泌乳素对人B淋巴细胞HLA-DR表达的影响

目的探讨泌乳素(PRL)与B淋巴细胞功能的关系。方法以生理浓度(10 ng.ml-1)的人PRL刺激培养IM-9细胞系,并设置未刺激组、脂多糖(LPS)刺激组、PRL刺激组、LPS+PRL刺激组、LPS+溴隐停(Brc)刺激组和LPS+PRL+Brc刺激组;采用免疫细胞化学S-P染色法检测不同刺激组B淋巴细胞HLA-DR的表达情况。结果LPS刺激组和PRL刺激组HLA-DR的平均光密度(MOD)与未刺激组相比有明显增加(P<0.05);LPS+PRL刺激组HLA-DR的MOD与LPS、PRL刺激组相比明显增加(P<0.01);LPS+Brc刺激组HLA-DR的MOD与LPS刺激组与LPS+PRL+Brc刺激组相比均明显降低(P<0.05)。结论PRL对B淋巴细胞有活化作用。     

老年性耳聋患者内皮祖细胞功能变化

目的探讨老年性耳聋患者外周血内皮祖细胞(EPCs)功能的变化。方法分离老年性耳聋患者(观察组)和健康老年人(对照组)外周血中单个核细胞,诱导其分化为EPCs,检测2组培养第7天的EPCs集落数目和细胞计数、黏附、增殖和迁移能力并进行比较。结果观察组EPCs集落数目(1.40±0.37)个少于对照组(2.88±0.48)个,差别有统计学意义(t=7.734,P<0.01)。观察组EPCs细胞计数(54.32±9.24)个少于对照组(67.64±8.39)个,差别有统计学意义(t=3.376,P<0.01)。与对照组相比,观察组黏附细胞数明显减少(P<0.05);EPCs增殖能力和迁移能力下降,差别均有统计学意义(P<0.01)。结论 EPCs功能下降可能为老年性耳聋的发病机制之一。     

催乳素对人B淋巴细胞IgG基因表达影响的实验研究

目的:研究人催乳素(PRL)对B淋巴母细胞系IM-9细胞IgG基因表达的影响。方法:应用人PRL(10ng/ml)刺激IM-9细胞,培养48h后用试剂盒提取细胞总RNA,反转录为cDNA,RT-PCR扩增IgGcDNA,琼脂糖凝胶电泳观察扩增情况。结果:该cDNA片段的大小为98bp,LPS、PRL与LPS-PRL组cDNA条带在第24循环时出现,LPS-Br与LPS-PRL-Br组cDNA条带在第28循环时出现,并随循环数的增加亮度逐渐增强,LPS-PRL组该cDNA条带亮度最强。结论:PRL能够上调B淋巴细胞中IgG基因的表达,但该功能能够被Br拮抗。     

催乳素保护人B淋巴细胞免其凋亡的实验研究

目的:研究人催乳素(PRL)在B淋巴母细胞系IM-9细胞凋亡中的保护作用。方法:在地塞米松诱导IM-9细胞凋亡的实验体系中加入PRL(10ng/ml),DNA琼脂糖凝胶电泳观察PRL对地塞米松诱导IM-9细胞凋亡的保护。结果:地塞米松组诱导的IM-9细胞在48h后出现细胞凋亡,DNA琼脂糖凝胶电泳显示有大量小分子DNA片段形成,呈典型的细胞凋亡DNA梯形带,地塞米松-PRL组的IM-9细胞的DNA经电泳后未出现凋亡的DNA条带。结论:地塞米松能诱导IM-9细胞的凋亡,PRL能保护IM-9细胞,免其凋亡。     

银杏叶提取物对LPS诱导HeLa细胞凋亡的影响

目的研究银杏叶提取物(Ginkgo biloba leaf extract,GbE)对细菌脂多糖(LPS)诱导的人宫颈癌细胞HeLa细胞凋亡的影响。结论将HeLa细胞分成LPS组、GbE+LPS干预组和对照组,各组细胞加入相应药物干预8～72h。采用MTT法检测GbE对细胞的毒性作用;计算各组细胞不同时间段细胞数,测定各组细胞的增殖情况;通过细胞形态学检测(AO/EB染色)测定细胞凋亡发生情况。结果在72h内不同浓度GbE对HeLa细胞无明显细胞毒性作用,细胞存活率在90%～100%之间,差异无统计学意义(P>0.05);LPS组经LPS诱导8h后细胞在各时间段增殖均较其他两组活跃,细胞数明显高于其他两组(tGbE+LPS=6.423,P<0.001;t对照组=3.976,P<0.005);GbE+LPS组培养48h后细胞凋亡数明显高于LPS组和对照组。结论 GbE具有抑制LPS诱导的HeLa细胞增殖及促进细胞凋亡的作用。     

