HSV1-tk乳腺癌移植瘤裸鼠模型PET-CT报告基因显像

目的 对~(18)F-FHBG体外摄取、体内分布及荷瘤裸鼠PET-CT显像等方面进行研究.方法 利用γ井型计数器测定体外肿瘤细胞T47D和T47D-tk对~(18)F-FHBG的摄取、正常昆明小鼠和移植瘤裸鼠~(18)F-FHBG体内分布;并进行荷皮下移植瘤裸鼠~(18)F-FHBG PET-CT显像.结果 体外肿瘤细胞摄取实验显示T47D-tk细胞摄取~(18)F-FHBG的程度明显高于正常的T47D细胞,120 min时T47D-tk细胞对~(18)F-FHBG的摄取为T47D细胞的64倍(P<0.001).正常小鼠注射~(18)F-FHBG后,主要分布于肝脏、肠道、肾脏和膀胱,而脑部未见明显放射性分布.荷皮下移植瘤裸鼠PET-CT显像显示,T47D-tk肿瘤浓聚~(18)F-FHBG的程度明显高于T47D肿瘤,且2 h显像效果较好.结论 体外T47D-tk细胞摄取~(18)F-FHBG的程度明显高于正常的T47D细胞;在小鼠体内~(18)F-FHBG主要经肠道和泌尿系统排泄.~(18)F-FHBG报告基因探针可以有效的定位于HSV1-tk基因表达的部位且与移植瘤裸鼠体内分布研究结果一致.这可为进一步开展~(18)F-FHBG报告基因显像与肿瘤基因治疗的监测提供有效手段和科学依据.     

早老性痴呆模型细胞移植的正电子发射计算机断层显像

目的 探讨2-(4'-N-11C-甲胺基苯)-6-羟基苯丙噻唑(11C-PIB)和18F-脱氧葡萄糖(18F-FDG)正电子发射计算机断层显像(PET)在模型验证及监测移植细胞中的应用价值.方法 建立Aβ(1-40)海马注射痴呆模型后进行细胞移植,通过行为学、组织学检测及11C-PIB PET和11F-FDG小动物PET显像,观察显像结果是否与行为学、组织学结果相匹配.结果 模型组在Morris水迷宫中的潜伏期显著长于正常组(P<0.01),组织学显示海马CA,及齿状回出现神经元丢失和AB沉积11C-PIB显像中模型组海马区域PIB放射性摄取显著增高(P<0.05),18F-FDG显像中模型组注射侧海马放射性摄取显著低于正常组的同侧(P<0.001).细胞移植后移植组潜伏期较模型组减少33.7%～51.5%(P<0.01),组织学显示Aβ沉积无明显改变,神经干细胞分化表达神经元核蛋白阳性细胞,并持续6周表达5-溴脱氧尿苷阳性细胞,11C-PIB显像显示移植组与模型组放射性摄取差异无显著性(P>0.05),18F-FDG显像显示移植组与模型组放射性摄取基本一致(P>0.05).结论 11C-PIB PET成像有助于诊断早老性痴呆并活体监测模型大鼠脑内的淀粉样斑块,而18F-FDG在监测移植细胞短期疗效方面存在局限性.     

