辛伐他汀对H2O2诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用研究

目的 研究辛伐他汀对H2O2诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用并探讨其机制.方法 应用出生2～3 d的SD(Sprague-Dawley)大鼠乳鼠心肌细胞进行培养,用H2O2建立心肌细胞凋亡模型.随机分为五组:正常组,损伤组,1μmol/L,3 μmol/L,10 μmol/L辛伐他汀保护组.损伤组H2O20.2 mmol/L作用6 h.甲基四唑蓝比色法(MTT法)测定心肌细胞活力;PI-AV双染后,流式细胞分析仪测定细胞凋亡率;用Western blot法测定caspase-3蛋白含量.结果 (1)H2O2能明显造成心肌细胞损伤:损伤组与正常组相比细胞活力下降.辛伐他汀1 μmol/L,3 μmol/L,10 μmol/L保护组对损伤心肌细胞有不同程度的保护作用(P<0.05),并随剂量增加效果明显;(2)流式细胞仪检测细胞凋亡率损伤组比正常组增高(P<0.05);辛伐他汀各保护组细胞凋亡率均比损伤组降低(P<0.05),并随剂量增加效果明显;(3)用Western blot法测定caspase-3蛋白含量显示,损伤组比正常组caspase-3含量明显增加,辛伐他汀保护组可以降低H2O2引起的caspase-3蛋白含量增加,并随剂量增加效果明显.结论 辛伐他汀能够减轻H2O2引起的培养心肌细胞的凋亡,可能与抑制细胞内凋亡相关蛋白caspase-3有关.     

过氧化氢诱导HUVECs氧化应激模型的构建

目的 利用过氧化氢 (H2O2) 诱导人脐静脉内皮细胞 (human umbilical vein endothelial cells, HUVECs) 构建体外氧化应激细胞模型.方法 H2O2分6个浓度梯度处理HUVECs不同时间, 倒置显微镜观察细胞形态变化, CCK-8法检测细胞存活率, 流式细胞术检测细胞凋亡率, DCFH-DA荧光探针和流式细胞仪检测细胞内活性氧水平, 筛选H2O2的最佳作用浓度和时间.结果 不同浓度H2O2处理细胞不同时间, 对HUVECs均有损伤作用;400、600、800μmol/L H2O2处理HUVECs 24 h, 细胞存活率显著降低 (P<0.05) , 800μmol/L H2O2作用HUVECs不同时间, 细胞存活率随处理时间延长逐渐降低 (P<0.01) ;各组H2O2处理HUVECs 24 h, 细胞凋亡率显著增加 (1 000μmol/L除外, P<0.05) , 坏死率亦显著增加 (100μmol/L除外, P<0.05) ;800μmol/L H2O2处理HUVECs不同时间, 细胞凋亡率随处理时间延长逐渐增加, 24 h时达到最高 (P<0.05) , 细胞坏死率亦逐渐增加, 48 h时达到最高 (P<0.05) ;各组H2O2作用HUVECs 24 h, 浓度400μmol/L时, 细胞内ROS水平达到最高 (P<0.01) , 800μmol/L H2O2处理HUVECs, 胞内ROS水平随处理时间延长而递增 (P<0.01) .结论800μmol/L H2O2与HUVECs作用24 h可构建体外细胞氧化应激模型.     

Caspase-3抑制剂所致氧化应激状态下肾小管上皮细胞差异表达基因的筛选及功能验证

目的：研究caspase-3抑制剂引起的氧化应激状态下肾小管上皮细胞基因表达特点，筛选潜在的候选基因，为揭示caspase-3调控活性氧（reactive oxygen species,ROS）损伤肾小管上皮细胞的机制奠定基础。方法：将人肾小管上皮细胞HK-2用H2O2(300μmol/L)处理6 h后，随机分为对照组和caspase-3抑制剂组（Ac-DEVD-CHO,15μmol/L），运用Illumina Hiseq 2500测序平台完成基因测序，筛选差异基因并进行相关富集分析，用定量PCR对筛选到的前10位差异表达基因（differentially expressed gene,DEG）进行验证。将H2O2(300μmol/L)处理6 h后的HK-2细胞随机分为对照组、caspase-3抑制剂组（Ac-DEVDCHO,15μmol/L）、CTNNB1组[pcDNA3.1（+）-CTNNB1]、caspase-3抑制剂+CTNNB1组[Ac-DEVD-CHO,15μmol/L+pcDNA3.1（+）-CTNNB1]以及caspase-3抑制剂+CTNNB1 NC组[Ac-DEVD...     

