曲格列酮诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的观察过氧化物酶体增殖激活受体γ（PPAR-γ）的配体曲格列酮（troglitazone,TGZ）对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,SGC-7901细胞分为对照组和曲格列酮不同浓度（5、10、15、20μmol／L）加药组,应用流武细胞仪检测曲格列酮不同浓度对胃癌SGC-7901细胞凋亡率的影响;RT—PCR及Western blot方法观察PPARγ、p53的mRNA及蛋白表达变化。结果曲格列酮可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,凋亡率与浓度呈正相关;曲格列酮干预后,p53的mRNA及蛋白在胃癌SGC-7901细胞中表达上调,而PPARγ的mRNA及蛋白表达水平无明显改变。结论曲格列酮依赖激活PPARγ能在体外诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能是通过上调抑癌基因p53表达而实现,提示PPA即可能是胃癌治疗的一个新分子靶点。     

曲格列酮体外对肝癌细胞HepG2生长及β-catenin信号通路的影响

目的:观察过氧化物酶体增长因子活化受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)γ激动剂--曲格列酮体外对肝癌细胞生长及β-catenin信号通路的影响,初步探讨其可能的抗肝癌机制.方法:体外培养肝癌细胞HepG2,以MTT法测定不同浓度曲格列酮(5、10、20、40、80、100μm0l/L)作用120 h后细胞存活率,并与正常培养细胞(对照组)作比较;应用流式细胞仪分析曲格列酮(10μmol/L)处理组及对照组HepG2细胞周期;免疫细胞化学法观察曲格列酮(10μmol/L)处理组及对照组HepG2细胞β-catenin的亚细胞定位;Western印迹法检测各自cyclin D1和c-myc蛋白的表达.结果:5、10、20、40、80、100μmol/L曲格列酮作用120 h后,HepG2细胞存活率分别为(96.8±1.2)%、(53.4±1.2)%、(42.3±1.2)%、(31.4±1.0)%、(13.6±0.8)%和(9.6±0.7)%,组间有统计学差异(P＜0.05).与对照组相比,10 μmol/L曲格列酮处理组细胞G0/G1期细胞比例增加[(67.6±0.5)%vs(56.3±1.5)%,P＜0.01],而S期细胞比例减少[(20.6±0.5)%vs(25±1.0)%,P＜0.01)].对照组细胞β-catenin亚细胞定位于细胞核,而曲格列酮处理组定位于细胞质;Western印迹结果表明曲格列酮处理组细胞c-myc和cyclin D1蛋白表达低于对照组.结论:曲格列酮体外能抑制肝癌细胞生长,且随着浓度的增加,其抑制作用逐渐增强;其抑制作用可能与调控β-catenin信号通路,调节相关靶蛋白表达有关.     

PPARγ激动剂对肝癌细胞HepG2增殖的影响及其机制探讨

目的 观察过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮体外抑制人肝癌细胞HepG2生长并探讨其作用机制.方法 MTT检测不同浓度罗格列酮(10、30、50、100 μmol/L)对HepG2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,免疫细胞化学半定量检测PPARγ、PTEN、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达,TUNEL和透射电镜观察HepG2细胞凋亡的形态学改变.结果 PPARγ经其配体罗格列酮激活后,可明显抑制HepG2细胞的生长并呈剂量和时间依赖关系;HepG2细胞周期出现G0/G1期停滞;PTEN、Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达水平下降,Caspase-3被激活.TUNEL和透射电镜均可在罗格列酮组观察到凋亡细胞.结论 PPARγ激动剂罗格列酮可抑制肝癌细胞HepG2的生长,其主要作用机制之一是促进细胞凋亡,这可能与调节Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达有关.     

