蛋白激酶C对腹膜间皮细胞己糖激酶活性的调控

目的研究蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）对腹膜间皮细胞（peritoneal mesothelium cell,PMC）己糖激酶（hexokinase,HK）活性的调节作用,以及HK活性与PMC对葡萄糖摄取的相关性。方法大网膜取自雄性SD大鼠,胰蛋白酶-EDTA消化法用于PMC的原代培养及传代,细胞角蛋白抗体的间接免疫荧光染色用于PMC的鉴定;6-磷酸葡萄糖脱氢酶耦联比色法检测HK活性,观察PKC激活剂——佛波酯（PMA、PDD）及经典型PKC（classical PKC,cPKC）抑制剂——Goe6976对HK活性的影响;比色法检测培养液内葡萄糖的消耗量作为细胞对葡萄糖净利用指标。结果原代培养的PMC24h贴壁,5～8d融合,形成铺路石样外观,细胞角蛋白在胞浆阳性表达。PMA对HK活性的诱导呈时间和剂量依赖性,并增加了PMC对葡萄糖的净利用。0．01、0．1及1μmol／L的PMA作用24h后,HK活性分别提高30．7％、59．9％及99．1％（P〈0．05）。1μmol／L的PMA作用于PMC,6h后HK活性开始上调,24h时达到高峰（分别为21．3％和100．4％,P〈0．05）,培养液内的葡萄糖基本消耗一半（2mmol／L,P〈0．05）。0．1μmol／LPDD对HK活性的诱导与1μmol／L的PMA作用相似,PDD的结构相似物4α—PDD对HK活性无上述作用。G66976抑制了PMA对HK活性的诱导。10、20、30、40及50Ixmol／L的Goe976预处理PMC30min,再予1μmol／LPMA培养24h,HK活性分别抑制了14．6％、26．8％、34．2％、44．2％及54．9％（P〈0．05）。结论PKC使HK活性上调,增加了细胞对葡萄糖的净利用,可能与长期腹膜透析后PMC对葡萄糖的吸收加速有关;cPKC抑制剂对HK活性的阻断可能成为提高腹膜透析超滤的有效途径之一。     

高糖和脂多糖对腹膜间皮细胞己糖激酶活性的调节作用

目的:研究高糖和脂多糖(LPS)对腹膜间皮细胞(PMC)己糖激酶(HK)活性的调节作用。方法:行PMC的原代培养及鉴定。首先将不同浓度的葡萄糖(0.10,1.50,2.50,4.25%)分别和不同剂量的LPS(0,0.1,1.0,10.0,50.0,100.0mg/L)加入培养基;其次用含4.25%葡萄糖和10.0mg/LLPS的培养基孵育细胞不同时间(0,1,3,6,12,24h);6-磷酸葡萄糖脱氢酶耦联比色法测定HK活性。最后用含10.0mg/LLPS的培养基孵育细胞不同时间(0,1,3,6,12,24h);测定HK活性和细胞葡萄糖的摄入量,分析HK活性与葡萄糖摄入量的相关性。结果:高糖和LPS对HK的活性具有交互作用(F=423.55,P<0.01)。高糖和LPS以剂量(P<0.01)和时间依赖的方式诱导HK活性(P<0.01);LPS以时间依赖的方式促进PMC葡萄糖净利用(P<0.01)。结论:高糖和LPS对PMC己糖激酶活性的调节作用在腹膜透析失超滤的过程中发挥了重要的作用。     