嵌合性5型腺病毒载体Ad5/F35体外转染大鼠骨髓间充质干细胞的研究

目的:研究携带35型腺病毒纤毛的嵌合性5型腺病毒载体Ad5/F35能否有效地将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因体外转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),并观察eGFP基因在大鼠BMSCs内持续表达的时间.方法:贴壁培养法分离、扩增大鼠BMSCs.用带有eGFP基因的Ad5/F35(Ad5/F35-eGFP)分别以1、10、100、1000的感染复数(MOI)转染第2代大鼠BMSCs;荧光倒置显微镜和流式细胞仪(FCM)检测eGFP基因的转染效率与表达水平,观察细胞生长状态以评估病毒对大鼠BMSCs基本生物学特性的影响;对MOI=100的病毒转染的大鼠BMSCs在转染后第2、7、14、21、30天分别用FCM检测大鼠BMSCs内eGFP的表达情况.结果:MOI在1到1000范围内,eGFP基因转染效率和表达水平与Ad5/F35-eGFP的MOI呈正向剂量相关性.MOI=100的病毒可转染90%左右的大鼠BMSCs,且eGFP基因在1个月内均有表达.MOI为1、10、100的病毒不影响大鼠BMSCs的活力和增殖能力.结论:Ad5/F35可以高效地将eGFP基因体外转染大鼠BMSCs,eGFP基因可持续表达1个月.本研究为Ad5/F35作为BMSCs的基因转移和表达载体进行细胞治疗与基因治疗提供了实验依据.     

正电子成像技术活体评价老年痴呆大鼠模型

目的 探讨正电子成像技术应用于阿尔茨海默病(AD)大鼠模型验证的可行性.方法 建立Aβ_(1-40)海马注射模型,进行Morris水迷宫测试、HE染色及刚果红染色,观察大鼠行为学、组织学改变.应用PET及Micro PET活体显像显示大鼠脑内2-(4'-N-~(11)C-甲胺基苯)-6-羟基苯并噻唑(N-~(11)CH_3-6-OH-BTA-1,简称~(11)C-PIB)及~(18)F-氟代脱氧葡萄糖(~(18)F-fluordeoxyghcose,简称~(18)F-FDG)的摄取及分布,与行为学、组织学进行比较.结果 ~(18)F-FDG显像中模型组大鼠海马区域放射性摄取明显低于正常组(P<0.01),与学习记忆能力减退、神经元丢失相符;~(11)C-PIB显像中模型组大鼠脑内注射区域PIB特异性结合β-淀粉样蛋白,放射性摄取明显高于正常组,与病理改变淀粉样蛋白沉积相符.结论 正电子成像技术利用~(11)C-PIB及~(18)F-FDG两种核素联合显像,能够在体显示AD大鼠脑内的斑块沉积及海马区域糖代谢改变,可用于活体验证老年痴呆模型的建立.     

脊髓内移植间充质干细胞的转铁蛋白受体显像

目的 探索放射性核素显像活体追踪移植干细胞的可能性.方法 用放射性受体分析定量测定体外培养人间充质干细胞(hMSCs)的转铁蛋白受体表达.兔脊髓内移植人间充质干细胞,蛛网膜下腔注入 131Ⅰ标记铁胞和转铁蛋白后不同时间,用伽玛相机采集图像.感兴趣区(ROI)技术对图像进行半定量分析.磷屏放射自显影验证活体显像.结果 hMSCs高表达转铁蛋白受体(10,770/细胞),并且对铁饱和转铁蛋白具有高亲和力(KD=0.982nmol/L).实验组动物在注射显像剂后16和24h观察到了移植区放射性浓聚灶,而以PBS作为移植物和以 131Ⅰ标记的血清白蛋白作为显像剂的2个对照组均呈阴性显像,ROI分析显示实验组与对照组之间具有显著的统计学差别(P＜0.05).磷屏放射自显影证实了间充质干细胞移植部位能够特异结合铁饱和转铁蛋白.结论 应用核素显像活体示踪移植干细胞具有可行性,经过进一步改进,有望为干细胞移植治疗提供无创的监测手段.     

骨髓间质干细胞促进急性心肌梗死大鼠的血管新生及其抗纤维化作用

目的探讨骨髓间质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSCs)促进急性心肌梗死(acute myocardial infraction,AMI)大鼠的血管新生及抑制大鼠心肌间质纤维化形成的作用。方法制做大鼠AMI模型,并于术后24 h从尾静脉移植同种异体BMSCs。在移植后21天用超声心动图检测BMSCs移植大鼠的左心室舒张末期内径(LVDd)、左心室收缩末期内径(LVDs)和射血分数(EF)。收取BMSCs移植大鼠的心脏标本,用新生血管标志物第Ⅷ因子相关抗原免疫组织化学染色法检测心肌毛细血管密度;用免疫组化检测其心肌间质Ⅰ,Ⅲ型胶原沉积情况。结果与对照组相比,BMSCs移植组心脏功能改善,毛细血管密度增加,心肌间质Ⅰ,Ⅲ型胶原沉积减少。结论BMSCs移植能改善AMI大鼠心脏功能,促进血管新生,减轻其心肌间质纤维化。     

