UPLC-MS/MS法同时测定补中益气丸(水丸)中6种化合物含量

目的 建立UPLC-MS/MS法同时测定补中益气丸(水丸)中黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、橙皮苷、阿魏酸、甘草酸和甘草苷的含量。方法 采用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱(100 mm × 2.1 mm, 1.8 μm)，流动相为5 mmol/L乙酸铵溶液-甲醇(含0.1%甲酸)，梯度洗脱；质谱离子化方式为电喷雾源(ESI)，采用多级反应离子监测模式(MRM)定量分析。结果 各化合物在相应浓度范围内线性关系均良好，r2值为0.994~0.999，加标回收率范围为86.7%~103.5%，相应的RSD为3.8%~7.6%。结论 本方法定性和定量准确可靠，重复性好、基质干扰小、灵敏度高，满足补中益气丸(水丸)中6种化合物含量的测定要求。     

UHPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中环磷酰胺及其代谢物的浓度

目的 建立利用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法同时测定大鼠血浆中环磷酰胺及其代谢产物(羧基磷酰胺、4-酮基环磷酰胺和脱氯乙基环磷酰胺)浓度的方法.方法 以Agilent poroshell SB-C18柱(75 mm×2.1mm,2.7μm)为色谱柱,甲醇-10 mmol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.25 mL/min,柱温25℃,进样量5 μL;质谱采用电喷雾离子源(ESI),选择多重反应离子监测(MRM)正离子模式.取8只成年雄性SD大鼠分离获得血浆样品,测定血浆样品中环磷酰胺及其代谢产物的血药浓度和药代动力学参数.结果 方法学验证表明,环磷酰胺、羧基磷酰胺、4-酮基环磷酰胺在浓度为20～4 000 ng/mL范围内线性关系良好(r分别为0.998 0、0.995 3和0.998 6),脱氯乙基环磷酰胺在浓度为5～1 000 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.996 8).日内、日间相对标准差(RSD)对于质控(QC)样品和最低定量限(LLOQ)样品分别小于8.73％和15.38％,基质因子的RSD均在-15％～15％之间,提取回收率均在(66.44±5.53)％～(96.66±1.73)％之间;所有待测化合物的稳定性均表现良好.大鼠血浆中各化合物药代动力学参数如下:环磷酰胺、羧基磷酰胺、4-酮基环磷酰胺和脱氯乙基环磷酰胺的Ckx分别为(207.52±13.20)、(18.47±2.66)、(6.59±1.33)和(8.27±1.44) μg/mL,T1/2分别为(1.28±0.09)、(5.03±0.48)、(6.72±0.47)和(7.47±0.68)h,AUGo(-)t分别为(372.52±32.79)、(65.70±5.04)、(33.26±11.76)和(45.03±8.93) μg·h·mL-1.结论 该方法操作简单、灵敏、准确、专属性强,适用于高剂量环磷酸铵在大鼠血浆中药代动力学研究.     

HPLC法测定氟他胺片的含量

目的：建立用外标法测定氟他胺片含量的简单高效液相色谱方法。方法：采用PurospherStarC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇∶水（70∶30）；检测波长：227nm；进样量20μl，流量：1.0ml/min；温度30℃。结果：氟他胺在8.016～200.40μg/ml浓度范围内线性关系良好（r=1）；平均回收率为98.6%，回收率的RSD为0.6%。结论：本测定方法简便快速，灵敏度高，准确度好，可用于氟他胺片的含量测定。     

LC-MS法测定大鼠血浆中EXH-1626的浓度

目的:建立测定大鼠血浆中EXH-1626浓度的液相色谱-质谱(LC-MS)方法?方法:大鼠血浆样品中加入内标卡马西平,经蛋白沉淀剂(甲醇∶5%硫酸锌溶液 = 70∶30,V/V)沉淀血浆蛋白后取上清液5 μl进行LC-MS测定?色谱条件:色谱柱为汉邦ODS C18柱(5 μm,150 mm × 4.6 mm),流动相为乙腈∶10 mmol/L醋酸铵水溶液(用乙酸调pH至3)70∶30,流速为0.6 ml/min,柱温30℃;质谱条件:采用电喷雾离子化(ESI)方式,以选择性离子监测(SIM)方式检测,EXH-1626和内标选择检测离子的质荷比(m/z)分别为453.3([M+H]+)和274.3([M+H]+)?结果:大鼠血浆中EXH-1626在5~10 000 ng/ml内线性关系良好(r = 0.999 7),最低定量限(LOQ)为5 ng/ml,由低到高(10?100?1 000和10 000 ng/ml)4个浓度的日内和日间精密度RSD均< 10%,绝对回收率均> 70%,相对回收率90%~110%?结论:该方法快速?准确,灵敏度高,操作简便,适用于EXH-1626血药浓度测定及其非临床药代动力学研究?     

