清热化瘀滋阴方对狼疮性 MRL/lpr 小鼠免疫功能的影响

目的观察中药清热化瘀滋阴方对狼疮性MRL／lpr小鼠免疫功能的影响。方法选用C57BL／6J小鼠作为对照组,将MRL／lpr小鼠随机分为模型组、中药组（清热化瘀滋阴方组）、西药组（泼尼松组）、中西药结合组（清热化瘀滋阴方加泼尼松组）,每组各8只。对照组和模型组给予生理盐水,其余各组连续灌胃给予相应药物4周,4周末荧光显微镜观察肾组织IgG的沉积,测定血清IgG、抗ds—DNA抗体、IL-6、IL-10、ICAM-1的含量。结果与模型组比较,中药组、西药组、中西药结合组MRL／lpr小鼠肾组织IgG荧光强度显著降低、血清IgG、抗ds—DNA抗体、II,6、IL-10、ICAM—1的含量下调,其中以中西药结合组效果更为明显（P〈0．05或P〈0．01）。结论清热化瘀滋阴方具有改善狼疮性MRL／Ipr小鼠免疫功能的作用。     

砒霜对MRL/lpr自发性狼疮小鼠的疗效及安全性观察

目的探讨砒霜中的有效成分三氧化二砷（ATO）对MRL/lpr自发性狼疮小鼠的疗效及安全性观察。方法20周龄（发病期）MRL/lpr狼疮小鼠24只,设C57正常小鼠24只做参照,随机平分为治疗组和对照组,治疗组ATO 0.4 mg/（kg.d）隔日腹腔注射,对照组隔日腹腔注射同等量生理盐水,疗程为60 d,比较治疗组和对照组在体质量、病死率、血常规上的差异;采用ELISA法检测小鼠血清抗ds-DNA抗体的表达水平。结果MRL/lpr狼疮小鼠中治疗组体质量增长幅度明显高于对照组（P=0.006）;累积病死率25%低于对照组（50%）;血小板较对照组有所上升（P=0.009）;血清抗ds-DNA抗体（OD值）对照组为1.798 5±0.262 1,治疗组为0.918 3±0.067 7,治疗组低于对照组（P〈0.01）。C57小鼠未见在对照组和治疗组中有显著性差异。结论ATO可以延长MRL/lpr小鼠动物生存期限,可降低动物的死亡率,降低外周血抗ds-DNA抗体的表达水平,而对C57正常小鼠则无明显作用。     

重组白细胞介素18对肺炎链球菌肺炎小鼠免疫平衡的调节

目的研究重组白细胞介素18（rIL-18）对肺炎链球菌肺炎小鼠Th1／Th2免疫应答的影响。方法建立小鼠肺炎链球菌肺炎模型,将BALB／c小鼠24只随机分为三组,分别为对照组（NC）,肺炎组（PP）和肺炎rIL-18干预组（PIL-18）（n=8）,RT-PCR法检测各组小鼠肺组织中IFN-γ、IL-4mRNA的表达,同时BALF进行有核细胞分类计数。结果1）PIL-18组BALF中性粒细胞和巨噬细胞计数显著高于PP组和NC组（P〈0．001）;2）PIL-18组肺组织IFN-γ mRNA表达上调而IL-4mRNA表达下调（P〈0．001）。结论在小鼠肺炎链球菌肺炎早期给予rIL-18可诱导IFN-γ的合成,促进Th1免疫应答,使Th1／Th2免疫平衡向Th1免疫偏移、促进宿主对肺炎链球菌的防御。     

中药狼疮方对狼疮样小鼠脾细胞体外分泌白细胞介素-6和白细胞介素-10的影响

目的：探讨狼疮样小鼠脾细胞体外分泌白细胞介素－6（IL－6）和白细胞介素－10（IL－10）水平及其中药狼疮方对其影响。方法：采用慢性移植物抗宿主病小鼠模型，给中药狼疮方、强的松及联合治疗后分别检测抗ds-DNA抗体、刀豆蛋白A（ConA)诱导的脾细胞增殖反应和IL－6、IL－10水平。结果：（1）脾细胞自身增殖反应性，模型组明显高于正常组（P＜0．05）；各治疗组治疗后脾细胞自身增殖反应性与正常组比较差异不显著（P＞0．05）。（2）模型组血清抗ds-DNA抗体为1．75±0．25，与正常组（1．20±0．21）比较差异有显著性（P＜0．01）。各治疗组血清抗ds-DNA抗体与正常组比较差异不显著（P＞0．05）。（3）模型组狼疮样小鼠脾细胞经ConA诱导下分泌Th2细胞因子IL－6和IL－10水平明显高于正常组及各治疗组，差异有显著性（P＜0．05）。结论：狼疮方具有免疫抑制剂作用，可抑制T和B细胞活化，减少Th2细胞因子的形成和自身抗体产生，有效地治疗系统性红斑狼疮。     

