小青龙汤对单纯型和复合型变应性鼻炎豚鼠模型Th1/Th2失衡的影响

目的:建立单纯型和肾阳虚复合型2种不同变应性鼻炎模型,探讨小青龙汤对2种变应性鼻炎模型Th1/Th2失衡作用的异同。方法:将105只雄性豚鼠随机分7组,每组15只:空白对照组(A组),单纯模型对照组(B1组),小青龙汤干预单纯模型组(B2组),息斯敏干预单纯模型组(B3组),肾阳虚复合模型对照组(C1组),小青龙汤干预肾阳虚复合模型组(C2组),息斯敏干预肾阳虚复合模型组(C3组)。B1、B2、B3组进行单纯变应性鼻炎造模;C1、C2、C3组在单纯变应性鼻炎的模型上进行肾阳虚复合模型造模。造模成功后,模型组进行用药观察,记录各组局部过敏反应;ELISA法(酶联免疫吸附试验法)检测血清中IFN-γ、IL-4、IL-2和IL-10等细胞因子含量;荧光定量PCR法测脾组织中IFN-γmRNA、IL-4mRNA、T-bet mRNA、GATA-3 mRNA等转录因子的相对含量。结果:变应性鼻炎单纯模型和肾阳虚复合模型均出现IFN-γ降低(P0.01),IL-4升高(P0.01),IFN-γ/IL-4比值降低(P0.01),IFN-γmRNA降低(P0.01),IL-4 mRNA升高(P0.01),IFN-γmRNA/IL-4 mRNA比值降低(P0.01),T-bet mRNA降低(P0.01),但可使GATA-3 mRNA升高(P0.01),因而T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值也相对降低(P0.01)。小青龙汤可使单纯模型IFN-γ升高(P0.01),IL-4降低(P0.01),IFN-γ/IL-4比值升高(P0.01);升高IFN-γmRNA(P0.01),降低IL-4 mRNA(P0.01),使IFN-γmRNA/IL-4 mRNA比值升高(P0.01);使T-bet mRNA升高(P0.01),但可使GATA-3 mRNA降低(P0.01),从而使T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值也相对升高(P0.01)。小青龙汤可降低肾阳虚复合模型中IL-4的含量(P0.01),对IFN-γ作用不明显,升高IFN-γ/IL-4比值(P0.01);可使IFN-γmRNA升高(P0.01),但对IL-4 mRNA变化不大,IFN-γmRNA/IL-4 mRNA比值升高(P0.01);对T-bet mRNA作用不明显,但可使GATA-3 mRNA降低(P0.05),因而T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值也相对升高(P0.01)。结论:小青龙通过调节IFN-γ/IL-4比值、IFN-γmRNA/IL-4 mRNA比值和T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值,来调节Th1/Th2平衡,对单纯变应性鼻炎模型的过敏反应的改善更为明显。     

三拗汤对支气管哮喘大鼠Th1,Th2转录调节机制的研究

目的:重点探讨三拗汤对哮喘大鼠Th1/Th2细胞的调节作用,并深入研究其对转录因子GATA-3和T-bet水平的干预作用.方法:以鸡卵清蛋白腹腔注射并雾化吸入复制大鼠哮喘模型,分别以不同剂量三拗汤及地塞米松灌服,检测用药前后哮喘大鼠肺泡灌洗液中细胞因子IL-4和IFN-γ含量;RT-PCR方法检测肺组织中T-bet和GATA-3 mRNA表达水平.结果:中药中剂量组大鼠BALF中IL-4水平较其他组明显减低,IFN-γ水平升高,IL-4/IFN-γ较哮喘组明显减小,肺组织GATA-3和T-bet转录因子mRNA表达水平分别与IL-4及IFN-γ变化水平相一致.结论:中药三拗汤可能通过对哮喘大鼠Th1/Th2细胞转录因子的调节作用,达到抑制哮喘大鼠气道炎症的目的.     

