黄芩苷对人牙周膜干细胞生物学特性的影响及作用机制

【摘要】 目的 探讨黄芩苷（baicalin）对人牙周膜干细胞（PDLSCs）生物学特性的影响及其潜在的作用机制。 方法 体外培养人PDLSCs,将对数期的PDLSCs随机分为：control组（DMEM培养液）、baicalin组（1.0 μmol/L baicalin）、baicalin+XAV939组（1.0 μmol/L baicalin和4.0 μmol/L Wnt/β-catenin信号通路特异性抑制剂XAV939）,采用细胞计数法（CCK-8）检测各组细胞增殖情况,黏附实验和Transwell实验分别检测细胞黏附和迁移能力,酶联免疫检测仪检测碱性磷酸酶（ALP）活性,实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测成骨相关基因骨钙蛋白（OCN）,骨桥蛋白（OPN）和成骨细胞转录因子2（RUNX2）的表达,蛋白免疫印迹（Western blot）法分析Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-连环蛋白（β-catenin）、c-myc和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的表达。 结果 与control组相比,baicalin组PDLSCs增殖能力明显升高,黏附和迁移能力均明显提高,ALP活性随时间的延长而升高,OCN、RUNX2和OPN基因的表达量明显升高,β-catenin、c-myc和Cyclin Dl蛋白表达显著上调,差异均具有统计学意义 (P＜0.05)。与baicalin组相比,添加XAV939能够部分逆转baicalin对PDLSCs以上各指标的影响。 结论 黄芩苷能够促进PDLSCs增殖、黏附和迁移能力,且可诱导PDLSCs的成骨分化,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

幽门螺杆菌Tipα通过Wnt/β-catenin通路诱导胃癌细胞EMT

探讨幽门螺杆菌(H.pylori)肿瘤坏死因子α诱导蛋白(Tipα)是否通过Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路诱导人胃癌SGC7901细胞上皮-间质转化(EMT)。设置PBS组、Tipα组和通路抑制剂XAV939预处理组,采用Western blot和免疫荧光观察β-catenin磷酸化和核转位情况;qRT-PCR和Western blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白(ZO-1)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)以及通路下游靶基因(c-myc和cyclinD1)的表达情况;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力。结果显示,Tipα能以时间依赖性方式诱导β-catenin Ser675和Ser552磷酸化和核转位,且下调E-cadherin和ZO-1表达,上调N-cadherin和Vimentin表达(P＜0.01);与PBS相比,Tipα增强c-myc和cyclinD1的表达(P＜0.05)以及细胞的迁移能力(P＜0.05)。XAV939预处理抑制Tipα诱导的SGC7901细胞EMT形成及通路下游靶基因的表达。表明Wnt/β-catenin信号通路参与了Tipα诱导的胃癌细胞EMT形成。     

人肝癌HepG2细胞miR-26a对其活性和Wnt信号通路的作用机制

【摘要】 目的 探讨人肝癌HepG2细胞miR-26a对其活性和Wnt信号通路的作用机制。 方法 将人肝癌细胞株HepG2细胞分为肝癌组（无干预的HepG2细胞）、miR-26a组（HepG2细胞转染miR-26aminmics）（模拟物）、miR-26a-NC组（HepG2细胞转染miR-26a-NC）（空转）,多种方法检测HepG2生物活性,免疫印迹和PCR分别检测β-catenin、Wnt3蛋白水平和mRNA表达。结果 miR-26a-NC组与肝癌组HepG2细胞侵袭数量、HepG2细胞迁移率、HepG2细胞凋亡率,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05）,miR-26a组HepG2细胞侵袭数量、HepG2细胞迁移率、HepG2细胞凋亡率,与miR-26a NC组相比差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-26a-NC组与肝癌组HepG2细胞中β-catenin、Wnt3蛋白水平比较差异无统计学意义(P＞0.05）,miR-26a组HepG2细胞β-catenin、Wnt3蛋白水平与miR-26a-NC组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-26a-NC组与肝癌组HepG2细胞中β-catenin、Wnt3mRNA水平比较差异无统计学意义(P＞0.05）,miR-26a组HepG2细胞β-catenin、Wnt3mRNA水平与miR-26a-NC组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论miR-26a抑制HepG2细胞活性,促使其凋亡,其作用机制可能与抑制β-catenin、Wnt3表达相关。     