曲格列酮诱导肾癌细胞的凋亡

目的:探讨过氧化物酶增殖体激活的受体γ(PPAR-γ)在肾癌细胞中的表达及PPAR-γ配体曲格列酮对肾癌细胞凋亡的影响.方法:通过RT-PCR、Western blot方法,从mRNA及蛋白水平检测PPAR-γ在肾癌细胞株786-0、A498及正常肾来源的细胞株HK-2、HMCC中的表达,DNA梯度电泳、荧光显微镜观察曲格列酮诱导肾癌细胞凋亡的现象,Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白在肾癌细胞凋亡过程中的变化.结果:PPAR-γ在肾癌细胞株中的表达高于正常肾来源的细胞株,50 μmol/L曲格列酮可以诱导肾癌细胞凋亡,伴随有Bcl-2表达的减少及Bax表达的增加.结论:曲格列酮可以诱导肾癌细胞的凋亡,PPAR-γ配体有可能成为新的治疗肾细胞癌的药物.     

曲格列酮上调PPAR-γ抑制宫颈癌HeLa细胞ICAM-1和MMP-9表达

目的探讨PPARγ激动剂曲格列酮对于宫颈癌HeLa细胞增殖及ICAM-1和MMP-9表达的影响。方法使用曲格列酮和/
或GW9662（PPARγ拮抗剂）对HeLa细胞进行干预。在不同时间点（0、24、48和72 h）使用MTT法对HeLa细胞活性进行测定。
在干预48 h后,使用RT-PCR和western blot对HeLa细胞ICAM-1、MMP-9 和PPARγ mRNA和蛋白进行测定。并使用EMSA对
HeLa细胞PPARγ DNA结合能力（核转录水平）进行分析。结果GW9662组、曲格列酮+GW9662组与空白对照组相比较各时
间点细胞活性未见显著统计学差异（P>0.05）;但曲格列酮组与空白对照组相比较细胞活性呈时间依赖性降低,差异有显著统计
学意义（P均<0.05）。干预48 h 后,曲格列酮组ICAM-1 和MMP-9 mRNA和蛋白表达较空白对照组明显降低（P均<0.05）;但
GW9662组和曲格列酮+GW9662组ICAM-1和MMP-9 mRNA和蛋白表达水平与空白对照组比较未见显著统计学差异（P均>
0.05）。曲格列酮干预后HeLa细胞PPARγ mRNA和蛋白表达水平和PPARγ核转位水平均显著增加,差异有显著统计学意义（P
均<0.05）。结论本实验表明曲格列酮可以通过促进PPARγ表达和PPARγ的核转录水平下调HeLa细胞ICAM-1和MMP-9的合
成,抑制HeLa细胞的增殖。
     

曲格列酮在体内和体外抑制肝细胞癌的生长

已有研究表明,过氧化物酶体增殖因子-活性受体γ(PPARγ)参与了癌细胞的分化和生长抑制。作者评估了通过曲格列酮激活PPARγ对肝癌(H CC)细胞生长、增殖和凋亡在体内和体外的影响,并研究了PPARγ活化与环氧合酶-2(COX-2)表达的关系。分别培养人H CC细胞系H uh7和H ep3B于有或无曲格列酮的培养液中。通过W ST-1测定法确定细胞生长状况,细胞周期分析法和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫印迹法确定细胞增殖,流式细胞仪和TUNEL染色确定细胞凋亡。将H uh7细胞植入裸鼠皮下后监测肿瘤生长状况,并确定用曲格列酮治疗的影响。与组织学正常…     

配体活化的过氧化物酶体增殖物激活受体γ诱导结肠癌细胞凋亡

目的:探讨配体活化的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)抑制结肠癌细胞生长,及诱导细胞凋亡的作用。方法:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫杂交(Western-blot)法测定PPARγ在SW480和LS174T结肠癌细胞中的表达。MTT法检测PPARγ激动剂15脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)和吡格列酮(Pioglita-zone,PGZ)对结肠癌细胞生长的抑制作用。流式细胞术检测细胞凋亡率,电镜观察凋亡细胞形态。免疫细胞化学法检测凋亡相关分子Fas、bcl-XL蛋白表达的变化。结果:PPARγ在SW480和LS174T结肠癌细胞株中均有表达,15d-PGJ2和PGZ对两种细胞的生长均有抑制作用,并呈剂量依赖效应。15d-PGJ2和PGZ显著诱导结肠癌细胞凋亡率增加(P<0.05或P<0.01),电镜显示凋亡细胞特有的形态学改变。免疫细胞化学结果显示,PPARγ激动剂诱导Fas蛋白表达明显增多(P<0.01),bcl-XL蛋白表达显著降低(P<0.01),该改变与凋亡程度呈正相关。结论:PPARγ经配体活化后,通过诱导凋亡抑制结肠癌细胞增殖,该作用可能与促凋亡基因Fas抗原表达上调以及凋亡抑制基因bcl-XL表达下调相关。     