超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞治疗大鼠脑卒中的磁共振活体追踪

目的探索利用磁共振技术活体追踪干细胞的可行性以及干细胞对卒中大鼠脑梗死体积的影响。方法采集大鼠后肢股骨和胫骨骨髓,采用密度梯度离心法分离并培养骨髓间充质干细胞(BMSCs)。利用超顺磁性氧化铁和多聚左旋赖氨酸的混合物标记BMSCs,普鲁士蓝染色检测标记率。线栓法建立18只大鼠脑缺血2h再灌注动物模型,分为缺血对侧BMSCs移植组(细胞数1.5×105/15μl)、缺血同侧纹状体移植组(细胞数1.5×105/15μl)和对照组(15μlD-Hanks液)3组,每组6只。分别在脑缺血后第1天、细胞移植后第1天及第14天进行磁共振扫描,对各时间点梗死体积的变化进行统计学分析。结果超顺磁性氧化铁对BMSCs的标记率为96%。磁共振追踪显示移植后第14天缺血同侧移植组BMSCs向缺血灶边缘迁移,缺血对侧移植组BMSCs沿胼胝体弥散,但是3组之间的脑梗死体积变化差异无显著性(P>0.05)。结论超顺磁性氧化铁对干细胞标记率高,磁共振活体追踪有利于了解干细胞移植后的存活和迁移。BMSCs脑内移植对于卒中大鼠脑梗死体积的影响无统计学意义。     

骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死的多模态体内示踪分子成像

目的 利用多聚乙烯-超顺磁性氧化铁(PEI2k-SPIO)标记带有萤火虫荧光素酶（Luciferase）的SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs/Luciferase）,探索多模态成像活体示踪BMSCs移植治疗急性心肌梗死的可行性。方法 PEI2k-SPIO成功标记BMSCs/Luciferase细胞后行普鲁士兰染色及MTT验证标记的有效性及安全性。超声引导下原位移植至SD大鼠急性心肌梗死模型的梗死心肌边缘,分别在移植后1 d和1周行磁共振成像（MRI）及移植后1 d、2 d、3 d和1周行光学成像。结果 MTT结果显示PEI2k-SPIO标记的BMSCs/Luciferase细胞与未标记BMSCs/Luciferase细胞间存活细胞率差异无统计学意义(P<0.05)。MRI在细胞移植后1 d能观察到注射区域低信号,移植后1周未观察到低信号影;移植后1、2、3 d可同时探测到生物发光,移植后7 d未检测到生物发光。结论 多模态分子成像可同时示踪移植干细胞的位置和判断细胞存活状态。     

生物发光显像技术对血管生成抑制因子vasostatin在肿瘤细胞PC3中活性监测

目的 应用非侵入性活体显像技术研究血管生成抑制因子vasostatin。方法 采用融合表达方案,将治疗基因vasostatin和报告基因fluc偶联构建融合表达载体,使表达的融合蛋白中两个蛋白互相不干扰,并有天然的特性。结果 将稳定表达FLuc阳性对照和V10FL融合蛋白的PC3细胞进行体外生物发光显像。用稳定表达FLuc的PC3细胞构建荷瘤模型,用生物发光显像能检测到肿瘤的发生。结论 可应用非侵入性活体显像技术进行体内和体外基因表达的检测与监控。     

