RISK信号通路在1-磷酸鞘氨醇后适应减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

目的研究再灌注损伤挽救激酶(reperfusion injury salvage kinase,RISK)信号通路在1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)后适应减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法将H9c2细胞随机分为7组,即(1)正常对照组(C);(2)缺氧/复氧组(H/R);(3)S1P组;(4)S1P+LY294002组(S1P+LY);(5)LY组;(6)S1P+PD98059组(S1P+PD);(7)PD组。采用MTT法测定各组细胞存活率;比色法测定丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(TSOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活力;采用激光共聚焦显微镜技术检测细胞内游离钙离子浓度变化;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;Western blot法测定Akt和ERK1/2蛋白的磷酸化水平。结果与H/R组比较,S1P组可明显增加H9c2细胞缺氧/复氧损伤后细胞存活率及凋亡率,增加TSOD及Mn-SOD活力,降低MDA含量,降低钙离子浓度,增加Akt和ERK1/2磷酸化水平,而PI3K/Akt信号通路阻断剂LY294002或ERK1/2阻断剂PD98059可阻断S1P对H9c2的上述作用。结论 S1P能够减轻H9c2细胞缺氧/复氧损伤,加入PI3K/Akt抑制剂LY294002和ERK1/2抑制剂PD98059均使S1P的保护作用被取消,表明S1P通过RISK信号通路发挥抗H9c2细胞缺氧/复氧损伤作用。     

心肌离子通道的研究进展

心血管疾病主要死因是致命性心律失常,对它的治疗仍是一个问题。心肌细胞膜上存在多种离子通道,这些通道表达和功能的彼此平衡是心脏正常功能的基础。当某种通道的功能或表达异常时,通道间平衡被打破,将出现心律失常。对心肌离子通道的全面认识,可以从分子水平更好的解释心肌电生理及病理机制。     

薯蓣皂苷对培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

目的研究薯蓣皂苷对培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法采用体外培养乳鼠心肌细胞，建立缺氧／复氧损伤模型，以薯蓣皂苷进行干预。心肌细胞随机分为5组：空白对照组（C组）；缺氧／复氧组（A／R组）；薯蓣皂苷（Dioscin）低、中、高剂量干预组（Dioscin＋A／R组）。分别观察各组心肌细胞搏动频率；MTr法测细胞存活率；用Rhl23荧光探针标记线粒体，检测荧光强度以反映线粒体膜电位（△ψm）变化；Fluo-3负载心肌细胞，激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙离子浓度变化。结果薯蓣皂苷干预组心肌细胞搏动频率、细胞存活率、△ψm与A／R组比较明显升高；细胞内平均钙离子荧光强度显著低于A／R组。结论从细胞水平初步证实薯蓣皂苷预处理心肌细胞对A／R损伤有一定保护作用，保护机制可能涉及对线粒体膜保护和防止细胞内钙超载等。     

蒿鳖养阴软坚方抗CCl4复合因素所致大鼠肝纤维化的作用

目的 观察蒿鳖养阴软坚方抗CCl₄复合因素致大鼠肝纤维化的作用。方法 Wistar大鼠随机分为对照组,模型组,蒿鳖养阴软坚方低、中、高剂量组,复方鳖甲软肝片及秋水仙碱阳性对照组。CCl₄复合因素法建立肝纤维化模型,比色法测定血清丙二醛（MDA）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）的量及肝组织羟脯氨酸（Hyp）水平,明胶酶谱法检测肝组织基质金属蛋白酶2（MMP-2）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）的活性,免疫组化法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果 与模型组相比,随着剂量的增加,蒿鳖养阴软坚方组大鼠血清MDA水平逐渐下降,血清TP、ALB的量逐渐增加,肝组织Hyp的量和MMP-2活性逐渐下降,MMP-9活性变化不明显,肝组织α-SMA的表达下降。结论 蒿鳖养阴软坚方能够对抗CCl₄复合因素诱发的大鼠肝纤维化。     

吡那地尔、美托洛尔、谷氨酰胺、胰岛素单独及联合使用对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的抗凋亡作用及机制

目的研究吡那地尔(pinacidil,Pin)、美托洛尔(metoprolol,Met)、谷氨酰胺(glutamine,Glu)、胰岛素(insu-lin,Ins)4药联用对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)所致H9c2心肌细胞损伤的抗凋亡保护作用并探讨其作用机制。方法将培养的H9c2心肌细胞随机分为7组,即①正常对照(Con)组;②缺氧/复氧(H/R)组;③吡那地尔(Pin)组;④美托洛尔(Met)组;⑤谷氨酰胺(Glu)组;⑥胰岛素(Ins)组;⑦吡那地尔、美托洛尔、谷氨酰胺和胰岛素4药联用(PMGI)组。细胞经药物处理建立H/R损伤模型,并测定各组H9c2心肌细胞的存活率;收集培养液测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡百分率;罗丹明123(Rhodamine123,Rh123)荧光探针标记线粒体,检测荧光强度以反映心肌细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,△Ψm)变化。结果对于H/R损伤的H9c2心肌细胞,吡那地尔、美托洛尔、谷氨酰胺与胰岛素4药联用组与药物单用组或H/R组相比能明显提高细胞存活率,保护其细胞膜,减少LDH渗漏;减少细胞凋亡率;提高△Ψm。结论吡那地尔、美托洛尔、谷氨酰胺和胰岛素4药联用后,通过不同途径保护心肌细胞,达到协同抗凋亡作用。     

