蕲蛇乙醇提取物多肽成分的蛋白组学研究

目的通过蛋白质组学方法分析蕲蛇乙醇提取物中的多肽类成分。方法双向凝胶电泳技术分离多肽,染色后切取多肽斑点胶内酶切,利用基质辅助激光解吸离子飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析酶切后抽提的肽段,获取的质谱数据进一步用于数据库检索,鉴定相关肽段序列。结果采用稀乙醇热浸法每克蕲蛇药材多肽溶出率为5.48%。凝胶图像显示各等电点区间均有2kDa的多肽分布,无法通过串联质谱数据结合数据库检索方式有效鉴定,而在15kDa区间存在的胶点中高置信度匹配到多个肽段。结论采用稀乙醇热浸法能有效提取蕲蛇干燥药材中的多肽成分。     

钠升电喷雾串联质谱技术鉴定两种髓系白血病细胞分化相关蛋白质

目的鉴定IL-6诱导小鼠髓系白血病M1细胞分化过程中出现的两种上调表达的相关蛋白质.方法 将待鉴定的蛋白质斑点从双向电泳凝胶上切下,经胶内胰蛋白酶酶切后,先进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)肽质量指纹谱分析,再通过钠升电喷雾串联质谱(nano-ESI-MS/MS)技术获得其胰蛋白酶水解肽段的串联质谱图和肽段的全长序列,串联质谱图经Micromass专用软件MaxEnt3处理后,通过Mascot查询NCBI、SWISSPROT等数据库.结果两种未能通过肽质量指纹谱鉴定的蛋白质经Nano-ESI-MS/MS技术获得了明确鉴定,分别为蛋白质Destrin和Putative.结论 Nano-ESI-MS/MS通过获得多肽序列信息在鉴定蛋白质方面具有独特的优势.     

肝癌细胞线粒体蛋白的MALDI-TOF质谱鉴定方法研究

目的:探索胶上蛋白原位酶切、肽质量指纹图(PMF)分析以及数据库检索方法的优化条件,建立适合于亚细胞比较蛋白质组学研究的质谱鉴定策略.方法:从考马斯亮蓝染色的2-DE胶上取下牛血清白蛋白(BSA)标准蛋白进行胶内原位酶切,与基质(CHCA)混匀后进行MALDI-TOF MS分析;对来源于人肝细胞癌细胞株QGY-7703线粒体的差异表达的候选蛋白点L9,按照通过BSA标准蛋白优化的条件进行MALDI-TOF质谱鉴定;其肽质量指纹图(PMF)经MS-Fit检索.结果:经数据库检索,BSA的肽质量指纹图(PMF)匹配肽质量数为10/11,序列覆盖率为19%,说明实验条件完全可信.候选蛋白点L9的PMF数据经数据库检索后,排名前两位的蛋白均为OXCT(3-oxoacid CoA transferase 1 precursor),其匹配肽段为9/13,序列覆盖率为24%;且OXCT的理论分子量(56kda),理论等电点(7.1),与胶上L9蛋白的位置相符.故候选蛋白点L9确认为OXCT(3-oxoacid CoAtransferase1 precursor).结论:本文所确定的鉴定策略适用于线粒体比较蛋白质组学的研究.     

液质联用技术鉴定蛋白的方法建立

目的:建立液质联用鉴定蛋白的方法。方法:通过与目前最常用质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定蛋白对比,判断液相色谱与质谱联用鉴定蛋白技术——增加色谱(CapLC)分离,用质谱鉴定蛋白是否是一种可行的实验方法。结果:直接使用MALDI-TOF/TOF-MS鉴定出酶切产物中的17种肽段,覆盖率:31.5%检索的得分为130;CapLC联合使用MALDI-TOF/TOF-MS共鉴定出35种肽段,覆盖率为59.35%,检索的得分为2976。结论:CapLC联合使用MALDI-TOF/TOF-MS对酶切产物进行鉴定的方法,是一种可行的实验方法,并且该技术路线与MALDI-TOF/TOF-MS相比,是更加准确有效的蛋白鉴定方法。     