二氮嗪干预氧化应激介导的INS-1细胞KATP通道作用机制的研究

目的研究二氮嗪(diazoxide,DIZ)干预氧化应激对INS-1细胞ATP敏感性钾通道(Adenosine triphosphate-sensitive potassium channels,KATP channels)SUR1亚基基因的表达影响。方法将INS-1细胞株分为:①氧化应激组:将50、100、200、400μmol/L H2O2分别加入各瓶细胞中培养3 h;②二氮嗪干预组:加入50μmol/L二氮嗪培养INS-1细胞30 min后,加入400μmol/L H2O2,继续培养3 h;③牛磺酸干预组:加入1 mmol/L牛磺酸培养INS-1细胞30 min后,加入400μmol/L H2O2,继续培养3 h;④空白对照组:不加二氮嗪、牛磺酸及H2O2,其他培养条件相同。MTT检测氧化应激组细胞存活率、Elisa检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)、Western blot分别检测3组各SUR1亚基蛋白的表达。结果 H2O2处理INS-1细胞3 h与对照组相比较后50μmol/L组细胞存活率(105.27±3.83)%稍升高(P<0.05),200μmol/L组、400μmol/L组细胞存活率分别为68.66%和51.67%均显著降低(P<0.05、P<0.01);与对照组(112.87±9.28)mU/L相比较,50μmol/L H2O2组GSIS量(118.47±10.15)mU/L升高(P<0.05);200μmol/L组(85.79±7.03)mU/L、400μmol/L组(64.59±4.53)mU/L细胞均显著降低(P<0.05,P<0.01);不同浓度H2O2培养INS-1细胞3 h后SUR1亚基蛋白的表达50μmol/L组较正常组有升高(P<0.05),100μmol/L H2O2组较正常组无统计学差异,200、400μmol/L组比对照组明显升高(P<0.05);二氮嗪干预组SUR1亚基蛋白表达比对照组显著升高(P<0.01),牛磺酸干预组与对照组比较无明显升高(P>0.05)。结论低浓度H2O2可以促进细胞增殖与胰岛素分泌,中、高浓度H2O2抑制细胞增殖与胰岛素分泌,二氮嗪抑制细胞KATP通道SUR1亚基的表达,可能是通过抑制线粒体呼吸链电子转运抑制ROS的释放,减轻细胞氧化应激的程度。     

