实验性肝纤维化间质胶原酶基因表达的研究

为了解实验性肝纤维化间质胶原酶（ＭＭＰ１）基因表达的动态变化，建立了四氯化碳中毒性及人血白蛋白免疫损伤性２种大鼠肝纤维化模型。采用逆转录定量ＰＣＲ方法，测定肝纤维化不同阶段间质胶原酶基因表达水平。结果表明：正常大鼠肝组织有间质胶原酶的基因表达。在肝纤维化的发生、发展过程中，肝组织间质胶原酶基因表达逐渐增强；到肝硬化阶段ＭＭＰ１基因表达较肝纤维化阶段下降；在肝硬化的自发逆转过程中ＭＭＰ１基因表达保持在明显高于正常对照的水平。提示肝纤维化过程中ＭＭＰ１基因表达与酶活性的变化一致，酶活性的变化是其基因表达改变的结果     

免疫印迹法检测肝纤维化组织基质金属蛋白酶抑制因子-1表达水平

目的 观察实验性肝纤维化过程中金属蛋白酶组织抑制因子－1（TIMP－1）蛋白表达水平的动态变化。方法 建立四氯化碳中毒性大鼠肝纤维化模型,采用免疫印迹方法（Western blot法）,测定肝纤维化不同阶段TIMP－1的蛋白表达水平。结果 正常大鼠肝组织可见TIMP－1的蛋白表达。在肝纤维化的发生、发展过程中,TIMP－1蛋白表达逐渐增强,到肝硬化阶段达到高峰。结论 TIMP－1可能是促进和影响肝纤维化、肝硬化形成的重要因素。     

An adipocentric view of liver fibrosis and cirrhosis

Liver fibrosis is the consequence of chronic or repeated liver injury caused by hepatotoxic agents like alcohol and viruses, as well as immune and congenital metabolic disorders. Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD), caused by obesity and abnormal lipid metabolism, may be the latest known cause of liver fibrosis and cirrhosis. Furthermore, NAFLD with obesity can provide a terrain in which alcoholic and viral liver diseases, such as chronic hepatitis C, are prone to cause liver cirrhosis. Insulin, insulin-like growth factor (IGF)-1, peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs), leptin, adiponectin, and preadipocyte factor-1/delta-like1 (Pref-1/dlk1) are hormones, growth factors, nuclear receptors, and cytokines that are actively involved in lipid metabolism. They share common target cells important in liver fibrosis, i.e., hepatic stellate cells (HSCs). Activation of HSCs is known to initiate and perpetuate liver fibrosis. Insulin and IGF-1 stimulate HSC activation and collagen production in vitro. However, IGF-1 alleviates liver fibrosis in vivo. Ligands of PPARy inhibit HSC activation and collagen synthesis in vivo and in vitro, and are helpful in decreasing liver fibrosis. But ligands of PPARbeta enhance proliferation of HSCs. Leptin is profibrogenic, and liver fibrosis is decreased in leptin- or leptin receptor-deficient mice. Adiponectin is, on the contrary, anti-fibrogenic. Extensive liver fibrosis may develop in adiponectin-knockout mice and is alleviated by administration of recombinant adiponectin. Pref-1/dlkl is implicated in fibrogenesis of the liver through its modulation of HSCs. The use of such biologically active molecules in lipid metabolism as ligands of PPARgamma and adiponectin might not help slim down a patient on the whole, but can potentially be used to halt the progression of liver fibrosis. Weight reduction, a strategy for controlling obesity and metabolic syndromes, may also be a tool for decreasing NAFLD and alleviating liver cirrhosis.     

乙肝患者血清学标志物与肝纤维化的关系研究

[摘要] 目的 评价血清纤维化指标透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原肽( PⅢP)、Ⅳ型胶原 ( CⅣ)、层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白（FN）、基质金属蛋白酶(MMP-2) 及其抑制物(TIMP-1)对肝纤维化诊断的价值。方法 采用放射免疫法检测80例肝病患者肝纤维化血清学标志物水平，并与患者的肝组织病理学检查作对比。结果 肝纤维化血清指标HA、PⅢP、CⅣ、LN、MMP-2、TIMP-1，大部分指标纤维化各期及炎症各级的值比正常人显著升高（P<0.05或0.01）；仅FN指标，肝纤维化患者显著降低(P<0.05或0.01)。血清HA、PⅢP、CⅣ、LN、MMP-2、TIMP-1与肝纤维分期显著正相关（P<0.05或0.01）；与炎症分级显著正相关（P <0.05或0.01）。仅FN与肝脏病理分期、分级显著负相关（P<0.05）。结论　血清纤维化指标与肝纤维化分期分级存在显著相关性，具有重要临床意义。     

