LPAR1对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨溶血磷脂酸受体-1(LPAR1)对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法:应用基因集富集分析(GSEA)方法分析LPAR1的表达与细胞恶性表型的关系.LPAR1质粒及其空载对照转染人骨肉瘤细胞MG63、U2OS.CCK-8法、流式细胞术、Transwell小室法检测细胞的增殖、凋亡、转移及侵袭能力.建立体内裸鼠移植瘤,观察LPAR1对瘤体生长的影响.Western blotting法检测mTOR/AKT信号通路激活的情况.结果:LPAR1在骨肉瘤中低表达;GSEA分析结果显示,负调控细胞增殖、周期、迁移和侵袭和肿瘤转移基因集富集以及细胞凋亡基因集富集在LPAR1高表达组.与空载体组相比,LPAR1组人骨肉瘤细胞MG63、U2OS的细胞活力、克隆形成率、迁移和侵袭能力及Ki67、CDK2、CCNB1、BCL2、pmTOR/mTOR、pAKT/AKT表达均明显下降,细胞凋亡率及BAX蛋白表达明显上升(P＜0.05).与空载体组相比,LPAR1组裸鼠的瘤体体积、质量明显下降,瘤体组织中的LPAR1蛋白表达上调(P＜0.05).结论:LPAR1在骨肉瘤中低表达,过表达LPAR1可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭及裸鼠成瘤,其机制可能是通过抑制AKT信号通路来实现.     

对乙酰氨基酚对心肌细胞H2O2损伤的保护作用

目的 研究对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)对H2O2引起的心肌细胞损伤的保护作用.方法 原代SD大鼠乳鼠心肌细胞培养,48 h后加入H2O2造成心肌细胞损伤,损伤前1 h加入不同浓度的APAP作为保护剂.损伤6 h后,甲基四唑蓝比色(MTT)法测定线粒体脱氢酶活性,试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、心肌细胞中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、Caspase-3活性.结果 H2O2能明显造成心肌细胞损伤, 表现为:细胞活力降低、LDH活性增加、MDA含量增加、SOD活性下降、caspase-3活性增高;20 μmol·L-1、60 μmol·L-1、180 μmol·L-1的APAP对H2O2引起的心肌细胞损伤有保护作用,并随浓度增加保护作用加强.结论 APAP能减轻H2O2对心肌细胞的损伤作用,抑制H2O2引起的培养心肌细胞凋亡.     

辛伐他汀对H2O2诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用研究

目的 研究辛伐他汀对H2O2诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用并探讨其机制.方法 应用出生2～3 d的SD(Sprague-Dawley)大鼠乳鼠心肌细胞进行培养,用H2O2建立心肌细胞凋亡模型.随机分为五组:正常组,损伤组,1μmol/L,3 μmol/L,10 μmol/L辛伐他汀保护组.损伤组H2O20.2 mmol/L作用6 h.甲基四唑蓝比色法(MTT法)测定心肌细胞活力;PI-AV双染后,流式细胞分析仪测定细胞凋亡率;用Western blot法测定caspase-3蛋白含量.结果 (1)H2O2能明显造成心肌细胞损伤:损伤组与正常组相比细胞活力下降.辛伐他汀1 μmol/L,3 μmol/L,10 μmol/L保护组对损伤心肌细胞有不同程度的保护作用(P<0.05),并随剂量增加效果明显;(2)流式细胞仪检测细胞凋亡率损伤组比正常组增高(P<0.05);辛伐他汀各保护组细胞凋亡率均比损伤组降低(P<0.05),并随剂量增加效果明显;(3)用Western blot法测定caspase-3蛋白含量显示,损伤组比正常组caspase-3含量明显增加,辛伐他汀保护组可以降低H2O2引起的caspase-3蛋白含量增加,并随剂量增加效果明显.结论 辛伐他汀能够减轻H2O2引起的培养心肌细胞的凋亡,可能与抑制细胞内凋亡相关蛋白caspase-3有关.