背伸肌退变与骨质疏松性椎体骨折风险的关系

骨质疏松是以骨量下降,骨组织显微结构发生退变,导致骨强度降低,最终使患者骨折危险性增大为特征的疾病,骨质疏松患者容易发生脊柱畸形,使躯体的重心向前移动,脊柱旁肌需要更强大的力来维持脊柱正常的姿势,从而导致脊柱旁肌损伤.本文主要阐述背部肌肉与骨密度(BMD)和骨折风险之间的关系、肌肉退变方式及目前主要检测其退变的主要手段和方法.     

CRISP2基因及蛋白在弱精子症患者中的表达及其临床意义

目的 弱精子症作为男性不育的重要因素之一,影响着全球15％的育龄夫妇,但其发病机制尚待阐明.课题组前期研究通过基因芯片技术发现CRISP2在弱精子症患者精子中表达明显下调,但其临床意义仍有待进一步阐明.方法 收集2013年1月至2013年6月的弱精子症患者及健康男性精液标本各24例,检测这些精液样本中CRISP2基因及蛋白表达水平,探讨其与精子形态、运动能力及生育预后的相关性.结果 弱精子症患者精液标本中CRISP2蛋白表达水平明显低于正常对照组,而CRISP2基因mRNA表达水平并无明显统计学差异.相关性分析显示CRISP2蛋白表达水平与形态正常精子率(r=0.6182,P=0.0037)及前向运动能力(r=0.6309,P=0.0029)呈明显正相关.经过密切随访,CRISP2蛋白高表达患者配偶受孕率明显高于CRISP2蛋白低表达患者(80.0％vs20.0％,P=0.0230).结论 CRISP2蛋白表达水平与弱精子症患者的精子形态、前向运动能力呈正相关,且CRISP2蛋白低表达的弱精子症患者生育预后不良,提示CRISP2作为弱精子症患者治疗新靶点的潜在价值.     

SHOX2体外增强膀胱癌细胞的迁移、侵袭和干细胞特性

目的 探讨人矮小同源盒基因2（SHOX2）对人膀胱癌细胞迁移、侵袭能力和干细胞特性的影响及其可能机制。方法 分析TCGA肿瘤数据库中SHOX2基因在膀胱癌标本和癌旁对照标本的表达情况,利用GEPIA网站对TCGA膀胱数据中的SHOX2基因表达量进行单因素生存分析,并利用GSEA软件预测其可能的生物学功能。选取对数生长期的人膀胱癌细胞T24,采用SHOX2 shRNA及SHOX2过表达质粒分别敲低、过表达SHOX2基因,用Western blot检测SHOX2蛋白表达量,通过划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力,悬浮成球、克隆形成实验检测细胞的干细胞特性。在光镜下观察细胞形态变化,并用Western blot检测细胞上皮间充质转化（EMT）标志分子E-cadherin、Vimentin蛋白表达量的变化和TGF-β信号通路重要组件TβR-I蛋白表达量的变化。结果 与癌旁膀胱组织相比,SHOX2基因在TCGA膀胱癌组织中表达升高（P=0.01）,在配对的膀胱癌组织中明显升高（P=0.001）,SHOX2基因表达与总生存率呈负相关（P=0.01）;GSEA显示SHOX2基因表达与EMT（P=0.002,P=0.03）及干细胞特性（P=0.006,P=0.008）呈正相关。在膀胱癌细胞 T24 中,两种不同的 SHOX2 shRNA 均能降低SHOX2的蛋白表达水平（shSHOX2-1,P=0.004;shSHOX2-2,P=0.03）,SHOX2过表达质粒则能提高SHOX2的蛋白表达水平（P=0.007）。划痕实验、Transwell侵袭实验结果显示,抑制SHOX2表达后膀胱癌细胞的迁移（P<0.001,P=0.02）、侵袭（P=0.002,P=0.003）能力明显降低,而SHOX2过表达则提高膀胱癌细胞的迁移（P<0.001）、侵袭（P=0.004）能力。悬浮成球、克隆形成实验结果显示,抑制SHOX2表达后明显减弱膀胱癌细胞的干细胞特性（P=0.002,P=0.007,P<0.001）;而SHOX2过表达则增强膀胱癌细胞的干细胞特性（P=0.002,P<0.001）。此外,抑制SHOX2表达可使细胞发生上皮样形态改变,而SHOX2过表达可使细胞发生间充质样形态改变;Western blot结果显示,抑制SHOX2表达可使膀胱癌细胞中的E-cadherin蛋白表达水平升高（P<0.00）,Vimentin（P<0.001,P=0.01）、TβR- I（P=0.03,P=0.02）蛋白表达水平降低;而 SHOX2 过表达可使膀胱癌细胞中的Vimentin（P=0.04）、TβR-I（P=0.003）蛋白表达水平升高。结论 SHOX2在膀胱癌中扮演致癌基因：SHOX2增强膀胱癌细胞的迁移、侵袭能力和干细胞特性,其作用机制可能与TGF-β信号通路参与调控的EMT有关。     