中药黄芩有效成分黄芩苷在牙周病防治中的实验研究

目的探讨中药黄芩有效成分黄芩苷在牙周病防治中的的临床应用。方法选取在本院就诊的100例牙周病患者进行治疗,随机分成两组,即LPS组、黄芩苷+LPS组,每组50例,另取无牙周病健康体检者50例作为对照,加入黄芩苷,即为黄芩苷组。其中黄芩苷的浓度为0.1μg/ml,LPS浓度为100μg/ml,三组在基本培养基的基础上加入相应的效应物质,采用细胞培养技术进行体外培养人牙周膜细胞(PDLC),应用噻唑盐比色测定法测定PDLC由脂多糖(LPS)介导增殖的时间效应,用流式细胞仪技术测定PDLC由LPS介导细胞周期的影响,比较三组之间的差异。结果经细胞培养,三组在酶标仪A490nm处检测,黄芩苷组OD值为(0.341±0.034),LPS组为(0.192±0.023),黄芩苷+LPS组为(0.249±0.026)。黄芩苷组与LPS组比较,t=27.2947,P<0.01;黄芩苷组与黄芩苷+LPS组比较,t=16.0786,P<0.01;黄芩苷+LPS组与LPS组比较,t=11.6109,P<0.01:各组OD值比较,差异均有显著统计学意义。结论对中药黄芩有效成分的研究可为牙周病的防治提供实验依据;桂西中医药材资源丰富,加工手艺简单,成本低,具有地方特色,中药黄芩有效成分的推广应用可带来良好的社会效益。     

他莫昔芬对人胶质瘤细胞的抑制作用

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂,他莫昔芬对人胶质瘤细胞U251生长的作用。方法:U251细胞PKCα和雌激素受体(ER)的表达用免疫组化,细胞活性分析用台盼蓝实验和四唑盐(MTT)比色实验,细胞增殖和凋亡,通过流式细胞仪进行检测,PKC抑制剂他莫昔芬(TAM)作用终浓度为5,2.5,1.25μg/m l;治疗对照为卡莫司汀(BCNU),终浓度与TAM相同。结果:细胞PKCα表达阳性,ER表达阴性。加入TAM后,U251细胞变老,脱落,细胞总数减少;活细胞比例为(82.553±12.187)%,MTT比色吸光值为0.607±0.079,空白对照组为(98.683±1.993)%和0.865±0.103,BCNU组(68.159±16.587)%和0.610±0.087,TAM组与空白对照组比较,细胞活力明显下降(P<0.001),与BCNU组比较无统计学差异;流式细胞仪检测显示TAM组G2-M期细胞相对空白对照组增多,为(12.418±3.646)%,TAM组细胞凋亡为(6.435±3.347)%,空白对照组为(1.205±0.985)%,二者有显著差异(P<0.001),并且有随着剂量减小,凋亡细胞增多的趋势(P=0.033)。提示增殖抑制,凋亡增加,卡莫司汀组表现为S期细胞增加,凋亡细胞比例比TAM明显减少(P=0.018)。结论:他莫昔芬对人U251胶质瘤细胞生长具有明显的抑制作用,可以作为人胶质瘤治疗后选方法。     

