂量组比较,OPB中、高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05);与OPB中剂量组比较,OPB高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。结论OPB可明显抑制人结肠癌SW620细胞增殖,其机制可能与OPB阻滞TGF-β1/Smad信号通路有关。     

miR-101 对结直肠癌细胞SW620 生物学特性的影响

目的探讨miR-101对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法利用CCK8法、平板克隆形成实验、细 胞周期、细胞凋亡方法分别检测SW620、GV209-SW620、mir101-SW620 3组细胞的生物学特性。结果CCK8比色法结果显示 SW620各组细胞生长时间水平差异具有显著性（F=4152,P<0.001）,细胞增殖能力组间有显著性差异（F=10220,P<0.001）。平 板克隆实验的结果为SW620 空白对照组、GV209-SW620 对照组和mir101-SW620 组的克隆形成率分别为：44.33%、48.17%、 35.17%。SW620 3组细胞间的克隆形成能力差异具有统计学意义（F=73.015,P<0.001）。细胞周期分析发现SW620各组细胞 间其G1、S、G2/M 期存在着统计学差异（F=45.974,P=0.019;F=122.139,P=0.000;F=115.171,P=0.000）。除了SW620 和 GV209-SW620 的G2 期分布无统计学差异外（P=0.441）,其余各组G1、G2/M 期均有统计学差异（P<0.01）;与SW620 和 GV209-SW620相比,mir101-SW620组出现了明显的G1和G2/M期周期阻滞。细胞凋亡实验发现SW620细胞各组细胞凋亡率 差异有统计学意义（F=6115,P<0.001）,各组进行两两比较,均有统计学差异（P<0.01）。与SW620空白细胞组、GV209-SW620 对照组相比,miR-101过表达组细胞凋亡率增加（P<0.05）。结论miR-101能够抑制结直肠癌细胞SW620的增殖,细胞G1和G2/ M期周期阻滞及促进细胞凋亡。     

紫草素诱导人结肠癌细胞SW620凋亡及机制研究

目的探讨紫草素诱导人结肠癌细胞株SW620凋亡及分子机制。方法体外培养人结肠癌细胞株SW620,加入终浓度分别为2.5～15μmol/L的紫草素。采用MTT法测定紫草素对肿瘤细胞的增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率,Western blot方法测定对bcl-2、bax蛋白表达水平。结果紫草素随时间和浓度的增加对SW620细胞增殖抑制率增加,细胞凋亡率增加（P〈0.05）。Western blot法检测发现bax蛋白表达升高同时bcl-2蛋白表达下降。结论紫草素有抑制结肠癌细胞增殖和诱导凋亡的作用,可以通过调控bax和bcl-2蛋白的表达经线粒体途径诱导细胞凋亡。     

延龄草总皂苷抑制结肠癌细胞增殖作用及机制研究

目的观察延龄草总皂苷对结肠癌细胞HT-29、SW-620的增殖、环氧合酶2（cyclooxygenase 2,COX-2）表达与功能及β-连环素（β-catenin）表达的影响。方法培养结肠癌细胞HT-29与SW-620,加入不同浓度的延龄草总皂苷（0～300.00mg/L）,采用四甲基偶氮唑盐（microculture tetrazolium,MTT）比色法,观察延龄草总皂苷对HT-29、SW-620增殖的影响,以蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞中COX-2、COX-1和β-catenin蛋白的表达,以酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）方法检测细胞培养液中前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）的浓度。结果延龄草总皂苷可有效抑制HT-29、SW-620的增殖,其IC50分别为：（9.87±1.15）mg/L,（36.63±1.07）mg/L。延龄草总皂苷可剂量依赖性地降低COX-2、β-catenin的表达和PGE2的浓度。结论延龄草总皂苷可有效抑制结肠癌细胞HT-29、SW-620增殖,可能机制为其降低了COX-2的表达及功能与β-catenin的表达。     

紫花牡荆素对人结肠癌SW480细胞生长和凋亡的影响

目的观察紫花牡荆素（CAS）对人结肠癌SW480细胞生长和凋亡的影响。方法体外培养人结肠癌SW480细胞,平皿克隆形成法测定细胞锚定依赖性生长能力,PI染色流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡率,Western Blotting分析CAS对上调死亡受体-5（DR5）、抑制核因子κB（NF-κB）（p65）蛋白表达的影响。结果平皿克隆形成法检测显示CAS呈浓度依赖性抑制SW480细胞生长。PI染色FCM结果表明CAS呈时间和浓度依赖性诱导SW480细胞凋亡。Western Blotting检测显示CAS呈时间和浓度依赖性上调死亡受体-5（DR5）表达和抑制核因子κB（NF-κB）活性。结论 CAS具有抑制人结肠癌SW480细胞增殖和诱导凋亡的作用,其诱发结肠癌细胞凋亡作用与DR5表达和NF-κB活性有关。     

