白细胞介素1β对兔主动脉平滑肌细胞MCP—1及VCAM—1蛋白及 …

白细胞介素１β（ＩＬ－１β）是一种参与动脉粥样硬化斑块形成的细胞因子。为了研究ＩＬ－１β在动脉粥样硬化斑块形成过程中的作用,采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ观察ＩＬ－１β对培养的兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）单核细胞趋化蛋白（ＭＣＰ－１）和血管细胞粘附分子１（ＶＣＡＭ－１）蛋白分泌及ｍＲＮＡ表达的影响。结果表明,ＩＬ－１β对兔主动脉ＳＭＣ ＭＣＰ－１的蛋白分泌和ｍＲＮＡ     

氧化修饰LDL及VLDL对兔主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1mRNA表达的作用

单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）是一种强的单核细胞趋化因子，在体外可由多种细胞分泌，包括血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）。本研究采用斑点杂交方法检测了氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）及氧化修饰极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）对培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达的作用。结果表明，培养的ＳＭＣ可表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ，而且ＳＭＣ暴露于ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ后，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达水平明显增高，分别增高约１１倍、６倍和２０倍。因此我们认为ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ可以刺激培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ的表达。     

高血脂兔主动脉粘附分子VCAM-1基因表达的研究

目的：研究高血脂对主动脉血管细胞粘附分子１（ＶＣＡＭ－１）基因表达的影响。方法：采用胆固醇喂饲法建立兔高血脂模型,在喂饲后１,６周处死动物,应用组织原位杂交、免疫组织化学等方法检测产动脉ＶＣＡＭ－１的表达,并与正常组对比。结果：喂饲胆固醇１周后高血脂很快诱导主动脉内皮细胞表达ＶＣＡＭ－１,并在６周后动脉粥样硬化（ＡＳ）病灶内也有丰富表达。结论：高血脂促进动脉ＶＣＡＭ－１表达,是其促进ＡＳ发病的机制     

氧化修饰的低密度和极低密度脂蛋白对巨噬细胞单核趋化蛋白表达的影响

探讨氧化修饰的低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）和氧化修饰的极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）是否能诱导巨噬细胞表达单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）ｍＲＮＡ和蛋白，以阐明二者在动脉粥样硬化发生中的作用。方法在巨噬细胞的培养基中分别加入２５μｇ／ｍｌ的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）、ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ，３７℃下温育２４小时，收集巨噬细胞的条件培养基，同时用异硫氰酸胍法提取巨噬细胞总ＲＮＡ。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析的方法检测巨噬细胞ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ的表达，用夹心ＥＬＩＳＡ检测其条件培养基中ＭＣＰ－１蛋白的含量。用微孔滤膜法进行单核细胞的趋化试验。结果当巨噬细胞分别暴露于ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ２４小时后，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白的表达明显增加，同时单核细胞迁移距离的明显增加。而当巨噬细胞分别暴露于ＬＤＬ和ＶＬＤＬ２４小时，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白的表达只有轻微的增加，单核细胞迁移距离亦无明显的增加。结论巨噬细胞能表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白，ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ能诱导该细胞更强地表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白     

细胞因子对人肾小球系膜细胞表达细胞粘附分子的调控

研究白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）及肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα），对体外培养的人肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）和血管细胞粘附分子－１（ＶＣＡＭ－１）的调节作用。方法用ｒｈＩＬ－１β（２５ｎｇ／ｍｌ）或ｒｈＴＮＦα（１００ｎｇ／ｍｌ）与系膜细胞共同孵育４、８、１６及３２小时，然后用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测该细胞ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１的ｍＲＮＡ表达，并用细胞ＥＬＩＳＡ检测它们的蛋白质表达。结果未予任何刺激的对照组，系膜细胞仅低水平表达ＩＣＡＭ－１、ＶＣＡＭ－１ｍＲＮＡ和蛋白质。ｒｈＩＬ－１β或ｒｈＴＮＦα刺激后，系膜细胞上这两种细胞粘附分子ｍＲＮＡ的表达，均迅速上调（仅ＴＮＦα刺激ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达高峰在８小时，其余均在４小时），蛋白质表达也显著增加（Ｐ＜０．００１））。结论细胞因子ＩＬ－１β及ＴＮＦα可能通过刺激肾小球系膜细胞表达ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１而参与肾小球肾炎发病。     

