负载DMOG的光交联明胶水凝胶的骨组织工程研究

目的：探讨负载DMOG(Dimethyloxallyl Glycine)的光交联明胶(Gelatin Methacryloyl,GelMA)水凝胶的促成骨分化的作用以及对大鼠颅骨骨缺损修复的效果。方法：制备GelMA-DMOG水凝胶后,扫描电镜下观察其表面特征,体外检测其降解时间;将小鼠成骨前体细胞(MC3T3-E1)培养于GelMA和GelMA-DMOG水凝胶表面,荧光观察细胞骨架形态,CCK-8法检测其细胞毒性;成骨诱导后,ALP,茜素红染色和qRT-PCR检测其对MC3T3-E1细胞成骨向分化的影响;构建大鼠颅骨骨缺损模型,4周和8周后观察GelMA和GelMA-DMOG水凝胶对骨缺损修复的效果。结果：与GelMA水凝胶相比,GelMA-DMOG水凝胶孔径大小、分布及降解时间并没有明显差异;两组水凝胶对MC3T3-E1细胞增殖无明显影响;与培养在96孔板上的对照组相比,GelMA组略微促进MC3T3-E1细胞成骨向分化,而GelMA-DMOG组明显增强了细胞的成骨向分化和成骨相关基因Runx2、ALP和OCN的表达;大鼠颅骨骨缺损体内实验发现与GelMA组相比,GelMA-DMOG水凝胶处理组具有明显的促成骨成血管作用和较好的骨缺损修复效果。结论：GelMA-DMOG水凝胶相对于GelMA材料自身的理化性能没有改变,且体外和体内实验显示该材料对于骨缺损修复具有较好的促进作用,为骨组织工程治疗骨缺损的临床应用开辟了新途径。     

可注射GelMA水凝胶搭载CD271与PDGF修复骨缺损的实验研究

目的：探讨负载CD271与血小板衍生生长因子(PDGF)的可注射甲基丙烯酸明胶(GelMA)水凝胶支架在SD大鼠颅骨缺损修复中的效果。方法：利用5%的GelMA水凝胶与PDGF共同构建得到GelMA/PDGF支架,然后将CD271抗体对支架进行修饰。实验共分为GelMA、GelMA/PDGF、GelMA/CD271、GelMA/PDGF/CD271 4组。通过水凝胶支架与雄性SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在体外共同培养,检测细胞的生物相容性及成骨相关蛋白的表达情况;颅骨缺损模型使用的动物为质量约350 g的SD雄性大鼠,并在骨缺损处植入水凝胶支架;大鼠颅骨在术后8周接受Micro-CT检测以评估修复效果。结果：BMSCs与负载CD271与PDGF的GelMA水凝胶支架具有良好的生物相容性,可提高成骨相关蛋白(碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原蛋白、骨钙素和骨桥蛋白)的表达(P<0.05),并可促进修复体内颅骨的缺损。结论：负载CD271与PDGF的混合水凝胶支架具有良好的生物相容性,在骨组织工程中极具应用潜力,能促进BMSCs的成骨分化。     

新型自组装多肽水凝胶对成骨细胞前体细胞作用的体外研究

目的 观察新型自组装肽TRSAWmx水凝胶对在体外小鼠成骨细胞前体细胞MC3T3-E1细胞粘附效果、增殖能力及成骨分化能力的影响.方法 通过原子力显微镜观察新型水凝胶的自组装性能;以倒置显微镜对贴壁细胞计数,比较不同材料细胞的粘附;以CCK-8检测和评价不同材料上细胞的增殖;通过激光共聚焦显微镜观察细胞在材料表面的生长;茜素红-S染色观察钙结节形成;检测材料上培养的细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性以及细胞ALP、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等基因的表达.结果 TRSAWmx能自组装成纳米纤维结构;在接种30、60、90 min时,TRSAWmx组细胞粘附数明显高于空白组(P＜0.05);3、5、7d时TRSAWmx组细胞有着更佳的增殖活力(P＜0.05);在成骨诱导培养3、7、14 d时,TRSAWmx组ALP活性明显高于RADA16-Ⅰ组(P＜0.05);培养14 d后,TRSAWmx组茜素红-S染色可见钙结节形成多,成骨相关基因ALP、OCN、VEGF表达水平更高(P＜0.05).结论 新型自组装多肽纳米水凝胶TRSAWmx在体外能有效提高MC3T3-E1细胞粘附、增殖和成骨分化能力.     

