前癃通对大鼠前列腺增生组织中内皮生长因子表达的影响

目的 通过免疫组化、原位杂交等实验方法观察前癃通对大鼠前列腺增生组织中内皮生长因子(VEGF)表达的影响,从转录和翻译水平探讨其治疗的分子机制,促进前癃通治疗良性前列腺增生症中推广应用. 方法 60例SD大鼠分成空白对照组,模型组和前癃通低、中、高剂量组和癃闭舒组,采用免疫组化和原位杂交的方法观察各组大鼠前列腺增生组织中VEGF阳性表达情况(所有图像均采用MIAS图像分析系统观察分析). 结果 6组大鼠前列腺组织中VEGF平均灰度值、积分光密度、阳性细胞总面积比较,差异均有统计学意义(P<0.01).模型组显著高于空白对照组(P<0.01),前癃通低、中、高剂量组及癃闭舒组大鼠前列腺组织中VEGF各检测指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),前癃通高剂量组灰度值、积分光密度、阳性细胞总面积均低于癃闭舒组,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 前癃通可以降低大鼠前列腺组织中VEGF的阳性表达,高剂量较低剂量的影响更明显.     

益肾通癃胶囊对前列腺增生模型大鼠雌雄激素比及缺氧诱导因子-1α的影响

目的探讨益肾通癃胶囊对前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)模型大鼠雌雄激素比及缺氧诱导因子1α(chypoxia-inducible fac tor-1α,HIF-1α)的影响。方法对SD雄性大鼠皮下注射丙酸睾酮5 mg/(kg·d),连续4周。造模成功后将大鼠随机分为4组:正常组、模型组、中药对照组和实验组,每组7只。实验组大鼠灌服0.365 g/kg益肾通癃胶囊混悬液;中药对照组灌服0.183 g/kg癃闭舒胶囊混悬液;正常组及模型组给予同等容量的生理盐水灌胃,连续灌胃8周后,光镜下观察前列腺组织病理学变化;称取前列腺湿重并计算前列腺指数;检测大鼠血清E2、T、DHT水平及E2/T;测定前列腺组织中HIF-1α蛋白表达。结果与模型组比较,实验组大鼠前列腺腺体轻微增生,少数呈乳头状增生,腺腔基本恢复正常。与模型组比较,实验组大鼠前列腺体积、前列腺湿重、前列腺指数及前列腺组织中的HIF-1α蛋白表达水平均降低(P<0.01);大鼠血清中的DHT、E2、T水平降低,E2/T比值升高(P<0.01)。结论益肾通癃胶囊可能通过降低BPH模型大鼠血清中的DHT、E2、T水平,升高E2/T比值,抑制HIF-1α的表达起治疗BPH的作用。     

前列通瘀汤对前列腺蛋白所致慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺组织细胞因子影响的研究

目的探讨前列通瘀汤对前列腺蛋白所致慢性非细菌性前列腺炎(CPPS)大鼠治疗作用机理。方法采用腹腔注射百白破疫苗,多点皮下注射大鼠前列腺蛋白提纯液和福氏完全佐剂的混悬液免疫方法制造大鼠CPPS模型。大鼠分为正常组、模型组、塞来昔布组和前列通瘀汤大、中、小剂量组。30d后处死大鼠,取前列腺组织,ELISA法检测前列腺组织匀浆白细胞介素-1β(IL-1β)、环氧化酶-2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)、β-内啡肽(β-EP)的含量。结果前列通瘀汤大剂量组与塞来昔布组均可显著降低大鼠前列腺组织中IL-1β、COX-2、PGE2的含量,升高β-EP的含量。前列通瘀汤大剂量组与塞来昔布组比较无显著差异(P(0.05)。结论前列通瘀汤对CPPS的治疗作用与前列通瘀汤能调节前列腺组织炎性和细胞因子含量密切相关。     

塞来昔布通过诱导人NAG-1基因表达抑制胃癌生长

目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布在人体内抑制胃癌及诱导非甾体类抗炎药物(NSAID)活化基因(NAG-1)的作用.方法 36例胃癌患者在接受胃癌根治术或胃大部切除术前随机分为2组.塞来昔布组:20例,术前口服塞来昔布,0.2 g,qd×7 d.对照组:16例,术前不用任何抗肿瘤药物.术中切除标本送组织病理学研究;采用DNA末端原位标记染色法检测胃癌细胞凋亡;免疫组化检测胃癌细胞COX-2表达;半定量RT-PCR技术检测两组胃癌组织NAG-1 mRNA表达.结果 塞来昔布组胃癌组织凋亡阳性细胞的积分光密度值高于对照组(180.20±42.67 vs 10.28±5.02,P<0.05),塞来昔布组NAG-1 mRNA(0.22±0.13)也较对照组(0.12±0.08)上调(P<0.05).两组COX-2蛋白表达率(75.0% vs 87.6%)差异无统计学意义.结论 塞来昔布在人体内通过诱导NAG-1基因转录,促进胃癌细胞凋亡.     