血管内皮钙黏蛋白在非小细胞肺癌血管生成中的作用

［摘 要］ 目的:探讨血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）在非小细胞肺癌(NSCLC)血管生成中的作用,为NSCLC的抗血管生成治疗提供实验依据。方法:将人肺癌A549细胞分为空白对照组、干扰组和阴性对照组,VE-cadherin-siRNA瞬时转染A549细胞,实时定量PCR和Western blotting法检测VE-cadherin在各组细胞中表达水平;新型四唑氮盐（MTS）比色法检测A549细胞吸光度(A490)值的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;ELISA法分析A549细胞瞬时转染上清中VE-cadherin的表达水平;并分析上清液作用后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)A490值、各周期(G0/G1、G2/M和S)细胞比率、凋亡率和Matrigel小管形成数的改变。结果:干扰组VE-cadherin mRNA的表达水平（0.299±0.039）明显低于空白对照组（1.137±0.082）和阴性对照组（1.001±0.076）（P<0.05）;干扰组VE-cadherin蛋白的表达水平（0.297±0.045）明显低于空白对照组（0.833±0.119）和阴性对照组（0.794±0.095）(P<0.05);各组A549细胞A490值、各周期细胞比率和凋亡率比较差异无统计学意义;干扰组上清液中VE-cadherin的表达水平［(2.89±0.07) μg/L］明显低于空白对照组［（11.43±0.09）μg/L］和阴性对照组［（11.15±0.04）μg/L］（P<0.05）。干扰组与阴性对照组上清液作用后G0/G1、G2/M和S期HUVECs所占百分比比较差异无统计学意义(P>0.05);干扰组上清液明显抑制了HUVECs的增殖,作用24、48和72 h细胞增殖抑制率分别为29.2%、33.8%和30.1%;作用48 h干扰组HUVECs的凋亡率为27.12%±5.22%,显著高于阴性对照组(13.43%±3.50%)（P<0.05）。干扰组HUVECs小管形成数为1.53±0.31,显著低于阴性对照组（14.53±1.51）（P<0.05）。结论:VE-cadherin可能通过促进血管生成参与NSCLC的发生发展,有望成为NSCLC抗血管生成治疗的新靶点。     

重庆市某教学医院创建“无烟医院”的调查研究

目的了解重庆市某教学医院医务人员吸烟状况、烟草危害认识程度、控烟意愿和控烟途径掌握等情况,为重庆市“无烟医院”建设相关制度的完善提供参考。方法采用自行设计问卷对重庆市某教学医院医务人员（医生、护理、医技、行政和后勤人员）进行普查,共计2156人。问卷主要内容包括：社会人口学信息、吸烟状况、烟草危害认识程度、控烟意愿和控烟途径掌握等情况。采用Epidata3．1软件录入数据,SPSS13．0软件分析数据,统计结果用百分比表示。结果医务人员总吸烟率为9．65％,其中男性吸烟率30．49％,女性吸烟率2．75％,临床医生吸烟率12．50％;吸烟人群的年龄分布,50岁以下的占91．97％,20～35岁超过50．00％。52．43％的受访人员不知道WHO《烟草控制框架公约》;受访人员仅对吸烟与呼吸系统疾病、吸烟与胎儿发育异常之间的关系掌握相对较好。84．99％的受访人员认为院内吸烟点应该设在室外;83．56％的受访人员表示会不同程度劝阻院内公共场所吸烟行为,但是仅有14．20％的受访人员认为帮助公众戒烟是无烟医院的建设宗旨;70．00％的医生在日常诊疗活动中经常询问及记录患者吸烟情况相对护理和医技人员较好;近30．00％的医护人员完全不知道戒烟药物,近70．00％受访者表示控烟信心不足,近70．00％医护人员不会推荐具体的戒烟方法。结论该院医务人员吸烟人群总体呈年轻化分布,反映出开展控烟教育的迫切性;在维护医院无烟环境方面有共识,但是对医务人员的社会控烟责任认识存在不足,控烟知识、劝戒技巧和技能等培训有待进一步强化。建议从打造无烟的就诊环境,禁止医院内吸烟行为;鼓励就诊患者积极戒烟,提供专业的戒烟服务;积极推动社会控烟工作,倡导公众戒烟3个阶段保证医院控烟的持续性。     