成骨细胞在精-丙-天-丙16自组装多肽水凝胶表面培养的研究

目的研究小鼠成骨前体细胞MC3T3-E1在自组装多肽水凝胶材料上黏附、伸展、增殖和分化的能力。方法人工合成短肽精-丙-天-丙16(RADA16),制备RADA16水凝胶并用扫描电镜观察其微观结构。同时在RADA16多肽水凝胶支架材料上接种MC3T3-E1细胞,观察细胞黏附、伸展、增殖和分化的情况。结果 MC3T3-E1细胞能够在多肽水凝胶上黏附、伸展和增殖。成骨诱导培养后的细胞有较高水平的ALP、OC表达及矿化基质沉积,成骨相关基因Runx2,OSX,AKP-2和OC也有高表达,且表达量随着时间的延长而不断升高。结论自组装多肽水凝胶能够支持MC3T3-E1细胞的黏附、伸展、增殖和分化,显示了良好的生物相容性,可能在牙周炎所致的骨质缺损修复中有广泛应用。     

还原型谷胱甘肽上调β-catenin蛋白表达促进MC3T3-E1细胞成骨分化

目的:探讨还原型谷胱甘肽(GST)对小鼠成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的影响,并从Wnt/β-catenin信号通路角度初步探讨其可能的机制。方法:通过碱性磷酸酶(ALP)染色以及细胞外钙化结节来检测成骨细胞MC3T3-E1的分化情况;GST干预MC3T3-E1成骨细胞株7 d、14 d和21 d后,利用Real-time PCR检测成骨相关因子RUNX2、OSX、COLⅠ、OCN基因及Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、LRP5和GSK-3β的表达;通过Western blot检测β-catenin蛋白表达。结果:ALP染色观察到MC3T3-E1细胞外基质存在钙质沉积,且MC3T3-E1 ALP活性阳性。GST能明显提高MC3T3-E1细胞成骨相关基因以及Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达。Western blot结果提示GST可以明显促进β-catenin蛋白的表达。结论:MC3T3-E1细胞本身具有一定的成骨细胞特性,有效浓度的GST能促进小鼠MC3T3-E1细胞成骨分化,Wnt/β-catenin信号转导通路在成骨分化过程中起一定的调节作用。     

大黄素通过BMP-9途径促进前体成骨细胞的分化

目的 研究大黄素对前体成骨细胞MC3T3-E1增殖与分化的影响及其作用机制。方法 采用不同浓度（0.05、0.1、0.5、2.0和5.0 μmol/L）大黄素处理MC3T3-E1细胞（给药组）,以不加大黄素为对照组。分别采用MTT法检测细胞的增殖率;对硝基苯基磷酸二钠（PNPP）法定量检测碱性磷酸酶（ALP）活性;茜素红染色观察矿化结节数目;RT-PCR法检测骨形态发生蛋白（BMPs）途径相关信号分子的表达。采用BMPs抑制剂（Noggin）处理细胞后检测ALP活性,观察BMP-9在大黄素促成骨分化中的作用。结果 大黄素对MC3T3-E1细胞的增殖无影响,大黄素浓度为0.5~5.0 μmol/L时可促进细胞ALP表达及矿化结节形成,其中浓度为5 μmol/L时效果最显著。大黄素可增强细胞BMP-9的表达,与BMP-9信号途径相关的上下游信号分子mRNA的表达亦有相应改变;Noggin预处理后,大黄素促成骨分化的功能受到明显抑制。结论 大黄素可通过激活BMP-9信号通路促进前体成骨细胞的分化。     

基于虚拟筛选的丹参促成骨化合物筛选及活性验证

目的: 借助虚拟筛选技术对丹参促成骨化合物进行筛选并通过体外实验对其活性进行验证。方法: TCMSP数据库查询丹参的活性成分;通过Autodock vina进行分子对接,CCK-8实验考察对细胞的增殖作用,碱性磷酸酶（ALP）活性实验、DAPI-鬼笔环肽双染以及茜素红染色观察促成骨作用。结果: 根据分子对接及文献检索最终筛选得到丹参素、丹酚酸B、丹参酮ⅡA和隐丹参酮4种活性成分。CCK-8实验结果显示,丹酚酸B能够促进MC3T3 E1小鼠前成骨细胞的增殖。ALP活性实验发现,丹参素和丹酚酸B能显著增加MC3T3-E1细胞的ALP活性。DAPI-鬼笔环肽双染及茜素红染色实验进一步证明了丹酚酸B对MC3T3 E1细胞具有一定的促成骨作用。结论:通过分子对接技术筛选出来的丹酚酸B在经过活性验证后,证明其具有一定的促成骨作用。     

