As2O3诱导NB4细胞凋亡的周期选择性与活性氧水平相关

目的 研究三氧化二砷（As2O3)诱导NB4细胞凋亡的周期性选择与细胞 活性氧（reactive oxygen species,ROS)水平的关系。方法 以碘化丙啶（PI）标记DNA,流式细胞仪检测As2O3单独或联用二甲萘醌（DMNQ）作用后细胞周期的变化,以7－氨基放线菌素D（7AAD）标记DNA,双氢罗丹明123（DHR）或双氢－乙酰乙酸二氯荧光黄（DCFH－DA）捕获ROS,流式细胞仪双参数法检测细胞周期不同阶段ROS水平。结果 2μmol/L As2O3可选择性诱导NB4 G2／M期细胞凋亡,DMNQ可增强这一效应;G2／M期细胞ROS水平明显高于G1、S期。结论 As2O3诱导NB4 G2／M期细胞凋亡与G2／M期ROS水平较高相关。As2O3诱导NB4细胞凋亡的周期选择性与细胞ROS水平有关。     

白血病细胞固有活性氧水平与As2O3促凋亡作用的关系

目的探讨白血病细胞株的固有活性氧(ROS)水平与细胞对三氧化二砷(As2O3)促凋亡作用的敏感性之间的关系. 方法用2μmol/L As2O3作用于四种髓系来源的人白血病细胞株(NB4、HL60、K562、U937),证实As2O3促凋亡敏感性在四种细胞之间的差异.然后在不加As2O3情况下,用活性氧捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)或双氢罗丹明123(DHR)捕获ROS,通过流式细胞仪检测细胞的ROS水平. 结果四种白血病细胞凋亡敏感性与ROS水平存在对应关系,由高到低的顺序为:NB4、HL60、K562、U937. 结论白血病细胞固有的ROS水平与细胞对As2O3诱导凋亡的敏感性有关.     

白血病细胞固有活性氧水平与As2O3促凋亡作用的关系

目的 探讨白血病细胞株的基因固有活性氧(ROS)水平与细胞对三氧化二砷(As2O3)促凋亡作用的敏感性之间的关系。方法 用2μmol/L As2O3作用于四种髓系来源的人白血病细胞株(NB4、HL60、K562、U937)，证实As2O3促凋亡敏感性在四种细胞之间的差异。然后在不加As2O3情况下，用活性氧捕获剂双氢—乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH—DA)或双氢罗丹明123(DHR)捕获ROS，通过流式细胞仪检测细胞的ROS水平。结果 四种白血病细胞凋亡敏感性与ROS水平存在对应关系，由高到低的顺序为：NB4、HL60、KS62、U937。结论 白血病细胞固有的ROS水平与细胞对As2O3诱导凋亡的敏感性有关。     

维甲酸联合三氧化二砷对NB4细胞NF-κB、ROS表达的影响

摘要目的探讨全反式维甲酸(ATRA)联合三氧化二砷(As2O3)对NB4细胞的生长以及核因子-κB(NF-κB)、活性氧(ROS)表达的影响.方法选择NB4细胞,加入ATRA和不同剂量的As2O3,观察细胞生长曲线,流式细胞仪检测CD11 b、ROS、NF-κB的变化,DNA片段梯度观察细胞凋亡.结果 0.5 μmol/L As2O3下调了1 μmol/L ATRA诱导的NB4细胞的分化凋亡发生,同时抑制了NF-κB的激活,提高了ROS水平.2 μmol/L As2O3联合同浓度ATRA对增殖抑制、诱导凋亡更明显.结论 ATRA联合As2O3对NB4细胞具有分化和凋亡的双重效应.     