针灸对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖及Star5-Foxp3通路影响

目的探索针灸“大椎穴”调节肿瘤免疫抑制的作用机制。方法将48只雄性Balb／c小鼠随机分为电针组、艾灸组、荷瘤组和正常组,每组12只。在小鼠左腋皮下接种H22肿瘤细胞,建立肿瘤模型。分别采用电针、艾灸大椎治疗。观察生存率、抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数。AlamarBlue法检测ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖,增殖能力以还原值表示。RT—PCR方法检测脾淋巴细胞Foxp3 mRNA、Stat5a mRNA、Stat5b mRNA以及胸腺Foxp3 mRNA表达。结果艾灸组荷瘤小鼠生存率高于荷瘤组,但差异无统计学意义（P〉0．05）：艾灸组抑瘤率为39．3％：电针组与艾灸组荷瘤小鼠脾脏指数较荷瘤组升高（P〈0．05）：电针组与艾灸组荷瘤小鼠胸腺指数较荷瘤组胸腺指数升高,但差异无统计学意义（P〉0．05）。AlamarBlue法检测电针组、艾灸组、荷瘤组小鼠脾淋巴细胞增殖还原值均高于正常组（P〈0．05）：艾灸组还原值高于荷瘤组（P〈0.05）：荷瘤组小鼠脾淋巴细胞Foxp3 mRNA、Stat5a mRNA、Stat5b mRNA表达较正常组增高（P〈0．05）：艾灸组、电针组小鼠脾淋巴细胞Foxp3 mRNA、Stat5a mRNA、Stat5b mRNA较荷瘤组表达降低（P〈0．05）：荷瘤组小鼠胸腺Foxp3 mRNA表达较正常组增高（P〈0．05）：艾灸组小鼠胸腺Foxp3 mRNA表达较荷瘤组降低（P〈0．05）：电针组小鼠胸腺Foxp3 mRNA表达较荷瘤组降低,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论艾灸治疗具有抑制H22荷瘤小鼠瘤体生长、提高H22荷瘤小鼠生存率的趋势：电针和艾灸治疗能提高H22荷瘤小鼠脾脏指数、增强H22荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖能力：针灸调节肿瘤免疫抑制效应与电针和艾灸下调H22荷瘤小鼠脾淋巴细胞Foxp3 mRNA、Stat5a mRNA、Stat5b mRNA表达,胸腺Foxp3 mRNA表达有关。     

狼疮平颗粒通过核因子κB信号途径下调BXSB狼疮肾炎小鼠肾组织MCP-1表达

目的研究狼疮平颗粒是否可以通过下调核因子κB（NF-κB）信号途径抑制单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein l,MCP-1）的表达而发挥对狼疮肾炎（lupus nephritis,LN）小鼠的肾脏保护作用。方法将18只雄性11周龄BXSB LN小鼠随机分为模型组、激素组和中药组,每组6只,分别给予生理盐水、甲泼尼龙、狼疮平颗粒灌胃;另选6只同周龄的雄性C57BL/6小鼠作为正常组,给予生理盐水灌胃,均每天1次,连续4周。测定24 h尿蛋白量;分别采用RT-PCR、Western blot检测肾组织中MCP-1 mRNA和蛋白表达;免疫组化法检测肾组织NF-κB p65表达;PAS染色做肾组织病理活动性指数（activity index,AI）计分;ELISA法检测ds-DNA抗体含量;分析上述指标间的关系。结果模型组24 h尿蛋白水平、血清ds-DNA抗体含量、MCP-1蛋白及mRNA表达水平、NF-κB p65表达水平、AI计分均较正常组明显升高（P〈0.01）。用药后中药组与激素组上述指标均明显降低（P〈0.05）。LN小鼠MCP-1蛋白表达水平与其mRNA表达水平、NF-κB p65表达水平、AI计分、24 h尿蛋白定量及ds-DNA抗体含量均呈正相关（r=0.984、0.936、0.887、0.698、0.679,P〈0.01）。结论狼疮平颗粒可能通过抑制NF-κB的核转位降低MCP-1水平而发挥肾脏保护作用。MCP-1在LN的发生和发展过程中起重要作用,是LN理想的治疗靶位之一。     