塞来昔布对实验性Barrett食管的作用研究

目的:探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对大鼠实验性Barrett食管发生发展的影响.方法:60只8周龄雄性SD大鼠,50只行食管空肠吻合术2周后随机分为2组.术后4周,塞来昔布组大鼠塞来昔布10 mg/(kg·d-1)经食管灌入;对照组经食管灌入生理盐水1 ml;另外,10只大鼠为假手术组.术后20周处死动物,观察比较3组动物大体组织变化、食管炎、Barrett食管及食管腺癌的发生情况,免疫组织化学检测COX-2的表达,酶联免疫竞争法检测PGE2的水平.结果:术后20周,塞来昔布组轻、中、重度食管炎发生率分别为14/19(73.68%)、4/19(21.05%)、1/19(5.26%);对照组为4/17(23.53%)、5/17(29.41%)、8/17(47.06%),两组比较有显著差异(P<0.05).Barrett食管发生率塞来昔布组为7/19(36.84%),对照组为13/17(76.47%),两组比较有显著差异(P<0.05).Barrett食管不典型增生发生率塞来昔布组为2/19(10.53%),对照组为8/17(47.06%),两组比较有显著差异(P<0.05).COX-2蛋白表达塞来昔布组为1/7(14.29%),对照组为10/13(76.92%),两组比较有显著差异(P<0.05).塞来昔布组PGE2水平(1480.1±489.8 )pg/mg.protein,显著低于对照组(2933.8±862.9)pg/mg.protein(P<0.001).假手术组组织学未见异常.结论:塞来昔布对大鼠反流性食管炎、Barrett食管和食管腺癌的发生发展有化学预防作用.     

环氧合酶-2表达与Barrett食管及食管腺癌的相关性

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)表达在Barrett食管(BE)及食管腺癌(EA)发生发展中的作用及COX-2抑制剂在预防与治疗BE及EA中的作用。方法170只SD大鼠分为无反流组、铁剂组、反流组、反流铁剂组、塞来昔布组5组,手术制作胃食管反流模型。术后铁剂组、反流铁剂组与塞来昔布组大鼠腹腔注射右旋糖苷铁(50mg/kg,每周2次,共22周),同时塞来昔布组予以塞来昔布(20 mg.kg-1.d-1)灌胃,共22周。24周后取得食管标本,病理检查大鼠食管BE及EA的发生情况,应用SP免疫组织化学染色检测COX-2的表达活性。结果无反流组与无反流铁剂组未发生BE、异型增生和EA,反流铁剂组BE、异型增生及EA的发生率高于反流组与塞来昔布组(P<0.05)。反流铁剂组免疫组织化学染色COX-2阳性率及阳性程度高于其他组(P<0.05),塞来昔布组与反流组比较差别无统计学意义(P>0.05)。COX-2在肿瘤中表达最高,异型增生中次之,正常黏膜表达最低。结论COX-2表达的增加可能与BE及EA的发生发展有关;选择性COX-2抑制剂能减少动物模型BE及EA的发生率。     

前癃通胶囊抑制良性前列腺增生基质细胞TGF-β1表达的体外实验研究

目的研究前癃通胶囊干预下,TGF-β1mRNA在良性前列腺增生基质细胞中的表达的变化。方法:采用MTT比色法检测前癃通胶囊对体外培养良性前列腺增生前列腺基质细胞增殖的抑制作用;应用逆转录-多酶链反应(RT-PCR)技术,观察前癃通胶囊干预下TGF-β1mRNA在良性前列腺增生基质细胞中的表达的变化。结果 3种浓度的前癃通胶囊能抑制前列腺基质细胞的增殖,且随着时间的延长抑制作用增强,高浓度组在不同时段对前列腺基质细胞增殖有明显的抑制作用,与中浓度组比,组间比较差异有统计学意义(P<0.01);中浓度组在不同时段对前列腺基质细胞增殖有抑制作用,与低浓度组比,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。前列腺基质细胞中的TGF-β1mRNA表达随着前癃通胶囊(药液)浓度的增高呈现下降趋势。TGF-β1mRNA在高浓度组的表达最低,空白组的表达最高。高、中、低浓度组分别与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);高、中浓度组与低浓度组比较TGF-β1mRNA的表达明显减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论前癃通胶囊对前列腺基质细胞的增殖有较强的抑制作用,能降低TGF-β1mR-NA在基质细胞中的表达。     