MC3T3-E1细胞成骨模型的建立及局部黏着斑激酶表达的研究

目的:通过化学诱导手段建立MC3T3-E1细胞成骨模型，探讨局部黏着斑激酶(FAK)基因表达与成骨细胞形成的关系，了解FAK对成骨分化的影响。方法:观察MC3T3-E1细胞成骨诱导前后细胞形态，茜素红化学染色检测矿化情况，实时荧光定量PCR检测成骨标志物Runx2、ALP的表达，同时分析FAK在成骨过程中的表达情况。结果:MC3T3-E1细胞成骨诱导3 d后细胞呈长梭形或多角形；第21、28 d时，茜素红染色可见矿化结节；成骨标志物Runx2、ALP的表达呈持续升高的趋势，FAK的表达总体呈升高趋势，在第7 d时略有下降。结论:FAK的表达与成骨相关基因的表达趋势基本一致，提示FAK可能在MC3T3-E1细胞成骨过程中发挥一定作用。     

腺病毒介导的NELL1基因对小鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的探讨重组腺病毒(Ad-GFP-NELL1)介导的NELL1因子对小鼠成骨细胞(MC3T3E1)增殖、分化及OCN(骨钙素)和OPN(骨桥蛋白)基因表达的影响。方法免疫荧光染色鉴定重组腺病毒(Ad-GFP-NELL1)转染细胞后绿色荧光蛋白(GFP)及NELL1的表达;不同转染滴度Ad-GFP-NELL1转染MC3T3E1细胞,荧光显微镜下观察转染效果;将MC3T3E1细胞分为对照组,NELL1组(Ad-GFP-NELL1转染)和GFP组(Ad-GFP转染),利用CCK-8试剂盒检测并绘制生长曲线;观察和计量茜素红染色后钙结节数目;定量PCR检测成骨相关基因OCN,OPN表达的改变。结果免疫荧光显示Ad-GFP-NELL1转染大鼠骨髓基质干细胞72h后能同时表达NELL1和GFP;在最佳转染滴度200pfu/cell转染条件下,Ad-GFP-NELL1及Ad-GFP对MC3T3E1细胞增殖没有明显影响(P>0.05)。NELL1组细胞钙结节数目(7±2)比空白对照组(2±1)及Ad-GFP组(2±1)明显增多(P<0.05),OCN(3.7倍),OPN(5.1倍)的表达也明显上升。结论 Ad-GFP-NELL1转染MC3T3E1细胞后能有效促进细胞的成骨分化作用,且对其增殖无明显毒性作用。     

DMOG对MSCs成骨分化及缺血损伤影响的研究

[目的]研究二甲基乙二酰基甘氨酸(dimethyloxalglycine,DMOG)对体外培养的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化和缺血损伤的影响。[方法]利用全骨髓贴壁法获得MSCs,诱导其向成骨细胞分化,同时给予20μM、40μM、80μM的DMOG处理,培养3d、7d、14d时分别进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的定量测定,培养14d时进行硝酸银染色;建立MSCs缺血损伤模型,同时给予不同浓度DMOG处理,Western blot检测MSCs中Bcl-2/Bax蛋白的表达,MTT法检测MSCs增殖能力,台盼蓝染色检测MSCs细胞活力。[结果]DMOG处理可促进MSCs成骨分化中ALP的表达,且DMOG 20μM处理促进作用最显著;各组MSCs成骨分化中ALP的表达均呈时间依赖性增加。DMOG 20μM组黑色矿化基质分泌明显多于其余各组。40μM DMOG可以显著提高缺血损伤MSCs中Bcl-2蛋白的表达、抑制Bax蛋白的表达,可显著促进缺血损伤MSCs的增殖能力和存活率,DMOG的20μM、80μM处理无显著促进或抑制作用。[结论]DMOG 20μM可显著促进MSCs成骨分化能力,DMOG40μM可有效提高缺血损伤MSCs的增殖能力和存活率。     