Wnt／β-连环蛋白在高糖诱导心肌成纤维细胞增殖中的作用

目的：探讨Wnt／β-连环蛋白（Wnt／[β-catenin）在高糖诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞CFs增殖中的作用。方法：分离新生乳鼠CFs,构建高糖（25mmol／L）诱导CFs增殖细胞模型。采用Wnt／β-catenin抑制剂XAV939以及激动剂SKL2001调控Wnt／8-catenin信号通路。MTr法和细胞计数检测心肌细胞增殖,Westernblot法检测大鼠CFs中β-catenin的表达,实时荧光定量PCR（qPCR）检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果：25mmol／L高糖刺激48h后CFs的细胞增殖显著增加,β-catenin表达显著升高（P〈0．01）,XAV939能抑制CFs增殖（P〈0．01）,降低高糖诱导β-catenin及PCNA的表达（P〈0．01）,SKL2001能对抗XAV939抑制高糖诱导CFs增殖的作用。结论：高糖诱导的CFs增殖可能与激活Wnt／β-catenin途径有关。     

乙肝病毒X蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调控Gankyrin表达

目的：研究乙肝病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein,HBX）对Gankyrin表达水平的影响以及Wnt/β-catenin信号通路在HBX基因调控Gankyrin表达中的作用。方法：HBX腺病毒表达载体（Ad-HBX-GFP）感染转染2种人肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721细胞,Si-HBX分子（Si-HBX oligo）用 LipofectamineTM 2000转染入HepG2.2.15细胞,用RT-PCR和Western blot法检测HBX与Gankyrin的表达情况;β-catenin腺病毒载体转染HepG2、SMMC-7721细胞,用Western blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况;在沉默β-catenin表达的HepG2、SMMC-7721细胞中过表达HBX基因,Western blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况。结果：①HepG2.2.15细胞中Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均高于HepG2细胞（P＜0.05）。②HepG2与SMMC-7721细胞系中Ad-HBX-GFP组Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均高于绿色荧光蛋白腺病毒表达载体（Ad-GFP）组（P＜0.01）。③HepG2.2.15细胞中Si-HBX组Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均低于Si-阴性对照（Si-NC）组（P＜0.01）。④在HepG2与SMMC-7721细胞系中过表达HBX后,Ad-HBX-GFP组β-catenin的蛋白表达水平均高于Ad-GFP组（P＜0.01）。⑤在HepG2与SMMC-7721细胞系中过表达β-catenin后,β-catenin腺病毒表达载体（Ad-β-catenin-GFP）组Gankyrin的蛋白表达水平均高于Ad-GFP组（P＜0.01）。⑥在HepG2与SMMC-7721细胞系中沉默β-catenin后,过表达HBX基因,Si-β-catenin腺病毒表达载体（Ad-si-β-catenin-RFP）组与红色荧光蛋白腺病毒表达载体（Ad-RFP）组相比,Gankyrin的蛋白表达水平未见升高（P＜0.01）。结论：HBX-Wnt/β-catenin-Gankyrin信号转导通路存在与肝癌细胞中,抑制β-catenin的功能可阻遏HBX对Gankyrin的上调作用,本结果将可能为肝癌的治疗提供新的思路。     

姜黄素对转化生长因子-β诱导的A549细胞上皮间质转化的影响

目的研究姜黄素对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的肺腺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)作用及可能机制。方法选取体外培养肺腺癌A549细胞采用MTT法检测姜黄素细胞抑制率。实验分对照组、TGF-β组(TGF-β5ng/m L)、TGF-β+姜黄素组(TGF-β5ng/m L+姜黄素10μmol/L)、姜黄素组(姜黄素10μmol/L)。采用Transwell细胞迁移及浸润实验检测各组的运动迁移和侵袭浸润的能力,免疫荧光和Western印迹法实验检测各组EMT相关标记物E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平与Wnt/β-catenin信号通路相关P-GSK3β、GSK3β、β-catenin、c-Myc蛋白以及Snail蛋白表达水平,同时检测Wnt/β-catenin抑制剂XAV939(1、2、4μmol/L)作用后EMT表达情况。结果 MTT实验表明,10μmol/L姜黄素作用A549细胞24h和48h时,细胞增殖抑制率分别为(12.21±2.60)%和(21.33±3.25)%(P0.05);TGF-β能显著促进细胞的运动迁移和侵袭浸润,下调E-钙黏蛋白的表达,上调波形蛋白及N-钙黏蛋白的表达,伴有P-GSK3β、β-catenin和c-Myc的表达增加以及Snail蛋白表达增加,GSK3β表达无明显变化,而姜黄素可以抑制TGF-β的作用(P0.05)。同时,XAV939对TGF-β诱导的EMT也有抑制作用。结论姜黄素可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来抑制TGF-β诱导的A549细胞上皮间质转化。     

