大鼠视网膜缺血再灌注损伤后bcl-2和bax mRNA的表达变化及其意义

目的:探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤后bcl-2和baxmRNA的表达变化及其意义。方法:采用升高眼内压的方法,制作实验性视网膜缺血再灌注大鼠模型。将30只Wistar大鼠随机分为正常组(n=4)和缺血再灌注组(n=16),其中缺血再灌注组又分为再灌注后2、6、24、72h等4个时间段(每时间段4只)。应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测视网膜组织中bcl-2和baxmRNA的表达变化。结果:视网膜组织内bcl-2mRNA的表达水平在缺血再灌注损伤后2h时即开始下降,6h时降至最低,持续至第72h,与正常组相比有显著差异(P<0.01)。与bcl-2的表达相反,baxmRNA的表达呈上升趋势,6h时达最高,72h时仍显著高于正常组(P<0.01)。结论:bcl-2和bax可能参与了缺血再灌注损伤所造成的视网膜细胞的凋亡过程。     

Bcl-2和Bax在缺血预处理保护海马神经元缺血再灌损伤中的作用

目的:探讨凋亡相关基因bcl-2和bax在缺血预处理(ischemic preconditioning,IPC)保护大鼠海马神经元缺血再灌损伤中的作用。方法:随机将动物分为IPC加缺血再灌组(IPC组)、单纯缺血再灌组(IR组)和对照组。观察海马CA1区神经元的组织形态学变化;TUNEL染色检测海马CA1区神经元凋亡;免疫组化测定海马CA1区神经元Bcl-2和Bax的表达。结果:IPC组海马CA1区神经元存活数显著多于IR组,凋亡细胞数显著低于IR组,Bcl-2呈强表达,Bax表达不明显。结论:IPC诱导Bcl-2表达上调和Bax蛋白表达下调,可抑制凋亡的发生,对海马CA1区神经元缺血再灌损伤起保护作用。     

丹参对大鼠急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的　探讨丹参对大鼠急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法　采用结扎大鼠左冠状动脉法制备心肌缺血 +再灌注模型 ,2 4只大鼠随机均分为 :①缺血再灌注 (IR)组 :缺血45min ,再灌注 1h ,滴注生理盐水 ;②丹参治疗 (DS)组 :缺血 45min ,再灌注 1h ,滴注丹参注射液 (5mg/kg ,制药厂生产 ) ;③假手术 (Sham)组 :行假手术 ,滴注生理盐水 ,分别采用地高辛随机引物法及免疫组织化学法检测心肌凋亡细胞、心肌细胞bax和bcl 2基因的蛋白表达情况。结果　缺血再灌注心肌细胞凋亡数量显著高于Sham组 (P <0 .0 1) ,DS组心肌细胞凋亡明显受到抑制 (P <0 .0 5 )。IR组和DS组bax、bcl 2基因蛋白表达均明显增加(P值均 <0 .0 1) ;丹参明显抑制bax基因表达 (P <0 .0 5 ) ,但对bcl 2基因表达无明显影响。结论　急性心肌缺血再灌注时心肌细胞调亡加剧 ,bax和bcl 2参与调控缺血再灌注时心肌细胞调亡 ,丹参可抑制调亡加速基因bax的表达 ,因而在缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的保护方面有一定价值。     