siRNA沉默HBx基因对肝癌细胞YKL-40蛋白表达影响的研究

目的 观察HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒X(HBx)基因沉默对酿酒酵母YKL-40蛋白表达的影响.方法 构建靶向HBx基因的siRNA真核表达载体pRNAT-HBx和阴性对照质粒,同时设空白对照组,采用Lipofectinamine 2000脂质体转染法转染人肝癌细胞系HepG2.2.15细胞.采用RT-PCR检测各组中HBx和YKL-40的mRNA水平,Western blot、细胞免疫荧光检测各组中HBx蛋白和YKL-40蛋白的表达.结果 pRNAT-HBx明显抑制HepG2.2.15细胞中HBx基因的表达,同时YKL-40的mRNA和细胞内蛋白表达水平也随之相应下调.结论 抑制HBx基因的表达能下调HepG2.2.15细胞中YKL-40蛋白的表达,提示HBx蛋白对YKL-40蛋白的表达具有一定的激活作用.     

罗格列酮抗人HL-60细胞增生作用及其作用机制

目的 探讨罗格列酮(rosiglitazone)对人急性髓性白血病细胞系(HL-60)细胞增生抑制及作用机制.方法 MTT法观察对HL-60细胞增生的影响,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡率,免疫组化和Western blot检测分析PPARγ、Bax、bcl-2、NF-κB蛋白表达状况.结果 罗格列酮对HL-60细胞具有明显生长抑制效应,抑制率最高达77%,且呈时间-效应、剂量-效应依赖关系;流式细胞检测结果提示:10～100μmol/L罗格列酮能抑制HL-60细胞增生;50、100μmol/L罗格列酮能促进HL-60细胞凋亡.免疫组化和Western blot检测发现:HL-60细胞表达PPARγ;罗格列酮作用HL-60细胞后,发生核转位现象; Bax表达增加, bcl-2 、NF-κB的表达减少.用PPARγ阻断剂GW9662作用于HL-60 细胞后PPARγ、Bax、bcl-2、NF-κB蛋白表达无变化.结论 罗格列酮能抑制HL-60细胞增生,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与激活PPARγ途径,上调Bax下调Bcl-2 、NF-κB有关.     

PPAR γ配体抑制气道肌纤维母细胞分化的作用机制

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)配体对气道肌纤维母细胞分化和转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad3信号传导途径的影响.方法 小鼠气道纤维母细胞原代培养,并于特定时间加入TGF-β1(5 mg/L)或PPARγ配体-罗格列酮(10mmol/L)或PPARγ抑制剂(10mmol/L)处理后,用Western blot检测肌纤维母细胞的标志物-α平滑肌肌动蛋白原(αSMA)以及结缔组织基质-纤维结合蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达情况;并采用Western blot、DNA凝胶电泳迁移率检测和免疫细胞化学检测对Smad3蛋白的磷酸化、与DNA结合能力和细胞核转位的影响.结果 罗格列酮能抑制TGF-β1诱导的αSMA的产生,并降低纤维结合蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达;同时抑制Smad3的磷酸化、与DNA的结合能力和细胞核转位.PPARγ配体的抑制剂能够完全消除PPARγ配体对TGF-β1的抑制作用.结论 PPARγ配体能够通过阻断TGF-β1/Smad3信号传导通路,抑制TGF-β1诱导产生的肌纤维母细胞分化和纤维化的细胞效应.     

