再生障碍性贫血T-bet/IFN-酌信号通路及中医研究进展

再生障碍性贫血（AA）是T 淋巴细胞介导的自身免疫性疾病。AA 的发病机制研究主要集中在免疫功能异常、造血干细胞损伤、造血微环境异常3 个方面。近年来,AA 免疫机制异常越来越受到中医药血液病研究者的关注。AA 发病机制中细胞因子及相关的细胞内信号转导通路尤其复杂,其中T-bet/IFN-γ信号通路在AA 发生发展过程中起着重要的作用。本文就T-bet/IFN-γ及其相关信号传导通路在AA 中的作用做一综述。     

慢性再生障碍性贫血患者中医证型与T-bet/GATA-3相关信号通路、Th亚群的相关性

目的从Th细胞失衡、转录因子T-bet/GATA-3及相关信号通路水平分析其与慢性再生障碍性贫血(CAA)中医证型的关系。方法选择CAA患者,辨证分为脾肾阳虚组和脾肾阴虚组各20例,另选20例健康者做对照(正常组),采用实时荧光定量PCR检测CAA患者外周血单个核细胞(PBMNC)T-bet、GATA-3及STAT4、STAT6mRNA表达,采用流式细胞术、酶联免疫吸附法检测CAA患者外周血Th1、Th2比例及PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平。结果脾肾阴虚组患者PBMNCT-bet、STAT4、T-bet/GATA-3比值、Th1、IFN-γ、IL-12均高于脾肾阳虚组(P<0.05),并且此2组患者亦高于正常组(P<0.05),而GATA-3、STAT6、IL-43组比较则无统计学差异(P>0.05)。结论与脾肾阳虚型患者相比,CAA脾肾阴虚型存在更严重的IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路异常活化和Th1偏移,脾肾阴虚型存在更明显的免疫异常状态。     

川芎嗪对儿童哮喘中转录因子T-bet/GATA-3表达失衡干预作用的研究

目的通过检测30例哮喘儿童T-betmRNA和/GATA-3mRNA的表达强度及上清液中IFN-γ、IL-4水平,评价T-bet/GATA-3的比率与Th1/Th2失衡的关系及哮喘发病机制,研究川芎嗪对儿童哮喘中转录因子T-bet/GATA-3表达失衡的干预作用。方法抽取30例正常对照组、30例哮喘发作组儿童空腹外周静脉血4 ml,分离出单核细胞,用ELISA法测定上清液IL-4、IFN-γ含量,RT-PCR法检测转录因子T-bet mRNA和GATA-3mRNA表达强度。结果哮喘组儿童IFN-γ/IL-4比值明显低于正常对照组(P<0.001),川芎嗪干预组IFN-γ/IL-4比值明显高于哮喘(P<0.001),差异有显著性。哮喘组T-bet/GATG-3比值低于正常对照组(P<0.001),川芎嗪干预组T-bet/GATA-3比值高于哮喘组(P<0.001),差异有显著性。结论川芎嗪能通过上调儿童哮喘患者T-bet mRNA的表达强度,降低GA-TA-3mRNA表达水平,从而逆转Th1/Th2功能失衡,对儿童哮喘起到有效防治作用。     

STAT1与肺纤维化关系研究进展

肺纤维化疾病病因复杂,认为细胞因子占重要作用,信号传导与转录激活因子1（STAT1）作为炎症信号通路中的关键因子,在肺纤维化疾病中异常表达,显示其可能与肺纤维化发病机制中占重要地位。STATI参与肺纤维化可能与其在JAK-STAT信号通路中表达,同IL-18,IFN-γ,1CAM-1等炎症介质相互作用有关。     

双氢青蒿素与火把花配伍的免疫抑制作用及机制研究

目的:研究双氢青蒿素与火把花配伍对迟发型超敏反应小鼠的免疫抑制作用及可能的作用机制。方法:建立迟发型超敏反应(delayed-type hypersensitivity,DTH)小鼠模型,观察双氢青蒿素、火把花及两者配伍对DTH小鼠的免疫抑制效应;ELISA法检测血清中γ干扰素(Interferon,IFN-γ)和白介素4(Interleukin,IL-4)含量;RT-qPCR技术检测淋巴结中Th1/Th2细胞转录因子T-bet及GATA-3的基因表达。结果:与正常对照比较,模型对照组小鼠耳肿胀度、胸腺、脾脏指数显著升高,血清中IL-4、IFN-γ含量及IFN-γ/IL-4比值显著升高,淋巴结中T-bet mRNA表达水平显著上调,GATA-3 mRNA表达水平显著下调;与模型对照组比较,双氢青蒿素与火把花配伍组(0.2+7.5)g/kg小鼠耳肿胀度、胸腺、脾脏指数显著降低,血清中IFN-γ含量显著降低、IL-4含量显著升高,IFN-γ/IL-4比值显著降低,淋巴结中T-bet的mRNA表达水平显著下调,GATA-3的mRNA表达水平显著上调。结论:青蒿素与火把花配伍能够明显抑制DTH反应,其可能通过降低IFN-γ含量、升高IL-4含量,以及调节Thl/Th2免疫平衡从而发挥免疫抑制作用。     