Hela细胞蛋白质分离和肽质量指纹谱鉴定方法的建立

目的研究Hela细胞总蛋白质的分离及利用肽质量指纹谱对蛋白质进行鉴定的方法。方法提取了Hela细胞的总蛋白质,通过双向电泳技术对蛋白质进行了分离,并应用图像扫描仪及图像分析软件获取蛋白质点的数字化信息。对其中不同丰度的蛋白质点,进行胶内酶切后,通过基质辅助激光解吸/电离直角型飞行时间质谱(MALDIO-TOF-MS)分析,再将检测出的多肽质量数通过Mascot搜索引擎检索NCBInr数据库。结果获得了Hela细胞总蛋白质双向电泳图谱及蛋白质点的数字化信息,通过MALDIO-TOF-MS检测得到的肽质量指纹谱再经过网上公共数据的检索从而获得3个蛋白质点分别是α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)、γ-肌动蛋白(γ-actin)和过氧化物酶2(peroxiredoxin 2)。结论Hela细胞总蛋白质双向电泳的分离效果较好,肽质量指纹谱法能有效地对Hela细胞的蛋白质斑点进行鉴定。     

气相色谱质谱联用技术分析皂角刺挥发油成分

【目的】分析皂角刺挥发油中的化学成分。【方法】采用气相色谱质谱联用(GC-MS)技术测定皂角刺挥发油中的化学成分,并结合NIST2014质谱库进行检索,用峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。【结果】从皂角刺挥发油中共鉴定出65个成分,占挥发油成分的64.85%。皂角刺挥发油的主要成分为棕榈酸、亚油酸、芳樟醇、正己醛、2-正戊基呋喃、正十四烷、糠醛、反油酸、植酮、苯乙醛等。【结论】采用GC-MS法对皂角刺挥发油进行分析,为皂角刺指纹图谱的建立提供了研究基础,为合理开发利用皂角刺资源提供了科学依据。     

基于CYP1B1酶抑制活性的泽泻95%乙醇提取物化学成分的UPLC-IT-TOF/MS分析

目的 研究泽泻95%乙醇提取物化学成分及抑制CYP1B1酶的活性。方法 采用酶孵育反应实验测定泽泻醇提取物对CYP1B1酶的抑制活性,并通过超高效液相色谱串联离子阱飞行时间质谱（UPLC-IT-TOF/MS）技术,使用ESI离子源,Shimadzu Composition Formula Predictor软件定性分析活性物质。结果 泽泻醇提取物具有显著抑制CYP1B1酶的活性,抑制率为93.96%。通过多级质谱数据分析,结合氮规则和Scifinder数据库检索,从泽泻醇提取物中鉴定了25个原萜烷型三萜类成分,可能是抑制CYP1B1酶的主要成分之一。结论 本研究快速、准确分析了泽泻醇提取物中原萜烷型三萜类成分,为其药效物质基础和质量控制提供了依据。     

两种来源小金钱草的生药学比较

【目的】进一步完善江西习用药材小金钱草的质量标准。【方法】采用性状鉴定、显微鉴定、薄层色谱和紫外光谱法进行比较研究。【结果】两种来源小金钱草的药材性状、显微、薄层色谱、紫外光谱均有明显差异。【结论】尽管两种小金钱草原植物亲源关系极其密切,但仍存在着显著的生药学差异和成分差异。     

银杏叶多酚物质不同提取方法的比较研究

【目的】观察不同提取方法对银杏叶中多酚成分含量的影响,为其进一步开发提供依据。【方法】采用乙醇提取法、酶解—乙醇提取法、超声波—乙醇提取法、微波—乙醇提取法制备银杏叶多酚成分,以称质量法测定提取物得率,福林—酚比色法测定多酚含量。【结果】应用不同提取方法的银杏叶多酚提取物得率及含量分别为:乙醇提取法(11.78±0.13)%、(5.42±0.06)%,酶解—乙醇提取法(12.71±0.09)%、(6.89±1.04)%,超声波—乙醇提取法(12.45±0.11)%、(6.71±0.06)%,微波—乙醇提取法(11.39±0.10)%、(5.97±1.00)%。经统计学分析,与乙醇提取法相比,酶解—乙醇提取法和超声波—乙醇提取法多酚提取物含量更高(P 0.05或P 0.01)。【结论】以上4种提取方法所得银杏叶多酚提取物的得率和含量不一,酶解—乙醇提取法和超声波—乙醇提取法更优。     

多肽色谱保留预测及其在蛋白质组学中的应用

基于串联质谱的蛋白质组学分析方法往往依赖于实际谱图和理论谱图的匹配打分,而大量共洗脱肽的干扰会降低多肽和蛋白的鉴定及定量的准确性。多肽保留时间预测可将多肽色谱保留行为转变为稳定独立的特征时间属性,作为多肽鉴定的辅助和验证指标,改善多肽鉴定的准确性。复杂体系中多肽色谱保留预测也对优化蛋白质组学测定条件、提高数据非依赖采集中质谱数据的检出率和重复性具有重要意义。本文针对未修饰多肽及修饰多肽常用的色谱保留预测方法（包括基于标准化索引、多肽分子模型、氨基酸残基参数和机器学习等）进行了综述,总结各种方法的原理及其特点,并对其在蛋白质组学中的应用及发展方向进行了展望。     