塞来昔布对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B增殖和凋亡的影响

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞后细胞增殖的变化;不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;RT-PCR检测细胞中COX-2 mRNA的表达。结果MTT结果显示,塞来昔布对HEC-1B细胞的增殖抑制作用呈现时间依赖性和浓度依赖性;不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞24 h后,流式细胞仪结果显示G0/G1期细胞增加,S期和G2/M细胞减少,细胞凋亡率增加,各药物组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);RT-PCR结果显示,在50~200μmol/L塞来昔布组,随着药物浓度的增加COX-2 mRNA的表达逐渐减弱(P<0.05)。结论塞来昔布能抑制HEC-1B细胞的增殖,并能改变细胞周期和诱导凋亡,其机制可能与下调细胞中COX-2 mRNA的表达有关。     

塞来昔布对人结肠癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的 研究不同剂量环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人结肠癌裸鼠移植瘤生长的影响及机制.方法 将人结肠癌HT-29细胞注射于裸鼠背部皮下建立移植瘤模型,16 d后,将裸鼠以随机数字表法分为5组:对照组、塞来昔布1组(25 mg·kg-1·d-1)、塞来昔布2组(50 mg·kg-1·d-1)、塞来昔布3组(75 mg·kg-1·d-1)、塞来昔布4组(100 mg·kg-1·d-1),并给予相应剂量的塞来昔布.每周测量肿瘤体积,给药35 d后,处死裸鼠,切取移植瘤组织检测COX-2,survivin表达, VEGF mRNA表达和微血管密度(MVD).结果 塞来昔布1、2、3、4组的抑瘤率分别为34.94%、39.20%、53.50%、59.20%,与对照组比较移植瘤体积明显缩小(P<0.05).与对照组比较,塞来昔布各组COX-2、survivin的表达水平均明显降低(P<0.05),并且抑制程度呈药物剂量依赖性.低剂量(25 mg·kg-1·d-1)塞来昔布可明显抑制VEGF mRNA表达和结肠癌移植瘤微血管生成(P<0.05,vs对照组),其抑制作用并未随用药剂量的增加而增强.结论 不同剂量的塞来昔布均能明显抑制结肠癌移植瘤的生长,其抑制作用呈用药剂量依赖性,这种作用可能是通过抑制survivin的表达实现的.低剂量塞来昔布可抑制人结肠癌裸鼠移植瘤微血管生成,可能对防止肿瘤转移起到重要作用.     

苦参碱对膀胱癌大鼠COX-2、cPLA2及PGDH蛋白表达水平的影响

目的:探讨苦参碱对膀胱癌大鼠环加氧酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)、细胞膜磷脂酶A2(cytosolic phospholipases A2,c PLA2)、前列腺素脱氢酶(prostaglandin dehydrogenase,PGDH)蛋白表达水平的影响。方法:选取SD雄性大鼠120只,随机分为正常对照组、模型组、塞来昔布组、苦参碱高剂量组、苦参碱中剂量组、苦参碱低剂量组,各20只。给予亚硝基胺灌胃建立膀胱癌模型,并给予相应的药物治疗。观察所有大鼠的膀胱质量、质量200 mg膀胱所占比例、肿瘤细胞凋亡指数,并对各组大鼠COX-2、c PLA2及PGDH蛋白的表达水平进行检测。结果:治疗后,与模型组比较,各药物组大鼠的膀胱质量、质量200 mg膀胱所占比例较低,其中塞来昔布组、苦参碱高剂量组低于苦参碱中剂量组、低剂量组(P0.05);治疗后,与模型组比较,各药物组大鼠肿瘤细胞凋亡指数较高,其中塞来昔布组、苦参碱高剂量组高于苦参碱中剂量组、苦参碱低剂量组(P0.05);治疗后,与模型组比较,各药物组大鼠COX-2阳性表达率较低,其中塞来昔布组、苦参碱高剂量组低于苦参碱中剂量组、苦参碱低剂量组(P0.05);治疗后,与模型组比较,各药物组大鼠COX-2、c PLA2蛋白表达水平较低,其中塞来昔布组、苦参碱高剂量组低于苦参碱中剂量组、苦参碱低剂量组(P0.05);各药物组大鼠PGDH蛋白表达水平较高,其中塞来昔布组、苦参碱高剂量组高于苦参碱中剂量组、苦参碱低剂量组(P0.05)。结论:苦参碱能够明显抑制亚硝基胺诱发的大鼠膀胱癌的生长,其作用机制可能与抑制前列腺素通路相关蛋白COX-2、c PLA2表达、促进PGDH蛋白表达有关,且其作用具有剂量依赖性。     

