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1.
目的 在2型糖尿病肾病(DN)白蛋白尿易感基因定位的基础上,进一步筛选白蛋白尿易感基因位点(UA-1)区域附近的候选基因.方法 提取20周龄雄性KK/Ta(n=3)和BALB/c (n=2)小鼠肾脏总RNA,应用Affymetrix Murine Genome U74Av2基因芯片检测肾脏基因表达谱.选择UA-1区域的差异表达基因多配体蛋白聚糖4(syndecan-4),竞争性RT-PCR验证基因芯片的结果.提取KK/Ta、BALB/c小鼠的基因组DNA,进行syndecan-4基因编码区和启动子区域的序列分析.结果 在2型糖尿病KK/Ta小鼠UA-1区域附近存在着约10个差异表达基因.其中syndecan-4在20周龄KK/Ta小鼠肾脏中的表达上调,为BALB/c小鼠的26.1倍.在syndecan-4基因编码区存在2个基因多态性,分别为A93C和T216C多态性,2者均为同义突变.在syndecan-4基因启动子区域存在3个基因多态性,分别为-T263C、-T396C 与-G669A多态性.TATA框位于转录起始位点上游321 bp处,-T263C处恰好为转录因子Clox 的结合位点.结论 syndecan-4基因位于2型糖尿病UA-1附近区域,在20周龄KK/Ta小鼠肾脏中的表达明显上调,是DN的候选基因.syndecan-4启动子处的基因多态性可能为其差异表达的原因. 相似文献
2.
目的研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal me-sothelial cells,RPMC)白细胞介素15(interleukin-15,IL-15)、IL-6及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的影响。方法胰蛋白酶法行RPMC的原代培养和传代,经鉴定第3代用于试验。分组:①正常对照组;②LPS组:不同浓度LPS组(1、10、100mg/L)分别作用6h和12h;③不同时间组:10mg/L LPS分别作用于RPMC3、6、12、24h。实时定量PCR法测IL-15mRNA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中IL-15和IL-6的表达;硫代巴比妥法测MDA。结果 LPS可刺激RPMC的IL-15mRNA及蛋白的表达增高且在12h内呈时间剂量依赖性(P<0.05);LPS诱导RPMC IL-6的蛋白表达增高(P<0.05);LPS诱导RPMC MDA的含量表达增高且呈浓度依赖(P<0.05)。结论 IL-15作为炎症因子参与了腹膜透析相关性腹膜炎的病理过程。LPS可上调RPMC IL-15、IL-6和MDA的表达,导致腹膜炎症及氧化应激。 相似文献
3.
目的观察高糖、脂多糖(LPS)单独及联合作用对大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)中骨桥蛋白(OPN)的表达及其所致纤维化的影响。方法将培养的RPMC分为正常对照组,不同浓度葡萄糖组(1.5%,2.5%,4.25%,24 h),高糖(2.5%)作用不同时间组(8,12,24,34,48 h),不同浓度LPS组(50,100μg/mL),LPS(50μg/mL)作用不同时间组(8,12,24,34,48 h)及联合作用组(2.5%葡萄糖+LPS 50μg/mL,24 h)。采用细胞免疫组织化学法检测OPN在RPMC内的表达情况,Real-time RT-PCR技术检测OPN和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达。结果高糖、LPS单独及联合作用均可刺激RPMC的OPN表达增加,呈剂量及时间依赖性,2者联合作用时OPN表达量较高糖、LPS单独作用时增高,差异有统计学意义(P<0.05)。高糖、LPS单独及联合作用均可导致TGF-β1表达增加,作用8 h时表达水平升高,12 h降低,24 h达到高峰,48 h仍存在,与0 h组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论高糖及LPS通过上调OPN的表达引起腹膜损伤,导致腹膜纤维化,2者联合作用时通过影响OPN的表达加速了腹膜透析合并腹膜炎过程中腹膜纤维化的病理进程。 相似文献
4.
5.