血必净对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的:研究血必净对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和细胞色素C(Cyt C)蛋白表达的影响,并探讨其作用机制。方法:将108只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组和血必净组,每组27只。采用线栓法栓塞大脑中动脉3 h制作大鼠脑缺血再灌注模型;分别于 6、12和24 h采用TUNEL法检测大鼠大脑皮层神经细胞凋亡数;Western blotting法检测大脑皮层中Cyt C蛋白相对表达水平。结果:TUNEL法检测,与模型组比较,尼莫地平组和血必净组各时间点大鼠神经细胞凋亡数明显减少(P<0.01);与尼莫地平组比较,24 h时血必净组大鼠神经细胞凋亡数减少(P<0.05)。Western blotting法检测,6~24 h模型组大鼠大脑皮层中Cyt C蛋白相对表达水平较假手术组升高(P<0.05或P<0.01);6~24 h尼莫地平组和血必净组大鼠大脑皮层中Cyt C蛋白相对表达水平较模型组明显降低(P<0.01);24 h时血必净组大鼠大脑皮层中Cyt C蛋白相对表达水平较尼莫地平组降低(P<0.01)。结论:血必净对脑缺血再灌注损伤神经细胞有抗凋亡作用,其抗凋亡效应与抑制Cyt C蛋白表达有关联。     

局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡相关基因表达的研究

目的探讨在局灶性脑缺血再灌注损伤中神经细胞凋亡及相关基因表达的影响及脑缺血后神经细胞凋亡的调控机制。方法利用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，采用免疫组化和逆转录聚合酶链（RT—PCR）反应方法分别检测脑缺血再灌注不同时间细胞洲亡及相关基因bcl-2和bax、Caspase-3表达的动态变化。结果轻度脑缺血和再灌注早期，bcl-2表达升高，具有神经保护作用，但重度脑缺血和再灌注后期，其保护作用不足以抑制神经细胞凋亡。Bax表达于神经细胞删亡时空分布一致，可反映缺血后脑损伤的程度。Caspase-3在脑缺血再灌注损伤中起重要作用，其表达的升高早于细胞凋亡，直接参与神经细咆凋亡的执行。结论脑缺血再灌注能够引起Bcl-2基因和Caspase-3基因表达的改变。导致神经细胞凋亡的发生。     

全身亚低温对大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区bcl-2, bax基因表达的影响

目的:观察全身亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤相关基因表达的影响及其机制. 方法:采用改良的Pulsinelli-WA 4VO法,制备大鼠全脑缺血再灌注模型,采用SABC法观察亚低温对大鼠全脑缺血再灌注后bcl-2, bax基因表达规律. 结果:SABC法观察显示bcl-2在缺血再灌注后6 h有少量表达,24 h达峰值,7 d时明显减弱. 亚低温组再灌注后6 h表达较弱,3 d时表达增强达峰值,7 d时明显减弱. 亚低温组与单纯缺血再灌组比较,在缺血再灌注后3 d时有显著性差异(P<0.01). bax基因在缺血再灌注后6 h出现表达, 5 d时达高峰,7 d时仍有较高水平表达. 亚低温组各时间点bax基因呈低表达,与缺血再灌组比较,5 d和7 d时相差最显著(P<0.01),并且未见表达高峰出现. 结论:亚低温可抑制脑缺血再灌注后促凋亡基因如bax基因的表达,从而抑制脑缺血后神经元凋亡的发生. 亚低温的脑复苏作用可能与其抑制脑缺血再灌注后神经元凋亡的发生有关.     

胰岛素样生长因子-1对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的 :研究胰岛素样生长因子 - 1 ( IGF- 1 )对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及 bcl- 2、Bax蛋白表达的影响 ,探讨 IGF- 1对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法 :制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。将 30只 Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、缺血组及 IGF- 1治疗组。于缺血 1 0 min后经尾静脉给予 IGF- 1 1 0 μg,应用 TTC染色观察梗死灶体积 ,应用免疫组化染色和 TUNEL法检测 bcl- 2、Bax蛋白表达及神经凋亡细胞。结果 :与缺血组比较 ,IGF- 1治疗组梗死体积明显减少 ( P<0 .0 1 ) ,凋亡细胞数明显减少 ( P<0 .0 1 ) ,bcl- 2蛋白表达明显升高 ( P<0 .0 1 ) ,Bax蛋白表达明显降低 ( P<0 .0 1 )。结论 :IGF- 1通过增加 bcl- 2蛋白表达 ,减少 Bax蛋白表达 ,减少神经细胞凋亡 ,对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