CHADS_2/CHA_2 DS_2-VAS_C评分的应用

临床上CHADS2评分和CHA2DS2-VASC评分主要用来对非瓣膜性心房颤动(房颤)血栓栓塞的风险进行评估。由于CHA2DS2-VASC评分系统更为全面,并能筛选出不需要抗凝治疗的"真正的低危患者",因此现多应用此评分系统。然而,两种评分系统所包含的危险因素同样适用于其他心血管疾病,两者也可以被用来对房颤风险、左心房功能进行评估,同时也可对非房颤患者进行预后评估。     

过氧化氢对人肝癌细胞株HepG2增殖的促进作用

目的:探讨低剂量过氧化氢(H2O2)对人肝癌细胞株HepG2的促增殖作用及该作用与NF-κB和细胞周期的关系. 方法: 不同剂量H2O2直接作用于培养的HepG2细胞;20 μmol/L NF-κB抑制剂(PDTC)预处理细胞2 h, 50 μmol/L的H2O2作用HepG2细胞;50 μmol/L H2O2分别作用于G1, G2/M, S期细胞,MTT法测定细胞增殖活性. 结果: 50 μmol/L的H2O2具有明显的促进HepG2细胞生长的作用,此作用可以被PDTC抑制;50 μmol/L的H2O2可以明显的促进G1期HepG2细胞生长. 结论: 低剂量H2O2可诱导HepG2细胞增殖,该过程可能包含依赖NF-κB的信号途径的参与;H2O2诱导HepG2细胞增殖在细胞周期的不同时相效应敏感性不同,主要诱导G1期细胞增殖.     

评价房颤CHADS2评分及其衍生评分对冠心病及其严重程度的预测价值

目的：探讨房颤评分系统CHADS2(欧洲)评分及其衍生评分对冠心病及其严重程度的预测价值。方法纳入2013年1月1日-2013年12月1日就诊于本院心血管内科怀疑冠心病并行冠状动脉造影检查的连续病例429例,根据其造影结果分为对照组(n=51)及冠心病组(n=378)。根据患者的临床资料计算其CHADS2、CHA2DS2-VASc和CHA2DS2-VASc-HSF评分,根据其冠状动脉造影结果计算Gensini积分评价其病变严重程度,并对3种评分的冠心病预测能力进行评价。结果 CHADS2、CHA2DS2-VASc和CHA2DS2-VASc-HSF评分与病变支数(r=0.317,P＜0.01;r=0.332,P＜0.01;r=0.330,P＜0.01)及Gensini积分均有一定相关性(r=0.240,P＜0.01;r=0.274,P＜0.01;r=0.295,P＜0.01)。截断点分析显示, CHA2DS2-VASc-HSF评分≥3对冠心病的预测价值最高,其灵敏度、特异度、曲线下面积分别为0.860、0.804、0.832(95%CI：0.766~0.898)。结论 CHADS2及其衍生评分对冠心病有一定的预测价值,尤其是CHA2DS2-VASc-HSF评分≥3对冠心病有较高的预测价值。     

抗人胸腺细胞单克隆抗体2G_2B_2和2G_2C_2的制备及特性鉴定

用杂交瘤技术制备２株单克隆抗体（单抗）２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２。经研究发现,它们主要与胸腺细胞、脐血及ＰＨＡ激活的外周血单个核细胞等反应;免疫组化显示其主要作用于皮质胸腺细胞;与造血系统中分化早期的瘤细胞、骨髓瘤细胞等反应阳性率较高。生物学特性鉴定结果提示,单抗均属免疫球蛋白ＩｇＧ１亚类,腹水效价达１：１２８０００,所识别抗原分子量为４５／４６ＫＤａ,无抗原调变作用。故２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２是类似ＯＫＴ１０的抗ＣＤ３８单抗,但竞争抑制结果表明三者分别作用于不同的抗原决定簇,即２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２是两个抗ＣＤ３８新单抗。     