牛磺酸镁配合物对乌头碱诱发心律失常大鼠心肌细胞钙通道的影响

目的研究牛磺酸镁配合物(TMCC)对乌头碱诱发心律失常大鼠心肌细胞L型钙电流(I_(Ca,L))的影响。方法酶解法分离大鼠单个心室肌细胞,乌头碱诱导大鼠心律失常模型,胺碘酮作为阳性对照,100、200和400μmol·L~(-1)TMCC作用于心肌细胞。应用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞I_(Ca,L)的变化。结果 400μmol·L~(-1)TMCC显著增加大鼠正常心肌细胞I_(Ca,L),胺碘酮则使之减小。1μmol·L~(-1)乌头碱使I_(Ca,L)电流密度由(4.3±1.6)pA·pF~(-1)增加到(6.4±1.9)pA·pF~(-1)(p<0.01),400μmol·L~(-1)TMCC能显著降低乌头碱诱导的I_(Ca,L)增加。胺碘酮则能使之恢复为(3.7±1.4)pA·pF~(-1)。结论 400μmol·L~(-1)TMCC能增加正常细胞的I_(Ca,L),对钙内流有促进作用,并可减少乌头碱诱导的心律失常大鼠心肌细胞异常增加的电流。     

链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤

目的 研究链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠缺血/再灌注(I/R)心肌的损伤,从心电图、心肌梗死面积、心肌大体和超微结构观察损伤的程度并分析其可能的作用机制.方法 采用STZ(45 mg/kg)诱导大鼠糖尿病4周后制备心肌缺血30 min再灌注120 min模型,连续检测心电图变化,用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定心肌梗死面积、HE染色和电镜下观察心肌组织结构的改变.结果 糖尿病大鼠由I/R损伤引起的心肌梗死面积并没有增加,但是HE染色和电镜下均发现糖尿病心肌损伤更为严重,肌纤维结构消失、心肌细胞膜和细胞核损伤、线粒体降解、血管淤滞、内皮损伤.结论 STZ诱导糖尿病4周的大鼠缺血/再灌注后心肌损伤较非糖尿病大鼠加重.     

藏宝滋补液对大鼠降糖作用的实验研究

藏宝滋补液是藏医药的传统方剂,是祖国医药学中的瑰宝,它主含冬虫夏草、雪莲花、藏红花和红景天。在应用中该滋补液作为营养保健品深受好评。为弘扬祖国医药学,开发藏宝滋补液的新用途,本室在整体动物水平观察藏宝滋补液对正常大鼠和糖尿病大鼠的降糖效果,为该药应用于临床防治糖尿病提供实验依据。     

溃结康对三硝基苯磺酸诱导大鼠炎症性肠病的作用研究

目的 观察溃结康经灌肠给药对三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)诱导的炎症性肠病动物模型的作用,以明确溃结康对炎症性肠病的治疗作用,为探索药物应用于克罗恩病治疗的可行性。方法 采用TNBS灌肠的方法诱导大鼠溃疡性结肠炎模型,观察溃结康灌肠给药对大鼠疾病活动指数(DAI)评分、血清干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-l(IL-1)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)和肠黏膜中谷氨酰胺(Glutamine,Gln)的含量的影响,并观察药物对大鼠结肠组织损伤评分以及病理学的影响。结果 TNBS诱导的结肠炎模型可引起动物体质量下降,肉眼血便或便潜血阳性,DAI评分增高,血清IFN-γ,IL-1升高,肠黏膜Gln降低,溃结康不同剂量组灌肠给药可改善TNBS引起的DAI评分增高以及降低血清IFN-γ、IL-1水平,升高肠黏膜Gln,缓解结肠炎组织学变化,其中尤以溃结康高剂量组作用更为明显。结论 溃结康灌肠给药对缓解TNBS诱导结肠炎模型有一定治疗作用。     

灯盏花素对大鼠CYP3A4体内活性的影响

目的以咪达唑仑作为探针药物,研究灯盏花素对大鼠细胞色素P450 3A4(CYP3A4)体内活性的影响,为临床合理用药提供参考。方法将SD大鼠随机分为3组,对照组、灯盏花素低剂量组和高剂量组。低剂量组和高剂量组每天分别尾静脉给予灯盏花素粉针剂0.18 mg/100 g及0.54 mg/100 g,共10 d,对照组给予生理盐水。各组分别于第11天注射咪达唑仑溶液,于给药前及给药后不同时间点眼内眦静脉取血0.8 ml,使用高效液相色谱(HPLC)法测定血浆中咪达唑仑的浓度。结果静脉给予大鼠灯盏花素粉针剂10 d后,与对照组相比,低剂量组和高剂量组咪达唑仑的AUC、MRT和tφ均显著高于对照组(P<0.05),CL显著低于对照组(P<0.05);灯盏花素高剂量组与低剂量组无显著性差异。结论灯盏花素可明显抑制大鼠CYP3A4的体内活性。