局灶性脑缺血大鼠神经细胞凋亡及其调控基因bcl-2的表达

目的　观察大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和 bcl- 2基因表达情况及其相互关系。方法　采用健康雄性SD大鼠大脑中动脉阻断 (MCAO)模型 ,阻断 MCA血流 2 h后再灌注 ,在不同再灌注时间点断头取脑后 ,连续切片分别作 HE染色、TUNEL染色及 bcl- 2蛋白免疫组化染色。结果　 1MCAO后 ,缺血区部分神经细胞发生了凋亡 ,随着再灌注时间的延长 ,凋亡细胞数目逐渐增多 ,1天时达高峰 ,各再灌注时间组之间差异显著 (P<0 .0 1)。 2凋亡抑制基因 bcl- 2有不同程度表达 ,再灌注早期 (6 h)即达高峰 ,各组表达有显著差异 (P<0 .0 1) ;3神经细胞凋亡的出现与 bcl- 2表达在一定时程内呈直线负相关 (r=- 0 .747,P<0 .0 1)。结论　脑缺血再灌注损伤时 ,神经细胞凋亡起着重要作用 ,而 bcl- 2的表达则对凋亡起抑制作用。     

Effects of Carvedilol on Cardiomyocyte Apoptosis and Gene Expression In Vivo after Ischemia-Reperfusion in Rats

The effects of carvedilol on cardiomyocyte apoptosis and expression of bcl-2, bax genesfollowing ischemia (0.5 h) and reperfusion (48 h) in vivo and the possible biological mechanism ofcarvedilol inhibiting cardiomyocyte apoptosis were studied. The left anterior descending artery inWistar rats were ligated to establish ischemia-reperfusion (I/R) models. The model animals were di-vided into two groups: I/R group, the model rats not subject to other treatments except ischemia-reperfusion (n=8); carvedilol-treated group (n=8), I/R model rats treated with carvedilol. Eightrats in the sham-operated group were subjected to only experimental open operation. The number ofapoptotic cardiomyocyte was determined by TUNEL staining. Immunohistochemistry and in situ hy-bridization histochemistry (ISHH) were used to detect the expression of bcl-2 and bax genes. Imageprocessing system was used to quantitatively dispose the positive metric substances of both immuno-histochemistry and ISHH through the average optical den     

左归降糖益肾方含药血浆对高糖培养小鼠足细胞凋亡的影响

目的：探讨在高糖作用下,体外培养的小鼠足细胞凋亡及bax、bcl-2表达水平的变化,及左归降糖益肾方含药血浆的调控作用。方法将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白组(A组,25 mmoL/L葡萄糖,10%空白血浆)、高糖组(B组,200 mmoL/L 葡萄糖,10%空白血浆)、左归降糖益肾方含药血浆组（C 组,200 mmoL/L 葡萄糖,10%含药血浆）,4-苯基丁酸（4-PBA）含药血浆组（D组,200 mmoL/L葡萄糖,10%含药血浆）。采用间接免疫荧光细胞化学法检测足细胞凋亡情况;MTT自动比色法检测足细胞活力,蛋白质印迹法和逆转录-聚合酶链反应法分别检测bax及bcl-2蛋白或mRNA表达水平的变化。结果与A组相比,B组足细胞活力降低,bax及 bcl-2蛋白或mRNA的表达水平均升高（P＜0.01）;与B组相比,C组、D组足细胞活力升高,bax蛋白或mRNA的表达水平均降低（P＜0.05或P＜0.01）,bcl-2蛋白或mRNA的表达水平均升高（P＜0.01）;与C组比,D组足细胞活力升高（P＜0.05),但bax及bcl-2蛋白或mRNA的表达水平,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 bax及bcl-2蛋白或mRNA表达水平的升高,是足细胞损伤的分子机制之一;左归降糖益肾方含药血浆可以通过影响bax及bcl-2蛋白或mRNA的表达水平,从而抑制足细胞凋亡。     