靶向survivin的siRNA并氟尿嘧啶转染对HepG2增殖影响

目的研究靶向survivin的小分子干扰RNA(siRNA)和氟尿嘧啶(5-FU)联用对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用及对凋亡的影响。方法将HepG2细胞分为空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组、siRNA转染组及5-FU+siRNA转染组。转染采用脂质体法。采用RT-PCR法分别检测HepG2细胞survivin mRNA转录水平;MTT法分别检测靶向survivin的siRNA和5-FU对HepG2细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况。结果 siRNA转染组、5-FU+siRNA转染组survivin mRNA表达较空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组明显下降(F=326.78,q=5.78～7.12,P<0.05)。5-FU+siRNA转染组细胞增殖抑制率为51.58%±1.35%,与其他各组相比明显增高(F=1 293.24,q=15.31～82.26,P<0.01)。5-FU+siRNA转染组与其他各组相比细胞凋亡率明显增高(F=13 568.68,q=110.47～327.16,P<0.01)。结论将靶向survivin的siRNA和5-FU联合应用可以显著抑制肝癌细胞survivin基因表达,并协同抑制HepG2细胞增殖,共同发挥诱导细胞凋亡作用。     

p38 MAPK信号通路在TLR4促进胰腺癌血管生成中的作用

目的 探讨Toll样受体-4(TLR4)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路在胰腺癌血管生成中的作用.方法 以脂多糖(LPS)、TLR4-siRNA及p38 MAPK信号通路阻断剂SB203580分别作用于体外培养的胰腺癌PANC-1细胞,Western blot检测TLR4、血管内皮生长因子(VEGF)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)蛋白表达.收集各种因素处理后的PANC-1细胞培养液,观察其对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移和管腔形成的影响.结果 LPS组的HUVECs增殖率、迁移数目和管腔形成个数分别为(139.2±12.6)％、48.1±9.1和47.8±9.6,均显著高于对照组(P＜0.05).TLR4-siRNA组的HUVECs增殖率、迁移数目和管腔形成个数分别为(60.2±8.7)％、31.3±4.5和17.2±3.3,均显著低于对照组(P＜0.01);SB203580组的HUVECs增殖率[(79.6±8.9)％]、迁移数目(21.6±4.3)和管腔形成个数(23.5±4.3)均较对照组显著减少(P＜0.05);且TLR4-siRNA+ LPS、B203580+LPS组的HUVECs增殖率、迁移数目和管腔形成个数均分别显著低于LPS组(P＜0.01).与对照组相比,LPS组VEGF、p-p38蛋白表达均明显增加,TLR4-siRNA组、SB203580组TLR4、VEGF、p-p38蛋白表达明显减少;且TLR4-siRNA+ LPS组、SB203580+LPS组VEGF、p-p38表达较LPS组明显减少.结论 TLR4可促进胰腺癌的血管生成,其机制与激活p38 MAPK信号通路、促进VEGF表达有关.     

中药对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用的研究

犤目的犦研究中药抑制血管平滑肌细胞(VSMC)生长增殖的作用和机制。犤方法犦采用3H-TdR(氚胸腺苷)掺入和外源性c-juncDNA在血管平滑肌细胞中表达的方法,观察血管平滑肌细胞(VSMC)生长增殖变化。犤结果犦与对照血清+内皮素组(cpm2534.54±54.22/105细胞)相比,中药血清+内皮素组(cpm1104.33±37.31/105细胞)血管平滑肌细胞3H-TdR掺入量有显著下降(P<0.01),而且血管平滑肌细胞原癌基因的c-junmRNA表达也较弱。犤结论犦本实验表明复方丹参对血管平滑肌细胞增殖及其原癌基因c-junmRNA的表达有明显的抑制作用。     

雌激素对IM-9细胞增殖及功能的调节作用

目的探讨17-β-雌二醇(E2)在体外对人B淋巴细胞系IM-9细胞的调节作用。方法四甲基偶氮唑兰(MTT)法检测不同浓度E2对IM-9细胞增殖时间和剂量依赖性的影响;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测免疫球蛋白G(IgG)的分泌。结果48 h后低浓度E2(≤10-7mol.L-1)能明显地促进IM-9细胞的增殖(P<0.05),并呈时间-剂量依赖性,而高浓度E2(>10-7mol.L-1)对IM-9细胞有明显的抑制作用(P<0.05),也呈时间-剂量依赖性;RT-PCR扩增IgG显示低浓度的E2(10-10mol.L-1)明显促进IgG分泌(P<0.05),高浓度的E2(10-6mol.L-1,10-4mol.L-1)明显抑制IgG的分泌(P<0.05)。结论E2能调节IM-9淋巴细胞增殖,同时影响免疫球蛋白的分泌。     