肝脏瞬时弹性探测仪在诊断慢性乙型肝炎患者不同分期肝纤维化中的应用价值

目的 探讨肝脏瞬时弹性探测仪(FibroScan)在诊断慢性乙型肝炎患者不同分期肝纤维化中的应用价值.方法 选取200例慢性乙型肝炎患者,均行病理活检诊断肝纤维化分期,同时采用FibroSean检测肝弹性值.比较不同分期患者的肝弹性值,分析肝弹性值与肝组织纤维化分级的相关性.采用受试者工作特征曲线法评估FibroScan诊断不同分期肝纤维化的价值.结果 S0、S1、S2、S3、S4期患者的肝弹性值依次升高(P<0.05),肝弹性值与肝纤维化分期呈正相关(P<0.05).FibroScan诊断S1、S2、S3、S4期肝纤维化的曲线下面积分别为0.931、0.955、0.968、0.954,特异度及灵敏度均大于90％.结论 FibroScan检查对慢性乙型肝炎患者不同分期肝纤维化均具有较高的临床诊断价值.     

肝纤维化组织中MMP1、TIMP1的表达及其临床意义

目的 :检测肝纤维化组织中基质金属蛋白酶 1 (MMP1 )、基质金属蛋白酶组织抑制因子 1 (TIMP1 )的表达 ,为肝纤维化的诊治提供重要的分子生物学指标。 方法 :采用链霉菌抗生物蛋白 -过氧化酶联接法 (S- P法 )检测70例肝纤维化组织中 MMP1 、TIMP1 的表达。结果:(1) TIMP1 蛋白阳性表达随肝纤维化程度的加重而增强 ,并且呈正相关关系 (r=0 .92 74 ,P <0 .0 1)。 (2 ) MMP1 蛋白阳性表达随肝纤维化程度的加重无明显变化 ,无相关关系(r =0 .2 181,P >0 .0 5 )。 结论:TIMP1 与肝纤维化的发生、发展密切相关 ,随纤维化发生、发展阳性表达增强。从分子水平对肝纤维化、肝硬化病变进行评估 ,为早期诊治肝纤维化和判断预后提供依据。     

HR标准化肝脏表观弥散系数值评价肝纤维化程度及其与血清学指标的相关性研究

目的探讨标准化肝脏ADC值定量分析肝纤维化的能力,同时分析其与血清肝纤维化指标的相关性。方法利用MRDwI检查回顾性分析54例肝纤维化患者资料,检测肝纤维化血清学指标HA、LN、PC11I和IV-C,测量不同肝纤维化分期下肝脏ADc值、脾脏ADC值,并计算标;住化肝脏ADC值。分析肝纤维化分期与标准化肝脏ADC值之间的相关性,比较肝纤维化各期标准化肝脏ADc值间的差异,并对血清学指标和标准化肝脏ADC值作相关性分析。结朵血清学指标№、LN、PCIII和IV—c随肝纤维化分期进展依次升高,标准化肝脏ADc值（b=700S／mill。）依次降低,差异具有统计学意义（P〈0．01）;血清生化指标与标准化肝脏ADC值相关性分析,标准化肝脏ADC值与LN、PCIII、HA,IV-C呈负相关。结论MRDwI是有效检测和定量肝纤维化严重程度的影像学方法。血清肝纤维化指标、标准化肝脏ADC值在肝纤维化的诊断中均具有一定价值,两种方法各指标之间存在一定程度的相关性。     

苦参素防治肝纤维化的实验研究

目的探讨苦参素注射液抗肝纤维化作用及时IL-10、TGF-β1和Ⅰ型胶原表达的影响,为临床应用中药防治肝纤维化和肝硬化提供实验依据。方法将35只SD大鼠随机分为对照组、CCl4诱导肝纤维化模型组和苦参素注射液干预组,检测Ⅰ型胶原在各组肝组织中的表达及IL-10、TGF-β1在各组血清中的表达。结果在正常肝组织、苦参素注射液干预组肝组织和肝纤维化模型组肝组织中Ⅰ型胶原表达的平均密度值分别为0．298,0．313,0．503,差异均有统计学意义（P〈0．01）;血清中IL-10表达含量分别为1412．38pg／L、1311．81pg／L、877．03pG／L,差异均有统计学意义（P〈0．01）,血清中TGF-β1表达含量分别为491．29pg/L、665．36pg／L、959．09pg／L,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论苦参素可减轻CCl4诱导的肝纤维化,TGF-β1和IL-10的表达水平可作为评价临床上治疗肝纤维化的客观指标。     