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞内皮素-1基因表达及肿瘤坏死因子-α分泌的影响

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对经血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响,探讨罗格列酮对动脉粥样硬化过程中分子调控网络的作用。方法:罗格列酮干预AngⅡ处理后的HUVECs,通过RT-PCR、实时定量PCR检测内皮细胞PPARγ、ET-1基因mRNA表达,Western blot检测细胞PPARγ、ET-1前体蛋白、Akt、ERK1/2的表达,ELISA法检测细胞上清中TNF-α含量。结果:AngⅡ可上调HUVEC中PPARγmRNA及蛋白表达量、ET-1mRNA及ET-1前体蛋白表达,TNF-α分泌量呈浓度依赖性增高,ERK1/2的表达量增加;罗格列酮干预后细胞PPARγ表达量明显升高,ET-1表达量明显降低,细胞上清TNF-α含量明显降低,ERK1/2的表达被抑制。Akt的表达没有变化。结论:罗格列酮通过上调PPARγ基因的表达,抑制ERK1/2信号转导途径,影响AngⅡ处理的HUVECs中ET-1基因及其前体蛋白的表达,抑制炎症因子TNF-α的分泌。     

罗格列酮对肝癌细胞增殖的影响

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的配体罗格列酮（RSG）对肝癌细胞增殖的影响。方法：体外培养人肝癌HepG2细胞,应用CCK-8比色法检测不同浓度RSG（25、50、100、200μmol/L）和不同作用时间RSG（24h、48h、72h）对肝癌HepG2细胞增殖的影响;流式细胞仪（FCM）检测细胞周期;实时荧光定量PCR方法分析细胞周期蛋白CyclinD1的mRNA表达变化;免疫细胞化学法分析CyclinD1的蛋白表达变化。结果：RSG抑制肝癌HepG2细胞增殖,CCK-8比色法显示增殖抑制率与RSG的浓度-时间呈正相关;FCM检测发现,RSG使肝癌HepG2细胞的细胞周期被阻滞于G1期,而进入S期的细胞明显减少,且呈浓度依赖;RSG干预后,CyclinD1的mRNA及蛋白表达在肝癌细胞中下调。结论：RSG依赖激活PPARγ途径能在体外抑制肝癌细胞生长,提示PPARγ可能是肝癌治疗的一个新分子靶点。     

PPARγ激活在蛇葡萄素抑制乳腺癌细胞增殖和诱导凋亡中的作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖激活物受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)的激活在蛇葡萄素(ampelopsin,AMP)抑制乳腺癌细胞增殖和诱导细胞增殖凋亡中的作用.方法 以不同浓度AMP(20、40、60、80 μmol/L)分别处理人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞24 h后,荧光素酶报告基因法检测AMP对PPARγ的激活作用,CCK-8检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性.结果 与PPARγ激动剂罗格列酮一样,AMP剂量依赖性地增强报告基因荧光素酶活性,同时显著抑制乳腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡(P＜0.05);Western blot检测结果显示,AMP在显著上调乳腺癌细胞凋亡相关蛋白Bax、PTEN、活化Caspase-3表达的同时下调Bcl4蛋白及Bcl-2/Bax比值;激酶活性检测结果显示,AMP可显著增强Caspase-3激酶活性,以上作用均可被PPARγ特异性拮抗剂GW9662显著削弱.结论 AMP可能是PPARγ的天然激动剂,其通过激活PPARγ信号途径抑制乳腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

HBx基因缺失突变对HBV复制和转录的影响

目的构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,研究HBx缺失对HBV复制和转录的影响。方法以包含HBV全长基因组的野生型质粒pUC-HBV1.0为模板,用定点突变技术构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,并酶切和DNA测序鉴定。用SapⅠ单酶切这两种质粒,获得线性的野生型和HBx缺失突变型HBV基因组,经转染试剂PolyJetTMReagent介导分别瞬时转染到HepG2细胞中。在转染后各时间点Western blot检测HBx蛋白的表达,Southern blot和Real-time PCR同时检测细胞质DNA复制和细胞核cccDNA的合成,Real-time PCR分析定量HBV前基因组RNA(pgRNA)的转录。结果在野生组中可检测到HBx蛋白的表达,而在HBx突变组中HBx蛋白的表达低于Western blot的检测范围。两组中各时间点合成的cccDNA水平无统计学差异(P>0.05)。而在转染后96 hHBx突变组中细胞质DNA的复制和pgRNA的转录都分别比野生组减少50%～70%(P<0.05)。结论 HBx缺失虽然不影响细胞核HBV cccDNA的合成,但是它能下调细胞质HBV DNA的复制和pgRNA的转录。     