柴胡疏肝散联合骨髓间充质干细胞对心肌梗死大鼠心肌的保护作用

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)联合柴胡疏肝散对心肌梗死大鼠心肌组织的保护作用。方法:采用全骨髓贴壁法培养BMSCs。经结扎冠状动脉制备大鼠心肌梗死(AMI)模型。SD大鼠随机分为假手术组、AMI组(模型组)、BMSCs组、CHSG-L组(柴胡疏肝散小剂量+BMSCs移植)、CHSG-M组(柴胡疏肝散中剂量+BMSCs移植)、CHSG-H组(柴胡疏肝散大剂量+BMSCs移植)。BMSCs细胞悬液直接注入梗死区边缘心肌组织;中药或生理盐水经灌胃给予。各组干预7 d后,生化法测定大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)与丙二醛(MDA)含量;ELISA法检测大鼠血清低氧诱导因子(HIF-1α)表达;免疫组化法观察心肌血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果:与模型组和BMSCs组比较,各联合治疗组SOD升高、MDA降低,血清HIF-1α水平和心肌细胞VEGF蛋白表达升高;且柴胡疏肝散剂量越大,作用越显著。结论:BMSCs移植联合柴胡疏肝散可一定程度上保护心肌梗死大鼠心肌组织。     

骨髓间充质干细胞修复心脏的研究进展

心肌细胞丢失后继发的心力衰竭预后不佳,主要是因为心肌细胞是不可再生的。骨髓间充质干细胞(BMSCs)被认为是一种具有多向分化潜能的细胞,移植到受损心脏后可明显提高心功能。长期以来,人们认为BMSCs主要是通过分化为心肌样细胞来改善心功能的,然而这种观点受到越来越多的质疑。BMSCs的旁分泌行为具有修复心脏的作用,同时其抑制T淋巴细胞增殖和避免排斥反应的免疫调节,为人们对BMSCs修复心脏的机制带来新的线索。     

SPIO标记骨髓间充质干细胞移植入心肌梗死大鼠的示踪研究

目的探讨超顺磁性氧化铁微粒(SPIO)体外标记骨髓间充质干细胞(BMSCs)及体内示踪移植入大鼠心肌梗死心脏的BMSCs的能力。方法使用左旋多聚赖氨酸-SPIO共培养方式标记BMSCs。采用普鲁士蓝染色观察细胞内铁颗粒,流式细胞术检测细胞活力,将经过SPIO标记的干细胞移植入心肌梗死大鼠心脏,应用1.5TMRI系统行磁标记干细胞成像。超声心动图检测各组心脏的左室射血分数(EF),左室舒张末期内径(LVIDd),左室收缩末期内径(LVIDs)及短轴缩短率(FS)。结果普鲁士蓝染色显示,SPIO标记的BMSCs细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒,标记效率为(99.81±1.57)%;与正常未标记细胞相比较,细胞的活力差异无统计学意义(P0.05)。标记了SPIO的BMSCs体内MRI成像时显示,细胞移植区域信号缺失,对应区域病理切片普鲁士蓝染色可见胞浆内染色阳性的细胞。超声心动图显示,PBS组FS移植前后没有明显变化,BMSC组FS从移植前的(23.1±1.88)%上升到第1周的(31.28±4.15)%。BMSC组EF在移植前是(51.13±5.07)%,第1周时上升到(60.12±8.40)%。结论 SPIO能成功地标记BMSCs,且对BMSCs的活力无明显影响。BMSCs移植后能改善心梗大鼠的心功能。SPIO标记的BMSCs移植后在大鼠体内的分布、迁移过程可用MRI进行检测评价。     