As2O3对耐药的白血病细胞株UF-1和K562/D细胞增殖的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对耐药的白血病细胞株UF-1和K562/D的作用.方法:采用台盼蓝拒染法计数活细胞数,并计算细胞生长率;细胞涂片经Wright-Giemsa染色,光镜下观察细胞的形态;流式细胞仪解析细胞周期.结果:As2O3对耐药的白血病细胞株UF-1和K562/D的增殖均具有明显的抑制作用,与敏感细胞株NB4和K562细胞相比均无显著性差异.2 μmol/L的As2O3能够使UF-1细胞株的凋亡细胞占48.5%,亚G1期细胞明显增多,4 μmol/L的As2O3使K862/D细胞株的分裂期细胞占40.6%,G2/M期细胞增多.结论:耐药白血病细胞株UF-1和K562/D分别与敏感株NB4和K562相比,对As2O3的敏感性相同.As2O3诱导UF-1细胞凋亡,使K562/D细胞发生G2/M期阻滞.     

三氧化二砷和维生素C联合诱导喉癌细胞株Hep-2凋亡的作用

目的探讨VitC与三氧化二砷(As2O3)促喉癌细胞株Hep-2凋亡的协同效应。方法体外培养人喉癌细胞株Hep-2,以As2O3合用VitC孵育细胞,采用四甲基偶氮唑(MTT)法,Annexin-V/PI双染色流式细胞术来观察各组的细胞凋亡情况,并通过流式软件分析细胞周期变化。结果As2O3与VitC联用能显著降低单用As2O3的细胞存活率和升高细胞凋亡率(P<0.05),VitC能显著增强As2O3诱导细胞集中于G2/M期的作用,从而增强其促细胞凋亡作用。结论联用VitC能增强As2O3诱导细胞凋亡的作用,增强作用可能与影响细胞周期有关。     

Study of combination of tanshinone with arsenic trioxide induced apoptosis of acute promyelocytic leukemia cells in vitro

目的 为评估丹参酮ⅡA(Tanshinone ⅡA,Tan ⅡA)与三氧化二砷(As2O3)联合应用的效应,观察2药的相互作用和相互影响,为其临床应用提供依据.方法 以不同浓度的As2O3、TanⅡA单独及联合应用作用于急性早幼粒细胞白血病细胞(NB4)作为实验组,通过观察细胞形态学改变,以MTT法测定细胞存活率,并采用流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布,分析不同浓度的As2O3、TanⅡA单独及联合应用对NB4细胞的增殖、凋亡的影响.结果 TanⅡA、As2O3均能抑制NB4细胞生长,以1.0 μmol/L As2O3作用更显著,二者联合应用后的增殖抑制作用表现为协同效应;经TanⅡA组处理后的NB4细胞,其形态改变更多显示一定程度的成熟粒细胞的特征,As2O3组则更多表现为细胞凋亡的形态学改变,并经电镜检查证实,两药联合应用可加强NB4细胞的凋亡形态改变;处理后的NB4细胞G0/G1期比例增高,S期细胞比例降低,细胞增殖指数(PI)下降,两药联合应用后具有协同效应.结论 ①TanⅡA、As2O3对NB4细胞均有增殖抑制作用,两者的增殖抑制作用具有协同效应,并与剂量相关;②TanⅡA与As2O3联合作用于NB4细胞具有诱导凋亡作用,两药的诱导凋亡作用具有协同效应;③小剂量的As2O3联合TanⅡA即可对NB4细胞产生促进凋亡的效应,故临床可以选择小剂量的As2O3,以减轻砷剂的毒副作用.     

厌氧加强三氧化二砷对A549细胞G1期的阻滞作用

[摘要]目的观察低浓度三氧化二砷(As2O3)在不同氧环境下对肺癌A549细胞增殖抑制、细胞周期阻滞、细胞凋亡的诱导作用。方法分别在常氧(21% O2)、低氧(5% O2)、厌氧(0% O2)环境利用0 μmol/L As2O3(空白对照组)、1 μmol/L As2O3、1 μmol/L VP-16体外诱导培养肺癌A549细胞24 h,通过甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法测细胞增殖抑制率,通过碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色、流式细胞仪检测细胞周期,通过Annexin Ⅴ/PI双染色法检测细胞凋亡。结果1 μmol/L As2O3组A549细胞增殖抑制率及G0/G1期细胞比例随缺氧加重而增加;厌氧环境下该组细胞增殖抑制率及G0/G1期细胞比例均高于空白对照组(P<0.05),但其细胞凋亡率较空白对照组降低(P<0.05);与3种相应氧环境下VP-16组相比较,As2O3组A549细胞增殖抑制率、G0/G1期细胞比例、G2/M期细胞比例、细胞凋亡率均减少(P<0.05)。结论1 μmol/L As2O3对A549细胞无明显诱导凋亡作用,厌氧环境下该剂量As2O3可以通过G1期阻滞抑制A549细胞增殖。     