兔肝区组织间插植内照射后肝纤维化过程的动态观察

目的：观察家兔肝脏高剂量率组织间插植内照射后肝纤维化的过程,方法：将家兔分成4组：A组10Gy,B组20Gy,C组30Gy,D组对照组,观察内照射后1周,2周,1月,3月,6月的组织形态变化。结果：30Gy内照射后半年逐渐出现肝纤维化病变,可分为急性放射性肝炎期（1－2周）;肝纤维化前期（1－3个月）,肝纤维化期（6个月后）,结论：照射后6个月10Gy组肝损伤基本恢复,30Gy组出现典型的放射性肝纤维化改变。     

氯沙坦对实验性肝纤维化模型大鼠的作用

目的   研究氯沙坦对40%CCL4诱导的大鼠肝脏纤维化的影响。方法   制备CCL4诱导的大鼠肝纤维化模型,同时给予氯沙坦灌胃,共6周,分别取血和肝组织,检测血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT);光镜下观察肝组织病理改变;偏光显微镜下观察肝组织纤维化的程度;免疫组化检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;检测大鼠肝组织中AngⅡ、AT1R mRNA表达。结果   与模型组比较,氯沙坦干预组炎症反应、纤维化程度明显减轻,Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达明显减少( P<0.05),肝功能改善;肝组织中AngⅡ、AT1R mRNA表达降低(P<0.05)。结论   氯沙坦可能通过降低AngⅡ、AT1R的表达,而对CCL4诱导的大鼠肝纤维化起到一定的保护治疗作用。     

P53和高迁移率族蛋白-1在不同程度慢性乙型肝炎后肝纤维化组织中的含量及其意义

目的：探讨P53和高迁移率族蛋白-1(high mobility group protein 1,HMGB1)表达在慢性乙型肝炎肝纤维化中的作用。方法：将103例经病理活检证实为肝纤维化的慢性乙型肝炎患者按照非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)量表进行肝纤维化评分,分为3组：无纤维化组(n=18)、低纤维化组(n=49)和高纤维化组(n=36)。检测患者血清HMGB1水平,根据HMGB1水平和肝纤维化的程度绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线。采用CCl4法诱导肝纤维化大鼠模型后于第6周和第12周处死部分大鼠,Masson染色法观察各组大鼠肝纤维化程度,Western印迹测定大鼠肝组织中HMGB1和P53蛋白水平,酶联免疫吸附法检测组蛋白去乙酰化酶活性以及外周血炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6含量。结果：低纤维化组及高纤维化组患者血清HMGB1水平均明显高于无纤维化组(P<0.01);ROC曲线示血清HMGB1诊断肝纤维化程度的cut off值为74 pg/mL,特异性为65%,敏感性为87%。与正常组比较,低、高度肝纤维化组大鼠肝组织蛋白中,核内HMGB1减少,胞质HMGB1增多,而P53蛋白表达量明显增加(P<0.01),组蛋白去乙酰化酶活性降低,外周血炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6水平升高。结论：慢性乙型肝炎后肝纤维化组织中P53和HMGB1表达均明显增加;HMGB1水平与肝纤维化水平呈正相关,可作为辅助诊断肝纤维化的指标。     

三种血清因子水平在晚期血吸虫病肝纤维化诊治中的意义

目的探讨转化生长因子β1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）在晚期血吸虫病（晚血）患者肝纤维化诊断中的作用及意义。方法采用ELISA法检测45例晚血、30例健康人血清TGF-β1、MMP-1、TIMP-1水平;采用常规HE染色结合Masson三色、苦味酸天狼猩红特殊染色法,对晚血患者的肝活检组织进行肝纤维化程度分期。结果与对照组比较,晚血组血清TGF-β1、TIMP-1水平及TIMP-1/MMP-1值明显增高（P均〈0.01）,而且血清TGF-β1含量和TIMP-1/MMP-1值与肝纤维化程度呈正相关（P均〈0.05）,但血清MMP-1含量与肝纤维化程度差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 TGF-β1、MMP-1、TIMP-1与晚血肝纤维化的发生、发展密切相关,三者联合检测可作为晚血肝纤维化的诊断和疗效评估指标。     