夹竹桃麻素对兔心房肌细胞氧化应激损伤L型钙电流及动作电位时程的影响

背景 房颤的发生、发展机制复杂.大量研究表明,氧化应激与房颤关系密切.夹竹桃麻素(apocynin,APO)是氧化应激损伤过程中重要的氧化酶抑制剂,其能够对抗氧化应激的损伤作用.目的 探讨夹竹桃麻素对体外兔左心房肌细胞L型钙电流(L-type calcium current,ICa,L)及动作电位时程(action potential duration,APD)氧化应激损伤的保护作用.方法 酶解法分离得到单个兔左心房肌细胞,并将其分为5组:对照组(n=13),H2O2(10μmol/L)组(n=13),H2O2(50μmol/L)组(n=13),H2O2(50μmol/L)+APO(100μmol/L)组(n=13),APO(100μmol/L)组(n=13),应用膜片钳全细胞技术,探讨夹竹桃麻素(100μmol/L)对兔左心房肌细胞ICa,L及APD氧化损伤的保护作用.Western blot检测各组兔左心房中CaV1.2蛋白的表达.RT-qPCR检测兔左心房中的CACNA1C mRNA表达.结果 10μmol/L H2O2组:ICa,L峰值从(?18.5±0.1)pA/pF减至(?10.7±0.7)pA/pF(P<0.01);50μmol/L H2O2组:ICa,L峰值从(?18.5±0.1)pA/pF减至(?9.4±0.8)pA/pF(P<0.01);50μmol/L H2O2+100μmol/L APO组:ICa,L峰值为(?16.7±1.6)pA/pF,与50μmol/L H2O2组比较差异有统计学意义(P<0.01);100μmol/L APO组:ICa,L峰值为(?17.2±1.3)pA/pF,与对照组比较差异无统计学意义.门控机制研究表明,APO的作用主要是通过使稳态激活曲线向负方向移动、稳态失活曲线向正方向移动实现电流恢复,而与电流失活后恢复过程关系不大.进一步,APO使H2O2处理后缩短的APD50得以恢复.与对照组比较,H2O2组CACNA1C mRNA、CaV1.2蛋白表达下降(P<0.05),APO+H2O2组可以使表达恢复(P<0.05).结论 APO对兔左心房肌细胞ICa,L和APD具有保护作用.     

冬凌草甲素通过NLRP3途径抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应

目的研究冬凌草甲素(Oridonin)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症反应中核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)的作用。方法将Raw264.7巨噬细胞分成空白组、对照组、实验组(终浓度分别为4、10、15、20μmol/L Oridonin组),采用CCK8法检测细胞存活率,筛选Oridonin药物浓度。将小鼠Raw264.7巨噬细胞分为正常对照组、LPS组和LPS+Oridonin组,采用RT-qPCR法检测NLRP3、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、半胱氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)和白介素-1β(IL-1β)mRNA的表达;Western blot法检测NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达;免疫荧光染色检测NLRP3和Caspase-1蛋白共定位。结果 Oridonin浓度为20μmol/L细胞存活率急剧减少,浓度在4～15μmol/L之间细胞存活率较高,实验选用10μmol/L Oridonin处理小鼠巨噬细胞。与正常对照组比较,LPS组NLRP3、TNF-α、IL-6、Caspase-1和IL-1βmRNA基因表达显著上调(P0.05);与LPS组比较,LPS+Oridonin组NLRP3、TNF-α、IL-6、Caspase-1和IL-1βmRNA基因表达明显减少(P0.05)。与正常对照组比较,LPS组NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达显著增多(P0.05),与LPS组比较,LPS+Oridonin组巨噬细胞内NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达明显减少(P0.05)。与正常对照组比较,LPS组NLRP3和Caspase-1蛋白共定位明显增多,LPS+Oridonin组蛋白共定位明显减少。结论 Oridonin通过抑制NLRP3途径减轻LPS诱导的巨噬细胞炎症反应。     

二氮嗪预处理对H_2O_2损伤L6骨骼肌成肌细胞的作用及机制研究

目的:研究二氮嗪(diazoxide,DZ)预处理对H2O2损伤L6骨骼肌成肌细胞(skeletal myoblast,SKM)的保护作用,并探讨其与磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)/Akt信号通路的关系。方法:体外培养的L6 Sk Ms随机分为4组:对照组、H2O2损伤组(H2O2group;0.40mmo1/L H2O2作用24h),DZ预处理组(DZ group;200μmol/L DZ预处理30 min后,0.40mmo1/L H2O2作用24 h),LY294002抑制剂组(LY group;200μmol/L DZ和50μmol/L LY294002共同孵育30 min后,0.40mmo1/L H2O2作用24 h)。采用MTT比色法检测各组细胞存活率;Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Western blotting法检测各组细胞P-Akt、Caspase-3、Caspase-9的表达水平。结果:与对照组相比,H2O2损伤可诱导细胞凋亡,显著降低细胞存活率,降低P-Akt蛋白表达而增加Caspase-3,9蛋白表达。与H2O2组比较,DZ组的细胞存活率显著上升,凋亡率显著下降,P-Akt蛋白表达明显增加而Caspase-3,9表达明显降低。而PI3K抑制剂LY294002能够显著抑制DZ预处理对细胞的保护和抗凋亡作用,同时使P-Akt蛋白表达显著降低,Caspase-3,9蛋白表达显著增加。结论:DZ预处理可激活PI3K/Akt信号通路,下调凋亡蛋白caspase-3,9,从而抑制H2O2引起的L6 SKMs的凋亡。     