血必净对高糖环境下大鼠腹膜间皮细胞分泌晚期炎性因子HMGB-1和TGF-β_1的影响

目的 研究血必净注射液对高糖环境下大鼠腹膜间皮细胞(PMC)分泌高迁移率族蛋白1(HMGB-1)和转化生长因子β_1(TGF-β_1)的影响,探讨其对腹膜透析相关性腹膜纤维化的防治意义.方法 胰蛋白酶消化法行PMC的原代培养和传代,经鉴定第3代细胞用于实验.随机分实验组和对照组,实验组加2.5%的葡萄糖及不同浓度的血必净,培养不同时点分别收集上清液,用ELISA法检测其中HMGB-1和TGF-β_1的含量,并进行统计学分析.结果 加2.5%葡萄糖的各实验组HMGB-1及TGF-β_1的含量均显著高于对照组(P<0.05);加血必净的各实验组HMGB-1及TGF-β_1的含量均显著低于单纯高糖组(P<0.05),且随着血必净浓度升高,HMGB-1及TGF-β_1的含量下降,20 mg/ml血必净组两者含量最低.结论 高浓度葡萄糖可促进PMC表达HMGB-1和TGF-β_1,而血必净可以拮抗高糖对PMC中HMGB-1和TGF-β_1表达的上调作用,提示血必净对预防、延缓腹膜纤维化有一定意义.     

d-α-生育酚对高糖诱导的人腹膜间皮细胞己糖激酶表达的调节作用

目的探讨d-α-生育酚对高糖诱导的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelium cell,HPMC)己糖激酶(hexokinase,HK)及其同工酶表达的调节作用。方法胰蛋白酶消化法分离培养HPMC,免疫细胞化学染色及扫描电镜对培养细胞进行鉴定。第3代HPMC分为正常对照组(0．1％葡萄糖,相当于5．5 mmol／L)、高糖组(0．5％、1．0％、1．5％、2．5％、4．25％的葡萄糖)及d-α-生育酚干预组。培养24 h后,利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶耦联比色法和温度敏感实验检测HK及其同工酶的活性;免疫细胞化学染色检测HK蛋白的细胞内定位;Western印迹及逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)法分别检测HK蛋白及mRNA的表达。己糖激酶法检测培养液内葡萄糖的消耗量作为细胞对葡萄糖净利用指标。结果角蛋白和波形蛋白在HPMC的胞质呈阳性表达,扫描电镜可见细胞表面有丰富的微绒毛。1．5％、2．5％及4．25％葡萄糖组,HK总活性上调,与正常对照组(20．6±2．5)U／g蛋白比较,相对活性分别为115．4％、129．1％及155．2％,并以HKⅡ增加为主(P<0．05)。50 mmol／L d-α-生育酚干预组,HK总活性下调,是2．5％葡萄糖组的82．1％(P=0．001),其中HKⅡ受抑为主;d-α-生育酚干预后HPMC对葡萄糖的净利用由(25．3±3．9)mmol／L降至(17．3±2．1)mmol／L(P= 0．018)。正常状态下,HKⅡ蛋白在胞质呈棕色淡染;随葡萄糖浓度的增加(葡萄糖≥1．5％),HKⅡ在核周积聚、浓染,呈珠链样;d-α-生育酚预处理后,HKⅡ在核周的积聚变淡。HKⅡ蛋白及mRNA的表达与HKⅡ活性同步。结论d-α-生育酚抑制了高糖对HKⅡ活性、蛋白及mRNA表达上调的作用,并减少HPMC对葡萄糖的净利用;可能成为增加腹膜透析超滤的手段之一。     

人腹膜间皮细胞的体外培养

目的:建立简便有效的人腹膜间皮细胞(HPMC)的体外培养方法.方法:采用0.2%胰蛋白酶-0.02?TANa2消化人大网膜组织,细胞悬液经100目筛网滤过后进行培养.用形态学、免疫组化(SP 法)鉴定细胞.结果:分离培养的细胞光镜下呈铺路鹅卵石状.免疫组化鉴定显示角蛋白、波形蛋白抗原阳性,第Ⅷ因子、白细胞CD45抗原阴性,证实培养的细胞的确是HPMC.结论:胰蛋白酶消化法是一种简单实用的分离HPMC的方法.     