血管内皮钙黏蛋白对非小细胞肺癌侵袭转移的影响及其作用机制

目的 探讨非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）组织中血管内皮钙黏蛋白（vascular endothelial cadherin, VE-cadherin）的表达和其对细胞侵袭迁移能力的影响及作用机制。方法 采用免疫组织化学、RT-PCR法检测VE-cadherin在人NSCLC组织和癌旁组织中的表达;Westernblot法检测VE-cadherin在NSCLC细胞株中的表达;Transwell实验检测VE-cadherin对NCI-H460细胞侵袭迁移能力的影响;免疫荧光检测VE-cadherin与P120ctn在NCI-H460细胞上的定位;免疫共沉淀检测VE-cadherin与P120ctn的连接情况。结果 VE-cadherin在肺癌组织中表达水平较癌旁组织上调,其表达与NSCLC有无吸烟史、有无淋巴结转移有关（P<0.05）。VE-cadherin在PG、NCI-H460、 A549细胞株表达水平不同,干扰VE-cadherin表达后,NCI-H460细胞侵袭迁移能力下调,低氧可诱导VEcadherin在NCI-H460细胞表达增强,VE-cadherin与P120ctn存在结构上的连接。结论 VE-cadherin可能通过缺氧信号活化及P120ctn介导参与NSCLC侵袭、转移。     

VE-cadherin在不同侵袭性能非小细胞肺癌细胞株的表达及沉默VE-cadherin对非小细胞肺癌细胞株侵袭、迁移的影响

目的：了解广东省全科医生转岗培训项目实践技能培训短期效果,为改进培训策略和措施提供科学依据。方法按照卫生部制定的《基层医疗卫生机构全科医生转岗培训大纲（试行）》,对来自广东省15个经济欠发达地市的451名基层医生进行为期1年的全科医生转岗培训。采用自行设计问卷对学员进行实践培训前、后效果调查,内容包括实践技能掌握情况以及对培训质量的评价。应用SPSS 13.0处理数据,对数据进行描述性分析、t检验、方差分析及相关分析。结果学员培训前、后实践技能水平自评总分均值分别为（136.37±21.74）分和（169.39±17.12）分,培训前、后分值差异具有统计学意义（t=29.028,P=0.000）,各类技能分值均高于培训前;学员对实践技能培训的总满意率为91.6%,对培训环境和培训保障方面满意度较低;学员实践技能水平提高程度的影响因素包括学历、职称、培训意愿以及是否参加过全科医生培训;实践技能培训效果和学员对培训的总满意度呈正相关（r＝0.162,P＝0.037）。结论全科医生实践技能培训取得了较好的效果;今后培训应该注意增加学员实践操作机会,科学设计实践培训内容,进一步加强培训项目管理,以期持续提高实践技能培训效果。     

血管内皮钙黏蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的：探讨血管内皮钙黏蛋白（vascular endothelial cadherin,VE-cadherin）在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中的表达及其与临床病理特征之间的关系,并分析其与血管内皮生长因子（vascular endothelial grow factor,VEGF）之间的相关性。方法：应用免疫组化SP法检测72例NSCLC组织及相应癌旁正常组织VE-cadherin的表达情况;其中34例用qRT-PCR法检测mRNA的表达情况,并以 VEGF为阳性参照。Western blot检测肺癌细胞株A549和人正常支气管上皮细胞（nor－mal human bronchial epithelial cells,NHBEC）中VE-cadherin的表达,以及干扰后各细胞株的表达情况。结果：72例NSCLC组织癌细胞和VE-cadherin的阳性表达率分别为69.4%、52.8%,均明显高于对应癌旁正常组织肺泡上皮细胞0%和血管内皮细胞20.8%（P<0.05）;有淋巴结转移组中的表达量均明显高于无淋巴结转移组（P<0.05）;Ⅲ、Ⅳ期的阳性表达率均明显高于Ⅰ、Ⅱ期（P<0.05）。VEGF在NSCLC组织癌细胞和血管内皮细胞中的阳性表达率分别为84.7%、62.5%,均显著高于对应的癌旁正常组织肺泡上皮细胞16.7%和血管内皮细胞29.2%（P<0.05）。经qRT-PCR分析,VE-cadherin mRNA在癌组织和癌旁正常组织中的相对表达量分别为1.15±0.87、0.70±0.57;VEGF mRNA的相对表达量分别为1.39±1.17、0.79±0.65（P<0.05）。两者在蛋白水平和mRNA水平均呈正相关（P=0.001,P=0.008）。Western blot结果示在A549细胞株中可检测到VE-cadherin表达,但在NHBEC中不表达。siRNA可降低VE-cadherin在A549细胞株中的表达。结论：VE-cadherin可能在NSCLC血管生成中起重要作用,且可能与VEGF具有协同作用,siRNA可有效抑制VE-cadherin在肺癌细胞株A549中的表达。     