三氧化二砷体外诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对人胃癌SGC 790 1细胞抑制生长、诱导凋亡的生物学效应。方法 :光学显微镜观察细胞形态 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT)还原法检测As2 O3 对该细胞株生长的影响 ,流式细胞仪 (FCM )及 3′ OH末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果 :SGC 790 1细胞经As2 O3 作用后 ,细胞增殖受到明显抑制 ,且呈剂量和作用时间依赖关系 ,细胞周期分析显示G2 M期阻滞 ;FCM检测在细胞周期G1期前出现低于 2倍体的凋亡峰 ;TUNEL标记发现DNA链的断裂。结论 :As2 O3 能抑制人胃癌SGC 790 1细胞增殖 ,并诱导该细胞系凋亡 ,其发生机制可能与细胞周期阻滞有关。     

三氧化二砷对NB4细胞珠端粒酶活性的影响

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对NB4细胞珠端粒酶活性的影响,并探讨与细胞增殖、分化及细胞周期之间的关系。方法:应用MTT法、BNT法检测细胞的增殖抑制率、细胞分化率、流式细胞仪检测CD11b的表达率、细胞周期时相比率,以PCR为基础的TRAP法检测端粒酶活性。结果:As2O3能有效地使NB4细胞增殖抑制、诱导分化,伴随着端粒酶活性的变化为活性降低。细胞周期分析发现,G0/G1期高或S期低对应低水平端粒酶活性,G0/G1期低或S期高对应高水平端粒酶活性。结论:As2O3可抑制NB4细胞端粒酶活性,并与细胞分化、细胞周期时相有关。     

Survivin在肾癌组织和肾癌细胞系中的表达及意义

目的探讨存活蛋白(Survivin)在肾癌和肾癌细胞系中的表达情况及其与肾癌发生发展的关系。方法应用免疫组化方法检测66例肾癌患者和20例正常肾组织中Survivin的表达情况,应用Western blot和RT-PCR检测10例肾癌组织,正常肾组织及两种肾癌细胞系786-0和ACHN中Survivin的表达情况。结果肾癌组织和正常肾组织吸光度分别为0.031±0.002和0.875±0.124,差异具有显著性意义(P<0.01)。透明细胞癌,嗜色细胞癌和嫌色细胞癌吸光度值分别为0.873±0.091,0.904±0.103和0.813±0.126,各类型间差异无显著性意义。临床分期Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ、Ⅳ吸光度值分别为0.864±0.121,0.884±0.093和0.853±0.106,各期间比较差异无显著性意义。肾癌组织G1,G2,G3和G4吸光度值分别为0.693±0.092,0.762±0113,0.876±0.106和0.903±0.092,各级间比较,差异具有显著性意义(P<0.05)。Western blot和RT-PCR检测结果显示,正常肾组织表达阴性,肾癌组织和两种肾癌细胞系786-0和ACHN均有不同程度的Survivin蛋白和mRNA表达,统计学表明差异有显著性意义。结论Survivin和肾癌的分期,分型无关,和肾癌的分级有关,可以作为判断预后的标志物。     