人参总皂甙对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤的保护作用

目的 :观察人参总皂甙 (GS)对乳酸盐腹膜透析液 (L -PDS)在体外所致的人类腹膜间皮细胞 (HPMC)活力和增殖抑制的影响。方法 :采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞 ,建立稳定的体外培养模型 ;用乳酸脱氢酶 (LDH)的释放和四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT法 )评估细胞的活性及增殖能力。结果 :2 .5 %和 4.2 5 %葡萄糖L-PDS组与对照组相比HPMC的LDH释放增多 ,且两浓度差异无显著性 ;随L -PDS暴露时间的延长 ,HPMC的存活率逐渐降低 ;GS可以减少LDH的释放 ,提高细胞存活率 (P <0 .0 1) ,并能促进HPMC的增殖 (P <0 .0 5 )。结论 :GS对L-PDS体外所致HPMC活力和细胞增殖的抑制具有一定的保护作用。     

腹膜透析流出液中人腹膜间皮细胞的培养

目的建立从腹膜透析(PD)流出液中培养人腹膜间皮细胞(HPMC)方法。方法从10例PD患者PD流出液标本中收集HPMC并在体外进行原代培养,采用相差倒置显微镜、扫描电镜和免疫组化染色对培养的细胞进行鉴定。结果8例PD患者流出液中HPMC在体外原代培养成活,经相差倒置显微镜观察原代培养的HPMC呈典型的铺路石样外观;免疫组化显示培养的HPMC胞浆角蛋白、波形蛋白表达均阳性,白细胞CD45抗原阴性;扫描电镜见培养细胞表面有许多长短不一呈丝状的微绒毛。结论成功建立了从PD流出液中HPMC原代培养方法,该方法将对进一步PD的研究提供实验基础。     

Troglitazone对人腹膜间皮细胞TGF-β1和纤维连接蛋白表达的影响

目的:研究过氧化物增生体激活受体γ(PPAR-γ)激动剂troglitazone(曲格列酮,TGZ)对高浓度葡萄糖刺激下体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)中TGF-β1和细胞外基质纤维连接蛋白(Fn)表达的影响.方法:采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型.根据细胞增殖与毒性实验选择troglitazone的最佳浓度15 μmol/L,干预高浓度葡萄糖(30 mmol/L D-葡萄糖)刺激下的人腹膜间皮细胞.采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量检测HPMCs中PPAR-γ,TGF-β1以及Fn的mRNA表达;采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMCs培养液中TGF-β1蛋白质水平;Western印迹检测Fn蛋白质水平.结果:高糖(30 mmol/L D-葡萄糖)刺激可在mRNA和蛋白质水平明显上调HPMCs表达TGF-β1和Fn(P＜0.01),troglitazone干预高糖孵育的HPMCs,可使TGF-β1和FnmRNA和蛋白质的表达明显下调(P＜0.05).结论:Troglitazone能够明显抑制在高糖刺激下的HPMCsTGF-β1和Fn的表达,这可能为临床防治长期腹膜透析患者的腹膜纤维化提供一种较为有效的方法.     

氨基胍对腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性的影响

目的观察氨基胍对腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性的影响，探讨氨基胍对腹膜间皮细胞醛糖还原酶的调节作用。方法采用人的网膜作为细胞来源，胰蛋白酶-EDTA消化法进行人腹膜间皮细胞的分离、培养，间接免疫荧光法对第二代细胞进行鉴定；用生长期细胞进行实验，培养6d后测AR活性；应用紫外分光光度计记录NADPH在340nm处的吸光值测定醛糖还原酶活性。结果实验组氨基胍组醛糖还原酶的活性与对照组比较仅略下降，无显著性差异。结论氨基胍并不能明显地抑制腹膜间皮细胞醛糖还原酶的活性。     