硝苯地平对过氧化氢引起的心肌纤维化的抑制作用及机制

目的研究硝苯地平(nifedipine)对过氧化氢(H2O2)引起的心肌纤维化的影响及机制。方法原代培养大鼠心脏成纤维细胞(CFs),用100μmol/L H2O2刺激,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测硝苯地平(10μmol/L)以及对照药维拉帕米(verapamil,10μmol/L)对H2O2诱导的结缔组织生长因子(CTGF)、纤维粘连蛋白(FN)的蛋白表达以及信号蛋白MAPK磷酸化的影响;利用fluo-4/AM钙荧光探针法测定硝苯地平对H2O2刺激引起CFs内钙离子浓度([Ca2+]i)变化的影响。结果 (1)硝苯地平能够显著抑制H2O2诱导的CTGF、FN蛋白表达上调以及细胞外信号调控蛋白激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun N端激酶(JNK)磷酸化,而对p38MAPK磷酸化没有影响,维拉帕米对以上蛋白表达均无抑制作用;(2)硝苯地平对H2O2刺激引起的CFs中的[Ca2+]i增加没有影响;(3)ERK信号通路抑制剂PD98059(10μmol/L)可抑制H2O2诱导的CTGF、FN的蛋白表达上调。结论硝苯地平可抑制H2O2刺激引起的CTGF、FN蛋白表达上调,而对[Ca2+]i变化没有影响,其抗纤维化的作用不依赖于经典的钙离子阻断作用,可能与抑制ERK1/2磷酸化有关。     

白藜三醇对培养豚鼠心室肌细胞L-型钙电流密度的影响

目的:观察白藜三醇(RES)对培养的豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)密度的影响.方法:分离成年豚鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,记录不同浓度RES孵育心室肌细胞不同时间的ICa-L密度.结果:①培养72 h时,RES 30 μmol/L和100μmol/L使ICa-L密度分别下降13%和27%,呈现浓度依赖性抑制趋势,且RES 100 μmol/L组与对照组比较有统计学差异(P<0.05);②RES 10 μmol/L,30 μmol/L和100μmol/L对ICa-L密度呈现时间依赖性抑制趋势.且RES 100 μmol/L在24 h和72 h之间有统计学差异(P<0.05);结论:白藜三醇对培养豚鼠心室肌细胞L-型钙电流呈现浓度和时间依赖性抑制趋势.     

尿脂质运载蛋白2在狼疮性肾炎早期诊断中的临床研究

目的探讨尿脂质运载蛋白2(u Ln-2)在狼疮性肾炎(LN)患者早期诊断中的临床意义。方法选取2010年3月至2013年9月内蒙古自治区人民医院肾内科收治的107例LN患者为研究对象,根据尿液中微量白蛋白(m Alb)水平分为Ⅰ组(m Alb<20 mg/L,33例)、Ⅱ组(m Alb 20~200 mg/L,35例)和Ⅲ组(m Alb>200 mg/L,39例),同期选取门诊体检的40例健康体检者作为对照组,测定其u Ln-2、血肌酐、血尿素氮(BUN)、血清胱抑素C(Cys-C)水平。结果 u Ln-2水平在对照组、Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组逐渐增高,组间比较差异有统计学意义[分别为(7.2±0.7)、(9.7±0.8)、(12.2±0.9)、(15.0±1.0)μg/L,P<0.05];Ⅲ组血肌酐[(80±13)μmol/L]、BUN[(12±4)mmol/L]、Cys-C[(1.55±0.54)mg/L]明显高于Ⅰ组[(65±12)μmol/L、(6±2)mmol/L、(0.90±0.22)mg/L]、Ⅱ组[(70±13)μmol/L、(7±3)mmol/L、(1.02±0.30)mg/L]和对照组[(67±11)μmol/L、(6±2)mmol/L、(0.87±0.20)mg/L],差异均有统计学意义(P<0.05),但在对照组、Ⅰ组、Ⅱ组之间比较差异无统计学意义(P>0.05);LN患者的u Ln-2与m Alb之间呈正相关性(r=0.854,P<0.05)。结论 u Ln-2水平是检测LN患者早期肾功能损伤的敏感、有效的指标,且随着肾脏损伤程度的加重持续增高。     