狼疮3号颗粒治疗系统性红斑狼疮的实验研究

目的通过研究中药狼疮3号颗粒(Langchuang-3 granule,LC-3)对BXSB系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)模型鼠体重、自身抗体、脾指数、胸腺指数以及肾脏免疫复合物沉积的影响,探讨其对SLE的作用机制。方法将BXSBSLE模型鼠随机分成4组:对照组、中药组、西药组、中西药组。采用动态观察法测定小鼠体重变化,重量法测定小鼠脾指数及胸腺指数;双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清中抗核抗体(ANA)的含量;直接免疫荧光法测定小鼠肾脏中免疫球蛋白G(IgG)、补体C3的含量。结果中药组及中西药组小鼠体重增长明显,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);中药组已降低的胸腺指数升高,与空白对照组比较,差异有统计学意义,对已升高的脾指数作用不明显,西药组脾指数及胸腺指数均下调,而中西药组升高的脾指数降低(P0.01),降低的胸腺指数升高(P0.05);各给药组自身抗体(ANA)水平均降低,转为阴性(P0.01);小鼠肾脏IgG、补体C3的荧光强度均降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 LC-3与西药类固醇激素均对BXSB狼疮模型鼠有明显的治疗作用,中西药合用疗效优于单独应用中药或西药。     

利用基因芯片探讨中药复方对MRL/1pr狼疮小鼠肾脏基因表达及Th1/Th2细胞的调节作用

目的：探讨中药复方对MRL/1pr狼疮小鼠肾脏基因表达及Th1/Th2细胞因子比例的调节作用。方法：将狼疮小鼠随机分为两组。治疗组每天组饲料喂服中药复方。对照组进食正常鼠饲料。两组均自由饮水。观察小鼠存活率,蛋白尿阳性率及肾脏病理改变。将小鼠肾组织mRNA与点有8192条小鼠基因的芯片进行杂交,RT-PCR法检测肾组织干扰素γ（IFN-γ）和白细胞介素4（IL-4）的表达。结果：存活率治疗组为81.3%,对照组为51.2%;蛋白尿阳性率治疗组为40%,对照组为80%;治疗组肾小球与肾小血管病变较轻,芯片结果显示两组间差异表达（2倍以上0的基因共279条,RT-PCR结果显示治疗组肾组织中Th1/Th2细胞因子（IFN-γ/IL-4）比例增加（与对照组比较）。结论：中药复方能改善狼疮小鼠肾脏病变,调节肾组织多个系统的基因表达,纠正Th1/Th2细胞因子的比例失衡。     

补肾益髓法对慢性再生障碍性贫血IL-3、SCF、IFN—Y、TNF—αmRNA表达的影响

目的 通过观察补肾益髓中药对慢性再生障碍性贫血患者造血调控因子表达的影响，探讨补肾中药的调节机制。方法 将120例患者随机分为补肾益髓法治疗组90例，西药对照组30例；另取志愿献髓者骨髓10例作为正常健康人对照组。通过RT-PCR法观察其骨髓造血细胞调控因子干细胞因子（SCF）、白细胞介素3（IL-3）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、干扰素γ（IFN-γ）mRNA的半定量表达情况。结果两组患者治疗前SCF、IL-3表达水平明显低于健康人组（P〈0．01），治疗后升高（P〈0．05），治疗组高于对照组；治疗前TNF-α、IFN-γ表达水平明显高于健康人组（P〈0．01），治疗后降低（治疗组P〈0.01，对照组P〈0．05），治疗组低于对照组（TNF-α P〈0．01，IFN—γ P〈0．05）。结论 补肾益髓法中药可调节紊乱的免疫状态，增强正调控因子的作用，解除过高的负调控因子对造血细胞的过度抑制而达到治疗目的。     

补肾中药对哮喘缓解期患儿Th1/Th2平衡的影响

目的探讨补肾中药调节T1／Th2平衡治疗哮喘的分子机制。方法哮喘缓解期儿童20例,抽取静脉抗凝血分离单个核细胞（peripheral blood mononuelear cells,PBMC）。每份血样均分为3部分,分为空白组、喘可治（CKZ）Ⅰ组和CKZⅡ组,加入不同浓度的药物体外培养48h,分别收集细胞沉淀。荧光定量PCR检测T—bet mRNA、GATA-3 mRNA的表达强度及细胞因子IFN-γ mRNA、IL-4 mRNA的表达水平。结果不同剂量CKZ干预后,PBMC中T—bet mRNA的表达均较空白组显著增强,以CKZⅡ组的差异更为明显（P〈0．01）;CKZ组与空白组比较,GATA-3 mRNA的表达强度差异无显著性;CKZ组的IFN-γ mRNA的表达较空白组增强,其中CKZⅡ组与空白组比较差异有显著性（P〈0．05）;CKZⅡ组IL-4 mRNA的表达强度较空白组显著减低（P〈0．01）。CKZ组的T—bet／GATA-3比值与空白组比较,差异无显著性（P〉0．05）;CKZ组的IFN-γ／IL-4的比值较空白组上升,其中CKZⅡ组与空白组相比显著升高（P〈0．05）。结论补肾中药CKZ可以通过转录因子和细胞因子多个环节,增强Th1细胞的功能,同时抑制Th2细胞的功能,对Th1／Th2平衡具有多层次的调节作用。     