M(E)CANISMES MOL(E)CULAIRES IMPLIQU(E)S DANS L''''ALT(E)RATION DU PH(E)NOTYPE DES CELLULES (E)PITHELIAL(E)S TUBULAIRES PAR LES CALPA(I)NES EXTRACELLULAIRES

Objectif Rechercher les mécanismes moléculaires par lesquels des calpaines extracellulaires af-fectent l'adhérence et la mobilité des cellules épithéliales HK-2 dérivées du tubule proximal humain. Méthodes Western blot pour détecter le clivage des chaines α des intégrines; dosage radioimmunologique pour mesurer l' AMP cyclique intracellulaire; fluorescence-activated cell sorting (FACS) pour tester l' apoptose cellulaire. La morpholo-gie des cellules HK-2 a été observée et photographiée. Résultats (1) L ' exposition des cellules HK-2 à la calpaine μ n'a pas entrainé de clivage des chaines o3 et αV des intégrines; (2)l' exposition des cellules HK-2 à la calpaine μ entrainait une augmentation progressive de l' accumulation intracellulaire d' AMP cyclique (P<0.05) qui était associée une résistance cellulaire à l'apoptose(P <0. 05 ) ; (3)l'addition d'un inhibiteur pharmacologique de la protéine kinase A(PKA) prévenait totalement les modifications d'adhérence et de mobilité cellulaires induites par calpaine μ Conclusion Les calpaines externalisées peuvent modifier l' adherence et la mobilité cellulaires via un mécanisme qui implique l'accumulation d' AMP cyclique et l' activation de la PKA. Par ces mécanismes, les calpaines externalisées pourraient jouer un role dans l'induction de la réparation au cours de l'insuffucance rénale aiguё.     

人神经胶质瘤组织中的铜锌镁的含量及铜锌比值

本文测定了16例人胶质瘤组织中的铜锌镁含量及铜锌比值,其中恶性肿瘤的铜含量为20.49±4.87μg/g干重,锌为176.97±44.18μg/g干重,镁为650.91±207.88μg/g干重,铜锌比值为0.123±0.04。与健康成人脑组织比较,铜含量及铜锌比值明显降低(P<0.01),镁值升高56.59％,但无统计学意义,锌在二者之间无明显差异。与健康成年组比较,良性胶质瘤三种元素含量都无统计学意义(P>0.05),而早产儿的铜含量有显著性差异(P<0.01)。     

树枝状聚L-丙交酯-dendron-聚乙二醇-dendron-聚L-丙交酯的降解性能

根据对某化纤企业中水的水质监测,分析了化纤中水的水质特点和应用于循环冷却水所面临的问题,提出了系统水质稳定处理中的缓蚀阻垢要求,研制了针对化纤中水水质特点的高效缓蚀阻垢剂,测试了其在不同条件下的缓蚀阻垢性能,并在实际应用中取得良好的效果,解决了化纤中水回用于循环冷却水系统的腐蚀和结垢问题。     

心电图超声心动图及冠状动脉造影对心肌梗死的诊断探讨

目的:研究心电图(ECG)、超声心动图(UCG)、冠状动脉造影(CAG)对心肌梗死(MI)的诊断价值。方法:对来院的疑诊101例心肌梗死患者进行ECG。UCG、CAG检查比较,结果:以CAG手术结果为标准,在101例疑诊心肌梗死患者中ECG异常者占62.3%,诊断率为80%。UCG异常者占60.6%,诊断率为78%。CAG异常者占80.2%(确诊MI患者78例)。结论:证实ECG、UCG、CAG对MI均具有较高的诊断率,且各有特点,对诊断各具有互补之处,均具有较高的临床诊断价值。     

n-C_(10)H_(22)和n-C_(12)H_(26)的热压力系数及内压

本文测定了n-C_(10)H_(22)和n-C_(12)H_(26)在20—55℃的热压力系数。这些系数可用修正的van der Waals模型来描述式中A和B是液体的特性常数。对于n-C_(10)H_(22):A=339.40×10~(-6)m~3mol~(-1),B=29822×10~(-12)m~6mol~(-2)。对于n-C_(12)H_(26):A=403.06×10~(-6)m~3mol~(-1),B=41818×10~(-12)m~6mol~(-2)。与一般小分子液体和少于八个碳的正构烷不同,它们的B/A~2不再等于0.2610,而是随着碳链的增长而逐渐减小。     