激活Notch信号的骨髓间充质干细胞移植促心肌梗死模型鼠血管新生研究

目的探讨干预Notch信号骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对心肌梗死（MI）大鼠心肌的治疗性血管新生作用及其机制。方法 60只Wistar大鼠经结扎冠状动脉前降支建立MI模型后,建模2周进行相应处理后,随机分为MI模型对照组（B组）、培养液移植对照组（C组）、激活Noth信号的BMSCs移植实验组（D组）、BMSCs移植对照组（E组）,每组15只;另选取10只为假手术对照组（A组）。4周后观察细胞生长及增殖情况,测定缺血心肌中血管内皮细胞生长因子（VEGF）蛋白的表达及缺血区心肌毛细血管密度的改变。结果 BMSCs在梗死区中可增殖分化为内皮细胞,与A、B、C组相比,D组、E组缺血心肌中VEGF蛋白的表达增多及毛细血管密度均明显增高（P〈0.01）,且D组较E组更明显（P〈0.05）。结论激活Notch信号有促进心肌梗死区BMSCs向内皮细胞分化,并通过自分泌和旁分泌的方式增加缺血心肌VEGF的表达,由此促进缺血心肌中毛细血管新生。     

过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞通过分泌外泌体增强其抗凋亡能力的研究

目的　探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）是否通过分泌外泌体（Exosome）增强其细胞抗凋亡能力,进而提高心肌梗死后心功能。方法　2017年1—12月选取健康4周龄SPF级C57BL/6小鼠45只,通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs构建过表达GATA-4小鼠BMSCs并加入基因开启剂强力霉素（DOX）,而后采用ExoQuick-TC提取BMSCs分泌的Exosome,并检测Exosome纯度、电镜下观察其形态。体外实验：与过表达GATA-4 BMSCs分泌的Exosome共同培养的心肌细胞为A组（体外）,与空载体BMSCs分泌的Exosome共同培养的心肌细胞为B组（体外）,与BMSCs分泌的Exosome共同培养的心肌细胞为C组（体外）,低氧（1%）无血清条件下培养的心肌细胞为D组（体外）,正常条件下单独培养的心肌细胞为E组（体外）,各组均培养48 h,后采用流式细胞术检测各组心肌细胞凋亡率,采用Western blotting法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、细胞色素C表达水平。体内实验：选取12只小鼠建立心机梗死模型,造模成功48 h后经尾静脉注射80 000 μg的Exosome,其中A组（体内）注射过表达GATA-4 BMSCs分泌的Exosome,B组（体内）注射空载体BMSCs分泌的Exosome,C组（体内）注射BMSCs分泌的Exosome,另取3只心肌梗死未处理小鼠作为D组（体内）,3只正常小鼠作为E组（体内）。于注射Exosome后48 h采用心脏超声仪（PHILIPS EPIQ 7C）评估各组小鼠心功能。完成心脏彩超后采用原位免疫组化法评估心肌梗死小鼠心脏凋亡细胞数量。结果　Exosome表达量为0.272 5,Exosome纯度为5.25×108个,电镜可见Exosome大小40~100 nm。A组（体外）细胞凋亡率低于B组（体外）、C组（体外）、D组（体外）,但高于E组（体外）（P<0.05）。A组（体外）Caspase 8、细胞色素C表达水平低于B组（体外）、C组（体外）、D组（体外）及E组（体外）（P<0.05）。A组（体内）小鼠射血分数（EF）、环比收缩（FS）前后差值高于B组（体内）、C组（体内）、D组（体内）及E组（体内）（P<0.05）。A组（体内）小鼠心肌细胞凋亡细胞数量高于E组（体内）,而低于B组（体内）、C组（体内）、D组（体内）（P<0.05）。结论　过表达GATA-4 BMSCs分泌的Exosome可以通过增强BMSCs抗凋亡能力,进而有效改善心肌梗死后小鼠的心功能。     