负载骨髓干细胞来源外泌体的3D水凝胶通过调节免疫促进损伤软骨的修复

目的 分探究负载骨髓干细胞来源外泌体的GelMA水凝胶对软骨损伤的修复情况。方法 首先利用超速离心法分离提取出骨髓干细胞上清液中的外泌体,并通过外泌体透射电镜、粒径分析以及Western blot检测外泌体表面marker。检测负载外泌体的GelMA水凝胶相关性能（包括流变以及电镜）。通过BCA测蛋白法检测外泌体的释放情况,以及通过PKH26红色荧光染料标记外泌体,观察外泌体被RAW264.7细胞吞噬情况。将RAW264.7细胞种在孔板表面,分为空白对照组（Control组）、单纯外泌体组（Exo组）、单纯水凝胶组（GelMA组）、负载外泌体的水凝胶组（GelMA-Exo组）。通过q-PCR以及免疫荧光检测负载外泌体的GelMA水凝胶对于RAW264.7细胞极化的影响。建立材料/RAW264.7细胞/软骨细胞Transwell共培养模型,上室为软骨细胞,下室为材料/ RAW264.7细胞,分组与上面一致,通过q-PCR以及免疫荧光检测损伤软骨细胞的修复情况。构建大鼠膝关节软骨损伤模型,分为假手术组（Sham组）、单纯损伤组（SI组）、单纯水凝胶组（GelMA组）以及负载外泌体的水凝胶组（GelMA-Exo组）,通过HE和Masson染色检测软骨修复情况。结果 通过对提取的细胞进行多系分化能力的检测,成功获取了骨髓干细胞。通过透射电镜、粒径分析以及Western blot检测,成功分离出骨髓干细胞外泌体。负载外泌体的GelMA水凝胶明显促进RAW264.7细胞向M2型极化（P<0.05）。体外共培养模型表明负载外泌体的GelMA水凝胶能显著促进损伤软骨细胞的修复通过调节RAW264.7细胞由M1型向M2型转化（P<0.05）。HE和Masson染色表明负载骨髓干细胞来源外泌体的GelMA水凝胶明显促进软骨损伤的修复。结论 负载骨髓干细胞来源外泌体的GelMA水凝胶能够通过改善免疫微环境明显促进大鼠软骨损伤的修复。     

海藻酸钠壳聚糖支架复合成骨细胞特异性多肽修复兔颅骨缺损

目的 评价成骨细胞特异性识别多肽在骨缺损中的修复效果.方法 将成骨细胞特异性识别多肽与海藻酸钠/壳聚糖水凝胶(SA/CS Gel)复合植入兔颅骨双侧 15 mm圆形极限骨缺损区,实验组缺损处植入海藻酸钠/壳聚糖/成骨细胞特异性识别多肽水凝胶(SA/CS/多肽 Gel),对照组植入SA/CS Gel,空白组不植入任何载体及药物,随机分组.术后8周活体行CBCT扫描,随后处死取材并常规HE染色行组织学检查观察成骨效果.结果 影像学及组织形态学结果可见,实验组缺损区成骨量明显大于对照组及空白组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 成骨细胞特异性识别多肽可促进兔颅骨缺损的骨修复.     

杯苋甾酮抑制破骨分化和促进成骨分化的双向作用治疗骨质疏松症

目的 研究杯苋甾酮对破骨和成骨分化的影响, 探讨其在改善骨质疏松中的作用.方法 以CCK8检测杯苋甾酮对小鼠源性单核巨噬细胞 (BMMs) 及前成骨细胞MC3T3E1的毒性作用;流式检测药物对细胞凋亡的影响.以TRAP染色观察破骨分化;以ALP染色评估成骨分化, 以Real-Time PCR检测TRAP及ALP的表达.15只小鼠分为假手术组、OVX组、治疗组.治疗组给予杯苋甾酮干预, 余2组以生理盐水处理.4周后取胫骨, Micro-CT检测骨质及微观结构变化.结果 杯苋甾酮≤10 mg/L时对细胞无毒性 (P>0.05) , 不影响凋亡 (P>0.05) .其可显著抑制破骨分化 (P<0.05) , 促进成骨分化.杯苋甾酮可抑制TRAP表达 (P<0.05) , 促进ALP表达 (P<0.05) .杯苋甾酮可改善雌激素缺乏导致的骨质疏松.结论 杯苋甾酮通过抑制破骨、促进成骨的双向作用达到改善骨质疏松的作用.     