喷雾(冰冻)干燥法制备钠、锂快离子导体

对两种性能较好的快离子导体Na_3Zr_2Si_2P_3O_(12)(Nasicon)和Li_(1.8)Ti_(1.2)·Cr_(0.8)P_3O_(12)用喷雾干燥法和冰冻干燥法制备粉料和陶瓷烧结,并对样品进行了X射线衍射分析,形貌和显微结构观察以及阻抗谱测量等。实验结果表明:两种方法制备的粉料具有颗粒细,均匀性好,合成温度低等优点。在300℃时,两种样品的电阻半分别为10.05 Ω.cm和94.8 Ω.cm。激活能分别为0.25 eV和0.27ev。     

聚苯胺／含联苯结构聚芳砜导电复合膜的研究

采用溶液共混法得到了聚苯胺／含联苯结构聚芳砜导电复合膜。该复合膜有良好的力学性能和导电性能，对其导电规律进行了探讨。热分析结果表明复合膜有良好的热稳定性，用扫描电镜观察了复合膜的微观形貌，表明ＰＡｎ与ＬＰＥＳ的共混相容性较好。     

同时测定血清中苯巴比妥、苯妥英及卡马西平的反相高效液相色谱法

为了探讨高效液相色谱法同时测定苯巴比妥（ＰＢ）、苯妥英（ＰＨＴ）、卡马西平（ＣＢＺ）血药浓度的最佳实验条件，将标本在ｐＨ７．６条件下用二氯甲烷提取后经高纯度氮气在５０℃水浴中吹干，再用甲醇重溶后进行色谱分析。色谱条件：ＹＷＧ－Ｃ１８柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，１０μｍ），流动相甲醇：水为６０∶４０，流速１ｍｌ／ｍｉｎ，柱温４０℃，波长２５４ｎｍ。结果ＰＢ、ＰＨＴ、ＣＢＺ的最低检出浓度各为０．６７μｇ／ｍｌ、０．９４μｇ／ｍｌ和０．３１μｇ／ｍｌ。在三个不同水平下，ＰＢ、ＰＨＴ、ＣＢＺ的平均回收率各为９８．１４％、９６．７２％和９９．３６％，日内和日间变异均低于６．２５％，内源性物质及１０种常用药物未见干扰，在分析范围内具有良好的线性关系。该方法操作简便、快捷、准确，可满足临床和科研的需要。     

DETECTION DE LA MUTATION DU GENE HMLH1 DANS LE CANCER COLO-RECTAL PARELECTROPHORESE CAPILAILRE ASSOCIEE A LA FLUORESCENCE LASER-INDUITE

Objectif L'objectif de ce travail est d'etablir une methode d'analyse du polymorphisms de la conformation monochaine (PCMC) , capable de detecter la mutation ponctuelle du gene hMLHI dans le cancer colique en utilisant l'l ctrophor se capillaire associee a la fluorescence laser-induite (FLJ-EC). Methodes Les exons 12 du gene hMLHl du sang peripherique de 42 patients de cancer colo-rectal sporadique et 20 sujets sains temoins sont amplifies par la PCR. Le PCMC des produits du PCR est analyse par FLJ-EC. Les echantillons anor-maux ont ete confirmes par sequen age EC. Les effets de la concentration du milieu (LPA) , de la temperature de separationcet du voltage de separation sur le comportement de EC ont ete aussi studies. Resultats L'analyse de PCMC par la methode FLJ-EC a retrouve une mutation heterozygote chez 4 des 42 patients. La mutation ponctuelle de T1151A a ete objectivee par la sequen age EC de ces echantillons, aucune mutation n'a ete retrouvee chez les 20 sujets sains temoins. La separation des pics d'ADN monochainaux a ete facilitee par une legere augmentation de la concentration de LPA (4%-6% ) , une legere baisse de la temperature de separation (20℃) et une legere elevation du voltage de separation (9kV). Conclusion Une concentration adequate de LPA, une temperature de separation appropriee et un voltage de separation bien approprie ameliorent considerablement l'efficacite du FLJ-EC. L'application de cette methode pour detecter la mutation ponctuelle du gene hMLHl est d'une rapidite, d'une efficacite, et d'uneereproductivit consid rabies. Cette methode de realisation facile reste tres prometteur pour le depistage rapide et massive des mutations genetiques.