润燥灵方对干燥综合征模型小鼠血清Th1/Th2的影响

目的探讨润燥灵方治疗干燥综合征的可能作用机制。方法将90只C57bl/6j小鼠随机分为空白组、模型组、强的松组及润燥灵低、中、高剂量组,每组15只。除空白组外,其余各组采用免疫诱导法建立干燥综合征小鼠模型。造模成功后润燥灵高、中、低剂量组分别给予润燥灵方水煎剂36、18、9 g/(kg·d),强的松组给予强的松0.2 g/(kg·d),空白组和模型组灌服0.2 ml生理盐水,每日1次。连续给药4周后,ELISA法检测血清干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平,PCR法检测颌下腺T-bet和GATA-3转录因子的表达量,流式细胞仪检测血清Th1和Th2细胞的数量。结果模型组IFN-γ、IL-4、T-bet表达及T-bet/GATA-3、CD3+CD8-/IFN-γ、CD3+CD8-/IL-4及IFN-γ/IL-4明显高于空白组,润燥灵高、中剂量均能够降低IFN-γ、T-bet表达及CD3+CD8-/IFN-γ、CD3+CD8-/IL-4,以润燥灵高剂量组作用最明显(P0.05或P0.01)。结论润燥灵方能够下调干燥综合征模型小鼠血清Th1/Th2,可能是其治疗干燥综合征的作用机制之一。     

叶绿素铜钠盐对AA模型小鼠的实验研究

目的:探讨叶绿素铜钠盐对再生障碍性贫血治疗的作用机制。方法:建立免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型,分别胃饲3种不同剂量叶绿素铜钠25,50,100 mg/(kg.d),以环孢菌素[25 mg/(kg.d)]为阳性对照组,正常对照组及模型对照组胃饲生理盐水,连续15 d。检测血清及骨髓α肿瘤坏死因子,γ干扰素、白介素-6含量。结果:免疫介导再生障碍性贫血模型小鼠血及骨髓IFN-γ、IL-6、TNF-α水平升高,叶绿素铜钠盐组模型小鼠血及骨髓IFN-γ、IL-6、TNF-α水平降低。结论:叶绿素铜钠盐通过调节造血调控因子IFNγ-、TNF-α及IL-6的代谢,促进造血干/祖细胞的造血功能,从而有效治疗AA。     

三伏天灸对支气管哮喘患者T-bet、GATA-3、Foxp3及STAT-6影响的初步研究

目的:探讨转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3及STAT-6在支气管哮喘患者中的作用,研究三伏天灸治疗支气管哮喘的免疫调节机理。方法:将18例支气管哮喘患者纳入治疗组,选取18例健康志愿者纳入对照组,运用实时荧光定量PCR检测支气管哮喘患者治疗前、治疗6个月后和对照组样本外周血单个核细胞(PBMNC)中T-bet、GATA-3、Foxp3和相关信号通路STAT-6的mRNA表达,采用流式细胞术检测外周血Th1、Th2比例,酶联免疫吸附法(ELISA)检测IFN-γ、IL-4水平。结果:经三伏天灸治疗后,支气管哮喘患者IFN-γ分泌降低,T-bet、GATA-3表达水平升高,STAT-6水平降低;治疗前后Foxp3水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:三伏天灸可下调STAT-6,上调T-bet、GATA-3,从而抑制Th2过度分泌,调节Th1/Th2比例平衡,在哮喘病程中起到免疫调节作用。     

氧化苦参碱对慢性乙型病毒性肝炎Toll样受体9信号通路的影响

目的探讨氧化苦参碱抗乙型肝炎病毒(HBV)感染的作用机制。方法分离提取慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMCs),在体外加入氧化苦参碱刺激,检测其诱导抗病毒细胞因子产生的能力,及对Toll样受体9(TLR9)信号通路表达及功能的调节作用。结果氧化苦参碱可直接刺激PBMCs分泌大量干扰素α(IFN-α)和干扰素γ(IFN-γ),上调PBMCs细胞TLR9信号通路中TLR9、髓样分化因子88及肿瘤坏死因子受体相关因子6等信号传递分子,并诱导信号通路活化释放大量抗病毒细胞因子(IFN-α、IFN-γ和肿瘤坏死因子-α)。结论氧化苦参碱通过直接诱导抗病毒细胞因子释放及上调活化TLR9信号通路发挥其抗HBV作用。     

