糖蛋白糖链异质性检测对肝病的临床意义

研究糖蛋白糖链的方法一般有糖链结构分析和糖链异质体测定两种。应用植物凝集素亲和交叉免疫电泳检测糖蛋白糖链异质体简便易行,被越来越多的实验室采用。α_1-酸性糖蛋白与ConA的反应性测定结果与肝病并发症的有无及多少有关,有助于临床上判断肝病的严重程度。甲胎蛋白及α_1-抗胰蛋白酶的糖链异质体测定不仅有助于良、恶性肝病的鉴别诊断,而且有助于肝癌的早期发现。     

凝集素辛和电泳—免疫印迹法检测甲胎蛋白变异体

甲胎蛋白 (ＡＦＰ)是一个公认的肝细胞癌 (ＨＣＣ)标记物。然而 ,部分慢性肝炎、肝硬化等良性肝病亦可合成少量ＡＦＰ。由于糖基化过程的差异 ,不同疾病状况下肝细胞分泌的ＡＦＰ在糖链结构上并不相同。为了鉴别ＡＦＰ是产生于恶性肝癌细胞还是良性肝病细胞 ,人们已建立多种ＡＦＰ糖链变异体测定方法。新近的报告表明 ,ＡＦＰ糖链变异体测定还有助于ＨＣＣ复发转移的监测和预后的判断[1,2 ] 。我们在已建立的凝集素亲和免疫电泳自显影法[3 ] 的基础上 ,又建立了操作更简便、敏感度更高的凝集素亲和电泳 免疫印迹法 ,并初步用于良恶性肝病的…     

中期因子转录物及其蛋白在肝细胞癌中的定位与表达研究

目的了解中期因子 (Midkine,MK)转录物及其蛋白产物在肝细胞癌 (hepatocellularcarci noma ,HCC)中的定位情况与表达特点。方法应用原位杂交、免疫组织化学染色等方法对 33例人HCC组织、10例良性肝肿瘤组织及其配对瘤旁肝组织进行了MKmRNA及蛋白的定位与表达研究。结果免疫组织化学结果与原位杂交结果具有一致性 (χ2 =0 5 0 0 ,P >0 0 5 )。MK在HCC组织中呈高表达。MKmRNA及蛋白的阳性信号聚集于HCC细胞质。在HCC细胞外组织中亦有MK表达 ,尤以血管密集处明显。HCCMK表达率与肝癌组织学类型、分级等临床病理学特点无相关性。结论HCC在mRNA和蛋白水平上表达MK增加 ,并可能与促进HCC血管生成有关     

肝内胆管癌的相关危险因素

肝内胆管癌（intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC）又称胆管细胞癌或周围型胆管癌，是来自肝内二级分支以下胆管树上皮的肿瘤。在世界范围内，ICC占原发性肝脏恶性肿瘤的10％～20％，其发病率近年来呈上升趋势。ICC具有发生隐匿、恶性程度高、发展迅速、手术切除率低、临床预后差等特点，严重影响患者的生活质量及生存率。而了解其发病的高危因素对其预防和治疗具有重要意义。近年来对胆管癌的病因研究越来越受到重视，尽管尚未完全明确，但一般认为可能与以下因素有关。     

识别肿瘤血管内皮细胞的嵌合性T细胞受体的构建与鉴定

近年来发展了一种新的肿瘤免疫治疗策略 ,即将能够特异性识别并结合肿瘤细胞表面抗原、或受体的抗体或配体 ,与T细胞受体胞内成分融合成嵌合性 T细胞受体 (chimeric Tcell recepter,c TCR) ,赋予 T细胞持久的、预先决定的新配体识别特异性 ,转染 c TCR的细胞毒 T淋巴细胞 (cytotoxic Tlym phocyte,CTL )选择性地靶向和杀伤肿瘤细胞 [1 ] 。鉴于血管内皮生长因子受体在恶性肿瘤组织和正常组织中表达完全不同 [2 ,3] ,本研究采用重叠延伸技术构建一种能识别肿瘤血管内皮细胞的 c TCR,为进一步研究其功能提供实验基础。1　材料和方法1.…     

腺病毒介导的VEGF启动子-胸苷激酶表达系统对肝癌细胞的选择性杀伤作用

目的:构建携带受血管内皮生长因子(VEGF)启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)的重组腺病毒载体,并探讨该重组腺病毒对体外培养的肝癌细胞的特异性杀伤活性.方法:采用AdEasy System 构建携带受VEGF启动子或巨细胞病毒(CMV)启动子调控tk基因表达的AdVEGF-tk和AdCMV-tk,这两种重组腺病毒载体在293细胞中包装、扩增后,体外感染正常肝细胞系L02和肝癌细胞系HepG2,并用不同浓度的丙氧鸟苷(GCV)处理后以MTT法检测受染细胞的增殖情况.结果:AdVEGF-tk的病毒滴度为1×1010 pfu/ml,AdCMV-tk为5×1010 pfu/ml.L02细胞感染AdVEGF-tk后对GCV的敏感性无明显改变,而HepG2细胞感染AdVEGF-tk后对GCV的敏感性明显增加,在感染复数(MOI)为100并用50 μg/ml GCV处理时,则有90％ 以上HepG2细胞被杀死;而AdCMV-tk可杀死95％ HepG2细胞和80％ 以上L02细胞.结论:VEGF启动子调控的HSV-tk基因表达可特异性地杀死肝癌细胞,同时对正常肝细胞几无影响.     