砒霜对MRL/lpr自发性狼疮小鼠的疗效及安全性观察

目的探讨砒霜中的有效成分三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr自发性狼疮小鼠的疗效及安全性观察。方法20周龄(发病期)MRL/lpr狼疮小鼠24只,设C57正常小鼠24只做参照,随机平分为治疗组和对照组,治疗组ATO 0.4 mg/(kg.d)隔日腹腔注射,对照组隔日腹腔注射同等量生理盐水,疗程为60 d,比较治疗组和对照组在体质量、病死率、血常规上的差异;采用ELISA法检测小鼠血清抗ds-DNA抗体的表达水平。结果MRL/lpr狼疮小鼠中治疗组体质量增长幅度明显高于对照组(P=0.006);累积病死率25%低于对照组(50%);血小板较对照组有所上升(P=0.009);血清抗ds-DNA抗体(OD值)对照组为1.798 5±0.262 1,治疗组为0.918 3±0.067 7,治疗组低于对照组(P<0.01)。C57小鼠未见在对照组和治疗组中有显著性差异。结论ATO可以延长MRL/lpr小鼠动物生存期限,可降低动物的死亡率,降低外周血抗ds-DNA抗体的表达水平,而对C57正常小鼠则无明显作用。     

双氢青蒿素对BXSB狼疮小鼠自身抗体产生、TNFα分泌及狼疮性肾炎病理改变的影响

目的：观察双氢青蒿素(DQHS)对BXSB狼疮模型小鼠几项免疫指标及狼疮性肾炎(lupus nephri—tis,LN)病理改变的影响,探讨DQHS治疗系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的可能机制。方法：采用ELISA方法检测血清中的抗双链DNA(ds-DNA)抗体,以ELISA试剂盒检测血清中肿瘤坏死因子α(TNFα)的水平,对肾脏组织进行HE常规染色及Masson特殊染色。结果：血清中TNFα、抗dS—DNA抗体水平,DQHS 125mg／kg给药组及DQHS25mg／kg给药组与模型组比较,差异有显著性(P<0．05或P<0．01);各组肾脏组织HE、Masson染色病理改变差异有显著性。结论：DQHS能抑制BXSB小鼠血清抗ds-DNA抗体的生成,对BXSB小鼠血清中TNFα的分泌有抑制作用,能明显改善BXSB小鼠LN的病理状态。     

狼疮平颗粒对BXSB狼疮性肾炎小鼠B淋巴细胞活化因子表达的影响

目的研究B淋巴细胞活化因子(Blymphocyte activating factor,BAFF)在BXSB狼疮性肾炎小鼠血清和外周血B淋巴细胞(PBBC)中的表达,并观察中药狼疮平颗粒的治疗作用。方法将11周龄雄性BXSB狼疮性肾炎小鼠18只随机分为狼疮对照组、激素治疗组、狼疮平治疗组,每组6只;另取11周龄雄性C57BL/6小鼠6只作为正常对照组。分别给予灌胃生理盐水(10mL/d)、甲泼尼龙[5mg/(kg·d)]、狼疮平颗粒[4g/(kg·d)]、生理盐水(10mL/d),治疗4周,测定各组尿蛋白、ds-DNA和体重,分别应用ELISA、RT-PCR方法检测血清中可溶性BAFF(sBAFF)和外周血B细胞中BAFF-mRNA的表达及变化,并观察肾脏病理活动性计分、24h尿蛋白定量、ds-DNA与sBAFF的关系。结果狼疮性肾炎小鼠血清sBAFF、PBBC中BAFF mRNA水平、24h尿蛋白定量、血清ds-DNA含量均较正常小鼠明显升高。激素和狼疮平治疗组治疗后sBAFF、BAFF mRNA较治疗前明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),两组治疗后sBAFF、BAFF mRNA水平无明显差异(P>0.05)。狼疮性肾炎小鼠血清sBAFF水平与肾病理活动性计分、24h尿蛋白定量、ds-DNA成正相关(r=0.8098、0.8220、0.8535,P<0.01)。结论 BAFF在狼疮性肾炎的发生发展中起着重要的作用,可以监测病情变化并预测复发,是狼疮性肾炎治疗的理想靶点之一。中药狼疮平可以通过降低BAFF水平而改善狼疮性肾炎病情,值得进一步临床推广应用。     