小青龙汤对单纯型和复合型变应性鼻炎豚鼠模型Th1/Th2失衡的影响

目的:建立单纯型和肾阳虚复合型2种不同变应性鼻炎模型,探讨小青龙汤对2种变应性鼻炎模型Th1/Th2失衡作用的异同。方法:将105只雄性豚鼠随机分7组,每组15只:空白对照组(A组),单纯模型对照组(B1组),小青龙汤干预单纯模型组(B2组),息斯敏干预单纯模型组(B3组),肾阳虚复合模型对照组(C1组),小青龙汤干预肾阳虚复合模型组(C2组),息斯敏干预肾阳虚复合模型组(C3组)。B1、B2、B3组进行单纯变应性鼻炎造模;C1、C2、C3组在单纯变应性鼻炎的模型上进行肾阳虚复合模型造模。造模成功后,模型组进行用药观察,记录各组局部过敏反应;ELISA法(酶联免疫吸附试验法)检测血清中IFN-γ、IL-4、IL-2和IL-10等细胞因子含量;荧光定量PCR法测脾组织中IFN-γmRNA、IL-4mRNA、T-bet mRNA、GATA-3 mRNA等转录因子的相对含量。结果:变应性鼻炎单纯模型和肾阳虚复合模型均出现IFN-γ降低(P0.01),IL-4升高(P0.01),IFN-γ/IL-4比值降低(P0.01),IFN-γmRNA降低(P0.01),IL-4 mRNA升高(P0.01),IFN-γmRNA/IL-4 mRNA比值降低(P0.01),T-bet mRNA降低(P0.01),但可使GATA-3 mRNA升高(P0.01),因而T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值也相对降低(P0.01)。小青龙汤可使单纯模型IFN-γ升高(P0.01),IL-4降低(P0.01),IFN-γ/IL-4比值升高(P0.01);升高IFN-γmRNA(P0.01),降低IL-4 mRNA(P0.01),使IFN-γmRNA/IL-4 mRNA比值升高(P0.01);使T-bet mRNA升高(P0.01),但可使GATA-3 mRNA降低(P0.01),从而使T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值也相对升高(P0.01)。小青龙汤可降低肾阳虚复合模型中IL-4的含量(P0.01),对IFN-γ作用不明显,升高IFN-γ/IL-4比值(P0.01);可使IFN-γmRNA升高(P0.01),但对IL-4 mRNA变化不大,IFN-γmRNA/IL-4 mRNA比值升高(P0.01);对T-bet mRNA作用不明显,但可使GATA-3 mRNA降低(P0.05),因而T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值也相对升高(P0.01)。结论:小青龙通过调节IFN-γ/IL-4比值、IFN-γmRNA/IL-4 mRNA比值和T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值,来调节Th1/Th2平衡,对单纯变应性鼻炎模型的过敏反应的改善更为明显。     

化疗所致造血干细胞衰老的相关信号通路及中药治疗进展

化疗所致的骨髓抑制在临床中往往难以避免,造血干细胞衰老是化疗所致骨髓抑制最关键的机制。造血干细胞衰老相关信号通路包括p53-p21~(Waf1/Cip1)、p16~( Ink4a)-Rb、Wnt/β-catenin、PI3K/AKT/mTOR等多条信号通路,但其具体分子机制仍不明确。在这篇综述中,我们总结了造血干细胞衰老可能涉及的多条分子信号通路,以及中药复方及单体缓解造血干细胞衰老的作用机制。希望为中医药干预造血干细胞衰老研究指明方向。     

凉血解毒汤治疗急性再生障碍性贫血的机制探讨

目的 探讨凉血解毒汤治疗急性再生障碍性贫血的机制。方法 采用酶联免疫法检测急性再生障碍性贫血患者及正常对照者骨髓上清液中肿瘤坏死因子a（TNF—a）、γ干扰素（IFN-γ）、可溶性自细胞介素2受体（sIL-2R）的含量，并观察凉血解毒汤在体外对骨髓单个核细胞经植物血球凝集素诱生的造血负调控因子的调变作用。结果 急性再生障碍性贫血患者骨髓上清液中TNF—α、IFN-γ、sIL-2R的含量明显高于正常对照者，差异有显著性意义（P〈0．05）；体外试验显示，在多数急性再生障碍性贫血患者中凉血解毒汤可明显抑制IFN-γ、sIL-2R的分泌（P〈0．05或P〈0．01），而对TNF—α无明显影响（P〉0．05）。结论 急性再生障碍性贫血的发病机制与造血负调控因子（TNF—α、IFN-α、sIL-2R）的异常增多有关；凉血解毒汤在凉血止血、清热解毒的同时，也可能通过下调IFN-γ、sIL-2R的含量而促进造血功能恢复，起到治疗急性再生障碍性贫血的作用。     

