栀子苷干预LPS诱导RAW264.7巨噬细胞炎性反应递质的研究

目的:通过比较栀子苷水提液、栀子苷你标准品与栀子苷敲除液对LPS刺激巨噬细胞产生炎性反应的干预,探究栀子主要成分栀子苷的抗炎作用。方法:分别检测栀子苷水提液、栀子苷标准品、50%栀子苷敲除液对巨噬细胞的毒性;设立空白对照组、LPS模型组、栀子苷水提液组、栀子苷标准品组、50%栀子苷敲除液组、50%栀子苷回填组,检测各组对LPS刺激巨噬细胞后释放NO以及分泌IL-6和TNF-α的干预作用比较。结果:LPS刺激巨噬细胞后NO释放增多(P 10~(-4)),而栀子苷水提液、栀子苷标准品、栀子苷敲除液均能降低LPS刺激巨噬细胞后NO的释放,其中栀子水提液、50%栀子苷敲除液以及50%栀子苷回填液的作用最强,且其作用差异无统计学意义(P 10~(-2))。而栀子苷标准品的作用相对较小(P0. 05)。LPS刺激巨噬细胞后,巨噬细胞分泌TNF-α与IL-6较空白对照组增加(P 10~(-4)),栀子水提液干、栀子苷标准品、50%栀子苷敲除液以及含50%栀子苷的栀子水提液干预后,能降低上述细胞因子的分泌(P 0. 05)。结论:栀子中栀子苷与其他成分均具有一定的抗炎作用,各成分之间的抗炎作用各有侧重。     

小鼠骨髓源性树突细胞和脾源性树突细胞的形态及生物学性能对比

目的体外用相同的方法诱导骨髓前体细胞和脾脏细胞生成树突细胞(DCs),从细胞形态和生物学性能两个方面对两者进行比较,为后期小青龙汤干预TSLPDCs体系发挥抗过敏性鼻炎作用筛选合适的DCs细胞。方法从C57小鼠分别获取骨髓细胞和脾细胞,在体外用因子诱导生成DCs,结合流式细胞术(FCM)和酶联免疫吸附测定(ELISA)技术从细胞形态、表面分子的特异性表达、相关因子分泌等几个方面对两者进行比较。结果镜下观察骨髓源性DCs和脾源性DCs均有明显的不规则毛刺状突起,呈集落悬浮状态,但后者集落更明显;扫描电镜下两者均呈薄纱状且有粘连,但后者粘连更大。流式结果显示脾源性DCs纯度为(87.227±4.463)%,骨髓源性DCs纯度为(81.567±2.902)%,两者比较差异有统计学意义(P0.05)。LPS刺激前脾源性DCs CD11c~+CD83~+表达比例明显低于骨髓源性DCs(P0.05),LPS刺激后脾源性DCs CD11c~+CD83~+表达比例与骨髓源性DCs比较差异无统计学意义(P0.05)。ELISA结果显示LPS刺激前脾源性DCs IL-12表达量与骨髓源性DCs IL-12表达量比较差异无统计学意义(P0.05),LPS刺激后脾源性DCs IL-12表达量与骨髓源性DCs比较差异无统计学意义(P0.05)。结论骨髓前体细胞和脾细胞在体外经因子诱导后均可获得纯度和性能较好的DCs,且脾源性DCs纯度和性能均高于骨髓源性DCs,但数量明显少于骨髓源性DCs;骨髓源性DCs成熟早于脾源性DCs。     

小青龙汤对单纯型和复合型变应性鼻炎豚鼠模型Th1/Th2失衡的影响

目的:建立单纯型和肾阳虚复合型2种不同变应性鼻炎模型,探讨小青龙汤对2种变应性鼻炎模型Th1/Th2失衡作用的异同。方法:将105只雄性豚鼠随机分7组,每组15只:空白对照组(A组),单纯模型对照组(B1组),小青龙汤干预单纯模型组(B2组),息斯敏干预单纯模型组(B3组),肾阳虚复合模型对照组(C1组),小青龙汤干预肾阳虚复合模型组(C2组),息斯敏干预肾阳虚复合模型组(C3组)。B1、B2、B3组进行单纯变应性鼻炎造模;C1、C2、C3组在单纯变应性鼻炎的模型上进行肾阳虚复合模型造模。造模成功后,模型组进行用药观察,记录各组局部过敏反应;ELISA法(酶联免疫吸附试验法)检测血清中IFN-γ、IL-4、IL-2和IL-10等细胞因子含量;荧光定量PCR法测脾组织中IFN-γmRNA、IL-4mRNA、T-bet mRNA、GATA-3 mRNA等转录因子的相对含量。结果:变应性鼻炎单纯模型和肾阳虚复合模型均出现IFN-γ降低(P0.01),IL-4升高(P0.01),IFN-γ/IL-4比值降低(P0.01),IFN-γmRNA降低(P0.01),IL-4 mRNA升高(P0.01),IFN-γmRNA/IL-4 mRNA比值降低(P0.01),T-bet mRNA降低(P0.01),但可使GATA-3 mRNA升高(P0.01),因而T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值也相对降低(P0.01)。小青龙汤可使单纯模型IFN-γ升高(P0.01),IL-4降低(P0.01),IFN-γ/IL-4比值升高(P0.01);升高IFN-γmRNA(P0.01),降低IL-4 mRNA(P0.01),使IFN-γmRNA/IL-4 mRNA比值升高(P0.01);使T-bet mRNA升高(P0.01),但可使GATA-3 mRNA降低(P0.01),从而使T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值也相对升高(P0.01)。小青龙汤可降低肾阳虚复合模型中IL-4的含量(P0.01),对IFN-γ作用不明显,升高IFN-γ/IL-4比值(P0.01);可使IFN-γmRNA升高(P0.01),但对IL-4 mRNA变化不大,IFN-γmRNA/IL-4 mRNA比值升高(P0.01);对T-bet mRNA作用不明显,但可使GATA-3 mRNA降低(P0.05),因而T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值也相对升高(P0.01)。结论:小青龙通过调节IFN-γ/IL-4比值、IFN-γmRNA/IL-4 mRNA比值和T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值,来调节Th1/Th2平衡,对单纯变应性鼻炎模型的过敏反应的改善更为明显。     