纤维蛋白原、极低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞t-PA和PAI-1mRNA含量的影响

目的　拟建立逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）半定量法,探讨纤维蛋白原（Ｆｇ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）对人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣｓ）组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）、Ｉ型纤溶酶原灭活剂（ＰＡＩ－ｌ）ｍ ＲＮＡ 表达的影响。　方法　（ｌ）用异硫氰酸胍一步法（ＴＲＩｚｏｌ试剂）提取细胞总ＲＮＡ,用单管ＲＴ－ＰＣＲ 法、三对引物分别逆转录、扩增ｔ－ＰＡ,ＰＡＩ－１ 及内参照三磷酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）的特异性片段,扩增产物经２．０％ 琼脂糖凝胶电泳分离后,用凝胶图像分析仪照相、计算各条带分子量并扫描其光密度值（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｄｅｎｓｉｔｙ ｖａｌｕｅ,ＩＤＶ）,ｔ－ＰＡ、ＰＡＩ－１ ｍ ＲＮＡ的ＩＤＶ 用ＧＡＰＤＨ ｍ ＲＮＡ 的ＩＤＶ 进行校正,其相对表达量用各实验组与对照组比较的倍数表示。（２）以ＥＬＩＳＡ 法测定内皮细胞（ＥＣ）培养上清液（ＣＭ）中ｔ－ＰＡ,ＰＡＩ－１总抗原的含量。（３）ＥＣ与不同浓度Ｆｇ（２,２０,２００,２０００ μｇ／ｍ ｌ）或ＶＬＤＬ（５,１０,２０,３０,４０ μｇ／ｍ ｌ）共同孵育１２ ｈ 或２４ ｈ 后,观察ＥＣｔ－ＰＡ 和ＰＡＩ－１ ｍ ＲＮＡ 水平及ＣＭ 中抗原含量的变化。（４     

哮喘患者PBMC中Th1/Th2类细胞因子m-RNA的表达

为观察哮喘患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中Ｔ辅助细胞两个亚群的功能状态,采用ＲＴ－ＰＣＲ技术,以ＩＬ－２ 和ＩＦＮ－γ代表Ｔｈ１ 类细胞因子,ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０ 代表Ｔｈ２ 类细胞因子,检测了１６ 例哮喘患者和１０ 例健康志愿者ＰＢＭＣ中上述各种因子ｍ －ＲＮＡ的表达。结果表明,哮喘患者ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０的ｍ －ＲＮＡ 阳性表达数分别为１３／１６、１３／１６ 和６／１６,ＩＬ－２ 和ＩＦＮ－γ的ｍ －ＲＮＡ阳性表达数分别为１２／１６ 和０／１６,而健康志愿者ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０ ｍ －ＲＮＡ 阳性表达数分别为０／１０、２／１０ 和１／１０,ＩＬ－２ 和ＩＦＮ－γ的ｍ －ＲＮＡ 阳性表达数均为１／１０。与健康对照相比,哮喘患者ＰＢＭＣ中的Ｔｈ２ 类细胞因子阳性表达率显著增高,若以ＩＦＮ－γ／ＩＬ－４ 来衡量哮喘患者ＰＢＭＣ中Ｔｈ１／Ｔｈ２ 之间的平衡,其细胞因子的表达呈现Ｔｈ２ 方向的偏移状态。Ｔｈ２ 类细胞因子的强势表达在哮喘的气道炎症过程中可能具有重要意义     