再生障碍性贫血治疗前后的造血调控因子变化

目的:研究环孢菌素A配合大菟丝子饮治疗再生障碍性贫血(AA)的造血调控因子变化.方法:收集治疗前后AA患者的血浆样本,分别用夹心酶联免疫吸附法测定IL-3、IL-8、SCF、IFN-γ及TNF-α含量.结果:治疗后血红蛋白明显升高(t=2.4485,P《0.05);白细胞及血小板恢复较慢,治疗前后未见明显差异.治疗前的IL-8、IFN-γ均极显著高于正常对照(t'=7.6430,P《0.01;t'=3.2459,P《0.01),TNF-α也明显升高(t'=2.6106,P《0.05);治疗后的IL-8明显低于治疗前(t=2.1081,P《0.05),但治疗后仍显著高于正常对照(t'=3.0605,P《0.05).患者入院时血浆IL-3有不同程度的升高,经治疗后有下降趋势,但与正常对照组相比均未见显著性差别,所有患者在整个病程中,血浆SCF浓度无明显变化.结论:本研究结果表明IL-8、TNF-α和IFN-γ参与AA的发生、发展,提示AA时造血正调控因子可能并不低下,而造血抑制因子在AA的发病机制中有重要作用,免疫系统调节功能紊乱可能是导致AA的根本原因.     

清肺口服液早期抗呼吸道合胞病毒肺炎的作用机制

目的探讨清肺口服液早期抗呼吸道合胞病毒肺炎的作用机制。方法将45只BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、利巴韦林组[利巴韦林颗粒0.05g/(kg·d)]和清肺低剂量组[清肺口服液37g/(kg·d)]、清肺高剂量组[清肺口服液111g/(kg·d)],每组9只。除空白组外,其余各组均给予呼吸道合胞病毒(RSV)50μl/只滴入鼻孔造模,造模48h后开始给药。24h后观测肺组织病理改变程度,检测肺组织中γ干扰素(IFN-γ)、T-bet、GATA3蛋白水平及脾组织中Th1/Th2细胞平衡水平。结果与空白组比较,模型组肺组织病理评分显著增高、IFN-γ水平降低、Th1/Th2水平下降(P0.01);与模型组比较,利巴韦林组、清肺高剂量组肺组织病理评分显著下降、IFN-γ水平升高、Th1/Th2水平升高(P0.01)。与空白组比较,模型组T-bet水平降低而GATA3水平升高(P0.01);与模型组比较,各给药组T-bet水平升高而GATA3水平下降(P0.01)。结论早期采用清肺口服液干预呼吸道合胞病毒肺炎可抑制炎症变化,其机制可能与降低肺组织GATA3水平,升高T-bet水平,诱生IFN-γ表达,从而达到Th1/Th2细胞平衡相关。     

中医药调控JAK/STAT经典信号通路辨治银屑病的研究进展

银屑病的发病机制十分复杂，涉及多基因、多细胞、多因子，这些因素通过一系列级联反应将信号进行逐层传递，从而形成了疾病发生的众多生物学通路，对于银屑病相关信号通路的研究已经成为疾病机制探索和药物干预的核心方式。在银屑病相关的所有信号通路中，以Janus酪氨酸蛋白激酶（JAK）/信号转导及转录激活因子（STAT）信号通路最为经典，JAK/STAT信号通路在长期的细胞信号传递进化过程中被选择和放大，以其通路的简洁性、稳定性，参与疾病炎症、免疫调控等环节，将JAK/STAT信号通路作为切入点和突破口的研究，有助于重新梳理和发现银屑病微观机制下的上、下游相关靶点调控方式，不断延伸银屑病机制的探索和认识。该文整理了具有清、消、补功效作用的中药复方制剂及麻黄、靛玉红、厚朴酚、人参皂苷CK、紫草素、芍药苷、丹皮酚、雷公藤多苷等中药单体和成分参与下的JAK/STAT信号通路靶位的相关研究，并将其成果整合，提炼出不同诱导因子如白细胞介素（IL）-6、IL-21、IL-22、IL-23、γ干扰素（IFN-γ）、细胞因子信号转导抑制因子1/3（SOCS1/3）等作用下的JAK/STAT信号通路家族亚型，同时，以JAK/STAT信号通路为特异性参照手段，探讨了其在银屑病血分分型和地域性患者群体中表达的差异，从而为银屑病的机制深入探索和临床靶向诊治提供一定的参考和依据。     