狼疮方2号对狼疮模型血清中几种细胞因子的影响

 目的研究中药复方狼疮方2号(LCF-2)对BXSB狼疮模型鼠血清中细胞因子的作用及对脾指数、胸腺指数的影响,探讨其对SLE的作用机制。方法 将BXSB狼疮模型鼠随机分为空白对照组、中药组、西药组、中西药合用组。重量法测定小鼠脾指数及胸腺指数;双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清中IL-2,IL-6,TNF-a的含量。结果 LCF-2组能够升高已降低的胸腺指数,与空白对照组比差异有显著性,对已升高的脾指数作用不明显,而中西药组可以降低升高的脾指数(P<0.01),升高降低的胸腺指数(P<0.05);中药组能显著抑制TNF-a(P<0.05),上调IL-2水平(P<0.01),对IL-6的降低作用无统计学意义;中西药合用药组能抑制TNF-a(P<0.01),上调IL-2水平(P<0.05),抑制IL-6(P<0.05)。结论 中药复方LCF-2与西药泼尼松均对BXSB狼疮小鼠有明显的治疗作用,但两者的作用机制不同。中西药合用组疗效优于中药、西药组。     

三氧化二砷对MRL/lpr小鼠CD4+T细胞增殖和IFN-γ、IL-4分泌的调节作用

 目的探讨三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr狼疮小鼠脾脏CD4^+T细胞增殖以及IFN-γ和IL-4转录和翻译水平的影响。方法免疫磁珠分别分选15只MRL/lpr狼疮小鼠和15只C57BL正常对照小鼠脾脏CD4⁺T细胞,进而将CD4⁺T细胞随机分为空白组(RPMI1640),对照组(PHA20mg·L^-1+IL-21000u·mL^-1),ATO组[PHA20mg·L^-1+IL-21000u·mL^-1(48h)后+ATO1.0μmol·L^-1],体外共培养至72h。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测3组CD4⁺T细胞的增殖和抑制水平;酶联免疫吸附反应(ELISA)检测上清液中IFN-γ和IL-4水平;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测上述细胞因子基因的转录水平。结果①分选后获得的CD4⁺T细胞纯度为(94.12±1.08)%,细胞存活率为(95.82±3.41)%;②MRL/lpr小鼠对照组CD4⁺T细胞的增殖水平(A值)(0.343±0.019)较空白组(0.054±0.008)高(P<0.001);却低于C57BL小鼠对照组的水平(0.375±0.018)(P<0.05);③MRL/lpr和C57BL小鼠ATO组CD4⁺T细胞增殖水平(A值)分别为(0.324±0.013)和(0.362±0.013),均低于对照组(P<0.05,P<0.05);④MRL/lpr小鼠对照组IFN-γ的表达水平[(562.287±60.345)ng·L^-1]明显高于C57BL小鼠对照组[(253.208±59.434)ng·L^-1](P<0.05);ATO对MRL/lpr小鼠IFN-γ的抑制程度大于C57BL小鼠(P<0.05);MRL/lpr小鼠对照组的IL-4表达水平[(41.332±8.039)ng·L^-1]与ATO组[(23.046±3.253)ng·L^-1]和C57BL小鼠对照组[(29.303±8.038)ng·L^-1]比较,也具有明显的统计学差异(P<0.05和P<0.05);ATO对MRL/lpr小鼠IL-4的抑制程度高于C57BL小鼠(P<0.05);⑤在转录水平上,与C57BL小鼠相比,ATO对MRL/lpr小鼠IFN-γmRNA和IL-4mRNA的抑制程度更加明显(P<0.05和P<0.05);ATO对IFN-γ和IL-4表达水平的抑制和转录水平的抑制正相关,r=0.720(P<0.001)和r=0.557(P<0.01)。结论MRL/lpr小鼠存在CD4⁺T细胞的异常增殖,ATO能在不影响细胞存活率的浓度下抑制MRL/lpr小鼠CD4⁺T细胞的异常增殖活化,通过抑制其细胞因子IFN-γ和IL-4的mRNA分泌影响两者的表达,且对MRL/lpr小鼠抑制程度大于C57BL小鼠,表明ATO能抑制狼疮鼠的异常免疫功能,可进一步用于SLE的治疗。