慢性再生障碍性贫血患者中医证型与T-bet/GATA-3相关信号通路、Th亚群的相关性

目的从Th细胞失衡、转录因子T-bet/GATA-3及相关信号通路水平分析其与慢性再生障碍性贫血(CAA)中医证型的关系。方法选择CAA患者,辨证分为脾肾阳虚组和脾肾阴虚组各20例,另选20例健康者做对照(正常组),采用实时荧光定量PCR检测CAA患者外周血单个核细胞(PBMNC)T-bet、GATA-3及STAT4、STAT6mRNA表达,采用流式细胞术、酶联免疫吸附法检测CAA患者外周血Th1、Th2比例及PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平。结果脾肾阴虚组患者PBMNCT-bet、STAT4、T-bet/GATA-3比值、Th1、IFN-γ、IL-12均高于脾肾阳虚组(P<0.05),并且此2组患者亦高于正常组(P<0.05),而GATA-3、STAT6、IL-43组比较则无统计学差异(P>0.05)。结论与脾肾阳虚型患者相比,CAA脾肾阴虚型存在更严重的IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路异常活化和Th1偏移,脾肾阴虚型存在更明显的免疫异常状态。     

穴位敷贴对过敏性哮喘豚鼠Th/Th2失衡的免疫调节效应

目的:观察豚鼠血清中白介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)含量以及T-bet和GATA-3 mRNA的表达情况,探讨穴位敷贴对过敏性哮喘的免疫调节机制。方法:将30只雄性豚鼠随机分为正常组、模型组、穴位组、非穴位组、阳性对照组(氨茶碱组),每组6只。以卵清白蛋白致敏激发法建立哮喘模型,采用ELISA法检测豚鼠血清中IL-4、IFN-γ含量,RT-PCR法检测肺组织T-bet和GATA-3 mRNA的表达。结果:穴位组与非穴位组IL-4血清含量、GATA-3 mRNA表达明显低于模型组,IFN-γ含量、T-bet mRNA表达明显高于模型组(P<0.01),非穴位组血清IL-4、IFN-γ含量,T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的表达与穴位组相比有显著性差异(P<0.01)。结论:穴位敷贴可以通过调节转录因子的表达,从而改变Th0细胞分化方向,影响特征性细胞因子的分泌,纠正Th1/Th2比例失衡,这是穴位敷贴控制哮喘气道炎症的一种可能的机制,且药物敷贴于穴位处较之非穴位处能够发挥更好的疗效。     

中药槐耳调节哮喘缓解期儿童外周血单个核细胞Th1/Th2平衡的基因及蛋白水平研究

目的:从基因及蛋白水平探讨中药槐耳调节T辅助淋巴细胞(Th)平衡的机制,为槐耳在临床上治疗缓解期哮喘提供理论依据。方法:将哮喘缓解期儿童外周血单个核细胞(PBMC)分为3组,即空白组、中剂量组和大剂量组,分别与不同浓度的槐耳菌质配液(6g/L)及培养液作用48h;然后测定细胞培养沉淀中白细胞介素-4(IL-4)及干扰素-γ(IFN-γ)mRNA的表达和细胞培养上清中IL-4及IFN-γ的量。结果:在中剂量组和大剂量组中,IL-4mRNA表达明显低于空白组(P<0.05);IFN-γ表达明显高于空白组(P<0.05);IFN-γ/IL-4比值的基因及蛋白水平表达均高于空白组;然而,对于以上4个指标的检测,大剂量组与中剂量组之间无明显差异(P>0.05)。结论:槐耳菌质能够明显增加IFN-γ及减少IL-4mRNA的表达,可调节哮喘儿童缓解期IFN-γ/IL-4比值的失衡,平衡Thl/Th2比值的漂移。     