目的:观察脂多糖对大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)中骨桥蛋白(OPN)表达的影响;观察乌司他丁(ulinastatin)作用下RPMC的OPN细胞分布及mRNA表达的影响。方法:胰蛋白酶法行RPMC的原代培养和传代,经鉴定第3代细胞融合至80%时分组。正常对照组:不同浓度LPS(50,100μg/ml)组;50μg/mlLPS作用不同时间(8,12,24,34,48h)组;乌司他丁组:(160,320,640U/ml)与LPS50mg/L作用24h,RealTime-RT-PCR技术检测骨桥蛋白(OPN)、TGF-β1mRNA的表达。结果:LPS可刺激RPMC的骨桥蛋白表达显著增加,呈剂量、时间依赖性(P〈0.05);乌司他丁可降低LPS引起的RPMC中的骨桥蛋白表达,呈剂量依赖性(P〈0.05)。结论:脂多糖通过上调骨桥蛋白的表达,引起腹膜损伤导致腹膜纤维化,乌司他丁可以一定程度抑制骨桥蛋白引起的腹膜纤维化过程。 相似文献
6.
目的研究高糖对人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)糖萼组成成分透明质酸(hyaluronic acid,HA)、核心蛋白聚糖(decorin,DCN)和炎症及纤维化因子(白细胞介素6,interleukin-6,IL-6);转化生长因子-β1,transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响,以及观察舒洛地特(sulodexide,SLX)对上述因子表达的影响。方法将HPMCs随机分为以下各组:1.对照组;2.高糖组:(1)不同浓度组:1.5%,2.5%,4.25%葡萄糖作用48h;(2)不同时间组:2.5%葡萄糖作用不同时间(0,6,12,24,48,72h);3.高糖+SLX组:2.5%高糖+不同浓度舒洛地特(50μg/ml,400μg/ml,800μg/ml,1200μg/ml)作用48h。ELISA法检测各组上清液中HA、DCN、IL-6及TGF-β1的蛋白表达情况。结果 1.与对照组相比,不同浓度的高糖作用下HPMCs HA表达增多[(172.074±3.223)pg/ml比(147.000±1.667)pg/ml,F=20.410,P=0.036],DCN表达增多[(2.435±0.150)ng/ml比(1.021±0.138)ng/ml,F=219.555,P0.001],IL-6表达增多[(67.981±1.655ng/l)比(45.637±1.143ng/l),F=160.674,P0.001],TGF-β1表达增多[(204.691±2.829)ng/l比(112.716±7.484)ng/l,F=1692.284,P0.001];不同时间的高糖作用下HPMCs HA表达增多[(205.986±2.746)pg/ml比(147.000±1.667)pg/ml,F=1225.533,P0.001],DCN表达增多[(1.422±0.134)ng/ml比(1.021±0.138)ng/ml,F=112.124,P=0.001],IL-6表达增多[(68.078±2.944)ng/l比(45.637±1.143)ng/l,F=69.690,P0.001],TGF-β1表达增多[(194.816±1.854)ng/l比(112.716±7.484)ng/l,F=1160.819,P0.001]。2.与高糖组相比,SLX作用后能明显上调HA[(196.119±2.260)pg/ml比(172.074±3.223)pg/ml,F=120.845,P=0.013]和DCN[(3.227±0.067)ng/ml比(2.859±0.175)ng/ml,F=15.413,P=0.008]的表达,明显下调IL-6[(67.927±2.467)ng/l比(75.371±2.386)ng/l,F=50.643,P=0.002]及TGF-β1[(232.778±31.029)ng/l比(292.347±3.857)ng/l,F=21.458,P=0.002]的表达。结论 HPMCs存在HA和DCN的表达;高糖刺激可以反应性上调HPMCs的HA和DCN表达,但其表达不足以保护腹膜,而补充舒洛地特后HA和DCN表达显著上调,具有修复受损糖萼的作用;高糖可以显著上调IL-6及TGF-β1的表达,舒洛地特可以抑制高糖刺激下HPMCs IL-6和TGF-β1表达,从而抑制炎症和纤维化,保护腹膜功能。 相似文献
7.