麻黄细辛附子汤干预树突状细胞IL-4/STAT6的研究

目的:研究麻黄细辛附子汤干预树突状细胞24 h后,树突状细胞STAT6磷酸化程度(p STAT6)及其STAT6 mRNA、IL-4 mRNA、IFN-γmRNA表达的影响。方法:体外培养小鼠骨髓来源的树突状细胞,7 d后收集细胞,用麻黄细辛附子汤干预24 h,收集细胞,检测IL-4、IL-5和IL-13的含量,p STAT6的表达、检测IL-4 mRNA、STAT6 mRNA、GATA-3 mRNA的表达。结果:麻黄细辛附子汤干预树突状细胞后降低IL-4(P0.05)、IL-13(P0.01)的含量,对IL-5的分泌影响不大,p STAT6的表达下降(P0.01);IL-4 mRNA、STAT6 mRNA,以及GATA-3 mRNA表达降低(P0.01)结论:麻黄细辛附子汤能调控IL-4/STAT6通路,调节Th2调节Th1/Th2失衡,减轻了变应性炎性反应的发生,可对过敏性鼻炎发挥治疗作用。     

关于金元以前脏腑辨证理论及体系建立的探析

脏腑辨证在中医临床诊断及治疗过程中占据着较为重要的地位,医家学者欲在临床疗效中有所精进,关于脏腑辨证理论内涵及体系则不可不明。本文主要采用文献学研究法、史学研究法等方法,从历史时期、医家著作和研究内容三个角度着手,以期能厘清金元以前脏腑辨证内容、理论形成及体系建立之脉络,明确脏腑辨证的发展阶段和特点,并对脏腑辨证理论体系形成的时间和阶段进行进一步的明确和阐释。通过比较分析,可以得出以下结论:首先,脏腑辨证理论经历了不同时期、不同医家的补充和完善,其体系的建立在先秦两汉到金元的漫长发展过程中存在明确的继承和发展关系,脉络清晰。其次,关于脏腑辨证理论体系的建立,具体分法有三种:(一)按时期划分:先秦两汉、晋隋唐宋和金元时期。(二)按医家著作分:(1)《黄帝内经》《难经》《金匮要略》《中藏经》等;(2)《脉经》《诸病源候论》《备急千金要方》《小儿药证直诀》等;(3)《素问病机气宜保命集》《医学启源》等。(三)按研究内容及特点分:(1)内容零散局限不成体系期;(2)内容丰富体系初步建立期;(3)内容成熟体系完备,研究方向由系统转向专题为主。最后,脏腑辨证理论体系的建立最终完备成熟于张元素所撰写的《医学启源》,该医著完善了中医辨证论治体系,并对易水学派及后世医家进行专题研究发挥了重要作用。     

麻黄细辛附子汤纠正TSLP刺激树突状细胞后Th1/Th2偏移研究

目的研究麻黄细辛附子汤对免疫应答启动分子胸腺基质淋巴生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)刺激树突状细胞后对Th1/Th2失衡的影响,探究麻黄细辛附子汤治疗过敏性鼻炎可能的作用靶点及药理机制。方法体外诱导培养小鼠骨髓来源的树突状细胞,7天培养成功后,设空白组、TSLP组、麻黄细辛附子汤组。TSLP组与麻黄细辛附子汤组的树突状细胞均用TSLP刺激,麻黄细辛附子汤组同时用麻黄细辛附子汤进行干预,24小时后收集细胞,检测IL-4 mRNA、IFN-γ mRNA表达水平;收集实验各组细胞上清,检测细胞因子IL-13、IFN-γ的含量。结果 (1)与空白组比较,TSLP组IL-4 m RNA表达显著增多(P0.05),而麻黄细辛附子汤组表达显著减少(P0.05),麻黄细辛附子汤组IL-4 mRNA表达较TSLP组显著减少(P0.01);(2)与空白组比较,麻黄细辛附子汤组及TSLP组IFN-γ mRNA表达较均显著增多(P0.05),且麻黄细辛附子汤组较TSLP组升高更明显(P0.01);(3)与空白组比较,TSLP组IFN-γ m RNA/IL-4 mRNA无明显差异(P0.05),而麻黄细辛附子汤组较TSLP干预组与空白组显著升高(P0.01);(4)与空白组比较,TSLP组分泌IL-13显著增多(P0.05),而IFN-γ显著减少(P0.01),麻黄细辛附子汤组分泌IL-13含量较TSLP干预组及空白组均显著减少(P0.05),麻黄细辛附子汤组IFN-γ含量较空白组无差异(P0.05),与TSLP组相比显著增多(P0.01)。结论麻黄细辛附子汤汤能上调TSLP刺激树突状细胞后IFN-γm RNA的表达,下调IL-4 mRNA,升高IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA比值并抑制TSLP刺后激树突状细胞分泌IL-13,促进IFN-γ的分泌,对T细胞Th2分化进行调控,恢复Th1/Th2失衡,可对过敏性疾病发挥治疗作用。