甲基斑蟊胺诱导HepG2细胞凋亡的实验研究

为探讨甲基斑蟊胺对ＨｅｐＧ２细胞凋亡的诱导作用,揭示其抗癌机制,用ＭＴＴ法观察药物对细胞的生长抑制作用,用ＴＵＮＥＬ法、流式细胞仪及光镜等技术研究癌细胞凋亡。结果表明药物对癌细胞有明显的抑制生长作用;光镜可见染色质浓缩、核碎裂等改变;流式细胞仪可检测到凋亡峰;６ｍｇ／ｍｌ药物作用５天,ＴＵＮＥＬ法强阳性。提示甲基斑蟊胺可诱导ＨｅｐＧ２细胞凋亡。     

伏立康唑致精神症状2例报告

我院于2013年1月诊治了2例使用伏立康唑药物后出现精神症状的老年患者,经过对症治疗后,患者症状消失,病情稳定,现报告如下。     

淫羊藿总黄酮注射液对H2O2诱导心肌细胞损伤的影响

目的观察淫羊藿总黄酮注射液(EFI)对H2O2诱导心肌细胞损伤的保护作用。方法通过体外培养大鼠乳鼠心肌细胞,MTT法检测心肌细胞增殖状况,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,透射电镜观察心肌细胞超微结构。结果H2O2可剂量依赖性增加对心肌细胞增殖的抑制率,100μmol/LH2O2作用12h后心肌细胞凋亡率为(23.94±3.52)%,高于正常对照组的(1.98±1·22)%;心肌超微结构呈凋亡特征性变化;100、200、400mg/LEFI可剂量依赖性降低心肌细胞抑制率,显著降低心肌细胞凋亡率,分别为(15.12±3.61)%、(9.38±3.14)%和(4.49±0.52)%;且能改善心肌细胞超微结构变化。结论淫羊藿总黄酮注射液对H2O2诱导的心肌细胞损伤具有保护作用。     

谷氨酰胺抑制过氧化氢诱导的A549细胞凋亡

目的观察谷氨酰胺诱导A549细胞表达HSP70及在抗过氧化氢（H2O2）诱导的细胞凋亡中的作用。方法体外培养A549细胞,随机分为4组：①空白对照组（C组）即生理盐水组;②谷氨酰胺组（Gln组）：以含谷氨酰胺8mmol/L的培养液预处理细胞;③过氧化氢组（H₂O₂组）：以浓度为400μmol/L过氧化氢处理细胞;④谷氨酰胺预处理后过氧化氢刺激组（Gln+H₂O₂组）：以含谷氨酰胺8mmol/L预处理细胞后,再加入400μmol/L过氧化氢处理细胞. 用免疫印记（Western blotting）法检测HSP70蛋白的表达,记录平均灰度值;用流式细胞仪Annexin-V法检测细胞凋亡,计算细胞总凋亡率。结果① 与C组HSP70表达（1.87±0.55） 相比,Gln组（8.42±1.38）、H₂O₂组（9.35±1.57）和Gln+H₂O₂组（13.12±1.85）的HSP70表达分别增高约4.5倍、5倍和7倍（P＜0.01）;与H₂O₂组HSP70表达相比,Gln+H2O2组进一步增高（P＜0.01）;②与C组相比,Gln组细胞总凋亡率无明显变化;H₂O₂组和Gln+H₂O₂组细胞总凋亡率分别为7.48%和6.06%,均明显高于C组（P＜0.01）;与H₂O₂组相比,Gln+H₂O₂组细胞总凋亡率明显降低（P＜0.01）。结论谷氨酰胺诱导A549细胞表达HSP70并可明显地抑制H2O2所致的细胞凋亡作用。     