尼莫地平对沙土鼠脑缺血后细胞凋亡及Bcl-2的影响

目的:探讨沙土鼠短暂脑缺血后海马区细胞凋亡与Bcl鄄2表达的改变及尼莫地平的影响。方法:52只健康沙土鼠随机分成3组,假手术组(n=12),尼莫地平组(n=20),对照组(n=20)。采用夹闭双侧颈总动脉制成全脑缺血模型。尼莫地平组及对照组均夹闭双侧颈总动脉5min,随即分别予尼莫地平注射液(1mg/kg)及等量生理盐水腹腔注射。3组分别于再灌注24、48、72、168h断头取脑,海马石蜡切片,原位末端标记法(TUNEL)测定海马CA1区锥体细胞凋亡阳性数及免疫组化法测定Bcl鄄2反应强度。结果:对照组72h见大量凋亡细胞;Bcl鄄2在72h表达最强,168h明显减少。尼莫地平组凋亡细胞数明显减少(P<0.01),Bcl鄄2在24、48、72、168h均有较强表达(P<0.01)。结论:尼莫地平可显著减少沙土鼠脑缺血后海马CA1区细胞凋亡的发生,并可增强Bcl鄄2的表达;脑缺血后及时应用尼莫地平治疗具有明显脑保护作用。     

Protective effect of isoflurane and sevoflurane on ischemic neurons and expression of Bcl-2 and ICE genes in rat brain

Objective To study the protective effect of volatile anesthetics, isoflurane and sevoflurane, on ischemic neurons after cerebral ischemia-reperfusion in rats and its possible molecular mechanism. Methods Rat cerebral ischemia-reperfusion model was developed by occlusion of the middle cerebral artery （MCA） and bilateral common carotid arteries （CCAs） 1 h after reperfusion. Using flow cytometry （FCM） and Northern blot hybridization, we calculated the number of apoptotic bodies and detected the expression of bcl-2 mRNA and interleukin-113 converting enzyme （ICE） mRNA. Results The apoptotic bodies in hippocampus analyzed by FCM peaked at appeared 24 h after reperfusion, and decreased about 54% and 40%, respectively, after treatment with isoflurane and sevoflurane, as compared with ischemic group. There was no significant difference in the expression of bcl-2 mRNA and ICE mRNA between the inhaled anesthetic groups and ischemic group in hippocampus 24 h after MCA/CCAs occlusion. Conclusion Isoflurane and sevoflurane partially inhibit apoptosis but have no significant effect on the expression of bcl-2 and ICE genes.     

转bcl-2基因大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区P-P38的表达

目的 观察转bcl-2基因大鼠全脑缺血组再灌注后P-P38蛋白在海马回CA1区的表达. 方法 90只健康雄性SD大鼠,随机分为三组:假手术组(SO组,n=30),暴露血管而不夹闭;缺血再灌注组(IR组,n=30),采用4-VO法建立全脑缺血再灌注模型,5 min缺血后给予再灌注;转bcl-2基因组(bcl-2组,n=30):大鼠经转基因处理后再缺血再灌注.各组动物于再灌注后2,6,12,24,48,72 h处死,将脑组织切片进行HE染色,免疫组化染色及TUNEL染色,观察海马回神经元形态改变,凋亡细胞数量及P-P38在CA1区表达. 结果 HE染色显示:IR组全脑缺血再灌注后48 h CA1区神经元数目减少,排列紊乱,核膜界限不清,结构模糊;bcl-2组变化不明显.免疫组化染色显示:P-P38在SO组基本呈阴性着色;IR组CA1区2h出现,48 h达高峰,72 h略有下降;bcl-2组P-P38表达趋势同IR组,但各时间点表达强度弱于IR组.TUNEL染色显示:SO组可见到少量凋亡细胞;IR组全脑缺血再灌注后48 h凋亡细胞数达高峰;bcl-2组再灌注后12-72 h凋亡细胞数量较IR组均明显减少. 结论 全脑缺血再灌注后海马CA1区P-P38表达增加,bcl-2可通过抑制P-P38表达抑制脑缺血再灌注后的细胞凋亡.     