大鼠胰岛β细胞分离与原代培养方法探讨

目的 探索胰岛B细胞分离纯化方法和适宜的原代培养条件.方法 正常Wistar大鼠,胶原酶消化及网筛过滤初步纯化胰岛,双硫腙染色及葡萄糖刺激实验鉴定胰岛及其活性.胰岛以胰蛋白酶和DNA酶消化成单细胞悬液,在2.8 mmol/L葡萄糖条件下,用荧光激活流式细胞分选(FACS)β细胞.免疫组化法及葡萄糖刺激实验鉴定分选的β细胞及其活性,所分选β细胞置于不同浓度葡萄糖和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)50μmol/L浓度的Ham's F-10培养基中培养24 h,观察不同浓度葡萄糖及IBMX对β细胞活性的影响.结果 可获(550±95)个胰岛/只大鼠,活性良好.FACS后,可得约5688个β细胞/只大鼠,回收率(93.69±1.26)%,纯度(85.5±1.24)%.原代培养24 h后,10.0 mmol/L及16.0 mmol/L葡萄糖中β细胞活性较高,死亡和凋亡也较少.结论 胰岛的单细胞悬液,在外界葡萄糖浓度为2.8 mmol/L时可以FACS对β细胞进行分选纯化;原代培养24 h后,在外界葡萄糖浓度10.0～16.0 mmol/L时,β细胞有较高存活率和活性.     

MicroRNA在腹膜透析中的研究进展

腹膜透析是终末期肾病患者的主要治疗方式之一,因有能更好地保护残余肾功能等优势,具有广泛的应用前景。但长期腹膜透析容易出现多种并发症,其中腹膜透析相关性腹膜炎是最常见的并发症之一,反复发生的炎症刺激会加速腹膜纤维化的发展,最终导致超滤衰竭,腹膜透析失败。MicroRNA（miRNA）属于非编码RNA的一种,在炎症及纤维化过程中的作用备受关注,众多miRNA参与了腹膜炎症及纤维化过程。新近研究显示,腹膜透析过程中,多种miRNA的表达谱发生了改变。该文就miRNA在腹膜透析中的研究进展进行综述。     

腹膜转运特性对非糖尿病腹膜透析患者营养状态的影响

目的探讨尿毒症腹膜转运特性对非糖尿病腹膜透析患者营养的影响。方法根据腹膜平衡试验（PET），将31例腹膜透析患者腹膜分为低转运（L）、低平均转运（LA）、高平均转运（HA）、高转运（n）4种类型，比较4种转运特性腹膜透析患者腹透6个月后血清白蛋白（ALB）、血清转铁蛋白（TF）、血红蛋白（Hb）、主观综合性营养评倘法（SGA）。结果高转运腹膜组与低转运、低平均转运、高平均转运组比较，ALB、TF、Hb、SGA均显著降低（P〈0．05）；高转运腹膜组与低转运组比较，ALB、TF、、SGA均显著降低（P〈0．05）。结论在溶质清除相同的条件下，腹膜转运性高的腹透患者营养状况明显差于腹膜转运低的腹透患者。     

腹膜转运功能对连续性不卧床腹膜透析患者营养状况的影响

目的：探讨腹膜转运功能对连续性不卧床腹膜透析（ＣＡＰＤ）患者营养状况的影响。方法：将４６例ＣＡＰＤ患者按腹膜平衡试验（ＰＥＴ）结果分为Ⅰ组（高和较高转运率）和Ⅱ组（较低转运率），比较其尿素ＫＴ／Ｖ、蛋白分解率（ＰＣＲ）血清白蛋白（Ａｌｂ）、前清蛋白（ＰＡ）和转铁蛋白（Ｔｆ）水平。结果：两组在残余肾功能（ＲＲＦ）透析剂量和尿素ＫＴ／Ｖ方面无差异，Ⅰ组血清Ａｌｂ和ＰＣＲ显著低于Ⅱ组。结论：腹膜透性较高者更易发生蛋白营养不良。     