P38信号转导通路在胃泌素促进人大肠癌细胞SW480增殖中的作用及其机制

目的:探讨胃泌素对人大肠癌细胞株SW480增殖、凋亡的影响,以及P38-丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的关系。方法:体外培养大肠癌SW480细胞株,将细胞分为对照组、胃泌素组、丙谷胺组和胃泌素+丙谷胺组,对照组不加药,其余组加不同浓度的药物处理。运用MTT法观察细胞凋亡情况,确立5-肽胃泌素和丙谷胺处理SW480细胞的最佳浓度;流式细胞术检测各组细胞增殖指数的变化;qRT-PCR检测大肠癌SW480细胞株胃泌素受体/胆囊收缩素-B受体(CCK-2R)mRNA表达情况;Western blot检测P38蛋白表达及其磷酸化水平。采用方差分析和SNK-q检验进行统计学分析。结果:SW480细胞中存在CCK-2R mRNA表达。胃泌素在6.25²00.00 mg/L范围内能抑制大肠癌SW480细胞的凋亡,且当浓度达12.50 mg/L时为最佳浓度(P<0.05);单独丙谷胺对大肠癌SW480细胞凋亡无明显影响(P>0.05),但丙谷胺在8.00200.00 mg/L范围内能抑制大肠癌SW480细胞的凋亡,且当浓度达12.50 mg/L时为最佳浓度(P<0.05);单独丙谷胺对大肠癌SW480细胞凋亡无明显影响(P>0.05),但丙谷胺在8.00²56.00 mg/L范围内能明显拮抗胃泌素抑制SW480细胞的凋亡作用,其最佳浓度为16.00 mg/L(P<0.05)。胃泌素(12.50mg/L)组细胞增殖指数为(34.56±1.41)%,显著高于对照组的(28.74±1.61)%和胃泌素(12.50 mg/L)+丙谷胺(16.00 mg/L)组的(28.72±1.78)%(P<0.05),而丙谷胺(16.00 mg/L)组细胞增殖指数为(27.75±2.29)%,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);P38蛋白及其磷酸化在胃泌素组(12.50 mg/L)中表达水平低于对照组(P<0.01),也低于胃泌素(12.50mg/L)+丙谷胺(16.00 mg/L)组(P<0.01)。结论:胃泌素可以抑制大肠癌细胞株SW480的凋亡、促进增殖,其作用可能是通过抑制P38及其磷酸化水平来实现的,但能够被其受体拮抗剂丙谷胺抑制。     

白花蛇舌草乙醇提取物对人结肠癌细胞HT-29 Pim-1和Pim-2 mRNA表达的影响

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物对人结肠癌细胞HT-29 Pim-1和Pim-2 mRNA表达的影响。方法采用人结肠癌细胞HT-29常规体外培养,随机设定空白组和不同浓度（1、3、5、10 mg.mL-1）白花蛇舌草乙醇提取物组,干预24 h。倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定不同浓度药物对HT-29细胞增殖的影响,并用5 mg.mL-1浓度干预1、3、6、12、24、48 h观察对HT-29细胞增殖的影响;RT-PCR检测药物作用后HT-29细胞Pim-1和Pim-2 mRNA的表达。结果白花蛇舌草乙醇提取物干预后,HT-29的细胞密度明显减少,细胞变小,最终悬浮脱落而死亡;HT-29细胞增殖受到抑制,并呈现出量效和时效关系;白花蛇舌草乙醇提取物能明显下调HT-29细胞Pim-1和Pim-2 mRNA表达,并随药物浓度的增加而减少,呈一定的量效作用。结论白花蛇舌草乙醇提取物能显著抑制人结肠癌HT-29细胞的增殖以及下调Pim-1和Pim-2的mRNA表达。     

5-氟尿嘧啶和奥沙利铂诱导结肠癌SW620细胞死亡的比较

【目的】研究5-氟尿嘧啶和奥沙利铂分别诱导结肠癌细胞株SW620的细胞凋亡的作用效果。【方法】用80μg／ml 5-氟尿嘧啶和25μg/ml奥沙利铂分别作用SW620细胞8h,并应用AnnexinV—FITX／PI双标记流式细胞术对细胞凋亡进行检测,观察凋亡细胞的比例。【结果】80μg／ml 5-氟尿嘧啶处理8h组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约11．9％（P〈0．01）;25μg／ml奥沙利铂处理8小时组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约21．4％（P〈0．01）。【结论】在特定条件下,5-氟尿嘧啶和奥沙利铂均能明显诱导结肠癌细胞株SW620的细胞凋亡;奥沙利铂对结肠癌细胞的诱导凋亡作用要强于5-氟尿嘧啶。     