阿奇霉素原料及其制剂含量测定方法的研究

目的：建立测定阿奇霉素原料及其制剂含量的方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为Irregular-HC18柱，流动相为0.5%磷酸二氢铵溶液-乙晴（73：27），检测波长为210nm，结果：精密度及稳定性均良好；阿奇霉素浓度在0.7008mg/ml-4.2048mg/ml范围内，峰面积与浓度（mg/ml)呈良好的线性关系，相关系数为0.9999,平均回收率为99.76%,RSD为0.76%；与其他杂质峰的分离度符合要求，结论：本方法简便，专属，重现性良好，可用于阿奇霉素原料及其各种制剂含量的测定。     

超高效液相色谱法测定脑外伤患者口服大黄后尿液中蒽醌类成分

目的 建立超高效液相色谱(UPLC)法同时测定脑外伤患者口服大黄后尿液中蒽醌类成分。方法 Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.mm，1.7μm)；流动相为甲醇-0.5%醋酸(12∶82)；柱温25 ℃；检测波长254 nm；体积流量0.5 mL/min；进样量5 μL。结果 芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的尿中质量浓度分别在0.198~6.333、0.42~13.429、0.285~9.107、0.386~12.321、0.134~4.286 μg/mL线性良好，方法回收率在97.68%~108.85%，日内、日间RSD均小于7%。结论 本法精密度好，回收率高，操作简便、无毒、重现性好，可用于大黄蒽醌类成分在脑外伤病人体内的代谢组学研究。     

注射用头孢噻肟钠他唑巴坦钠含量测定方法的研究

目的 :建立测定注射用头孢噻肟钠他唑巴坦钠含量的方法。方法 :采用HPLC法 ,色谱柱为ODS柱 ,流动相为乙腈磷酸二氢钾溶液 (0 .0 3mol/L) - 10 %氢氧化四丁基铵 (190∶795∶15 ) ,并用磷酸调节pH为 4 .0 ,检测波长为 2 30nm。结果 :精密度及稳定性均良好 ;头孢噻肟及他唑巴坦浓度分别在 99.4～ 895 μg和 2 0 .6～185 μg范围内 ,峰面积与浓度呈良好的线性关系 ,相关系数为 0 .9998和 0 .9999,平均回收率为 10 0 .2 %和10 0 .1% ,RSD分别为 0 .95 %和 1.2 % ;他唑巴坦和头孢噻肟之间的分离度为 7,与其他杂质峰的分离度符合要求。结论 :该方法简便、专属、重现性好 ,可同时测定他唑巴坦钠和头孢噻肟钠的含量。     

反向高效液相色谱测定法同时测定人血浆中5种镇静催眠药浓度

目的：建立人血浆中地西泮、硝西泮、奥沙西泮、艾司唑仑和阿普唑仑的反向高效液相色谱测定法（RP-HPLC）。方法：以血浆为基质,配制含有5种镇静催眠药的混合标准品,取1 mL样品加入50 mg/L卡马西平10 μL为内标,乙酸乙酯萃取后用100 μL流动相溶解,进样20 μL,通过高效液相色谱仪检测人血浆基质中5种镇静催眠药浓度。色谱条件：色谱柱为C18柱（4.6 mm×250 mm）,柱温30 ℃,流动相为甲醇:水（65∶35）,流速1.0 mL/min,紫外检测波长为230 nm。结果：地西泮、硝西泮、奥沙西泮、艾司唑仑和阿普唑仑在5～1 200 μg/L 范围内线性关系良好(r≥0.9966, P<0.05) ,加样回收率在95.5%~105.6%,萃取回收率均在75%以上,日内及日间变异相对标准偏差(RSD)均小于10%（n=5）。 结论：RP-HPLC方法简便、准确、灵敏,适用于人血浆中地西泮、硝西泮、奥沙西泮、艾司唑仑和阿普唑仑的血药浓度的同时检测。     