腹膜透析管置入灌洗引流治疗以累积腹膜腔为主要表现的重症急性胰腺炎

目的探讨腹膜透析管置入灌洗引流治疗以累积腹膜腔为主要表现的重症胰腺炎的效果。方法回顾性分析84例以累积腹膜腔为主要表现的重症胰腺炎病例,治疗以腹膜透析管置入灌洗引流为主。结果全部患者顺利渡过急性炎症反应期,出现重症胰腺炎后期并发症共38例,经后续治疗全部治愈。结论腹膜透析管置入行腹腔灌洗引流能在创伤更小的基础上治疗重症胰腺炎,能够顺利地帮助病人渡过急性炎症反应期,值得在临床上推广。     

The Effect of Ligustrazine on Peritoneal Transport in Peritoneal dialysis

In order to investigate the effect of ligustrazine (Lig)i.p.on peritoneal permeability in peritoneal dialysis and its side effects,creatinine was given intravenously and continuously to maintain the high plasma creatinine level.All the rabbits were divided into three groups:normal control group (goup A),group B treated with 0.12% Lig and group C treated with 0.24% Lig.The peritoneal dialysis of all rabbits lasted 2h.The plasma and dialysate levels of glucose,protein and creatining were observed immediate,30min,60min,90min,120min after dialysis.Creastinine dialysate/plasma ratio (D/P),protein D/P ratio,grucose D/Do at different time points after dialysis and creatinine mass transfer area coefficient (MTAC) at 120min were calculated.The structures of peritoneum were observed under optical microscope and electron microscope after continuously intraperitoneal injection of Lig for 14 days.The results showed that the 90-min and 12-min creatinine D/P ratios in the group C were higher than in the group A.The 120-min creatinine MATC in the group C was higher than in the group A.The rabbits treated with Lig did not show significant structure changes of peritoneum and signs of peritoneal irritation.It was suggested that Lig could increase mass transfer ability of peritoneum without significant side effects.     

腹膜细胞刷检在恶性腹水中的诊断价值

目的：评述腹膜细胞刷刷检在良、恶性腹水鉴别诊断中的应用价值。方法：用自制腹膜细胞刷对２８例有中等量以上恶性腹水患者作腹膜刷检，并与腹水常规脱落细胞学检查、腹膜活检等方法进行比较。结果：腹水常规脱落细胞学检查肿瘤细胞的阳性率为４２．９％，腹膜病理活检４６．４％，腹膜刷检８２．１％；腹膜活检后腹水脱落细胞学检查肿瘤细胞的阳性率为６４．３％，腹膜刷检后８５．７％；腹膜活检和腹膜刷检同时进行后腹水脱落细胞     

罗格列酮对大鼠腹膜透析相关性腹膜纤维化的影响

目的观察罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)对腹膜透析所致腹膜纤维化的影响。方法 50只SD大鼠随机分为6组:空白对照组(n=5)、生理盐水(NS)组、模型组、二甲亚砜(DMSO)组、低浓度RGZ组、高浓度RGZ组(后5组n=9)。除空白对照组外其余大鼠均置入腹透管,除空白组和NS组外其余组均采用高糖腹膜透析液+红霉素制作慢性腹膜透析无菌性腹膜纤维化的大鼠模型。DMSO组、低浓度RGZ组、高浓度RGZ组分别采用DMSO、1.5mg/kg RGZ、15mg/kg RGZ治疗。透析5周后行1h腹膜平衡试验,检测血糖及血脂,计算超滤量(UF)、初始腹透液与透出液葡萄糖比值(D1/D0)、透出液与血浆尿素氮比值(D/Purea);处死大鼠,取壁层腹膜行H-E及Masson染色,观察腹膜形态改变,半定量计算腹膜单位面积血管数及炎症细胞数;免疫组化检测腹膜转化生长因子(TGF)-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况。结果与空白对照组相比,模型组和DMSO组间皮下基质增厚,血管增生及炎症细胞浸润增加(P<0.05);TGF-β1、α-SMA表达水平增高(P<0.05);RGZ能改善上述病理改变,下调TGF-β1、α-SMA表达(P<0.05);与空白对照组比较,NS组、模型组、DMSO组、低浓度RGZ组及高浓度RGZ组的超滤量和D1/D0减少,D/Purea增加(P<0.05),其中以DMSO组及模型组改变最为显著。两种剂量RGZ间差异无统计学意义(P>0.05)。结论在大鼠腹膜透析模型中加用罗格列酮能有效保护腹膜功能,抑制腹膜纤维化。     