心复康促进血管新生对移植骨髓间充质干细胞的保护作用

目的：探讨中药心复康在大鼠急性心肌梗死后对移植骨髓间充质干细胞（BMSCs）的保护作用及其机制。方法：经密度梯度离心联合贴壁筛选法培养并纯化BMSCs,采用冠状动脉结扎法建立大鼠急性心肌梗死模型,移植前以5-溴脱氧尿核苷（Brdu）对移植细胞进行标记,术后采用中药心复康灌胃联合干细胞移植治疗。移植后2周ELISA法检测大鼠血清血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）含量;处死动物,免疫组织化学方法检测心肌损伤区VEGF、bFGF蛋白表达情况、Brdu阳性移植细胞数和CD34^＋新生血管数。结果：心复康联合干细胞移植治疗大鼠心肌梗死,能提高移植细胞存活率（与细胞移植组比较P〈0.05）,提高大鼠血清VEGF、bFGF含量（与细胞移植组比较P〈0.05）,提高梗死区VEGF、bFGF蛋白表达,增加梗死区新生血管数量。结论：中药心复康对大鼠急性心肌梗死后移植干细胞有明显的保护作用,其机制可能与心复康联合干细胞移植能更有效的促进损伤区血管新生有关。     

NKX2．5基因修饰骨髓间充质干细胞对心肌梗死大鼠心功能的影响

目的：以NKX2．5融合绿色荧光蛋白基因（NKX2．5-pEGFP）质粒转染大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）,将基因修饰后MSCs移植入大鼠心肌梗死模型中,评价其对心功能的影响。方法：体外分离培养大鼠MSCs,构建NKX2．5-pEGFP基因质粒,以lip02000将质粒转染入MSCs。将基因修饰后MSCs植入心肌梗死后10d的大鼠心肌梗死区（MSCs组,n=20）,同时将注射等体积无血清改良依格尔（DMEM）培养液于心肌梗死区的大鼠作为DMEM组（n=20）。移植注射后4周,通过检测左心室射血分数（LEVF）、左室缩短分数（FS）等研究其对心功能的影响。结果：移植4周后,MSCs组大鼠LEvF[（79±4）％]较DMEM组[（47±3）％]显著提高（P〈0．01）,MSCs组大鼠FS[（48±9）％]较DMEM组[（25±6）％]显著提高（P〈0．01）。结论：移植NKX2．5基因修饰后的MSCs能够改善心肌梗死大鼠心功能。     

改良腺病毒AdF35-eGFP转染人 及大鼠骨髓间充质干细胞的效率对比研究

目的：比较改良腺病毒AdF35-增强绿荧光蛋白（eGFP）转染人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs）和大鼠骨髓间充质干细胞(rat BMSCs, rBMSCs)的效率。方法：分别从人体、大鼠骨髓中分离出BMSCs,成骨、成脂诱导培养以鉴定BMSCs。构建含eGFP的AdF35重组腺病毒载体AdF35-eGFP,以不同感染复数(multiplicity of infection, MOI)分别转染BMSCs后,MTT检测AdF35-eGFP对2种BMSCs的毒性作用,荧光显微镜观察eGFP的表达,流式细胞仪检测转染效率,实时定量PCR检测2种BMSCs表达柯萨奇腺病毒受体(CAR)和CD46 mRNA的水平。结果：hBMSCs和rBMSCs从骨髓中分离出来后,分别成功诱导分化成骨和成脂。当MOI为1 000 PFU/mL时,AdF35-EGFP对2种BMSCs的活性均有明显抑制作用（P<0.001）。AdF35-eGFP感染hBMSCs 48 h后,荧光显微镜下可见发强烈绿色荧光的细胞,流式细胞仪检测其转染效率可达(84.8±7.1)％;Ad5-eGFP感染rBMSCs后,荧光显微镜下仅见少量发绿色荧光的细胞,48 h转染效率为(3.1±1.1)％。hBMSCs高表达CD46 mRNA,低表达CAR mRNA;而rBMSCs则高表达CAR mRNA,低表达CD46 mRNA,2种基因的表达差异有统计学意义（P<0.01）。结论：AdF35可作为理想载体携带目的基因转染hBMSCs,但不适合作为转染rBMSCs的载体。     

