PLGA纳米载体介导的端粒酶hTERT反义核酸对裸鼠肝癌移植瘤的影响

目的通过以PLGA纳米粒作为端粒酶hTERT反义核酸的载体，促进反义核酸对肝癌瘸组织的抑制。方法以HepG-2肝癌细胞和裸鼠建立肝癌移植瘤实验模型；观测瘸重和成瘤率；流式细胞仪检侧肿瘤细胞凋亡及细胞周期的特点。结果与对照组相比，治疗组肿瘤细胞凋亡数明显增加，细胞增殖受到抑制，肿瘤生长缓慢，出瘤时间推迟。结论以PLGA纳米粒作为端粒酶反义核酸的栽体，能显著延缓裸鼠肝癌移植瘤的发展，产生明显的疗效。     

白蛋白纳米载体介导的反义核酸对肝癌细胞端粒酶活性的抑制

目的 利用纳米载体增强端粒酶反义寡核苷酸时肝脏肿瘤细胞端粒酶活性的抑制作用.方法 实验设6组:空白对照组、纯纳米粒组、游离正义寡核苷酸组、游离反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸-纳米粒组和反义寡核苷酸-纳米粒组.用TRAP-ELASA法检测端粒酶反义寡核苷酸对肿瘤细胞端粒酶活性的影响,以MTT法测定端粒酶反义寡核苷酸对肝脏肿瘤细胞(HepG2)生长的抑制作用.结果 ①纯纳米粒组、游离端粒酶正义核苷酸组和端粒酶正义核苷酸-白蛋白纳米粒处理组的端粒酶活性与空白对照组差异无显著性(P>0.05).②游离端粒酶反义核苷酸和端粒酶反义核苷酸-白蛋白纳米粒处理的肿瘤细胞的端粒酶活性与空白对照相比明显下降(P<0.05),且两者之间差异存在显著性(P<0.05).③纯纳米粒组、游离端粒酶正义核苷酸和端粒酶正义核苷酸-白蛋白纳米粒对肿瘤细胞的抑制作用很小.游离端粒酶反义核苷酸的抑制作用明显,端粒酶反义核苷酸-白蛋白纳米粒的抑制作用最强,两者之间差异有显著性(P<0.05).结论 白蛋白纳米粒可作为反义技术治疗的有效载体,增强端粒酶反义核苷酸的抑制作用.     

壳聚糖纳米载体介导的端粒酶反义核苷酸对肝肿瘤细胞的抑制作用

目的探讨纳米载体对端粒酶反义寡核苷酸抑制肝脏肿瘤细胞生长的影响。方法制备壳聚糖纳米载体，并装载端粒酶反义寡核苷酸，用TRAP—ELASA法检测端粒酶反义核苷酸寡对肿瘤细胞端粒酶活性的影响，以MTT法测定端粒酶反义寡核苷酸对肝脏肿瘤细胞（HepG2）生长的抑制作用。结果壳聚糖纳米载体能显著增强端粒酶反义寡核苷酸对端粒酶活性和肿瘤细胞生长的抑制作用。结论壳聚糖纳米粒可作为反义技术治疗的有效载体。     

载端粒酶反义核酸PLGA纳米粒的表征及生物学效应

目的 检测载端粒酶反义核酸聚乳酸-乙醇酸共聚物（PLGA）纳米粒的表征及生物学效应。分析其粒径范围、载药量及生物相容性。方法 以激光粒度分析仪测定纳米粒的粒径分布及平均粒径，紫外分光光度法测定反义核酸装载量，双室扩散法研究纳米粒的体外释药特性，核酸酶解法检测纳米粒对反义核酸的保护作用，MTT法研究纳米粒的细胞毒性。结果 纳米粒的平均粒度为201nm；包封率为67．3％，栽药量为3．66％。纳米粒体外释放开始阶段存在突释期，5d后释放量开始稳定，15d后仍有核酸释放。纳米粒中的核酸在37℃，经核酸酶消化1h后。仍然保持结构的完整、未被降解，而裸核酸在同样条件下30min即被完全降解。纳米粒对细胞的生长抑制与空白对照差异无显著性。结论 制备的端粒酶反义核酸-PLGA纳米粒稳定性、生物相容性好，以PLGA纳米粒作为载体可保护反义核酸免受核酸酶的降解。但PLGA纳米粒的反义端粒酶核酸载药量偏低，需进一步改进制备方法，提高载药量。     