鳖甲煎丸对Wnt信号通路中β-catenin/TCF4复合物活性及信号分子cyclin D1、MMP-2的影响

目的探讨鳖甲煎丸抗肝细胞癌转移侵袭的分子机制。方法使用含鳖甲煎丸药物血清培养肝癌细胞HepG2,48 h后采用
免疫荧光技术检测Wnt/β-catenin通路信号分子β-catenin蛋白表达水平,双荧光素酶检测法检测β-catenin/TCF4复合物的活性,
采用RT-PCR技术检测cyclin D1 与MMP-2 基因转录水平,Western blot 技术检测cyclin D1 与MMP-2 的蛋白表达水平。结果
含鳖甲煎丸药物血清可降低肝癌细胞HepG2细胞核中β-catenin蛋白的表达水平,抑制β-catenin/TCF4复合物的活性,明显下调
cyclin D1、MMP-2的基因转录及其蛋白的表达水平。结论鳖甲煎丸可抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制肝癌细胞HepG2
的生长、粘附和转移。
     

盘龙七片调节Wnt/β-catenin通路对大鼠胫骨骨折愈合的影响

目的 探讨盘龙七片对大鼠胫骨骨折愈合的促进作用及可能作用机制。方法 选用58只8周龄、SPF级SD雄性大鼠为实验大鼠,分为造模大鼠（n=48）与Sham组大鼠（n=10）。建立胫骨骨折模型大鼠,并将模型大鼠分为 Model组、盘龙七片组（Treat组）、β-catenin抑制剂组（XAV-939）及盘龙七片+β-catenin抑制剂组（Treat+XAV 939组）4组,每组10只。X光片观察大鼠胫骨骨折愈合状况;骨密度测定仪检测胫骨骨矿物质密度值（BMD）;HE染色观察大鼠骨折部位结构变化;酶联免疫吸附法检测血清中ALP、bFGF、TNF α、IL 1β;免疫印迹法检测骨组织中p 糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）、Wnt3、β 链蛋白（β=Catenin）及淋巴增强因子1(LEF1)蛋白表达。结果 与Sham组相比,Model组骨组织影像学愈合评分、BMD、ALP、bFGF水平、Wnt3、β-Catenin、LEF1蛋白表达降低,TNF α、IL 1β水平升高;与Model组相比,Treat组骨组织影像学愈合评分、BMD、ALP、bFGF水平、Wnt3、β Catenin、LEF1蛋白表达升高,TNF α、IL 1β水平降低;Treat+XAV 939组骨组织影像学愈合评分、BMD、ALP、bFGF水平、Wnt3、β-Catenin、LEF1蛋白表达高于XAV 939组,TNF α、IL 1β水平低于XAV 939组,差异有统计学意义（均P＜0.05）。 结论 盘龙七片可促进大鼠胫骨骨折愈合,其机制与抑制Wnt/β-catenin通路、缓解骨折大鼠机体炎症反应有关。     

Apaf-1通过wnt/β-catenin信号通路调控肝癌的机制研究

目的 研究Apaf-1基因在wnt/β-catenin信号通路中的作用及在肝癌细胞中的调控表达机制.方法 通过TOP-flash实验验证Apaf-1基因在wnt/β-catenin信号通路中调控作用机制;采用实时定量PCR方法检测各种肝癌细胞株(HepG2、H HCC、HB611)及正常肝细胞株(LO2)中Apaf-1基因的表达量;构建Apaf-1 RNA干扰质粒,转染到HepG2中并检测转染效率,检测相关基因及蛋白表达.结果 TOPflash实验发现Apaf-1可以抑制wnt/β-catenin信号通路,并且这种抑制作用具有剂量依赖效应;在肝癌细胞株中,Apaf-1表达量较正常肝细胞表达量降低,且在HepG2细胞株中表达量最低;在肝癌细胞株(HepG2)中RNA干扰Apaf-1基因,Apaf-1基因的的表达量显著降低,wnt信号通路下游基因及蛋白(β-catenin、Cyclin A、CDK2、wnt5a、STAT3、EGFR、APC)的表达量均显著性升高或降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Apaf-1基因通过wnt/β-catenin信号通路在肝癌细胞的生成过程中具有重要功能.     

Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59抑制子宫内膜异位症子宫内膜干细胞的增殖

目的分析Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59对子宫内膜异位症(EM)子宫内膜干细胞增殖的影响。 方法分离纯化获得子宫内膜干细胞,随机分为对照组、低剂量组(5 mmol/L Wnt-C59)和高剂量组(30 mmol/L Wnt-C59)。MTT法分析各组细胞增殖情况,Western blotting法分析细胞凋亡蛋白及Wnt/β-catenin通路蛋白的表达变化,酶联免疫吸附测定法分析LC3、Beclin1水平变化。结果与对照组比较,低剂量组和高剂量组细胞增殖受到明显抑制,Wnt3a及β-catenin蛋白水平明显降低,细胞凋亡蛋白Caspase-3及Caspase-9水平明显升高,LC3、Beclin1蛋白水平明显升高(P＜0.05),且高剂量组均更为明显(P＜0.05)。Pearson相关性分析显示,Wnt3a及β-catenin蛋白水平均与细胞增殖抑制率呈负相关(P＜0.05)。结论Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59能有效抑制EM子宫内膜干细胞增殖,促进其凋亡、自噬作用,其作用可能与其对Wnt/β-catenin信号通路的抑制有关。     

沉默重组蛋白2对NCI-H1688细胞的抑制作用及其Wnt/β连环蛋白信号通路机制

目的：探讨T细胞淋巴瘤常见重排蛋白2（Frat2）通过Wnt/β连环蛋白（β-catenin）信号通路对小细胞肺癌NCI-H1688细胞增殖的影响,阐明其可能机制。方法：选取生长状态良好的人小细胞肺癌NCI-H1688细胞和正常支气管上皮样细胞HBE细胞,采用Western blotting法和逆转录实时荧光定量-聚合酶链反应（Real-Time RT-qPCR）法分别检测NCI-H1688细胞和HBE细胞中Frat2蛋白及mRNA表达水平。NCI-H1688细胞随机分为空白对照组、阴性对照组、Frat2-siRNA组和Frat2-siRNA+XAV组。空白对照组细胞不转染,阴性对照组细胞转染阴性对照慢病毒,Frat2-siRNA组转染Frat2-siRNA慢病毒,Frat2-siRNA+XAV组转染Frat2-siRNA慢病毒并同时加入4 μmol·L^-1Wnt信号通路抑制剂XAV939。采用Western blotting法和Real-Time RT-qPCR法分别检测转染后各组细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平,采用MTT法检测各组细胞增殖活性,采用流式细胞术检测不同细胞周期细胞百分率,采用Western blotting法检测细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、c-myc、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、β-catenin和磷酸化糖原合成酶激酶3（pGSK-3β）蛋白表达水平。结果：与HBE细胞比较,NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.05）;空白对照组与阴性对照组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组细胞增殖活性降低（P<0.05）,G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期和G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05）,PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）;与Frat2-siRNA组比较,Frat2-siRNA+XAV组细胞增殖活性降低（P<0.05）,G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期和G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05）,PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）;空白对照组与阴性对照组上述各指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：沉默Frat2可抑制小细胞肺癌细胞增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