基层医院哮喘规范化诊治水平评估体系的研究

目的 建立一套科学的哮喘规范诊治评估体系,着力于规范基层医院哮喘诊治技术.方法 依据2008版<支气管哮喘防治指南>,制定哮喘规范诊治评估体系,评估随机抽取的5家基层医院(3家二甲和2家三甲)确诊为"支气管哮喘"的病历各50份;根据评估结果进行目标导向性培训,然后按同样方法抽取病例,用同一套评估体系进行再评分.结果 初次评分,2家三甲和3家二甲综合评分分别为(74.70±3.47)分和(58.12±5.35)分,2家三甲的诊断指标评分、治疗指标评分及综合评分均明显高于3家二甲(P＜0.01);经培训后2家三甲和3家二甲的综合评分分别为(84.35±4.74)分和(73.32±5.65)分,2家三甲的相关指标评分均仍明显高于3家二甲(P＜0.05);5家基层医院在目标导向培训后的相关指标评分均较培训前有较大提高(P＜0.01).结论 哮喘规范诊治评估体系可有效评估基层医院哮喘诊治水平;使基层医师在哮喘诊治实践中有据可依,有助于推动<指南>在基层的进一步普及.     

BMSCs来源的外泌体对大鼠睾丸缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）来源的外泌体对睾丸缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用原代培养方法 分离、培养、并鉴定大鼠BMSCs。超高速离心法提取BMSCs来源的外泌体,并采用纳米颗粒跟踪分析仪（NTA）分析其粒径大 小,透射电子显微镜观察其形态,蛋白免疫印迹法检测其典型标志蛋白质鉴定提取的外泌体。构建雄性SD大鼠睾丸缺血再灌 注损伤（IRI）模型,24 只健康雄性SD大鼠随机分为3 组;A组：假手术组（Sham 组）,B组：生理盐水处理组（I/R+NS）,C组： BMSCs来源外泌体（100 μg/mL）处理组（I/R+BMSCs-exo）。最后取各组大鼠扭转侧（左侧）睾丸并用光学显微镜检测睾丸组织 病理学结构改变以及对生精结构进行组织评分,采用生物化学的方法检测各组睾丸组织中超氧化物歧化酶的活性,丙二醛的含 量,蛋白免疫印迹法检测高迁移率族蛋B1（HMGB1）,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（caspases-3）和剪切型caspase-3的 表达。结果成功从大鼠骨髓中原代分离并培养BMSCs,并成功提取了BMSCs分泌的外泌体。动物模型中,与睾丸生精结构 正常的A组（Sham）相比,B组（I/R+NS）的睾丸生精结构明显有不同程度受损,而C处理组（I/R+BMSCs-exo）中有一定的改善 （P<0.05）。睾丸组织生化指标检测中,B组（I/R+NS）组织中的MDA的含量较A组（Sham）明显升高,而SOD的活性与A组 （Sham）相比则降低（P<0.01）,而在经外泌体处理之后的C组（I/R+BMSCs-exo）中,与生理盐水处理组B组相比,组织中MDA的 含量有一定程度降低而SOD 的水平则上调（P<0.05）。睾丸组织蛋白免疫印迹上,与A 组（Sham）相比,B 组（I/R+NS）的 HMGB1,caspase-3以及剪切型caspase-3明显升高,而C组（IR+BMSCs-exo）的HMGB1,caspase-3和剪切型caspase-3一定程度 的降低（P<0.05）。结论BMSCs来源的外泌体对睾丸缺血再灌注损伤有抗氧化,抗炎症和抗凋亡的保护作用。