淋巴细胞与再生障碍性贫血

再生障碍性贫血(AA)是一种少见的、严重的血液系统疾病,主要表现为全血细胞的减少,常合并贫血、出血和感染的发生.关于其发病机制,目前尚未完全阐明,一般认为与造血干/祖细胞缺陷、造血微循环异常和免疫异常有关.近年来,有关AA时免疫异常的研究发展较为迅速,而其中又以T细胞免疫为重点所在[1-2],主要包括T淋巴细胞亚群的失衡、激活异常、功能变态等方面.现将有关的最新研究进展综述如下.     

中医药调控银屑病相关信号通路研究进展

银屑病作为一种患病率逐渐攀升的炎症性皮肤病，给患者的生活质量带来很多负面影响，已引起医学界的广泛重视。银屑病可受遗传、环境、免疫等多种病因刺激而发病，以细胞因子驱动的表皮增生、异常分化、炎症和新血管生成为主要发病机制，涉及免疫和皮肤细胞的相互作用，但有些发病机制仍是研究的盲点，给临床治疗带来极大挑战，因此，探寻有效治疗靶点成为研究银屑病的重要目标。信号通路在银屑病的病理机制中承担重要细胞转导作用，是调控银屑病免疫和炎症反应的关键转导因子，是研究银屑病的热点领域。而中医药调控银屑病以其治疗通路广、作用靶点全且不良反应小等优势占据重要治疗地位，且随着网络药理学和分子生物学领域研究的深入，中药单体及中药复方可通过调控银屑病多条信号通路而发挥治疗作用。近年来，中医药防治银屑病已收获较好的临床疗效，可有效减轻瘙痒症状、减少皮损面积、改善焦虑情绪、预防并发症等，证明银屑病在中医研究领域的认识和辨证论治的正确性。尽管中医药在银屑病防治方面的理论与临床研究颇丰，但中医药对调控银屑病相关信号通路及作用机制方面的综述暂未见刊载。因此，该综述通过检索近几年国内外相关文献资料，介绍中医药调控银屑病相关的6条主要信号通路，即Janus酪氨酸蛋白激酶（JAK）/信号转导及转录激活因子（STAT）信号通路，丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路，磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路，核转录因子-κB（NF-κB）信号通路，Wnt信号通路，Notch信号通路。     

红树莓根茎水煎剂对S180荷瘤小鼠血清IFN-γ、IL-17的影响

目的观察红树莓根茎水煎剂(RRD)对S180荷瘤小鼠免疫功能的调节,探讨RRD抗肿瘤的作用机制。方法以S180荷瘤小鼠为研究对象,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法检测S180荷瘤小鼠血清中细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-17(IL-17)的水平,计算IFN-γ/IL-17比值。结果 RRD能够提高S180荷瘤小鼠血清中细胞因子IFN-γ水平,降低IL-17水平,逆转IFN-γ/IL-17比值。结论 RRD能抑制荷瘤小鼠S180肉瘤组织的生长,可以通过调节荷瘤机体的异常免疫状态,发挥抗肿瘤作用。     

黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎小鼠脾组织T-bet及GATA-3表达的影响

目的:探讨黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎(Collagen-induced Arthritis,CIA)小鼠特异性转录因子T-bet和GATA-3表达的影响,阐述黄芪糖蛋白治疗胶原诱导性关节炎小鼠的免疫作用机制。方法:建立牛Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型,随机分为CIA模型组、氢化可的松阳性对照组、黄芪糖蛋白低剂量组、中剂量组、高剂量组;HE染色观察CIA小鼠脾组织损伤程度;采用流式细胞术检测CIA小鼠外周血IFN-γ和IL-4的水平;Western blot法检测CIA小鼠脾组织中T-bet和GATA-3蛋白的表达。结果:与模型组比较,黄芪糖蛋白改善了CIA小鼠脾组织损伤情况,减轻炎性反应细胞浸润,下调了外周血IFN-γ和IL-4水平(P0.05);同时,降低了T-bet和GATA-3蛋白的表达(P0.05)。结论:黄芪糖蛋白对CIA小鼠的治疗作用,可能是与降低T-bet、GATA-3表达,调整Th1/Th2功能失衡有关。