TIMP-3-pcDNA3.0转染平滑肌细胞及其在大鼠心肌梗死瘢痕中的存活与表达

目的 探讨基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)基因转染平滑肌细胞的效果及移植的转染细胞能否在大鼠心梗瘢痕中存活并表达目的 蛋白.方法 植块法培养大鼠主动脉中层平滑肌细胞并鉴定;脂质体介导法以"TIMP-3基因质粒转染平滑肌细胞;RT-PCR和Western blot检测转染细胞的基因水平和蛋白表达;通过BrdU移植检测移植细胞的存活与增殖情况.实验大鼠随机分成单纯PBS注射、单纯平滑肌细胞移植和转染平滑肌细胞移植3组(每组7只实验大鼠),将移植物注射人(五点法)心梗大鼠的室壁内.1周后,提取其左心室组织mRNA和蛋白,分别进行RT-PCR和Western blot检测,鉴定其.TIMP-3基闪含量和表达情况.结论 植块法培养可以获得高纯度的平滑肌细胞;脂质体介导法可以使TIMP-3基因转染平滑肌细胞并获得TIMP-3蛋白的表达;移植的转染细胞能够在心梗缀痕中存活并增殖;转染细胞组大鼠左心室组织中TIMP-3 mRNA含量明显多于单纯平滑肌细胞移植组(P<0.01)及单纯PBS注射组(P<0.01);转染细胞移植组大鼠左心室组织中TIMP-3蛋白含量明显多于平滑肌细胞移植组(P<0.01)及单纯PBS注射组(P<0.01).结论TIMP-3基因可以通过脂质体介导法转染平滑肌细胞,且转染细胞可以在大鼠梗死心肌中存活、增殖并表达TIMP-3蛋白.     

人脐带间充质干细胞向心肌细胞诱导分化并体内移植的研究

目的探讨人脐带间充质干细胞(MSCs)经5-氮杂胞苷(5aza)诱导后能否向心肌样细胞分化及诱导后细胞移植到心肌梗死大鼠心脏后能否存活,为心肌细胞的移植探索新的细胞来源。方法从人脐带华尔通氏胶培养出MSCs,检测人脐带来源的MSCs的细胞表面标记。经5aza诱导,采用免疫组化方法及RT-PCR方法检测诱导后细胞能否表达心肌细胞标记物,诱导后细胞经5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)标记后移植到梗死心肌,观察移植后细胞能否存活。结果人脐带间充质干细胞经5aza诱导后能表达心肌细胞标记物,诱导后细胞移植到心肌梗死模型大鼠心肌后细胞能存活。结论人脐带间充质干细胞经5aza诱导能向心肌样细胞分化,诱导后细胞移植至体内能存活,人脐带间充质干细胞可以作为心肌细胞移植的来源。     

SHH基因转染BMMSC心肌移植对大鼠心肌梗死后血管新生的影响

目的探讨SHH（Sonic hedgehog）基因转染的骨髓间充质干细胞（BMMSCSHH）移植对大鼠心肌梗死区移植部位血管再生的影响。方法密度梯度离心法及贴壁培养获得BMMSC后,电转染法将SHH基因转入骨髓间充质干细胞。以结扎法制备大鼠急性心肌梗死模型,将实验动物200只大鼠按随机数字表法分5组,每组40只;分别在梗死与正常交界部位移植BMMSCSHH（转染组）、等量的BMMSC（细胞组）、pcDNA3．1-ShhDNA（基因组）、BMMSC和pcDNA3．1-ShhDNA的混合物（混合组）、等容积的低糖DMEM培养基（对照组）。于移植后第8周取正常心肌与心肌梗死交界区组织标本行免疫组化染色标记血管,通过血管密度分析法分析各组间交界区血管密度差异。结果经CD34免疫组化染色后行血管密度分析显示：转染组（36．48±5．22）较对照组（16．71±3．41）血管密度增加（P〈0．01）;较细胞组（29．46±2．27）、基因组（28．78±2．91）及混合组（29．55±4．55）血管密度增加（P〈0．05）。结论BMMSCSHH移植能有效表达目的基因、促进心肌梗死后血管新生,为缺血性心脏病的细胞转基因治疗提供理论依据。