pD_2和pA_2的测定

本文采用大鼠肛尾肌分别介绍测定苯肾上腺素ｐＤ＿２和其拮抗剂哌唑嗪ｐＡ＿２的方法。同时讨论了ｐＤ＿２和ｐＡ＿２的意义和推导过程。     

Dab2/DOC-2基因的研究进展

Dab2/DOC-2是具有信号转导功能的磷蛋白,在丝裂原信号转导途径中起作用,通过蛋白质的相互作用和蛋白磷酸化发挥作用,参与控制细胞生长的信号通路而发挥生长抑制效应,Dab2/DOC-2又作为胞质衔接蛋白,参与细胞内蛋白运输。在肿瘤中纯合子基因缺失时被激活,是抑癌基因的候选成员。其在多种肿瘤中低或失表达,如卵巢癌,乳腺癌,绒毛膜癌和前列腺癌等,重新表达能抑制肿瘤的生长。Dab2也在胚胎的发生过程中发挥重要的作用。     

2－（2－甲氧基苯氧）乙胺的合成

２－（２－甲氧基苯氧）乙胺Ⅰ是合成某些抗高血压药物的重要中间体，本研究探索二种途径制备。一是以２－甲氧基苯酚为起始原料，经相应的苯氧乙酸、苯氧乙酰胺，再用ＺｎＣｌ２－ＫＢＨ４－ＴＨＦ－Ｃ６Ｈ５－ＣＨ３体系还原，得目的物，并将Ⅰ转变成盐酸盐Ⅱ。二是通过Ｇａｂｒｉｅｌ反应制备目的物。结果表明第一种途径总收率（５８．１％）高于其他路线，并有原料易得、操作简便的优点     

KIR2DS2基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建携带KIR2DS2基因短发夹状干扰RNA(short hairin RNA,shRNA)的RNAi慢病毒载体.方法针对已经筛选确定的KIR2DS2基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ酶切后的pSicoR-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shKIR2DS2慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用LV-shKIR2DS2及Packaging system质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果PCR和测序证实,成功构建KIR2DS2shRNA的慢病毒载体LV-shKIR2DS2.293T细胞测定病毒滴度为6×108TU/ml.结论成功构建携带KIR2DS2基因短发夹状干扰RNA的RNAi慢病毒载体.     

MMP-2和TIMP-2在人脑星形细胞瘤中的表达

目的：研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)在人脑星形细胞瘤中的表达及其与病理分级的关系。方法：采用免疫组织化学方法检测47例星形细胞瘤组织中MMP-2和TIMP-2的表达情况。结果：MMP-2在高级别星形细胞瘤组(Ⅲ、Ⅳ级)和低级别星形细胞瘤组(Ⅰ、Ⅱ级)中的阳性率分别为76．0％和27．3％(P＜0.01)；TIMP-2为52．0％和50．0％(P＞0．05)。结论：MMP-2的过度表达及MMP-2／TIMP-2比例失衡可能是导致肿瘤侵袭的重要原因。MMP—2的表达与星形细胞瘤的病理分级密切相关，可作为星形细胞瘤分级与鉴别侵袭力大小的参考指标。     

2型糖尿病患者血浆TXA2和PGI2失衡及PLA2活性变化

目的：探讨2型糖尿病（DM）患者血栓素A2（TXA2）和前列环素（PGI2）失衡及PLA2活性变化。方法：以放免法测定血栓素B2和6－酮－前列腺素含量,以改良Zieve法测定血浆PLA2活性,同时观察空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、甘油三酯（TG）等的变化。结果：①2型DM患者存在TXA2和PGI2合成异常,且Ⅱ组（有微血管病变组）较I组（无微血管病变组）更为严重;②2型DM患者组血浆PLA2显著低于正常对照组,但I组与Ⅱ组之间无显著差异;③2型DM患者组TXB2与FBG、TG显著正相关,6－K－PGF1a与FINS显著负相关,TXB2与6－K－PGF1a均与血浆PLA2无显著相关性。结论：①TXA2和PGI2失衡在2型糖尿病及微血管病变的发生发展中起重要作用;②血浆分泌型PLA2活性变化与2型糖尿病密切相关,但在糖尿病患者TXA2和PGI2失衡及微血管病变中可能不起直接作用;③糖脂代谢紊乱以及高胰岛素血症在TXA2和PGI2失衡及DM微血管病变中起重要作用。