HPLC-MS/MS法测定人血浆中烟酸及其代谢物

目的 建立人血浆中烟酸及其代谢物的高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)测定法.方法 血浆样品加乙腈沉淀蛋白,取上清液挥干,用流动相溶解,二氯甲烷反洗后进样分析.使用Genimi C18柱(50×3.00mm,3 μm),柱温35℃,流动相为0.1%乙酸水溶液:甲醇:异丙醇(98:1:1),流速为0.2 mL/min,以正离子MRM模式检测,烟酸、烟酰胺、烟脲酸和内标6-甲基烟酸的检测离子对质荷比(m/z)分别为124.1→80.0、123.1→80.0、181.1→135.0和138.1→92.0.结果 烟酸线性范围为1.25～320 μg/L,烟酰胺和烟脲酸线性范围均为1.25～1280 μg/L,最低检测限均为1.25 μg/L,日内和日间RSD均小于9%,方法回收率为89%～105%.结论 该法具有快速、灵敏、准确、简便等特点,适用于人血浆烟酸浓度测定及药代动力学和生物利用度研究.     

LC-MS/MS法测定人血浆中洛伐他汀及其活性代谢物的含量

目的 建立高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定人血浆中洛伐他汀及其活性代谢物洛伐他汀酸的浓度.方法 样品用乙酸乙酯∶二氯甲烷(体积比为1∶1)提取浓集后进样,色谱柱为Phenomenex Gemini C18(50×3 mm, 3 μm),流动相为乙腈-水(85∶15).质谱采用ESI离子源MRM模式检测,以辛伐他汀为内标,按内标法定量. 洛伐他汀、洛伐他汀酸和内标的检测离子对分别为质荷比(m/z)427.4→325.4、445.4→343.4和436.4→325.4.结果 洛伐他汀在0.031～64 μg/L范围内线性关系良好(r=0.9987),最低定量限为0.031 μg/L,方法 回收率在96%～102%之间,日内、日间精密度相对标准偏差(RSD)分别小于5.3%及9.3%.结论 本文建立的方法 准确、灵敏,可用于洛伐他汀血药浓度测定及药代动力学研究.     

HPLC-MS/MS测定血浆中甜菜碱和游离胆碱及其稳定性研究

【目的】 建立高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定血浆甜菜碱和游离胆碱水平,并研究血浆中两种物质的稳定性。【方法】 以d9-氯化胆碱&#65380;d9-甜菜碱为内标,血浆经乙腈除蛋白后,采用SiO2柱(2.1 mm × 100 mm, 5 μm)乙腈-甲酸铵缓冲液(15 mmol/L,pH = 3.5)等度洗脱,经电喷雾电离,选择多反应监测模式(MRM)同时测定血浆中甜菜碱和游离胆碱。【结果】 血浆中甜菜碱和游离胆碱得到良好分离,最低定量限均为0.62 μmol/L,线性范围均为0.62 ~ 400 μmol/L。对游离胆碱的测定,日内相对标准差(RSD)为5.10% ~ 5.85%,日间RSD为4.54% ~ 13.26%,回收率94.15% ~ 103.70%;对甜菜碱的测定,日内RSD为3.60% ~7.30%,日间RSD为2.70% ~ 8.10%,回收率90.03% ~ 103.88%。稳定性研究中,游离胆碱和甜菜碱浓度随保存时间及温度增加,游离胆碱在血浆分离48 h内变化小于15%,甜菜碱超过3 h后变化即大于15%。3个反复冻融循环内游离胆碱浓度稳定;甜菜碱变化明显,第一个冻融循环后即增加至原始浓度3倍。【结论】 高效液相色谱串联质谱法同时检测血浆中甜菜碱和游离胆碱是一种快速、准确且灵敏的方法。血浆保存时应注意保存温度、时间及反复冻融对血浆中甜菜碱和游离胆碱浓度的影响。     

HPLC法测定醋酸地塞米松软膏中醋酸地塞米松的含量

目的 :测定醋酸地塞米松软膏中醋酸地塞米松的含量。方法 :采用反相高效液相色谱法 ,KromasilC18色谱柱 ,ψ(甲醇∶水 ) =70 ∶30为流动相 ,流速为 1.0mL·min-1,检测波长 2 4 0nm ,柱温为室温。结果 :醋酸地塞米松在 5 .2～ 5 2 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好 (r=0 .9999) ,回收率为 10 0 .4 % ,方法精密度 (RSD)为 0 .96 % (n =6 )。结论 :本法简便、准确 ,能有效地控制该制剂的质量     