肿瘤细胞特异性适配子筛选技术及其应用的研究进展

指数富集的配基系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)应用人工合成的随机寡核苷酸文库,通过筛选、分离、富集获得能与各种配体特异结合的寡核苷酸适配子(aptamer)。适配子能特异性结合多肽、蛋白质等多种靶分子,且具有高亲和力。细胞-SELEX技术在SELEX基础上发展起来,它以活细胞为基础,可以在对肿瘤细胞分子标志物一无所知的情况下有效地筛选出肿瘤细胞特异性适配子,是一个潜在的发现肿瘤细胞新标志物的理想策略。肿瘤细胞特异性适配子作为分子探针,在肿瘤基础研究、早期诊断,以及靶向治疗方面展示了巨大的应用前景。目前已筛选出淋巴细胞白血病、肝癌等多种肿瘤细胞的适配子,这些适配子已应用在肿瘤细胞检测,肿瘤早期发现、诊断、游离肿瘤细胞的分选和富集,以及肿瘤细胞靶向药物递送等方面,并且由于适配子适用范围广泛、易于修饰等特点,显示出良好的敏感性、特异性和其他独特的优越性。适配子在肿瘤研究中受到越来越多的关注,在肿瘤检测、诊断和治疗等方面发挥重要作用。     

基质金属蛋白酶与肿瘤上皮间质转化的研究进展

越来越多的研究表明,基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)与肿瘤细胞上皮间质转化(epithelial-mes-enchymal transition,EMT)的关系密切。MMPs是间质细胞表型的特有蛋白之一,既可以作为EMT发生的一个重要标志物,又可以诱发EMT。MMPs诱导肿瘤细胞发生EMT的机制是一个复杂的网络,可能涉及多个信号通路,如介导Rac1b激活ROS释放通路、活化TGF-β通路、降解E-cadherin促使β-catenin入核通路等。鉴于MMPs是诱导EMT促进肿瘤转移的一个关键因素,靶向MMPs已成为临床防治肿瘤的一个新策略。因此MMPs抑制剂则是当前研究热点,目前,多达50多种MMPs抑制剂被列入临床治疗肿瘤的候选药物,但其中大部分的疗效并未得到肯定。缺乏特异性则是其主要原因,故靶向MMP-EMT途径的肿瘤治疗仍然面临着很大的挑战,不仅需要鉴定出涉及肿瘤进展、促进EMT的主要或单一MMP,而且需要开发出具有高度特异性、选择性的MMPs抑制剂。     

重组人中期因子的原核表达、纯化及生物学活性鉴定

目的：表达和纯化具有生物学活性的重组人中期因子蛋白。方法：应用RT—PCR从人肝细胞癌组织总RNA中扩增中期因子cDNA,将其克隆到表达载体pET-24a,在大肠杆菌中诱导表达,经肝素-琼脂糖亲和层析柱纯化,应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western印迹和细胞增殖试验对纯化产物进行分析鉴定。结果：构建的重组质粒pET—HMK能在大肠杆菌中高表达,诱导表达的蛋白主要存在于包涵体中,经肝素琼脂糖柱亲和层析后纯化产物呈单一条带,特异性抗体反应证实是重组人中期因子,细胞增殖试验显示其能育效促进NIH3T3细胞生长,并且具有剂量依赖性。结论：原核系统表达的重组人中期因子蛋白纯品具有刺激细胞增殖的活性。     

原发性肝细胞癌根治性切除术后肝外复发的危险因素分析

目的 探讨影响原发性肝细胞癌(hepatocelluar carcinoma,HCC)根治性切除术后肝外复发的危险因素.方法 回顾性分析行根治性切除的238例HCC患者的临床资料,确定影响术后肝外复发的危险因素.结果 本组患者随访7-78个月,随访中位时间为34个月,32例(13.4%)出现肝外复发.依据单因素分析结果,术前血清甲胎蛋白(α fetoprotein,AFP)>1000 ng/ml、天冬氨酸氨基转移酶>50 IU/L、肝静脉侵犯、周围脏器侵犯、子灶、肿瘤包膜缺失是HCC根治性切除术后肝外复发的危险因素.多因素分析显示血清AFP>1000 ng/ml、肝静脉侵犯、周围脏器侵犯是肝外复发的独立危险因素.结论 HCC根治性切除术后肝外复发与术前血清AFP>1000 ng/ml、肝静脉侵犯、周围脏器侵犯有关.对具有这些危险因素的患者术后应加强随访.