神经肽FF对内吗啡肽2镇痛作用的调节

目的：研究神经肽FF （NPFF）对内吗啡肽2（EM-2）在急性痛与炎症痛中镇痛作用的调节。方法雄性昆明系小鼠,体重（20±2） g,侧脑室埋管后,水浴甩尾实验和福尔马林痛实验各随机分为8组,即盐水对照组、EM-2组、NPFF受体拮抗剂RF9组、EM-2+RF9组、低剂量NPFF+EM-2组、中剂量NPFF+EM-2组、高剂量NPFF+EM-2组、高剂量NPFF+RF9+EM-2组,每组8只小鼠。侧脑室注射药物NPFF、EM-2和RF9。小鼠水浴甩尾实验研究NPFF对EM-2中枢镇痛的调节作用,福尔马林痛实验研究NPFF对EM-2急性痛与炎症痛镇痛的调节作用。结果水浴甩尾实验结果显示,EM-27.5 nmol可延长小鼠的甩尾潜伏期, NPFF 5,10,15 nmol可剂量依赖性增强EM-2的镇痛作用。福尔马林痛实验结果显示,EM-215 nmol对第一相急性痛与第二相炎症痛均有镇痛作用, NPFF 10,15,20 nmol可剂量依赖性增强EM-2的镇痛作用。在2个实验中,RF9与NPFF联合给药后,RF9能拮抗NPFF对EM-2镇痛的增强作用。结论在小鼠水浴甩尾实验和福尔马林痛实验中,NPFF通过作用于NPFF受体拮抗剂RF9,剂量依赖性增强EM-2对急性痛和炎症痛的镇痛作用。     

塞来昔布诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的实验研究

目的探讨环氧化酶-2特异抑制剂-塞来昔布对喉癌Hep-2细胞增殖抑制和凋亡诱导作用及可能机制。方法以不同浓度的塞来昔布处理喉癌Hep-2细胞,以四甲基偶氮唑盐（Mar）法检测对细胞增殖的影响,Hoechst33342染色荧光显微镜下观察细胞核的形态改变,以Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax及COX-2的表达,Western blot分析Caspase-3裂解激活。结果MTT结果表明塞来昔布抑制Hep-2细胞的增殖呈时间和浓度依赖;Hoechst33342荧光染色见随塞来昔布处理时间延长,细胞核逐渐出现凝集、碎裂等凋亡表现;流式细胞术检测细胞凋亡率见塞来昔布处理细胞24h,70、100μmol/L组凋亡率分男q为（28．9±2．74）％、（32．7±3．96）％;Western blot分析蛋白表达,见随药物处理浓度增加,COX-2、Bcl-2表达降低,Bax表达增加,随药物处理时间延长Caspase-3出现裂解片段。结论塞来昔布能够有效地抑制Hep-2细胞增殖和诱导Hep-2细胞凋亡。其诱导凋亡作用机制可能与Bax/Bcl-2比值升高,Caspase-3蛋白裂解激活有关。     

Epigenetic regulation mechanism of ABCG2 induced drug-resistant phenotype

The aim of this study is to investigate epigenetic mechanism of ABCG2 induced drug-resistance.It is not only expatiate for drug-resistance regulation mechanism in all-round,but also to provide scientific experimental basis for selecting target to reverse its drug-resistance.Apply methylation-specific PCR (MSP) to have tested methylation of ABCG2 promoter region -359 to -353 specific positions in breast cancer tissues and paired adjacent tissue of 22 cases,and test their methylation positions with MSP products for sequencing; and adopt fluorescent quantitation RT-PCR to test expression level DNMT1,DNMT3A,DNMT3B and ABCG2; to make analysis on relationship between them with statistical spearman correlation.Specific positions of ABCG2 gene promoter region of 18 cases among the 22 cases with breast cancer (18/22,82％) existed high methylation (P＜0.05),MSP products sequencing proved methylation of the specific position,and mRNA expression level was relative higher in remarkable positive correlation (P＜0.05).ABCG2,DNMT1,DNMT3A,DNMT3B mRNA expression levels in breast cancer tissues were obviously higher than adjacent tissues (P＜0.01),and DNMT3B expression level was obviously higher than DNMT1 and DNMT3A (P＜0.01)in negative correlation with ABCG2 gene expression (P-0.001).-359 to -353 positions of promoter regions of ABCG2 gene existed high methylation capable to push expression of this gene in beast cancer tissue.DNMT3B is involved in expression regulation in ABCG2 gene,and provides new scientific basis tor drug-resistance target as reverse ABCG2 induction.     