磷酸肌酸对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及矿化的影响

目的 探讨磷酸肌酸(phosphocreatine,PCr)对体外培养的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的增殖、成骨分化及矿化的影响.方法 在体外培养的MC3T3-E1细胞中,分别加入含不同浓度(5,10,20 mmol·L-1)的PCr进行培养,并以不给予PCr药物处理的组为空白对照组.采用MTT法检测MC3T3-E1细胞的增殖情况;使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性试剂盒检测MC3T3-E1细胞内ALP的活性;采用Western Blot法检测MC3T3-E1细胞内ALP、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)的蛋白表达情况;利用茜素红染色法检测MC3T3-E1细胞形成矿化的能力.结果 PCr可以促进MC3T3-E1细胞的增殖且具时间依赖性,当处理12 h时,PCr对细胞无明显促增殖作用(P＞0.05);然而当处理48 h时,PCr(5,10,20mmol·L-1)对细胞的促增殖作用可分别达到137％、146％、153％.PCr(10,20 mmol·L-1)使MC3T3-E1细胞内ALP的活性分别增加到空白对照组的1.37和2.14倍(P ＜0.05,P＜0.01),并且显著上调ALP蛋白表达(P＜0.01,P＜0.01).PCr(5,10,20 mmol·L-1)还可明显上调MC3T3-E1细胞内BMP-2的蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),并使MC3T3-E1细胞形成的矿化结节数增加(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 PCr可以促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化与矿化,具有促成骨作用.     

lncRNA NEAT1过表达促进破骨细胞分化并抑制 成骨细胞分化诱发骨质疏松

目的:研究长链非编码RNA NEAT1在骨质疏松症中的表达及对成骨细胞和破骨细胞分化的作用。方法:收集正常人和骨质疏松症患者的骨组织,运用Real-time PCR检测NEAT1的表达水平。在卵巢去势（OVX）和鼠尾悬吊（TS）诱导的小鼠疏松股骨中,在小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1和人间充质干细胞hMSC向成骨分化过程中以及小鼠巨噬细胞系RAW264.7向破骨分化过程中,检测NEAT1的表达水平。利用敲低Neat1的慢病毒感染MC3T3-E1和RAW264.7细胞,分别采用碱性磷酸酶（ALP）染色确定成骨细胞活性以及抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察破骨细胞活性变化。结果:NEAT1在患者疏松的骨组织中、小鼠的疏松股骨组织中以及RAW264.7细胞破骨分化过程中表达明显增多;而在MC3T3-E1和hMSC成骨分化过程中表达明显降低。ALP染色显示敲低Neat1显著加重成骨细胞活性,TRAP染色显示敲低Neat1显著抑制破骨细胞活性。结论:长链非编码RNA NEAT1在成骨分化过程中低表达,在破骨分化过程中过表达,并通过促进破骨细胞分化及抑制成骨细胞分化诱发骨质疏松。     

碳酸化羟基磷灰石表面成骨活性的研究

目的：探讨碳酸化羟基磷灰石(carbonated hydroxuapatite，CHA)表面的成骨活性。方法：在CHA直接培养成骨细胞MC3T3-E1，观察细胞的黏附和增值数目，并检测碱性磷酸酶(ALP)活性和Ⅰ型胶原mRNA的表达，并以骨水泥(PMMA)作为对照。结果：MC3T3-E1细胞在CHA表面黏附和增值数目明显高于PMMA，并且ALP活性和Ⅰ型胶原mRNA表达水平均高于PMMA。结论：成骨细胞可直接在CHA表面黏附、增殖和并表达较高的成骨活性，可能是一种较为理想的骨缺损修复材料。     