下调泛素样含PHD和环指域1基因的表达对喉癌Hep-2细胞增殖侵袭能力的影响

目的 探讨下调泛素样含PHD和环指域1(ubiquitin-like protein containing PHD and RING finger domains 1,UHRF1)基因在喉癌Hep-2细胞中的表达后对其增殖,凋亡,侵袭迁移能力的影响.方法 实验分为空白组,阴性对照组和干扰组.利用UHRFl-siRNA干扰UHRF1在喉癌Hep-2细胞中的表达,采用qRT-PCR、Western blot检测UHRF1的表达变化.采用MTT法、流式细胞术、Transwell实验检测下调UHRF1表达后Hep-2细胞的增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的变化.Western blot检测下调UHRF1表达后Hep-2细胞内Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达的变化情况.结果 与空白组和阴性对照组相比干扰组下调UHRF1的表达后可明显抑制喉癌Hep-2细胞的增殖能力(P ＜0.001).空白组,阴性对照组,干扰组凋亡率分别为(5.47±2.77)％,(3.95±0.66)％,(18.95±1.10)％,干扰组凋亡率明显提高(P ＜0.001).空白组,阴性对照,干扰组每视野侵袭细胞数分别为(213.7 ±13.1),(221.3±10.3),(97.7±7.5),干扰组侵袭细胞数明显降低(P＜0.001).空白组,阴性对照,干扰组每视野迁移细胞数分别为(230.7±5.5),(222.7±11.2),(111.7±7.6),干扰组迁移细胞数明显降低(P ＜0.001).干扰组细胞Bax蛋白表达上调(P ＜0.001),Bcl-2蛋白表达下调(P ＜0.001),MMP-2蛋白、MMP-9蛋白表达下调(P ＜0.001).结论 在喉癌Hep-2细胞中下调UHRF1的表达后可明显抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞的侵袭迁移能力.     

LPS对5-FU杀伤QBC939细胞影响的实验研究

目的 探讨LPS联合化疗药物5-FU对人胆管癌QBC939细胞生长和诱导细胞凋亡的影响。方法 四甲基唾哇蓝(MTT)试验检测LPS对5-FU抑制QBC939细胞增殖的影响, 流式细胞术观察LPS对5-FU诱导QBC939细胞凋亡的影响。结果 1MTT法检测显示5-FU对胆管癌细胞株QBC939杀伤作用明显, 但易出现耐药性, LPS可以增强5-FU后期杀伤作用, 能一定程度上防止耐药的出现;2流式细胞术结果显示化疗药物5-FU后能显著诱导QBC939细胞发生凋亡, 凋亡指数为11.50±2.15(P<0.05), 对照组为3.53±0.32, 加用LPS后, 能更明显地诱导凋亡, 凋亡指数达到26.50±3.12, 与单用加化疗药物5-FU比较, 差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LPS能增强5-FU对胆管癌细胞株QBC939的后期杀伤作用, LPS联合化疗药物可能是胆管癌临床治疗的一种合理策略。     

Survivin反义寡核苷酸对肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响

目的:应用反义寡核苷酸技术研究凋亡抑制蛋白Survivin反义寡核苷酸对肿瘤细胞增殖的影响。方法:根据Survivin序列合成其反义寡核苷酸序列(Survivin-ASODN)。培养肝癌细胞株SMMC-7721,用荧光素标记的Survivin-ASODN转染,并设立空白对照、空脂质体对照及正义寡核苷酸(SODN)对照组;用PCR方法检测Survivin基因表达水平;通过MTT方法分析Survivin-ASODN转染对肝癌细胞增殖的影响。结果:荧光素标记的Survivin-ASODN在SMMC-7721细胞中的转染率达到60%以上。SMMC-7721细胞分别用100、200、300、400和600nmol·L1ASODN转染后,Survivin基因表达水平下降,细胞增殖抑制率24h时分别为(3.87±1.67)%、(9.21±2.21)%、(15.21±3.18)%、(21.32±3.43)%和(32.62±3.74)%,而300nmol·L1ASODN组48h时细胞生长抑制率为(29.21±4.12)%,72h时抑制率为(44.21±3.32)%;ASODN转染组细胞增殖抑制率与空白对照组、空脂质体组及SODN组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Survivin-ASODN对细胞增殖有抑制作用,且呈现剂量依赖性;并且随着作用时间的延长,其抑制效果增强。     