Effects of carvedilol on cardiomyocyte apoptosis and gene expression<Emphasis Type="Italic">in vivo</Emphasis> after ischemia-reperfusion in rats

Summary The effects of carvedilol on cardiomyocyte apoptosis and expression of bcl-2, bax genes following ischemia (0.5 h) and reperfusion (48 h)in vivo and the possible biological mechanism of carvedilol inhibiting cardiomyocyte apoptosis were studied. The left anterior descending artery in Wistar rats were ligated to establish ischemia-reperfusion (I/R) models. The model animals were divided into two groups: I/R group, the model rats not subject to other treatments except ischemia-reperfusion (n=8): carvedilol-treated group (n=8), I/R model rats treated with carvedilol. Eight rats in the sham-operated group were subjected to only experimental open operation. The number of apoptotic cardiomyocyte was determined by TUNEL staining. Immunohistochemistry andin situ hybridization histochemistry (ISHH) were used to detect the expression of bcl-2 and bax genes. Image processing system was used to quantitatively dispose the positive metric substances of both immunohistochemistry and ISHH through the average optical density (OD) value. The results showed that the number of the apoptotic cells were 36.18±9 (I/R group), 0–1 (sham-operated group) and 9.5±3 (carvedilol-treated group) in each visual field respectively with the difference being very significant among the groups (P<0.001). The OD values of bcl-2 protein in sham-operated group, I/R group and carvedilol-treated group were 0.14±0.01, 0.08±0.02 and 0.15±0.03, respectively. The OD values of bcl-2 mRNA in sham-operated group, I/R group and carvedilol-treated group were 0.08±0.01, 0.06±0.01 and 0.09±0.01, respectively. There was no significant difference between carvedilol-treated group and I/R group (P>0.05). The OD values of bax protein in I/R group, sham-operated and carvedilol-treated-treated group were 0.13±0.02, 0.07±0.01, 0.06±0.01, respectively. There was very significant difference between carvedilol-treated group and I/R group (P<0.01). Bcl-2/bax ratio was 1.07±0.14 (I/R group), 1.28±0.16 (sham-operated group), 2.5±0.26 (carvedilol-treated group) respectively with the difference being very significant between carvedilol-treated group and I/R group (P<0.05). It was indicated that carvedilol could inhibit cardiomyocyte apoptosis following ischemia and reperfusion, which was related to the increased bcl-2/bax ratio due to inhibition of bax gene expression. ZENG Hesong, male, born in 1965, Associated Professor This project was supported by a grant from the National Natural Sciences Foundation of Hubei Province (No. 2000J050).     

缺血再灌注后胆管上皮细胞凋亡和bcl-2/bax的表达及意义

目的探讨肝脏经不同时间热缺血再灌注后胆管上皮细胞的凋亡和bcl-2／bax的表达及意义。方法以大鼠肝脏原位缺血再灌注为模型，经15、30和60min缺血再灌注6h后取材，用TUNEL法原位检测胆管上皮细胞的凋亡，免疫组织化学方法检测bcl-2／bax在胆管上皮细胞中的表达。结果随着缺血时间延长，经再灌注后发生凋亡的胆管上皮细胞逐渐增多，bcl-2／bax蛋白表达指数呈进行性降低，bax则随凋亡细胞的增多表达增强。结论热缺血再灌注损伤引起胆管上皮细胞的凋亡，并随缺血时间的延长而加重，bcl-2／bax凋亡基因介导了缺血再灌注后损伤引起的胆管上皮细胞的凋亡，bcl-2对细胞凋亡具有抑制作用。     

Study on the effects of losartan on cardiomyocyte apoptosis and gene expression after ischemia and reperfusion in vivo in rats