维生素C对Hela细胞系增殖及细胞周期的影响

目的 探讨维生素C对Hela细胞系增殖及细胞周期的影响。方法 采用MTT测定，观察不同浓度维生素C(1μmol／L～3500μmol／L)对Hela细胞系增殖的抑制作用；运用流式细胞仪检测用药后细胞周期分布及增殖指数的变化。结果 各个浓度的维生素C对Hela细胞系增殖均有抑制作用，并呈剂量依赖性，3500μmol／L时，抑制率为66．15％。维生素C能使Hela细胞系阻滞于G0／G1期，抑制DNA的合成，使细胞增殖指数明显下降。且此作用随用药浓度的增加而增强。结论 维生素C在体外对Hela细胞系有明显的抑制作用，使细胞阻滞于G0／G1期。     

漂洗技术对血液中肿瘤细胞去除作用的研究

目的　观察血液回收机漂洗技术能否将血液中的肿瘤细胞去除。方法　选择繁殖能力强 ,不易受损的细胞系肠肿瘤细胞LOVO和胃肿瘤细胞SGC ,计数后分别混入浓缩的红细胞中。采用血液回收机将其过滤、离心、漂洗。在漂洗后的浓缩红细胞中分离肿瘤细胞 ,台盼蓝染色计数存活的肿瘤细胞。将分离出的肿瘤细胞培养 1 4d ,进行克隆形成实验及DNA代谢物测定 ,观察肿瘤细胞的活性。结果　经血液回收机漂洗后仍然存在肿瘤细胞 ,但活性受到显著抑制 ;细胞培养 7d时 ,未发现肿瘤细胞有克隆形成 ;培养 1 4d后 ,肿瘤细胞有克隆形成。免疫组化实验显示 ,漂洗后肿瘤细胞DNA合成能力与对照组无显著性差异。结论　单纯采用血液回收机漂洗技术可显著减少血液中的肿瘤细胞 ,但不能完全去除血液中的肿瘤细胞     

PCNA在卵巢颗粒细胞瘤中的表达及意义

目的 :探讨增殖细胞核抗原 (PCNA)在卵巢颗粒细胞瘤 (GCT)中的表达及临床意义。方法 :S P法检测5 2例卵巢GCT中PCNA表达水平。每例切片 3张 ,厚度 4 μm ,分别进行HE染色及PCNA测定。结果 :PCNA在卵巢GCT中强阳性表达率晚期明显高于早期 (P <0 .0 1) ;弥漫型明显高于其他病理类型 (P <0 .0 1) ;核分裂数≥ 3/HPF明显高于 <3/HPF (P <0 .0 1) ;瘤体 >10cm明显高于≤ 10cm (P <0 .0 1) ;术后复发者明显高于无复发者 (P<0 .0 1) ;死亡者明显高于存活者 (P <0 .0 1)。结论 :PCNA的表达与卵巢GCT的生物学行为及预后有关。     

细胞周期素A在肾癌细胞增殖中的作用

目的研究细胞周期素A在肾癌组织中的表达及其在肾癌细胞增殖中的作用.方法应用免疫组化SABC法检测肾癌及正常肾组织中细胞周期素A及Ki--67基因的表达,运用统计学方法分析其差异,并通过Ki-67表达指数评价细胞周期素A在肾癌细胞增殖中的作用.结果细胞周期素A在肾癌及正常肾组织中的阳性表达率分别为12.12%和5.09%(P＜0.01).在肾癌组织中,病理分级较高、术后生存时间＜5年者呈高表达(P＜0.01),不同临床分期及有(无)局部淋巴结转移的肿瘤之间表达无显著差异(P＞0.05).Ki-67指数较高者,细胞周期素A呈高表达(P＜0.01),细胞周期素A阳性表达率与Ki-67指数显著相关(r=0.757,P＜0.01).结论细胞周期素A可能参与肾癌的恶性转化,但与肿瘤的临床进展过程无关.检测细胞周期素A的水平可反映肾癌细胞的增殖活性,并可作为肾癌预后估计的参考指标.     