姜黄素对TGF-β诱导的A549细胞上皮间质转化的影响

目的 研究姜黄素对转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β)诱导的肺腺癌A549细胞的上皮间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT）的作用及可能的机制。方法 选取体外培养肺腺癌A549细胞采用MTT法检测姜黄素细胞抑制率。实验分为4组：对照（Control）组、TGF-β组（TGF-β5ng/mL）、TGF-β+姜黄素组（TGF-β5ng/mL+姜黄素10μmol/L）、姜黄素组（姜黄素10μmol/L）。采用Transwell细胞迁移及浸润实验检测各组的运动迁移和侵袭浸润的能力,采用免疫荧光和Western印迹法实验检测各组EMT相关标记物E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白和波形蛋白的表达水平与Wnt /β-catenin信号通路相关P-GSK3β, GSK3β, β-catenin, c-Myc蛋白以及Snail蛋白表达水平,同时检测Wnt /β-catenin抑制剂XAV939（1、2、4 μmol/L）作用后EMT表达情况。结果 MTT实验表明姜黄素对A549细胞的抑制作用呈时间和剂量浓度依赖性,10μmol/L姜黄素作用A549细胞24h和48h时,细胞增殖抑制率分别为12.21±2.60%和21.33±3.25%（P<0.05）;细胞运动迁移及侵袭浸润实验表明TGF-β能显著促进细胞的运动迁移和侵袭浸润,而姜黄素对其表现出抑制作用（P<0.05）。免疫荧光实验及免疫蛋白印迹实验表明TGF-β能下调E--钙粘蛋白的表达,上调波形蛋白及N--钙粘蛋白的表达,伴有P-GSK3β,β-catenin和c-Myc的表达增加以及Snail蛋白表达增加,而GSK3β表达无明显变化,而姜黄素表现出对这种现象的一个抑制作用。同时,XAV939对TGF-β诱导的EMT表现出抑制作用。结论 姜黄素可能通过抑制Wnt /β-catenin信号通路来抑制TGF-β诱导的A549细胞EMT。     

初步探讨乙型肝炎病毒X蛋白激活PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)激活磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响.方法 利用稳定表达HBx基因的肝癌细胞模型HepG2-HBX、Huh-7-HBX,运用阻断剂LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,采用Western blot方法分析HepG2-HBX和Huh-7-HBX细胞中p-Akt蛋白的表达水平的情况;采用CCK-8增殖实验和划痕愈合实验观测HepG2-HBX和Huh-7-HBX细胞的增殖和迁移能力.结果 与阴性对照肝癌细胞相比,稳定转染HBx基因的肝癌细胞中的p-Akt蛋白的表达增多(P<0.05),运用阻断剂LY294002阻断PI3K信号通路后,稳定转染HBx基因的肝癌细胞内的p-Akt蛋白表达降低(P<0.05).CCK-8增殖实验和划痕愈合实验结果均显示,与阴性对照肝癌细胞相比,稳定转染HBx基因的肝癌细胞的增殖能力和迁移能力增加(P<0.05).经阻断剂LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,稳定转染HBX的肝癌细胞的增殖和迁移能力减弱(P<0.05).结论 HBx可通过激活PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞增殖和迁移.     

长链非编码RNA-UFC1通过GSK-3β/β-catenin信号轴促进肝癌细胞的侵袭和转移

目的探讨长链非编码RNA-UFC1在肝癌侵袭和转移中的作用及机制。方法应用lincRNA-UFC1慢病毒载体转染人肝 癌细胞株Huh7 构建lincRNA-UFC1 过表达组和对照组;应用lincRNA-UFC1 干扰载体转染人肝癌细胞株BEL-7402 构建 lincRNA-UFC1 干扰组和干扰对照组（scramble）,通过实时定量PCR实验分析两种肝癌细胞中lincRNA-UFC1 的表达水平。 Transwell 及划痕实验检测lincRNA-UFC1 过表达组及干扰组相比对照组侵袭迁移能力的变化。Western blot 检测lincRNAUFC1 过表达组及干扰组相比对照组中GSK-3β/β-catenin蛋白的表达变化。利用GSK-3β/β-Catenin信号通路抑制剂XAV939阻 断后,观察Transwell 及划痕实验中lincRNA-UFC1 过表达对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响。结果在肝细胞癌中,过表达 lincRNA-UFC1 相较于对照组,肝癌细胞的侵袭转移能力明显增加（P<0.001）,而沉默lincRNA-UFC1 的表达相较于scramble 组,肝癌细胞侵袭转移能力明显减弱（P<0.001）。Western blot结果显示,过表达lincRNA-UFC1与对照组相比较,侵袭转移相关 蛋白β-catenin和p-GSK-3β表达明显上调（P<0.001）,而lincRNA-UFC1沉默表达后,结果相反。利用GSK-3β/β-Catenin信号通 路抑制剂XAV939 处理肝癌细胞可以逆转lincRNA-UFC1 促进肝癌细胞侵袭转移的功能（P<0.001）。结论在肝细胞癌中 lincRNA-UFC1通过上调磷酸化GSK-3β及β-catenin促进肝癌细胞侵袭转移。     