RNA干扰靶向沉默Gankyrin对结肠癌增殖及侵袭的影响

目的：观察靶向沉默Gankyrin 基因对结肠癌细胞SW620在增殖和侵袭方面的影响。方法：通过体外合成针对Gankyrin基因的siRNA,通过脂质体转染SW620细胞,设立对照组检测细胞增殖、凋亡、细胞周期及侵袭能力。结果：细胞转染后,实验组的倍增时间为25．6±0．8小时,对照组倍增时间为21．7±0．6小时（P＜0．01）;细胞周期检测实验组的G1期细胞为68．3±0．7脖、S期细胞为29．6±0．9脖,对照组的G1期细胞为44．1±0．3脖、S期细胞为4．8±0．4脖（P＜0．01）;细胞凋亡检测实验组AnnexinV ＋PI-细胞比例为8．93±0．21脖,明显高于对照组1．31±0．06脖（P＜0．01）;细胞侵袭实验实验组细胞侵袭能率为34．2±0．3脖,明显低于对照组的53．9±0．6脖（P＜0．01）。结论：siRNA干扰Gankyrin基因表达能够明显降低SW620的增殖和侵袭能力,提示Gankyrin可作为结肠癌基因治疗的潜在靶点。     

RNA干扰假基因Cripto-3表达对大肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的：探讨RNA干扰下调假基因Cripto-3（Cr-3）对人大肠癌细胞SW480增殖和侵袭的影响。方法：将大肠癌细胞随机分为5组：空白对照组,空载对照组,siRNA转染组（5 nmol/L组、10 nmol/L和20 nmol/L组）。将Cr-3小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染人大肠癌SW480细胞后,采用实时荧光定量PCR检测Cr-3表达水平;分别采用平板克隆形成实验和Transwell法检测大肠癌细胞的增殖和侵袭能力。结果：与空白对照组和空载对照组比较,siRNA转染组Cr-3表达水平均明显下降,且呈浓度依赖性（P〈0.05）,癌细胞克隆形成和穿过滤膜的细胞均明显减少,且与浓度相关（P〈0.05）。结论：假基因Cr-3在大肠癌细胞增殖侵袭中起着重要的作用,可能是大肠癌诊疗中的一个重要靶点。     

miR-126在人结肠癌细胞中的表达及其对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的探讨MicroRNA-126(miR-126)在人结肠癌细胞中的表达以及对结肠癌细胞生物学行为的影响。方法应用荧光PCR定量检测60例结肠癌患者的结肠癌组织以及癌旁组织中miR-126的表达,共60对,再测定5株结肠癌细胞(SW480、HT29、HCT116、LOVO、SW620)中的表达情况;CCK-8法、划痕实验和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并进一步通过体外实验研究miR-126对结肠癌细胞生物学行为的影响。结果与癌旁组织细胞比较,miR-126在结肠癌细胞中表达下降(95.0%vs.55.0%,P<0.05),发生转移者与未发生转移者比较,差异有统计学意义(25.0%vs.75.0%,P<0.05)。miR-126可以抑制SW480细胞的生长及其侵袭转移,有基质胶Tran—swell实验中,转染组及空白对照组细胞迁移数分别为(10.0±4.3)个和(258.0±30.6)个;无基质胶的Transwell实验中,分别为(84.0±13.2)个和(335.0±27.3)个,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-126高表达可以增强癌细胞对奥沙利铂的敏感性。结论miR-126可明显抑制结肠癌细胞的发生发展,影响多种结肠癌细胞株生物学行为。     

1-甲基乙内酰脲与氟尿嘧啶联合对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡作用的研究

目的探讨1-甲基乙内酰脲(1-methylhydantoin)单用以及与氟尿嘧啶(5-Fu)联合对结肠癌SW480细胞增殖抑制作用和诱导凋亡。方法使用MTT比色法检测1-甲基乙内酰脲M_((a-h))在不同浓度(0.5、5、10、20、50、100、200、500 mg/L)单用及与不同浓度5-Fu_((a-d))(10、20、50、100 mg/L)联合作用于人结肠癌SW480细胞的吸光度值,然后再计算抑制率(IR)。流式细胞仪监测M_d、M_e、Fu_b、M_d+Fu_b、M_e+Fu_b处理SW480细胞48 h对细胞周期分布和凋亡影响。结果 1-甲基乙内酰脲在体外对人结肠癌SW480细胞有增殖抑制作用。在低浓度时,1-甲基乙内酰脲对人结肠癌SW480细胞增殖抑制效果与5-Fu相当(P0.05);在高浓度时,1-甲基乙内酰脲对人结肠癌SW480细胞抑制增殖效果弱于5-Fu(P0.05)。1-甲基乙内酰脲与氟尿嘧啶联合应用有协同抗肿瘤效果。结论 1-甲基乙内酰脲能够抑制人结肠癌细胞SW480的增殖和诱导凋亡作用,并与氟尿嘧啶有协同抗瘤细胞增殖效果。