吡格列酮对胶质瘤细胞生长的抑制研究

目的:观察PPARγ激动剂吡格列酮(pioglitazone)对胶质瘤细胞生长、迁移、凋亡等生物学行为的影响,并研究其相关分子作用机制。方法:CCK-8法、细胞划痕试验、TUNEL法检测吡格列酮对胶质瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响;Western Blot法检测吡格列酮刺激后对胶质瘤细胞中相关基因表达的影响。结果:吡格列酮抑制胶质瘤细胞生长,降低细胞侵袭能力并诱导其凋亡。吡格列酮能够下调β连环蛋白(β-catenin)、MMP-2蛋白表达,上调Bad、Bax蛋白表达水平。转染β-catenin siRNA后检测发现MMP-2表达降低,Bad、Bax表达上调。结论:吡格列酮抑制胶质瘤细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,具有抗胶质瘤的功效。吡格列酮可能通过β-catenin介导抑制胶质瘤细胞生长。     

Effect of absence of HBx expression on HBV replication and transcription

目的 构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,研究HBx缺失对HBV复制和转录的影响.方法 以包含HBV全长基因组的野生型质粒pUC-HBV1.0为模板,用定点突变技术构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,并酶切和DNA测序鉴定.用Sap Ⅰ单酶切这两种质粒,获得线性的野生型和HBx缺失突变型HBV基因组,经转染试剂PolyJetTM Reagent介导分别瞬时转染到HepG2细胞中.在转染后各时间点Western blot检测HBx蛋白的表达,Southern blot 和Real-time PCR同时检测细胞质DNA复制和细胞核cccDNA的合成,Real-time PCR分析定量HBV前基因组RNA(pgRNA)的转录.结果 在野生组中可检测到HBx蛋白的表达,而在HBx突变组中HBx蛋白的表达低于Western blot的检测范围.两组中各时间点合成的cccDNA水平无统计学差异(P＞0.05).而在转染后96 hHBx突变组中细胞质DNA的复制和pgRNA的转录都分别比野生组减少50％～70％ (P＜0.05).结论 HBx缺失虽然不影响细胞核HBV cccDNA的合成,但是它能下调细胞质HBV DNA的复制和pgRNA的转录.     

HBx通过Wnt/β-catenin通路促进HepG2细胞增殖

目的 探讨Wnt/β-catenin通路在稳定表达乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)的HepG2肝癌细胞增殖中的作用机制. 方法 验证前期构建的HepG2/HBx细胞株能稳定表达HBx蛋白.CCK 8法检测HepG2/HBx,HepG2/mock及HepG2 3组细胞增殖情况,RT-PCR及Western-blot法分别检测上述3种细胞中β-cateninmRNA和蛋白表达水平;最后检测β-catenin选择性抑制剂XAV939(20 μmol/L)对各组细胞增殖水平的影响. 结果 前期构建的HepG2/HBx细胞株能稳定表达HBx蛋白.细胞增殖实验表明,HepG2/HBx组细胞增殖能力强于对照组(P＜0.05).RT-PCR及Western-blot检测结果显示,HepG2/HBx组细胞中β-catenin的mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P＜0.05),而HepG2/mock及HepG2组细胞之问则无明显差别.XAV939能够抑制各组细胞的增殖能力,HepG2/HBx组细胞在加入20 μmol/L XAV939作用后的增殖速度较加入相同浓度DMSO的HepG2/HBx组细胞下降(P＜0.05).XAV939对HepG2/HBx组细胞增殖的抑制强于对照组. 结论 HBx蛋白可以上调肝细胞β-catenin表达,激活Wnt邝-eatenin通路,促进肝癌细胞增殖.选择性β-catenin抑制剂可部分逆转该作用.     