新型免疫抑制剂FTY720诱导K562细胞凋亡及其机制

目的：探讨新型免疫抑制剂FTY720诱导K562细胞凋亡的效应及其机制,为临床白血病的疗提供实验依据。方法：体外培养人白血病K562细胞,分为空白对照组和FTY720处理组,FTY720处理组细胞分别采用6 μmol•L^-1 FTY720诱导3、6和12 h,或采用2、4、6和8 μmol•L^-1 FTY720处理24 h。采用流式细胞术分析细胞凋亡百分率、活性氧（ROS）水平、线粒体膜电位（MMP）和细胞周期。采用WST-1 还原法检测FTY720作用下K562细胞增殖抑制率。结果：流式细胞术检测,与空白对照组比较,6 μmol?L-1 FTY720诱导细胞3、6和12 h后,细胞凋亡率随时间延长而升高（P<0.01）;与空白对照组比较,2、4、6和8 μmol•L^-1 FTY720诱导细胞24 h 后,细胞凋亡率随药物浓度增加而升高（P<0.01）。与空白对照组比较,随FTY720浓度增加,K562细胞内ROS水平增加（P<0.01）,同时其MMP下降（P<0.01）。细胞周期分析,与空白对照组比较,随FTY720浓度增加,G0/G1期细胞百分率增加（P<0.05）,而S期和G2/M期细胞百分率减少（P<0.05）。WST-1 还原法分析,与空白对照组比较,FTY720处理72 h后,2、4、6和8 μmol?L-1FTY720处理组K562细胞增殖抑制率［（24.0±4.1）%、(46.4±3.9)%、(67.0±4.8)%和（88.2±5.6）%］明显升高（P<0.01）,FTY720对K562细胞的半数抑制浓度（IC50）为5.5　μmol•L^-1。结论：FTY720可通过导致细胞周期阻滞和激发ROS而诱导细胞凋亡来发挥抗肿瘤作用。     

血管内皮钙黏蛋白在非小细胞肺癌血管生成中的作用

［摘 要］ 目的:探讨血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）在非小细胞肺癌(NSCLC)血管生成中的作用,为NSCLC的抗血管生成治疗提供实验依据。方法:将人肺癌A549细胞分为空白对照组、干扰组和阴性对照组,VE-cadherin-siRNA瞬时转染A549细胞,实时定量PCR和Western blotting法检测VE-cadherin在各组细胞中表达水平;新型四唑氮盐（MTS）比色法检测A549细胞吸光度(A490)值的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;ELISA法分析A549细胞瞬时转染上清中VE-cadherin的表达水平;并分析上清液作用后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)A490值、各周期(G0/G1、G2/M和S)细胞比率、凋亡率和Matrigel小管形成数的改变。结果:干扰组VE-cadherin mRNA的表达水平（0.299±0.039）明显低于空白对照组（1.137±0.082）和阴性对照组（1.001±0.076）（P<0.05）;干扰组VE-cadherin蛋白的表达水平（0.297±0.045）明显低于空白对照组（0.833±0.119）和阴性对照组（0.794±0.095）(P<0.05);各组A549细胞A490值、各周期细胞比率和凋亡率比较差异无统计学意义;干扰组上清液中VE-cadherin的表达水平［(2.89±0.07) μg/L］明显低于空白对照组［（11.43±0.09）μg/L］和阴性对照组［（11.15±0.04）μg/L］（P<0.05）。干扰组与阴性对照组上清液作用后G0/G1、G2/M和S期HUVECs所占百分比比较差异无统计学意义(P>0.05);干扰组上清液明显抑制了HUVECs的增殖,作用24、48和72 h细胞增殖抑制率分别为29.2%、33.8%和30.1%;作用48 h干扰组HUVECs的凋亡率为27.12%±5.22%,显著高于阴性对照组(13.43%±3.50%)（P<0.05）。干扰组HUVECs小管形成数为1.53±0.31,显著低于阴性对照组（14.53±1.51）（P<0.05）。结论:VE-cadherin可能通过促进血管生成参与NSCLC的发生发展,有望成为NSCLC抗血管生成治疗的新靶点。