胰岛素样生长因子-1受体在实验性肝纤维化中的表达及IL-10的干预作用

目的 观察胰岛素样生长因子－1受体（IGF－1R）在实验性大鼠肝纤维化过程中的表达情况及白细胞介素－10（IL－10）对肝纤维化大鼠IGF－1R表达的影响。方法 建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型并行IL－10干预实验。取对照组、模型组及IL－10干预组大鼠肝脏组织，采用SP免疫组织化学方法检测分析在肝纤维化进程不同阶段大鼠肝组织IGF－1R4的表达情况。结果 经CCl4诱导成功建立大鼠肝纤维化模型。随着肝纤维化程度的加重，IGF－1R在肝组织中阳性表达明显增强；经Ridit分析，对照组与模型组IGF－1R阳性表达差异有显著性（P＜0．01）；IL－10干预组IGF－1R阳性表达较模型组明显减弱，差异有显著性（P＜0．05），且随IL－10干预时间的延长，IGF－1R在肝组织中阳性表达逐渐减弱。结论 随着肝纤维化程度的进展IGF－1R阳性表达增强，外源性IL－10可降低CCl4诱导大鼠肝纤维化中IGF－1R的表达。     

抗 HMGB1抗体对小鼠肝纤维化的保护作用

目的：：探讨 HMGB1在 CCL4导致的肝纤维化发生发展中的作用及作用机制。方法：昆明种雄性小鼠30只,随机分为3组：正常组、CCL4肝纤维化组、抗 HMGB1抗体组,建模8周后取肝组织及血清。用 ELISA 法检测血清中 HA、Col-Ⅰ、PⅢP 和 IL-6、TNF-α的含量;用 HE 染色和天狼猩红染色观察肝组织病理改变和胶原纤维形成情况;用 Real time RT-PCR 法检测小鼠肝组织中 TGF-β、α-SMA 和MMP-9 mRNA 的表达。结果：CCL4肝纤维化组小鼠血清 HA、Col-Ⅰ、PⅢP、IL-6、TNF-α含量和肝组织 TGF-β、α-SMA 和 MMP-9 mRNA 表达均明显高于正常组小鼠(P <0.05);而且抗 HMGB1抗体组小鼠血清 HA、Col-Ⅰ、PⅢP、IL-6、TNF-α含量和肝组织 TGF-β1、α-SMA 和 MMP-9 mRNA 表达均明显低于 CCL4肝纤维化组小鼠(P <0.05)。结论：抗 HMGB1抗体可减轻小鼠肝纤维化,减少小鼠炎症因子和纤维化因子的表达;HMGB1可能通过启动炎症反应而促进肝纤维化发生发展。     

MMP1过表达的骨髓间充质干细胞对肝纤维化的修复作用

目的：探讨基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase 1,MMP-1)过表达的骨髓间充质干细胞(bone marrow
mesenchymal stem cells,BMSCs)对大鼠肝纤维化修复作用的影响。方法：50只雄性SD大鼠随机分为4组,重组腺病毒
Ad-人MMP-1(human MMP-1,hMMP-1)-增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)组(A组,n=10)、
空载体Ad-EGFP组(B组,n=10)、肝纤维化对照组(C组,n=15)及正常对照组(D组,n=15)。应用CCl4植物油溶液皮下
注射制作大鼠肝纤维化模型,10周后成模。经尾静脉将已转染的细胞注入大鼠体内,肝纤维化对照组和正常组注射
等量生理盐水。3周后处死大鼠,观察转染MMP-1的BMSCs对大鼠体质量、肝组织质量、肝功能、肝纤维化指标及
肝组织病理的影响。结果：与对照组相比,转染MMP-1的BMSCs致大鼠体质量、肝组织质量和血清白蛋白显著增加
(P<0.05);血清谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、透明质酸酶(hyaluronic acid,HA)、层粘连蛋白(laminin,LN)及III
型前胶原(procollagen III,PC III)显著下降(P<0.05);苏木精-伊红染色法(HE染色)可见平均视野下纤维化的程度显著改
善(P<0.05)。结论：转染hMMP-1能够增强BMSCs对肝纤维化的修复能力。     