吡格列酮对胃癌细胞生长的影响及其机制的研究

目的 :研究过氧化物酶增殖因子活化受体γ(PPARγ)在人胃癌细胞株MKN 45的表达 ;观察PPARγ激活剂吡格列酮对胃癌细胞生长的影响以及是否引起凋亡基因c myc表达的变化 ,探讨其作用机制。方法 :采用RT PCR法检测PPARγ的表达 ,以不同浓度的吡格列酮干预细胞的生长 ,四甲基偶氮唑盐比色法检测吡格列酮激活剂对胃癌细胞株增殖活性的效应 ,RT PCR法检测药物干预前后c myc基因表达的变化。结果 :PPARγ在胃癌细胞株MKN 45中有表达。 0 .0 1μmol·L- 1 吡格列酮对MKN 45细胞的增殖无明显影响 ;1μmol·L- 1 吡格列酮作用 48h则明显降低MKN 45细胞的存活率 ,与不加吡格列酮的对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,随着药物浓度增加和培养时间延长 ,这一作用愈加明显。随着药物浓度的增加 ,c myc基因的表达呈下降趋势。结论 :PPARγ在胃癌细胞株MKN 45中有表达 ,PPARγ激活剂吡格列酮抑制胃癌细胞的生长 ,且引起c myc基因表达的下调 ,其可能是PPARγ激活剂抑制MKN45细胞生长的机制之一     

曲格列酮对激素不敏感型前列腺癌裸鼠移植瘤生长及凋亡影响

[摘要] 目的 探讨曲格列酮抑制前列腺癌的作用,并进一步了解其作用机制。方法 建立人前列腺癌细胞的裸鼠移植瘤模型,观察曲格列酮对移植瘤生长的抑制作用,并通过TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡,免疫组化检测移植瘤内PPAR-γ、NFκB、Bcl-2蛋白表达。结果 与对照组相比,曲格列酮可明显抑制前列腺癌裸鼠移植瘤生长速度,肿瘤体积、重量明显减少;细胞凋亡明显增加;免疫组化显示NFκB、Bcl-2蛋白表达减少,PPAR-γ蛋白表达显著增多。结论 曲格列酮对前列腺癌的抑制作用是通过PPAR-γ受体激活发挥其抗肿瘤作用,作用机制可能与下调NFκB、Bcl-2的表达,从而导致前列腺癌细胞凋亡有关。     

环氧合酶-2在HL7702/HBx肝细胞增殖中的作用

目的：探讨环氧合酶‐2（COX‐2）在稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）的HL7702肝细胞增殖中的作用及机制。方法 CCK‐8法及克隆形成实验检测HL7702／HBx细胞、HL7702／Mock细胞、HL7702细胞增殖情况,RT‐PCR法检测上述3种细胞中 COX‐2 mRNA 表达水平,Western‐blot 法检测 COX‐2蛋白表达水平, COX‐2选择性抑制剂NS‐398作用于各组细胞后再检测以上各组细胞增殖情况及COX‐2蛋白表达水平的改变。结果细胞增殖实验及克隆形成实验提示,HL7702／HBx 组细胞增殖能力强于 HL7702／Mock和 HL7702组（P＜0．05）,克隆形成率也更高（P＜0．05）。RT‐PCR检测结果提示,相对于 HL7702／Mock细胞和 HL7702组细胞,HL7702／HBx组细胞内COX‐2的mRNA相对表达量明显增高（P＜0．05）。Western‐blot检测提示,HL7702／HBx组细胞中的COX‐2蛋白相对表达水平较高（P＜0．05）,而 HL7702／Mock及 HL7702组细胞之间则无明显差别。NS‐398以时间依赖的方式部分抑制各组细胞的增殖能力,对 HL7702／HBx组细胞增殖的抑制强于其他2组细胞（P＜0．05）。经50μmol／L NS‐398处理后,3组细胞的COX‐2蛋白水平均显著降低,此现象在 HL7702／HBx组细胞中更加明显（P＜0．05）。结论 HBx蛋白可以上调肝细胞COX‐2表达,促进肝细胞增殖,选择性COX‐2抑制剂可部分逆转该作用。