细胞因子在腹膜透析腹膜纤维化中的作用

腹膜透析是肾替代治疗的主要手段之一,虽然腹膜透析的技术不断改进,但仍有一半以上的维持性腹膜透析患者在5年内退出治疗。主要原因是腹膜纤维化。在腹膜纤维化的发生发展中,既有损害性细胞因子的参与,保护性细胞因子的对抗。本文就细胞因子在腹膜纤维化中的作用进行综述。     

腹膜休息对腹膜液体转运功能的影响

目的研究腹膜休息在持续性不卧床腹膜透析(CAPD)患者中的作用。方法对超滤功能较差的腹透患者,临时改用日间不卧床持续性腹膜透析(DAPD),夜间空腹的透析处方,以使腹膜得到整夜的休息。所有腹膜透析患者都被告知详细记录透析换液,以便评估腹膜静息前后的腹膜流体转运功能。结果本研究入组7例CAPD患者。腹膜休息后的超滤量在存腹3h后较腹膜休息前提高,这种改变在存腹第10h时出现有统计学意义的升高(P<0.05)。患者在腹膜休息前日葡萄糖暴露量、24h透析液/血浆肌酐比值较休息后显著降低(P<0.01或0.05)。腹膜液体吸收率也在腹膜休息后显著降低(P<0.01)。结论腹膜休息可以提高CAPD患者的超滤功能并且降低高渗性透析液的使用。腹膜休息降低了腹膜溶质转运率和腹膜液体重吸收率,使患者的腹膜超滤功能得到恢复。     

舒洛地特对腹膜透析大鼠腹膜结构和功能的作用

目的观察舒洛地特对慢性腹膜透析大鼠腹膜结构和功能的作用。方法 36只SD雄性大鼠随机分为4组:空白对照组(n=6)、模型组(n=10)、低剂量[10 mg/(kg.d)]舒洛地特组(n=10)、高剂量[20 mg/(kg.d)]舒洛地特组(n=10)。透析8周后行1 h腹膜平衡试验(PET);使用全自动生化分析仪测定1 h腹膜平衡试验透出液中尿素氮(Durea)、透出液中总蛋白(Dtp)、初始腹透液葡萄糖浓度(D0)、透出液葡萄糖浓度(D1)、血浆尿素氮(Purea)及血浆总蛋白(Ptp),并计算D/Purea(说明腹膜对尿素氮清除效率)、D/Ptp(评估腹膜透析液中总蛋白丢失情况)、D1/D0(表示腹透超滤的能力)。取壁层腹膜行H-E及Masson染色观察腹膜结构变化,半定量计算腹膜厚度、腹膜单位面积血管及炎症细胞数;计算腹透液中白细胞数;ELISA法检测腹透液MCP-1及TNF-α水平;免疫组化检测壁层腹膜TGF-β1表达情况。结果与对照组相比,长期腹透大鼠腹膜间皮细胞减少,间皮下基质增厚,炎症细胞增多,血管增生明显(P<0.05),腹膜超滤量和D1/D0减少,D/Purea及D/Ptp增加(P<0.05),腹透液中白细胞数、MCP-1及TNF-α水平上调(P<0.05),脏层腹膜TGF-β1表达上调;给予舒洛地特干预后腹膜结构改变减轻,腹膜组织炎症细胞浸润和血管增生减少,腹膜功能改善,腹透液MCP-1及TNF-α水平下调(P<0.05),脏层腹膜TGF-β1表达下调。结论舒洛地特可能通过抑制腹膜慢性炎症来达到抑制腹膜纤维化及改善腹膜功能的作用。