LncRNA GASL1通过Wnt/β-catenin信号通路促进血管平滑肌细胞增殖

目的 探讨lncRNA GASL1能否通过激活Wnt/β-catenin信号通路,促进血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖.方法 构建lncRNA GASL1 相关的mRNAs共表达网络,并对其进行信号通路分析.将lncRNA GASL1(lncRNA GASL1组)或lncRNA NC(lncRNA NC组)分别转染人动脉VSMCs,采用CCK-8法检测lncRNA GASL1对VSMCs细胞活力的影响,免疫荧光检测增殖相关蛋白bcl-2的表达,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白的变化,最后将lncRNA GASL1和Wnt/β-catenin通路抑制剂(ICG001)加入VSMCs细胞共培养,检测VSMCs细胞活力及bcl-2蛋白变化.结果 lncRNA GASL1 相关的mRNAs共374个,Pathway分析显示lncRNA GASL1 与Wnt/β-catenin通路相关性最高.CCK-8检测结果显示:lncRNA GASL1组细胞活力高于lncRNA NC组细胞;Western blot结果显示:lncRNA GASL1组细胞Wnt1、β-catenin蛋白含量高于lncRNA NC组;免疫荧光观察显示:lncRNA GASL1 组bcl-2蛋白含量高于lncRNA NC 组(P＜0.05).将lncRNA GASL1 与ICG001 共培养VSMCs细胞后,CCK-8检测显示:lncRNA GASL1+ICG001组细胞活力低于lncRNA GASL1+对照剂组;免疫荧光观察显示:lncRNA GASL1+ICG001组bcl-2蛋白含量低于lncRNA GASL1+对照剂组;差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 lncRNA GASL1可促进血管平滑肌细胞增殖,阻断Wnt/β-catenin信号通路后,lncRNA GASL1对血管平滑肌的促增殖作用下降.     

环氧合酶-2在HL7702/HBx肝细胞增殖中的作用

目的：探讨环氧合酶‐2（COX‐2）在稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）的HL7702肝细胞增殖中的作用及机制。方法 CCK‐8法及克隆形成实验检测HL7702／HBx细胞、HL7702／Mock细胞、HL7702细胞增殖情况,RT‐PCR法检测上述3种细胞中 COX‐2 mRNA 表达水平,Western‐blot 法检测 COX‐2蛋白表达水平, COX‐2选择性抑制剂NS‐398作用于各组细胞后再检测以上各组细胞增殖情况及COX‐2蛋白表达水平的改变。结果细胞增殖实验及克隆形成实验提示,HL7702／HBx 组细胞增殖能力强于 HL7702／Mock和 HL7702组（P＜0．05）,克隆形成率也更高（P＜0．05）。RT‐PCR检测结果提示,相对于 HL7702／Mock细胞和 HL7702组细胞,HL7702／HBx组细胞内COX‐2的mRNA相对表达量明显增高（P＜0．05）。Western‐blot检测提示,HL7702／HBx组细胞中的COX‐2蛋白相对表达水平较高（P＜0．05）,而 HL7702／Mock及 HL7702组细胞之间则无明显差别。NS‐398以时间依赖的方式部分抑制各组细胞的增殖能力,对 HL7702／HBx组细胞增殖的抑制强于其他2组细胞（P＜0．05）。经50μmol／L NS‐398处理后,3组细胞的COX‐2蛋白水平均显著降低,此现象在 HL7702／HBx组细胞中更加明显（P＜0．05）。结论 HBx蛋白可以上调肝细胞COX‐2表达,促进肝细胞增殖,选择性COX‐2抑制剂可部分逆转该作用。     

白术多糖对肝癌细胞增殖及侵袭的抑制作用及其机制

目的探讨白术多糖（PAM）对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制。方法体外培养肝癌细胞HepG2分别给予不同 浓度的PAM处理,通过CCK-8和Transwell实验检测肝癌细胞的增殖、侵袭能力。采用免疫荧光技术检测肝癌细胞中β-catenin 蛋白表达水平,采用RT-PCR技术和免疫印迹法检测AKT、GSK-3β的基因和蛋白表达水平及其磷酸化表达,检测MMP-2的基 因和蛋白表达水平。HepG2 细胞给予LiCl/PAM/LiCl 联合PAM处理,检测细胞增殖、侵袭能力改变,检测GSK-3β磷酸化和 MMP2的蛋白水平。结果与空白对照组相比,PAM处理后肝癌细胞体外增殖能力下降、侵袭能力下降（P<0.05）;PAM处理可 以下调β-catenin蛋白表达、下调MMP-2基因与蛋白表达水平,同时抑制AKT与GSK-3β的磷酸化（P<0.05）。PAM对肝癌细胞 体外增殖、侵袭及AKT/GSK-3β/β-catenin通路的影响呈浓度依赖性：PAM的浓度越高,对肝癌细胞体外增殖、侵袭的抑制作用 越强;对AKT与GSK-3β的磷酸化的抑制作用越强,对β-catenin表达的抑制作用也越强。LiCl可以逆转PAM对肝癌细胞增殖、 侵袭的抑制作用,同时可以逆转PAM对GSK-3β磷酸化和MMP2的蛋白表达的抑制。结论PAM对肝癌细胞的体外增殖和侵 袭能力具有抑制作用,PAM可能通过影响Wnt/β-catenin 信号通路发挥作用。     