L—精氨酸和尼莫地平对脂多糖诱导的内皮细胞表达单核细胞趋化蛋 …

目的 观察Ｌ－精氨酸和尼莫地平对脂多糖（ＬＰＳ）诱导的内皮细胞（ＥＣ）的单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）ｍＲＮＡ和蛋白表达的影响。方法 在ＥＣ培养基中分别为ＬＰＳ,ＬＰＳ＋Ｌ－精氨酸和ＬＰＳ＋尼莫地平,培养８小时,用异硫氢酸胍法提了细胞的总ＲＮＡ,用γ＾２－３２Ｐ末端标记的ＭＣＰ－１寡核苷酸探针培养基（ＣＭ）中的ＭＣＰ－１蛋白含量,用免疫细胞化学方法检测ＥＣ的ＭＣＰ－１的蛋白的表达。结果 斑点杂     

人单核细胞趋化蛋白1基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的：克隆表达具有重要生物功能的人单核细胞核细胞趋化蛋白１（ｈｕＭＣＰ－１）。方法：从人外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）中提取ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ,用ＲＴ－ＰＣＲ法扩增出ｈｕＭＣＰ－１ｃＤＮＡ。将ｈｕＭＣＰ－１ｃＤＮＡ插入融合表达载体ｐＧＥＸＩＮ,１ｍｍｏｌ／Ｌ异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导后获得高效表达。结果：Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证明与ｈｕＭＣＰ－１单克隆抗体有明显交叉反应。结论     

哮喘患者是PBMC中Th1／Th2类细胞因子m—RNA的表达

为观察哮喘患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中Ｔ辅助上亚群的功能状态,采用ＲＴＰＣＲ技术,以ＩＬ－２和ＩＦＮ－γ代表Ｔｈ１类细胞因子,ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０代表Ｔｈ２类细胞因子,检测了１６例哮喘患者和１０列健康志原者ＰＢＭＣ中上述各种因子ｍ－ＲＮＡ的表达。结果表明,哮喘患者ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０的ｍ－ＲＮＡ阳性表达数分别为１３／１６、１３／１６和６／１６,ＩＬ－２和ＩＮＦ－γ的ｍ－Ｒ     

氧化修饰LDL及VLDL对兔主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋…

单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）是一种强的单核细胞趋化因子，在体外可由多种细胞分泌，包括血管平滑肌细胞。本研究采用斑点杂交方法检测了氧化修饰低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及氧化修饰极低密度脂蛋白对培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达的作用。     

血管活性肽在大鼠血管再狭窄形成中的作用

目的 研究血管活性肽在血管再狭窄形成中的作用。方法 在大鼠主动脉内皮球囊拉伤模型上,采用放射免疫法测定大鼠血浆及主动脉组织内皮素（ＥＴ）、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）和肾上腺髓质素（Ａdm）含量以及组织中血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）含量,用∧３Ｈ－ＴdＲ掺入法和组织学分析观察血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增生以及血管内膜／中膜面积比值。并在培养的ＶＳＭＣ上,采用∧３Ｈ－ＴdＲ掺入法研研究血管活性肽对细胞增生的影响。采用ＲＴ－ＰＣＲ法观察血管活性肽对自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和ＷＫＹ大鼠的主动脉和ＶＳＭＣ高血压相关基因－１（ＨＲＧ－１）表达的影响。结果 术后１０d ,血浆及主动脉ＥＴ达高峰,分别较对照组升高６９％和1２４％（Ｐ＜０．０１）;主动态ＡⅡ含量升高８０％（Ｐ＜０．０１）。应用ＥＴ抗血清或卡托普利可明显抑制血管损伤诱导的ＶＳＭＣ增殖和内膜增厚。血浆和主动脉ＣＧＲＰ水平在术后３d升高６４％和８９％（Ｐ＜０．０１）, 术后１０d血浆和组织Ａdm分别升高１２９％和１０２％（Ｐ＜０．０１）。在体应用ＣＧＲＰ（２５μg/kg）可显著抑制管损伤诱导的ＶＳＭＣ增殖和内膜增厚（抑制率分别为６６％和７９％,Ｐ＜０．０１）。ＥＴ和ＡⅡ抑制血管ＨＲＧ－１表达,激活丝裂素活化蛋白素酶（ＭＡＰＫ）;ＣＧＲＰ和Ａdm诱导ＨＲＧ－１表达,并抑制ＭＡＰＫ活性。结论 ＥＴ和ＡⅡ可促进损伤血管内增殖,而ＣＧＲＰ和Ａdm具有代偿性抗内膜增殖作用。ＥＴ、ＡⅡ、ＣＧＲＰ和Ａdm等血管活性肽可通过调节ＨＲＧ－１表达和ＭＡＰＫ途径以调控ＶＳＭＣ增殖,影响损伤血管狭窄的形成。     