肾透明细胞癌组织中BNIP3的表达及意义

目的 研究肾透明细胞癌中BNIP3表达及意义。 方法 收集肾癌手术切除的肾癌组织和对应癌旁正常肾组织新鲜标本,共30例。运用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法（Western blot）检测各组BNIP3、von Hippel-Lindan(VHL)、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况。并分析BNIP3与VHL、HIF-1α、VEGF表达相关性,及各个基因表达与临床病理参数间关系。 结果 实时荧光定量PCR检测结果示:在RNA水平,BNIP3、VHL在肾癌组织中表达水平低于癌旁正常肾组织(P<0.05), HIF-1α和VEGF在肾癌组织中表达水平高于癌旁正常肾组织(P<0.05),BNIP3表达与VHL、HIF-1α、VEGF无相关性,肾癌组织中BNIP3低表达与各个临床病理学特征无相关性。Western blot检测结果示:在蛋白水平,BNIP3、VHL在肾癌组织中表达水平低于癌旁正常肾组织(P<0.05), HIF-1α和VEGF在肾癌组织中表达水平高于癌旁正常肾组织(P<0.05)。BNIP3蛋白表达与VHL、HIF-1α、VEGF蛋白亦无相关性（P>0.05)。 结论 可能存在某种调控机制使BNIP3在肾透明细胞癌表达下调,且BNIP3低表达与VHL、HIF-1α、VEGF表达无相关性。     

SELDI-TOF-MS检测正常肾细胞株与肾癌细胞株的差异表达蛋白

目的分析体外培养的正常肾细胞株和肾癌细胞株的蛋白质表达差异。方法运用表面增强激光解吸离子化蛋白质芯片（SELDI-TOF-Ms）技术检测常规体外培养的正常肾细胞株（HK-2）和肾癌细胞株（786-0）。2种细胞株均用IMAC3（固定金属亲和）和WCX2（弱阳离子交换）2种芯片检测。采用PBSIIC型蛋白质芯片阅读机读取数据，Ciphegenproteinchip3．1软件采集数据，BiomarkerWizard软件分析2种细胞株的蛋白差异。结果SELDI-TOF-MS技术检测发现体外培养的肾癌细胞株与正常肾细胞株的蛋白质存在差异表达，共有15个蛋白质水平发生变化。IMAC3芯片发现差异峰6个，WCX2芯片发现差异峰9个。结论肾癌细胞株与正常肾细胞株之间的蛋白质谱有差异蛋白表达。     

DADS诱导人白血病细胞分化中的代谢变化

目的 研究二烯丙基二硫诱导人髓性白血病HL-60细胞分化过程中蛋白质组的差异表达.方法 运用蛋白质组学方法(双向凝胶电泳、质谱分析、生物信息学方法)分析鉴定DADS诱导HL-60细胞分化的差异表达蛋白质.结果 初步鉴定的差异表达蛋白质点中二型碳酸酐酶、磷酸丙糖异构酶、醛缩酶A在处理组中均表达下调,其功能与细胞代谢调节有关.结论 DADS可通过抑制二型碳酸酐酶表达和抑制糖酵解途径,抑制HL-60细胞增殖,诱导其分化.     

颅神经嵴干细胞成牙本质样细胞分化诱导的体内实验研究

目的观察诱导颅神经嵴干细胞(cranial neural crest stem cell,CNCSC)后的裸鼠体内成牙本质样细胞表型分化,探讨CNCSC用于牙再生研究的可行性。方法颅神经管组织块无血清条件培养法获取CNCSC,体外经成纤维生长因子8(FGF8)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、转化生长因子β1(TGFβ1)、牙本质基质非胶原蛋白等因子诱导后,与胶原-壳聚糖三维凝胶支架复合植入裸鼠背部皮下,免疫组织化学方法检测型胶原表达、牙本质涎磷蛋白(DSPP)表达,鉴定其成牙本质样细胞表型分化特征。结果诱导后CNCSC植入体内后1月表现为型胶原及DSPP阳性表达,2月后DSPP表达增强,局部区域可见极性栅栏状排列的细胞分布,并可见明显的细胞外基质形成。结论CNCSC在体内可向成牙本质样细胞表型分化,为进一步开展牙再生研究奠定了基础。