目的 观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ配体吡格列酮对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)合成细胞外基质的作用以及调节机制。 方法 胰蛋白酶消化法分离培养RPMC。随机分为正常对照组、高糖组(2.5%葡萄糖)、吡格列酮干预组(10 μmol/L、20 μmol/L+2.5%葡萄糖)、二硫氨基甲酸吡咯烷干预组(PDTC,NF-κB抑制剂,25 μmol/L、50 μmol/L+2.5%葡萄糖)、姜黄素干预组[活化蛋白1(AP-1)抑制剂,15 μmol/L、30 μmol/L+2.5%葡萄糖]。RT-PCR方法检测纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)、纤溶酶原激活抑制因子1(PAI-1)、c-fos、c-jun mRNA表达。ELISA方法检测细胞上清液中FN、COLⅠ和PAI-1蛋白水平。Western印迹方法检测IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、NF-κBp65、磷酸化NF-κBp65 (p-p65)蛋白表达。 结果 常规培养的腹膜间皮细胞表达基础量的FN、COLⅠ和PAI-1,高糖显著上调其蛋白及mRNA表达(P < 0.01)。吡格列酮预处理后,高糖诱导的FN、COLⅠ和PAI-1蛋白及mRNA表达显著低于高糖组(P < 0.01)。高糖作用后,磷酸化IκBα和NF-κBp65水平显著增高,c-fos、c-jun mRNA表达增加,与对照组差异有统计学意义(P < 0.01)。PDTC预处理后,高糖诱导RPMC的FN和PAI-1蛋白水平降低(P < 0.01),COLⅠ蛋白表达无明显变化。AP-1抑制剂姜黄素预处理后,高糖诱导的RPMC FN、COLⅠ和PAI-1蛋白水平均显著降低,与对照组差异有统计学意义(P < 0.01)。吡格列酮抑制高糖条件下磷酸化IκBα和NF-κB p65水平,抑制c-fos、c-jun mRNA表达(P < 0.05或P < 0.01)。 结论 NF-κB和AP-1信号通路参与高糖条件下RPMC的FN、COLⅠ和PAI-1表达的调节。吡格列酮通过NF-κB 和AP-1途径下调高糖诱导的RPMC的FN、 COLⅠ和PAI-1的表达,从而发挥抗纤维化作用。 相似文献
8.
应用竞争性放射免疫法测定90例非感染性肾脏疾病患乾尿分泌性免疫性蛋白A(S-IgA)的含量,证明S-IgA含量在非感染性肾脏疾病患者尿中明显增高,与正常值比较差异十分显著(P<0.01)。 相似文献
9.
己糖激酶在原代培养腹膜间皮细胞的表达 总被引:3,自引:1,他引:2
目的 :探讨大鼠腹膜间皮细胞 (peritonealmesothelialcell,PMC)的原代培养方法及其己糖激酶 (hexoki nase ,HK)的表达。方法 :胰蛋白酶 EDTA消化法进行PMC的分离、培养 ,6 磷酸葡萄糖脱氢酶 (G6PDH)偶联比色法检测其HK总活性。结果 :PMC的原代及传代细胞 5~ 8d即可达到融合 ,其HK的基础活性为 (4.80± 0 .39)U/g蛋白。结论 :改良的胰蛋白酶消化法是进行PMC原代培养的一种可靠的实验方法。PMC有较强的HK活性 ,参与了腹膜透析时对葡萄糖吸收和利用方面的调节 ,可能对透析超滤有较大的影响 相似文献
10.
目的 研究脂多糖(LPS)对大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)维生素D受体(VDR)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,从而为1,25(OH)2D3在腹膜透析相关腹膜炎中的应用提供理论依据。 方法 胰蛋白酶消化法原代培养腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组:(1)正常对照组;(2)脂多糖组:不同浓度的脂多糖(1、10、100 mg/L)分别作用6 h;10 mg/L脂多糖分别作用2、6、12 h;(3)1,25(OH)2D3作用组:10 mg/L脂多糖预孵育2 h后,加1,25(OH)2D3(10-8 mol/L、10-7 mol/L、10-6 mol/L)再作用6 h。RT-PCR法检测VDR mRNA的表达;Western印迹法检测VDR蛋白表达;ELISA法检测上清液TNF-α、TGF-β1的表达。 结果 与对照组相比,LPS组RPMC VDR mRNA和蛋白表达均显著下调(均P < 0.05)。与LPS组相比,1,25(OH)2D3组VDR mRNA和蛋白表达均显著上调(均P < 0.01)。LPS组上清液中TNF-α、TGF-β1浓度均显著高于对照组(均P < 0.01);1,25(OH)2D3组上清液中TNF-α、TGF-β1浓度均显著低于LPS组(均P < 0.01)。 结论 LPS能下调RPMC VDR mRNA和蛋白的表达,上调TNF-α、TGF-β1表达。1,25(OH)2D3可逆转LPS的作用,上调RPMC VDR mRNA和蛋白的表达,并下调TNF-α、TGF-β1表达。VDR对腹膜透析相关腹膜炎具有一定的保护作用,并具有抑制腹膜纤维化的作用。 相似文献