Along with the thrombolysis therapy, PTCAand the coronary artery bypass graft are used inthe treatment of acute myocardial infarction(AMI), these method played the important rolesfor restoring the myocardial perfusion, rescuingagonal cardiomyocyte or reducing the extension ofthe myocardial infarctlon and protecting the cardiacfunction, but ischemia/reperfusion can cause themyocardial injury. Therefore the study of the myocardial ischemia and reperfusion injury become theclinical hotspot. It …     

高血压对大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡的影响

目的:通过观察高血压对大鼠脑缺血再灌注后神经功能和细胞凋亡的影响,探讨高血压加重缺血性脑损伤的机制。方法:将Wistar雄性大鼠随机分为肾性高血压缺血再灌注组(HIR),正常血压缺血再灌注组(IR)和假手术组(N),采用大脑中动脉线栓法造成大脑缺血再灌注模型,缺血时间为2h,再灌注24h。进行神经功能评分后取脑,采用免疫组织化学技术检测脑组织bcl-2、Bax的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:正常血压缺血再灌注组神经功能评分低于肾性高血压缺血再灌注组(P<0.05)。肾性高血压缺血再灌注组与正常血压缺血再灌注组比较,bcl-2表达明显减少(P<0.05),Bax表达明显增多(P<0.05),神经细胞凋亡明显增多(P<0.05)。结论:高血压通过增加Bax表达、抑制bcl-2表达,促进脑细胞凋亡,加重缺血再灌注后脑损伤。     

抗呆Ⅰ号对体外模拟脑缺血再灌注损伤海马神经元凋亡调控基因表达的影响

采用免疫细胞化学法,观察体外模拟脑缺血再灌注损伤对原代培养海马神经元凋亡调控基因bcl-2和bax的表达及抗呆Ⅰ号(由天麻素等中药提取物组成)的影响.结果发现,脑缺血再灌注损伤可引起海马神经元bcl-2表达减少和bax表达增加,抗呆Ⅰ号可上调神经元bcl-2的表达和下调bax的表达,表明抗呆Ⅰ号能通过调节缺血再灌注损伤神经元凋亡调控基因的表达,对缺血再灌注损伤神经细胞起到一定的保护作用.     

黄芪对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的：探索黄芪对大鼠急性心肌炔血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法：采用结扎大鼠左冠状动脉法制备心肌缺血再灌注(IR)模型，分别以地高辛随机引物法及免疫组化法检测心肌凋亡细胞、心肌细胞bax、bcl—2基因的蛋白表达情况。结果：缺血再灌注心肌细胞凋亡数量显著高于假手术组(P＜0．01)，黄芪治疗组心肌细胞凋亡(P＜0．05)明显受到抑制。IR组和黄芪组bax和bcl--2基因蛋白表达均明显增加(P均＜0．01)，黄芪明显抑制bax基因表达(P＜0．05)，但对bcl—2基因表达无明显影响。结论：急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡加剧，bax、bcl—2参与了缺血再灌注时心肌细胞凋亡凋控，黄芪可抑制凋亡加速基因bax的表达，因而在缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的保护方面有一定价值。     

大豆异黄酮对大鼠脑缺血再灌后ATP酶及bcl-2和bax的影响

目的:观察大豆异黄酮对大鼠脑缺血再灌后ATP酶及bcl-2和bax的影响,探讨其神经保护作用的机制。方法:30只雄性SD大鼠,随机分成对照组、缺血再灌组和大豆异黄酮预处理组。采用三血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,缺血1 h后再灌1 h。观察各组大鼠脑组织病理学改变,Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性改变及bcl-2和bax表达的变化。结果:大豆异黄酮预处理组脑组织损伤较缺血再灌组明显减轻,ATP酶活性升高,并且可以促进bcl-2和抑制bax的表达(P0.05～P0.01)。结论:大豆异黄酮预处理能减轻大鼠脑缺血再灌损伤与提高Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性及促进bcl-2和抑制bax的表达有关。