高渗状态下肾脏COX2表达的基因调控

目的本研究旨在阐明核转录因子C／EBPβ和NFκB是否协同作用影响高渗状态下COX2的基因表达。方法体外培养肾髓间质细胞（RMICs），通过病毒转导或质粒转染技术将体外构建的COX2基因突变载体转入培养细胞，经高渗培养不同时间后．采用免疫印迹、荧光素酶报告基因活性检测等方法观察培养细胞COX2蛋白表达及活性的改变，同时应用染色质免疫沉淀分析法观察COX2基因与C／EBPβ、NFκB结合能力的改变。结果免疫印迹显示．高渗刺激能明显提高对照组COX2蛋白表达，应用突变序列IκBm阻断NFκB活性后COX2表达明显下降，应用突变序列C／EBPβ-P20阻断C／EBPβ亦能显著降低COX2表达．但同时运用突变序列C／EBPβ-P20和IκBm无法使COX2表达进一步下降。然而，将野生型、含NFκB或C／EBPβ结合位点突变的COX2启动子萤火虫荧光素酶报告基因的重组质粒转染至RMICs，高渗培养24h后显示：高渗刺激能显著增加野生型组COX2荧光素酶的活性，NFκB位点突变无法阻断该作用，而C／EBPβ结合位点突变却能完全抑制COX2高活性。进一步应用染色质免疫沉淀分析研究显示．高渗刺激能显著增加NhB（P65）或C／EBPβ与COX2基因的结合，并呈时间依赖性；NFκB结合位点突变不能消除高渗诱导的NFκB（P65）与COX2基因的结合增强，但在NFκB和C／EBPβ结合位点同时突变组该作用被阻断。结论在NFκB活化COX2基因转录过程中需要另一个核转录因子C／EBPβ的参与，C／EBPβ途径在高渗诱导肾脏内髓间质细胞表达COX2过程中具有重要作用。     

姜黄素对H_2O_2诱导人黑素细胞氧化应激损伤的预保护作用

目的:探讨姜黄素激活Nrf2对人黑素细胞免受H_2O_2诱导氧化应激损伤的预保护作用。方法:利用不同浓度的H_2O_2(50、100、200μmol/L)处理人黑素细胞24h,MTT检测细胞活性,筛选H_2O_2体外诱导人黑素细胞氧化应激的最适浓度;进一步使用10μmol/L的姜黄素预处理细胞2h后,使用最适浓度H_2O_2刺激24h。MTT检测细胞活性,DCFH-DA流式检测细胞内活性氧(ROS)含量,Real-time PCR测定Nrf2、Ho-1、Sod1、Cat的mRNA表达水平,Western blot检测Nrf2蛋白表达。结果:100μmol/L的H_2O_2处理人黑素细胞24h后细胞活性显著降低,10μmol/L的姜黄素预处理2h后,人黑素细胞活性显著增强,流式检测结果显示细胞内ROS含量显著降低,Western blot检测结果显示Nrf2蛋白表达增加,Real-time PCR结果提示Nrf2、Ho-1、Sod1、Cat的mRNA表达水平显著增强。结论:姜黄素保护人黑素细胞免受H_2O_2诱导氧化应激损伤的过程中激活了Nrf2信号通路,提示Nrf2是白癜风氧化应激致病机制中的关键分子,为临床治疗白癜风提供了一种思路。