脂质体介导端粒酶反义RNA对人乳腺癌细胞MCF-7活性及增殖的影响

目的:探讨经脂质体介导转染端粒酶反义RNA对MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法:用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体)导入人乳腺癌细胞MCF-7中,采用TRAP-PCR-ELISA法测定端粒酶活性,四唑盐比色(MTT)法检测MCF-7细胞的增殖,FCM分析等方法观察其对MCF-7细胞的增殖影响。结果:端粒酶反义RNA能显著抑制MCF-7细胞的端粒酶活性,抑制MCF-7细胞的增殖并诱导其凋亡。结论:脂质体转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒酶活性表达的同时,可促进MCF-7细胞凋亡。     

端粒酶基因hTRT反义寡核苷酸对其酶活性和肿瘤细胞增殖的影响

（1）目的：探讨端粒酶基因hTRT反义寡核苷酸对肿瘤细胞增殖和端粒酶活性的影响。（2）方法：采用MTT法检测反义寡核苷酸对肿瘤细胞HL－60增殖的影响。采用TRAP－PCR法检测反义寡核苷酸处理肿瘤细胞后端粒酶活性的变化；采用Giemsa染色观察反义寡核苷酸处理后肿瘤细胞形态学变化，采用DNA凝胶电泳和三苯胺法检测反义寡核苷酸处理后肿瘤细胞DNA片段化。（3）结果：端粒酶基因hTRT反义寡核苷酸作用48h对肿瘤细胞增殖出现抑制作用。5μmol/L反义寡核苷酸处理24h后，细胞端粒酶活性下降，并且随作用时间的延长，活性不断降低，96h下降至对照组的44．4％，用5μmol/L反义寡核苷酸处理96h的HL－60细胞出现凋亡的形态学特征，处理24，48，72，96h后凋亡指数为0.053,0.127,0.257,0.315,，用5μmol/L反义寡核苷酸处理HL－60细胞96h后，电泳出现DNA梯状条带。作用24，48，72，96h细胞DNA片段化率分别为17．98％，29．34％，35．43％，41．24％；（4）结论：端粒酶hTRT基因反义寡核苷酸能抑制肿瘤细胞的增殖和端粒酶活性，并能诱导肿瘤细胞HL－60凋亡。     

端粒酶反义RNA对人髓性白血病细胞系HL-60的作用

目的 探讨抗端粒酶在急性白血病治疗中的意义。方法 用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体）导入人髓性白血病细胞系HL-60中,采用TRAP法测定端粒酶活性,细胞生长动力学检测,电镜,DNA片段分析等方法观察其对HL-60细胞的端粒酶活性、细胞增殖及细胞凋亡影响。结果 端粒酶反义RNA能显抑制HL-60细胞的端粒酶活性,抑制HL-60细胞的增殖并促进其凋亡。结论 以端粒酶反义RNA抑制端粒酶活性是治疗白血病的潜在途径。     

反义端粒酶RNA抑制肝癌细胞生长的机制

目的：观察反义端粒酶RNA对SMMC－7721肝癌细胞系的作用,探讨抗端粒端治疗在原发性肝癌治疗中的意义。方法：采用脂质体介导的方式将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212/hTP转入SMMC7721细胞中,经潮霉素筛选,克隆细胞株扩增鉴定后,采用TRAP－PCR－ELISA,FCM及电镜检测反义端粒酶RNA对转染细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响;同时进行裸鼠荷瘤生长实验观察。结果：TRAP－PCR－ELISA法检测细胞端粒酶活性的结果为：实验组吸光度值为0．980,对照组吸光度值为2．861;FCM检测细胞凋亡结果为：实验组13．8％,对照组未见有凋亡峰形成,电镜观察发现转染细胞表现出典型的凋亡细胞形态。裸鼠移植瘤生长实验发现,转染细胞生长明显受到抑制作用,说明反义端粒酶RNA显抑制SMMC7721细胞的端粒酶活性,并且对其有显的促凋亡作用。结论：反义端粒酶RNA能有效地抑制肝癌细胞端粒酶活性,同时显促进癌细胞凋亡。     