声辐射力脉冲成像技术在评价肝纤维化程度的临床价值

目的分析声辐射力脉冲成像技术(acoustic radiation force impulse,ARFI)在评价慢性肝病患者肝纤维化程度中的临床价值。方法利用声辐射力脉冲成像技术对61例慢性肝病患者和56例正常人肝脏右叶进行检查,测得感兴趣区肝脏组织弹性量化值,即声触诊组织量化值(virtual touch quantification,VTQ),并与肝脏穿刺病理结果相对照。结果①61例慢性肝病患者病理活检结果:S0期8例,S1期12例,S2期10例,S3期13例,S4期18例;②VTQ值与肝纤维化程度有很好的相关性(Spearman r=0.737,P<0.01),不同阶段肝纤维化VTQ平均值是,正常对照组=1.03±0.26,S0=1.05±0.20,S1=1.14±0.28,S2=1.36±0.45,S3=2.01±0.76,S4=2.43±0.39;③正常对照组与S0组与S1组之间、S0组与S1组之间的VTQ值差异无统计学意义(P>0.05),其他各组之间的VTQ值差异均有统计学意义(P=0.000或P=0.016)。结论声脉冲辐射力成像技术能够反映肝组织弹性硬度的定量性息,对评估肝纤维化程度有重要价值。     

干扰素α治疗慢性乙型肝炎患者肝纤维化的实验研究

目的 观察干扰素α对慢性乙型肝炎（乙肝）患者肝组织纤维化程度的影响。方法选取病理诊断为S3-S4期的16例乙肝患者,干扰素治疗期前后3次进行肝组织炎症程度及纤维化程度病理分析，免疫组化检测肝组织TGF-β1蛋白、Fas及HBcAg抗原,TUNEL方法观察肝细胞凋亡情况。同期检测血清肝纤维化指标及肝功能。结果在S3-S4期，患者Fas、TGF-β1显著表达，肝细胞的DNA损伤严重。干扰素α治疗3个月后Fas抗原、TGF-β1表达程度显著下降（P〈0．05）；细胞凋亡程度减轻（P〈0．05）；肝组织HBcAg表达程度无显著改变；连续6～9个月治疗后，肝组织炎症及纤维化程度逐渐改善（P〈0．05），血清肝纤维化指标及肝功能水平与治疗前差异显著。结论干扰素仪能显著改善S3-S4期患者肝细胞凋亡和肝组织纤维化程度，但需持续治疗。     

都匀亚洲牛带绦虫病小鼠肝纤维化肝脏CTCF、TCF-β1的表达意义

目的研究结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）与转化生长因子-β1（transforming growthfactor-betal,TGF-β1）在都匀亚洲牛带绦虫小鼠肝纤维化肝脏中的表达状况及意义。方法用昆明小鼠感染都匀亚洲牛带绦虫建立小鼠肝纤维化模型;感染小鼠于30、40、50、60 d剖杀,HE染色观察肝脏病理变化,免疫组化法检测肝内CTGF、TGF-β1蛋白的表达水平。结果感染小鼠30 d时形成都匀亚洲牛带绦虫肝纤维化,40d时肝内CTGF和TGF-β1蛋白表达达高峰,随后出现下降,感染小鼠CTGF和TGF-β1蛋白表达水平具有直线相关性。结论CTGF与TGF-β1的表达与都匀亚洲牛带绦虫小鼠肝纤维化形成有密切关系,TGF-β1的致纤维化作用可能部分通过CTGF的生物学作用介导,阻断CTGF的传导通路可能是绦虫病肝纤维化治疗的有效靶点。     

实验性肝纤维化过程中基质分解素-1酶原的表达变化

目的：研究实验性肝纤维化过程中基质分解素-1(MMP-3)酶原蛋白表达的动态变化。方法：建立四氯化碳中毒性大鼠肝纤维化模型，采用半定量Western免疫印迹方法，对肝纤维化不同阶段肝内MMP-3的酶原蛋白的表达水平进行了检测。结果：在正常大鼠肝组织中有MMP-3的酶原表达。在肝纤维化发生发展过程中MMP-3酶原蛋白表达水平逐渐增强，至肝纤维化中期到达最高峰，到肝纤维化晚期及肝硬化阶段其表达较中期下降，但仍高于正常对照水平。结论：MMP-3在肝纤维化的发生、发展直至肝硬化形成过程中可能发挥着重要作用。