同时定量检测水胺硫磷和水胺氧磷的液相色谱-串联质谱法及应用

建立同时测定大鼠全血中水胺硫磷及其活性代谢产物水胺氧磷的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法,用于毒代动力学研究中血药浓度的测定。方法 采集大鼠全血样品后即刻用4倍体积冰冷乙腈沉淀蛋白。待测物用Zorbax SB C₁₈柱(2.1 mm×50 mm,1.8 μm)分离,以含有0.1%甲酸的水和甲醇为流动相系统进行梯度洗脱。采用ESI源正离子多反应监测模式分析,水胺硫磷、水胺氧磷和内标三唑磷的定量离子对分别为m/z 231→121、274→215和314→162。 结果 水胺硫磷和水胺氧磷在5 μg/L～5 mg/L浓度范围内线性良好,最低定量限为5 μg/L,回收率在63.1%～77.8%的范围内,准确度和精密度符合生物样品的检测要求。大鼠静脉注射3 mg/kg水胺硫磷后,水胺硫磷在血中很快下降,消除半衰期为22.2 min。活性代谢产物水胺氧磷的生成也较快,10～15 min达到(257.91±42.00)ng/ml的平均峰值,消除半衰期为17.6 min。水胺硫磷和水胺氧磷的AUC_0~t分别为(528.62±49.15)和(191.11±33.23)h ·μg/L。结论 本研究首次建立了同时定量测定大鼠全血中水胺硫磷和水胺氧磷的LC-MS/MS分析方法,方法的专属性好、灵敏度高,适用于水胺硫磷及水胺氧磷在大鼠体内的毒物代谢动力学研究。     

LC-MS/MS法测定人尿液中索法酮的浓度及其尿药排泄研究

目的:建立测定人尿液中索法酮浓度的LC-MS/MS方法,用于研究健康受试者口服索法酮后药物在体内的尿药排泄特征?方法:尿液经甲醇处理后,进行LC-MS/MS分析?色谱柱为Poroshell 120 SB-C18柱,柱温为30℃?流动相为甲醇∶2 mmol/L 醋酸铵(85∶15),流速为0.20 ml/min?负离子模式下使用电喷雾离子化和多反应离子监测?2名健康志愿者单次口服索法酮胶囊200 mg后,测定尿药浓度并研究尿药排泄特征?结果:索法酮的最低定量限为1 ng/ml,在1~500 ng/ml范围内线性关系良好,高中低3个浓度的批内?批间差均小于6%,基质效应在93.1%~114.8%范围内,提取回收率为84.7%~93.6%?尿液中索法酮的累积排泄率小于0.01%?结论:所建立的LC-MS/MS分析方法能快速?准确地测定尿液中索法酮的浓度?     

RP-HPLC法测定诺氟沙星葡萄糖注射液中乙二胺四乙酸二钠的含量

  目的  建立诺氟沙星葡萄糖注射液中乙二胺四乙酸二钠的含量测定方法。  方法  选择色谱柱为（SHISEIDO C18-MGⅡ 5 μm 4.6×250 mm），流动相为乙腈:0.05 mol/L醋酸铵:水，流动相比例为70∶15∶15，流速为1.0 mL/min，进样体积为20 μL，柱温为35 ℃，检测波长为254 nm，采用三氯化铁和乙二胺四乙酸二钠反应形成螯合物后对其进行测定。  结果  乙二胺四乙酸二钠峰与其他色谱峰分离度良好；乙二胺四乙酸二钠在2.0326～200.3260 μg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（R2 = 0.9997），平均回收率为98.11%（n = 9）。  结论  该方法快速、简便、专属性强、精密度高、重复性好，结果准确可靠，适用于诺氟沙星葡萄糖注射液中乙二胺四乙酸二钠的含量测定。     

养阴口香合剂中枳壳的质量控制研究*

目的研究并控制养阴口香合剂中枳壳的质量。方法 采用薄层色谱法对枳壳进行鉴别研究；采用高效液相色谱法测定枳壳中柚皮苷和新橙皮苷的含量，色谱柱为Waters Xbridge C18柱（250 mm × 4.6 mm， 5 μm），流动相为乙腈－水（20 ∶ 80），柱温为30 ℃，流速为1.0 mL·min-1，检测波长283 nm。结果 薄层色谱斑点清晰，分离度较好；高效液相色谱测定柚皮苷对照品在0.05680 μg～0.7100 μg范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为100.21%；新橙皮苷对照品在0.03053 μg～0.3817 μg范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为98.33%。结论 本研究方法准确可靠，重复性好，可用于养阴口香合剂中枳壳的质量控制。     