植物血凝素及脂多糖对人肾小球系膜细胞分泌IL-1 8的影响

目的 了解植物血凝素（ＰＨＡ）、脂多糖（ＬＰＳ）对人肾小球系膜细胞分泌ＩＬ－１８的影响。方法 体外培养的人系膜细胞经不同浓度的ＰＨＡ,ＬＰＳ诱导,ＥＬＩＳＡ测定培养上清。结果 ＬＰＳ和ＰＨＡ均可诱导人肾小球ＭＣ释放ＩＬ－１８,ＬＰＳ和ＰＨＡ呈浓度促进ＭＣ释放ＩＬ－１８,ＬＰＳ诱导作用较ＰＨＡ强,均显著高于对照组水平（Ｐ〈０．０５）。结论 肾小球系膜细胞在ＬＰＳ和ＰＨＡ诱导下可增加ＩＬ－１８分泌。．     

重组人Ⅸ因子逆转录病毒载体在肌细胞中的表达

目的：观察肌细胞特异性表达ｈＦⅨ重组逆转录病毒载体（ＲＶ－ｈＦⅨ）体外转染成肌细胞后的表达效果。方法：采用产病毒细胞株ｐｄＬ Ⅸ ｍ１βＡ２００Ｍｅ１／ＰＡ３１７和ｐｄＬⅨｍ２β Ａ２００Ｍｅ１／ＰＡ３１７培养上清,体外转染原人胎、联合免疫缺陷（ＳＣＩＤ）小鼠及Ｃ５７鼠成肌细胞,ＥＬＩＳＡ法检测细胞培养上清中ｈＦⅨ分泌水平。结果：不同来源成肌细胞经两种载体转染后均有ｈＦⅨ蛋白分泌,其中人胎成肌细胞     

过表达整合蛋白α5β1的SMMC7721细胞株的建立和鉴定

目的 构建过表达整合蛋白α５β１的ＳＭＭＣ７７２１细胞株。方法 应用分子克隆技术和基因转染建立过表达整合蛋白α５β１的ＳＭＭＣ７７２１细胞株，应用ＲＴ－ＰＣＲ及汉式细胞术鉴定ＳＭＭＣ７７２１－细胞表达整合蛋白α５β１，６－７７２１细胞。结论、整事蛋白α５β１基因转染后，ＳＭＭＣ７７２１细胞整合蛋白α５β１的ＲＮＡ及蛋白质表达明显提高。过表达整合蛋白α５β１的ＳＭＭＣ７７２１细胞株的建立有助于研究整     

类风湿性关节炎患者IL—1β,IL—及SAA水平的变化及其临床意义

目的 探讨类风湿性关节炎（ＲＡ）患者血清淀粉样蛋白Ａ（ＳＡＡ）,白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）、白细胞介素－６（ＩＬ－６）及Ｃ反应蛋白（ＣＲＰ）水平检测的临床意义。方法 采用酶联免疫吸附实验检测５１例ＲＡ患者及４１例正常对照组血清中ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＳＡＡ和ＣＲＰ水平。结果 ＲＡ患者ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＳＡＡ和ＣＲＰ水平明显高于正常对照组（Ｐ〈０．０１）,ＲＡ活动组与ＲＡ稳定组ＩＬ－１β、Ｉ     