氧化微环境中普鲁士蓝纳米酶促进MC3T3-E1细胞成骨分化

目的：探索氧化微环境中普鲁士蓝纳米酶对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。方法：CCK-8法和流式细胞仪检测不同浓度普鲁士蓝纳米酶的生物相容性;使用二甲酚橙法、WST-8法检测不同浓度普鲁士蓝纳米酶的模拟酶活性,DCFH-DA探针免疫荧光法检测普鲁士蓝纳米酶对细胞内活性氧的清除能力;通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色及活性检测、茜素红染色、实时荧光定量逆转录PCR评估其氧化微环境下对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。结果：CCK-8和流式凋亡结果显示,0～100μg/mL普鲁士蓝纳米酶具有良好的生物相容性;二甲酚橙法、WST-8法结果显示,普鲁士蓝具有良好的模拟酶活性并且呈时间和剂量依赖性;DCFH-DA探针免疫荧光结果显示,普鲁士蓝纳米酶对细胞内活性氧也有较好的清除能力;ALP染色及活性检测、茜素红染色、实时荧光定量逆转录PCR结果显示,氧化微环境中普鲁士蓝纳米酶对MC3T3-E1细胞的成骨分化能力具有显著增强作用。结论：普鲁士蓝纳米酶可以增强MC3T3-E1细胞的抗氧化活性,促进氧化环境中细胞的成骨分化能力。     

Col24α1基因低表达对成骨细胞碱性磷酸酶及矿化作用的影响

目的:探讨细胞外基质基因Col24α1在MC3T3-E1细胞成骨样分化过程中的表达情况,及其对分化过程中碱性磷酸酶活性和细胞矿化作用的影响。方法:培养MC3T3-E1细胞并诱导成骨分化,从基因及蛋白水平观察Col24α1在成骨细胞分化过程中的表达情况;构建Col24α1低表达慢病毒载体包装,滴度测定,细胞转染效率的验证;分别转染MC3T3-E1细胞,与空白组对照观察Col24α1沉默后碱性磷酸酶活性变化,细胞成骨矿化的影响。结果:Col24α1在成骨细胞在分化过程中表达随着矿化过程的进展而增加。使用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术,可以在MC3T3-E1成骨细胞中成功降低Col24α1表达,发现沉默Col24α1表达显著降低ALP活性和细胞矿化作用。结论:Col24α1可以调节成骨细胞的ALP活性和细胞矿化作用,其异常表达可能与骨骼病变相关。     

GelMA水凝胶在骨组织工程中的研究进展

 种植修复目前是牙列缺损、牙列缺失首选的修复方法。患者因牙周炎、长期牙缺失、全身疾病、外伤及肿瘤手术后的重度牙槽骨缺损是种植修复术的难点。充足的骨量是种植体完成骨结合并维持其长期稳定的必要条件,因此临床上需要可有效填补骨缺损的材料。明胶甲基丙烯酰基（gelatin methylacryloyl,GelMA）水凝胶因其独特的光交联特性,可以加工成不同形貌的水凝胶支架材料。同时,因其降解性能可控,力学性能可控,生物相容性好,在骨缺损修复材料领域具有广阔应用前景。本文将对GelMA水凝胶在骨组织工程中促进成骨生成和血管化的研究进展进行综述。     

柚皮苷调控miR-199a-5p/ECE1分子轴促进骨损伤修复

目的探讨柚皮苷通过调控mi R-199a-5p/ECE1分子轴对骨损伤修复的影响。方法 Western blotting检测ECE1及成骨分化相关标志物的表达水平;RT-qPCR检测mi RNAs相对表达水平;双荧光素酶报告基因验证mi R-199a-5p和ECE1靶向关系;MTT检测MC3T3-E1细胞增殖活力;碱性磷酸酶(ALP)检测MC3T3-E1细胞成骨分化能力;茜素红染色检测MC3T3-E1细胞矿化情况。结果柚皮苷处理显著促进MC3T3-E1细胞增殖活力、成骨分化指标Runx2、OPN、BMPs、OC等的表达、ALP活性以及细胞钙化能力水平(P<0.01)。其中20ng/m L浓度处理的效果最优。RT-qPCR检测结果显示,柚皮苷能显著上调mi R-199a-5p的表达水平。双荧光素酶报告基因检测结果表明ECE1是mi R-199a-5p的一个靶基因;并且,mi R-199a-5p靶向下调ECE1的表达。进一步实验表明,敲降mi R-199a-5p显著降低柚皮苷对MC3T3-E1细胞增殖活力、ALP活性和钙矿化的促进作用(P<0.01);敲降ECE1显著促进了柚皮... 更多