HPLC法测定深层液体发酵桑黄菌丝体粉中麦角甾醇的含量

目的：建立高效液相色谱（HPLC）法测定桑黄发酵菌丝体粉中麦角甾醇的含量。方法：采用甲醇超声提取菌粉中的麦角甾醇，色谱柱为Welch Mltimate LP-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇∶水（98∶2），流速1 mL·min-1，检测波长 283 nm，柱温30 ℃。结果：在进样量为0.100 721～1.007 214 μg(r2=0.999 9)范围内，麦角甾醇的浓度与峰面积具有良好的线性关系；平均加样回收率为98.02% (RSD 0.80%)。结论：该检测方法准确可靠，重复性好，可操作性强，可用于深层液体发酵桑黄菌丝体粉中麦角甾醇的含量测定，同时也为麦角甾醇列入桑黄发酵菌丝体粉的质量标准提供依据。     

高效液相色谱法测定布美他尼片的含量

目的：建立测定布美他尼片含量的方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent（4．6mm×250mm，5μm）；流动相为0．05mol／L磷酸二氢钾（用磷酸调节pH至3．0±0．5）-乙腈（50：50），检测波长为267nm。结果：精密度及稳定性均良好：在20～60μg／ml浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数为0．9994，平均回收率为99．75％．RSD为0．87％。布美他尼与其他杂质峰的分离度均符合要求。结论：该方法简便，重现性好，可用于测定布美他尼片的含量。     

LC-APCI-MS/MS法测定大鼠尿液和胆汁中的BAPTA-AM浓度

目的建立液相色谱-大气压化学离子化-串联质谱联用(LC-APCI-MS/MS)法测定大鼠尿液和胆汁中的BAP-TA-AM浓度.方法尿液和胆汁样品经乙腈沉淀去蛋白,离心后取上清液进行LC-APCI-MS/MS分析.色谱柱Zorbax C18柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相含0.5%乙酸和75%甲醇的水溶液;流速1mI/min.大气压化学离子化(APCI)离子源,以选择离子反应检测(SRM)方式进行检测.用于定量分析的检测离子对分别为m/z 765.15→647.25(BAPTA-AM)和m/z 419.10→343.05(内标,尼莫地平).结果尿液和胆汁中BAPTA-AM在0.25～50nr/mL范围内线性关系良好,回收率大于90%,定量下限为0.25ng/mL,批内与批间RSD均小于10%.结论建立的LC-APCI-MS/MS法符合生物样本测定要求,可用于大鼠静脉给予BAPTA-AM脂质体后,大鼠尿液和胆汁中BAPTA-AM浓度的测定.     

高效液相色谱法测定小鼠血浆中苯并三唑类紫外线吸收剂UV-327和UV-328

目的 建立小鼠血浆中苯并三唑类紫外线(ultraviolet, UV)吸收剂UV-327和UV-328的高效液相色谱测定方法。方法 在小鼠血浆中加入正己烷-丙酮溶液(体积比1 ∶1)涡旋混匀提取,上清液于50 ℃下氮气吹干,残渣用甲醇溶解后离心过滤,采用高效液相色谱-紫外检测器测定小鼠血浆中UV-327和UV-328的浓度。分析柱为Waters Symmetry^?C₁₈柱 (250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为100%甲醇,等度洗脱,流速1.0 mL/min,紫外检测波长为340 nm,以UV-320为内标,保留时间定性,内标法定量。 结果 UV-327、UV-328在0.05~10.0 mg/L范围内呈现良好的线性关系(r=0.999 7),检出限为0.01 mg/L,定量限为0.03 mg/L。小鼠血浆中,低、中、高3种浓度(0.50、1.00、2.00 mg/L)UV-327和UV-328的平均回收率分别为91.7%~101.0%和97.5%~103.9%,日内精密度(n=6)分别为2.9%~6.6%和2.7%~7.4%,日间精密度(n=3)分别为6.0%~9.3%和6.6%~8.6%,提取回收率分别为98.8%~103.8%和99.8%~100.9%。血浆样品室温下放置6 h和-40 ℃放置15 d,UV-327测定值的相对偏差分别为0.9%~3.5%和7.4%~15.0%,UV-328测定值的相对偏差分别为2.0%~4.3%和2.1%~13.8%。3种加标浓度的小鼠血浆样品室温下至少可以放置6 h,-40 ℃冰箱中可以保存15 d。结论 高效液相色谱法简便、快速,准确度、精密度和灵敏度较高,可应用于小鼠血浆中UV-327和UV-328的分析测定。