双氢青蒿素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其可能的分子机制.方法 用不同浓度(10、20、40 μmol/L)的DHA分别作用于人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞,采用MTT法、划痕实验、Transwell法和流式细胞术分别检测细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力和细胞周期与凋亡情况.Western blot检测细胞中DVL2、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1等蛋白的表达量.结果 不同浓度的DHA可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,且呈浓度依赖性增长(P＜0.05).DHA作用48 h后,细胞S期比例显著增加,诱导细胞凋亡(P＜0.05).DHA 可以降低胃癌细胞Dvl2、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1的蛋白表达水平(P＜0.05),增加GSK-3β蛋白的表达(P＜0.05).同时,SKL2001激活Wnt/β-catenin信号通路,逆转DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05);XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路,进一步加强DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05).结论 DHA能有效抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移,阻滞细胞周期停留在S期,诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关.     

二十二碳六烯酸对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究二十二碳六烯酸(DHA)对人胆管癌QBC 939细胞增殖、凋亡和周期的影响,并初步探讨可能的分子机制.方法 采用MTT法检测DHA和花生四烯酸(AA)对QBC 939细胞增殖的影响;流式细胞术检测DHA对QBC 939细胞凋亡和周期的影响;免疫印迹法检测DHA作用于QBC 939细胞后β -catenin、c-myc和cyclin D1三种蛋白表达量的变化.结果 作用浓度为80和100μg/mL的DHA可显著降低QBC 939细胞存活率,且呈一定的剂量、时间效应(P＜0.05),AA无明显作用.经80μg/mL DHA作用24 h后,QBC 939细胞早期凋亡率明显增加(P＜0.05),G0/G1期细胞显著增多(P＜0.05),G2/M、S期细胞减少(分别P＜0.01及P＜0.05).β-catenin、c-myc、cyclin D1表达量均下调.结论 DHA可抑制人胆管癌QBC939细胞增殖,促进其凋亡,部分作用机制可能是下调Wnt/β -catenin信号传导通路中β-catenin、c-myc和cyclin D1三种蛋白的表达.     

鳖甲煎丸对HepG2裸鼠移植瘤的抑制作用及瘤体组织中β-catenin、Tbx3表达水平的影响

目的通过研究鳖甲煎丸对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长的抑制作用及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响,探
讨鳖甲煎丸抗肝细胞癌的分子机制。方法裸鼠成瘤实验观察鳖甲煎丸对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长的抑制作用,免疫组织
化学法检测人肝癌HepG2裸鼠移植瘤组织中PCNA的表达水平,TUNEL法检测人肝癌HepG2裸鼠移植瘤细胞凋亡,Western
blot检测人肝癌HepG2裸鼠移植瘤组织中β-catenin和Tbx3的表达水平。结果鳖甲煎丸能够显著抑制人肝癌HepG2裸鼠移植
瘤的生长（P<0.05）;和阴性对照（NC）组（5.5±0.90）相比,高剂量（H）组（22.9±1.22）、中剂量（M）组（14.7±0.50）移植瘤细胞凋亡率
显著增加（P<0.05）;H（40.9±2.31）、M（53.5±2.41）、低剂量（L）组（62.3±1.80）与NC组（93.5±1.70）相比,PCNA阳性细胞比例显
著降低（P<0.05）;同时,鳖甲煎丸能够抑制Wnt/β-catenin信号通路的信号分子β-catenin和Tbx3的表达。结论鳖甲煎丸抗肝细
胞癌的作用机制可能与抑制PCNA的表达以及调控Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平有关。