端粒酶的义寡核苷酸抑制肺癌细胞端粒酶活性的研究

目的探讨端粒粒酶反义寡核苷酸对肺癌细胞端粒酶活性的抑制作用.方法脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸转染A549肺腺癌细胞株,采用TRAP-PCR-ELIsA法半定量检测转染后肺腺癌细胞端粒酶活性,观察它们的变化结果端粒酶反义寡核苷酸转染A549细胞72h后,A549细胞端粒酶活性明显下调.结论端粒酶反义寡核苷酸可以有效抑制肺腺癌细胞端粒酶活性.     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对肝癌细胞株的影响

目的：观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对肝癌细胞株的作用。方法：用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与肝癌细胞株共同孵育一定时间后，观察细胞形态变化，观察细胞DNA含量的分布，测定端粒酶活性。结果：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；电泳呈凋亡特征性Ladder带；流式细胞仪分析显示，在G1期前出现亚2倍体凋亡峰；端粒酶活性抑制。结论：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，抑制端粒合成，从而抑制肝癌细胞的生长。     

端粒酶反义寡核苷酸及其联合顺铂对胃癌细胞的影响

目的探讨端粒酶反义寡核苷酸及其联合顺铂对胃癌细胞的影响。方法利用脂质体将端粒酶反义寡核苷酸导入SGC7901胃癌细胞。TRAP—ELISA法检测端粒酶活性，噻唑蓝（MTT）法测定端粒酶反义寡核苷酸对胃癌细胞SGC7901的抑制；过氧化物酶的抗荧光素抗体法检测癌细胞凋亡指数。结果经端粒酶反义寡核苷酸处理的胃癌细胞端粒酶活性显著下降，端粒酶反义寡核苷酸明显抑制胃癌细胞的生长和诱导胃癌细胞的凋亡，端粒酶反义寡核苷酸联合顺铂，能增强对胃癌细胞生长的抑制和诱导胃癌细胞的凋亡。结论端粒酶反义寡核苷酸能有效抑制胃癌细胞生长，与顺铂协同作用，效果更为明显。     

端粒酶反义技术治疗恶性肿瘤的研究动态

反义核酸技术根据碱基互补原理，用人工合成或生物体合成的特定的反义核酸来抑制或封闭基因表达，是基因治疗中较具吸引力的手段之一。端粒酶已成为新的肿瘤标志物及肿瘤治疗的新靶点，抑制肿瘤细胞端粒酶活性可望达到抑制肿瘤生长的目的。本文着重介绍了瑞粒酶反义技术用于治疗多种恶性肿瘤的研究进展。     

槲皮素脂质体纳米粒在大鼠体内的分布研究

目的研究槲皮素脂质体纳米粒在大鼠体内分布情况。方法采用SD大鼠,随机分为槲皮素对照组(n=25)和槲皮素脂质体纳米粒实验组(n=25),分别给予尾静脉注射槲皮素悬浊液和槲皮素脂质体纳米粒悬浊液,于一定的时间点采集大鼠血液及主要脏器,使用HPLC法测定其槲皮素的浓度。结果实验组大鼠肝脏的槲皮素的浓度明显高于对照组,并呈缓慢下降趋势。结论槲皮素脂质体纳米粒具有良好的肝靶向性,并证实其有一定的缓释性。     

苦参碱诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的 研究苦参碱对人胃癌细胞诱导凋亡作用及端粒酶活性变化。方法苦参碱处理人胃癌细胞株SGC-7901后，用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应，显微镜下观察胃癌细胞形态变化，应用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期和凋亡，用PCR-ELISA法对胃癌细胞端粒酶活性进行检测。结果不同浓度的苦参碱对SGC-7901有明显抑制作用，且呈时间依赖性及剂量依赖性，形态学观察也发现大量神经细胞的染色质凝聚，核碎裂，凋亡小体产生，细胞即出现明显的凋亡形态特征，FCM检测结果显示苦参碱作用后，G0／G1期细胞比例增高，S期、G2／M期细胞比例下降，苦参碱在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调，且随苦参碱浓度增大和时间延长，抑制作用逐渐增强。结论苦参碱对人胃癌细胞具有明显抑制作用，诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一。     

hTERT基因反义核酸对人卵巢癌细胞 HO-8910存活能力的影响

目的：研究互补于人类端粒酶催化亚单位(hTERT)基因的反义寡核苷酸对人卵巢癌HO-8910细胞存活能力的影响．方法：采用台盼蓝排斥试验、裸鼠成瘤性观察等方法检测HO-8910卵巢癌细胞在反义核酸处理后细胞存活能力的变化．结果：针对hTERT基因反义核酸能显降低肿瘤细胞的存活能力，反义核酸作用后的HO-8910细胞不能诱发裸鼠肿瘤．结论：将直接针对hTERT基因的反义分子作用于体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910，能有效降低细胞生存能力．导致细胞死亡．     