一氧化氮抑制单核—内皮细胞粘附的机制

目的：研究一氧化氮（ＮＯ）抑制单核－内皮细胞粘附的机制。方法：以普钠作为ＮＯ的供体，用细胞粘附实验，流式细胞仪荧光强度测定，细胞ＥＬＩＳＡ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ等方法分别从细胞，蛋白表达，基因表达方面研究ＮＯ对内皮细胞粘附分子（ｖａｓｃｕｌａｒｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ，ＶＣＡＭ－１）表达的影响，结果：ＮＯ抑制ＩＬ－１α诱导的单核－内皮细胞粘附，抑制ＩＬ－１α诱发的ＶＣＡＭ－１的     

hIL—10基因转导抑制大鼠心肌细胞诱生炎症细胞因子

目的：观察人白细胞介素１０基因转导对脂多糖（ＬＰＳ）诱导大鼠心肌细胞（ＣＭＣ）的炎症细胞因子的产生及其基因表达的影响。方法：通过重组逆转录病毒载体ｐＬＸ（ＩＬ－１０）ＳＮ将人ＩＬ－１０基因导入大鼠ＣＭＣ,应用ＰＣＲ,ＲＴ－ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ;（１）检测ＩＬ－１０基因的整合和表达;（２）观察ＩＬ－１０基因转导对ＬＰＳ诱导的ＣＭＣ肿瘤坏死因子－α的ｍＲＮＡ表达及白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）和ＴＮＦ－     

肾病患儿外周血单个核细胞中白细胞介素1β及其受体拮抗剂的基因表达

为进一步了解原发性肾病综合征（ＩＮＳ）的发病与细胞免疫功能紊乱的关系，作者应用生物素标记ｃＤＮＡ探计、链霉亲合素－硷性磷酸酶检测系统行细胞涂片原位杂交，并用真彩色医学图像分析系统对杂交信号行定量分析，检测４例ＩＮＳ患儿及５例正常儿外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中的白细胞介素１β（ＩＬ－１β）及其受体拮抗剂（ＩＬ－ｌｒａ）信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）的表达。结果：在患儿ＰＢＭＣ中，ＩＩ－１β和ＩＬ－ｌｒａｍＲＮＡ的表达都明显低于正常对照（１０８±２０比１０６±３１及１４５±１１比３０７±１００，Ｐ＜０．０５）。提示ＩＮＳ时，ＰＢＭＣ中ＩＬ－１β及其受体拮抗剂基因表达异常。作者认为其原因可能与多个细胞因子间相互调节失常有关，并分析了所用生物素标记探针杂交技术在儿科临床应用中的优越性。     

蒺藜总皂甙抑制培养的牛脑微血管内皮细胞表达E选择素

目的：观察蒺藜总皂甙（ＧＳＴＴ）对牛脑微血管内皮细胞（ＢＣＭＥＣ）表达Ｅ选择素的影响。方法：流式细胞仪测定白细胞介素１β（ＩＬ－１β）诱导ＢＣＭＥＣ粘附大鼠血单核细胞（ＭＮＣ）和中性粒细胞（ＮＴＰ）的数目；应用ＥＬＩＳＡ法检测ＢＣＭＥＣ表达Ｅ选择素的量。结果：ＢＣＭＥＣ经ＩＬ－１β诱导后，明显增加细胞表面Ｅ选择素的表达；ＢＣＭＥＣ与白细胞的粘附率亦明显增加，对ＭＮＣ的粘附率从（１２．９±０．４）％增至（４５．７±０．６）％，对ＮＴＰ的粘附率从（１４．７±０．３）％增至（４４．９±０．６）％。抗Ｅ选择素单克隆抗体（ＡＥｍＡｂ）能显著降低ＩＬ－１β的诱导作用。在ＩＬ－１β处理前，用ＧＳＴＴ（０．０１～１．００ｇ／Ｌ）与ＢＣＭＥＣ共孵育，则ＧＳＴＴ可浓度依赖性地抑制ＩＬ－１β的诱导作用，降低Ｅ选择素的表达量。结论：ＧＳＴＴ能抑制ＢＣＭＥＣ表达Ｅ选择素