反义hTR对人胃癌细胞株SGC-7901恶性表型的逆转作用

目的 探讨反义ｈＴＲ基因转染对胃癌细胞系ＳＧＣ－７００１恶性有型的逆转作用及其在肿瘤基因治疗中的价值。方法 构建包含端粒重复序列模板区的反义ｈＴＲ基因真核表达载体用脂质体法将其转染率胃癌细胞系ＳＧＣ－７９０１,比较观察反义ｈＴＲ基因转染后７９０１细胞的ｈＴＲＲＮＡ表达、端粒酶活性、体外生长增殖降低,体外生长增殖能力降低,接触抑制恢复、细胞凋亡率增加、软琼脂集落形成能力和裸鼠体内致瘤能力完全消失。结     

磁性纳米复合物PEG-APTES-MNP介导的磁热作用可有效抑制肝癌的生长

目的观察磁性纳米复合物PEG-APTES-MNP介导的磁热对肝癌的影响。方法合成磁性纳米粒子复合物,并将与肝癌细 胞HepG2共同孵育,并将其分为纳米粒磁热治疗组、纳米粒治疗组和对照组。普鲁氏蓝染色法检测HepG2细胞对磁性纳米粒 子的摄取效率;MTT法检及流式细胞术测磁性纳米粒子对HepG2的抑制效果;激光共聚焦检测磁性纳米粒子在细胞内产生活 性氧自由基（ROS）水平;将裸鼠植瘤,并将其分为PEG-APTES-MNP组（只注射磁性纳米复合物）、PEG-APTES-MNP（Heat）组 （注射磁性纳米复合物并进行磁热治疗）和对照组（注射等体积PBS）,每组5只,分别进行治疗并检测其在动物水平对肿瘤的抑 制作用。结果合成的磁性纳米复物表征准确;血细胞凝集实验表明其不会引起血细胞的聚集,具有良好的理化性质和生物相 容性;在肿瘤细胞HepG2内可以产生大量活性氧自由基,在体外实验中协同磁热对其增殖产生了更强的抑制效果（P<0.05）,并 促进细胞凋亡;在体内实验中,其介导磁热的作用下可以有效抑制肝癌动物模型肿瘤生长（P<0.05）。结论磁性纳米复合物 PEG-APTES-MNP具有良好的理化性质和生物相容性,其介导的磁热作用可有效抑制HepG2细胞及肝癌动物模型肿瘤生长, 可以作为肝癌的潜在纳米药物。     

靶向Survivin基因microRNA诱导肝癌细胞凋亡的实验

目的:探讨靶向Survivin的microRNA转染肝癌细胞阻抑Survivin表达,及其对肝癌细胞凋亡、增殖的影响。方法:设计合成特异性靶向Survivin的microRNA的序列。肝癌细胞株HepG2接种于细胞培养板内,分为5组,空白对照组、脂质体组和低、中、高浓度转染组(分别给予50、100和200 nmol/L microRNA转染);作用后收集各组细胞。四氮唑盐(MTT)法检测不同浓度的microRNA对细胞的生长抑制率。流式细胞术检测各组细胞增殖率和凋亡指数。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测靶向Survivin的mRNA表达水平。结果:通过MTT检测,不同浓度microRNA转染组细胞的抑制率明显高于对照组(P<0.05)。各浓度mi-croRNA转染组细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.05),高浓度转染率最明显(P<0.05)。各浓度microRNA转染组细胞增殖指数明显低于对照组(P<0.05),高浓度转染组最明显(P<0.05)。各浓度microRNA转染组细胞Sur-vivin的mRNA转录水平有不同程度减弱。结论:不同浓度Survivin的microRNA转录能下调Survivin的mRNA表达,诱导肝癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。