基于T-bet/GATA-3表达研究化痰祛瘀法对哮喘小鼠气道炎症及免疫失衡的影响

目的:研究转录因子T-bet和GATA-3在哮喘模型小鼠疾病进展过程中的改变及其意义及其在Th1/Th2失衡中的作用,探讨化痰祛瘀法对支气管哮喘防治作用的机理。方法:通过卵蛋白致敏、激发建立支气管哮喘小鼠模型,于激发后7天和21天分批取材,用RT-PCR法检测肺组织匀浆中T-bet、GATA-3 mRNA表达。结果:激发7天后:与空白组比较:模型组T-bet明显降低,GATA-3明显升高,T-bet/GATA-3比值明显降低;两用药组T-bet及T-bet/GATA-3比值均明显降低,组间无明显差异。与模型组比较:两用药组T-bet均无明显变化,GATA-3均明显降低,T-bet/GATA-3比值均明显升高;组间无明显差异。哮喘激发21天后:与空白组比较:模型组T-bet明显降低,GATA-3明显升高,T-bet/GATA-3比值明显降低;两用药组T-bet及T-bet/GATA-3比值均明显降低。与模型组比较:地塞米松组T-bet无明显差异,GATA-3明显降低,T-bet/GATA-3比值明显升高;中药组T-bet明显升高,GATA-3明显降低,T-bet/GATA-3比值明显升高;两组间无明显差异。结论:BALB/c小鼠经OVA致敏及雾化激发后,使转录因子T-bet/GATA-3表达失衡,模型小鼠出现气道炎症及气道重建的相关表现,符合中医病机中的"痰瘀互结"。化痰祛瘀法对T-bet/GATA-3表达失衡具有双向纠偏的调节作用。对改善气道慢性炎症及气道重建方面,其疗效与地塞米松相近,但作用环节较对照组更为广泛,且随用药时间延长,有累加效应。     

加减固本防哮饮对支气管哮喘患者缓解期外周血T-bet/GATA-3比值及Th1/Th2平衡的影响

目的:观察加减固本防哮饮对支气管哮喘患者缓解期外周血T-bet/GATA-3比值及Th1/Th2平衡的影响。方法选取2016年12月～2018年11月间在本院接受治疗的支气管哮喘缓解期患者65例,随机数字表法分成2组,对照组(32例)采用沙美特罗替卡松粉吸入剂,观察组(33例)在对照组基础上加服加减固本防哮饮。观察患者临床疗效、治疗前后肺功能、中医证候评分、血清白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)含量及结合蛋白-3(GATA-3)及转移因子T-bet mRNA表达。结果观察组患者总的有效率为93.94%,高于对照组的81.25%(P0.05);治疗后观察组患者PEF、FEV1较治疗前、对照组升高(P0.05);治疗后观察组患者ACT评分较治疗前、对照组升高,中医证候积分较治疗前、对照组降低(P0.05);治疗后观察组患者血清IL-4含量较治疗前、对照组降低,IFN-γ含量、IFN-γ/IL-4比值较治疗前、对照组升高(P0.05);治疗后观察组患者GATA-3mRNA表达较治疗前、对照组降低,T-bet mRNA表达、T-bet/GATA-3比值较治疗前、对照组升高(P0.05)。结论加减固本防哮饮可改善支气管哮喘患者缓解期患者肺功能,提升疗效,其作用机制可能和调控外周血T-bet/GATA-3及Th1/Th2平衡有关。     

从祛瘀化痰法探讨平喘方及拆方对哮喘小鼠Th1/Th2免疫失衡的干预机制

目的研究平喘方及拆方干预哮喘小鼠Th1/Th2免疫失衡的作用机制,并探究"化痰"与"祛瘀"两种治法干预气道炎症的疗效。方法对60只BALB/c雄性小鼠按随机数字表分为空白对照组、哮喘模型组、地塞米松组、平喘方组、拆方1(祛瘀方)组、拆方2(化痰方)组共6组,每组10只,运用卵蛋白(OVA)和氢氧化铝腹腔注射致敏并雾化吸入激发,建立小鼠支气管哮喘模型,末次激发后给药7 d并杀检取材,运用HE染色观察各组小鼠气道及肺组织病理改变,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中白介素4(IL-4)、干扰素γ(INF-γ)、白介素17(IL-17)、白介素10(IL-10)表达,蛋白质印迹法法(Western Blot)检测肺组织中转录因子GATA结合蛋白3(GATA-3)、T盒子转录因子(T-bet)蛋白表达。结果与空白组比较,模型组病理染色显示炎症细胞侵润明显,管壁及肺组织结构受到破坏,周围组织伴有炎性物质渗出,IL-4、IL-17、GATA-3表达增高(P<0.05),INF-γ、IL-10、T-bet表达减低(P<0.05)。与模型组对比,平喘方及拆方组可显著减少病理染色中的气道炎症程度,减低IL-4、IL-17、GATA-3表达(P<0.05),升高INF-γ、IL-10、T-bet表达(P<0.05),拆方组间比较祛瘀方在改善气道病理优于化痰方,在降低IL-4、IL-17、GATA-3因子水平具有优于化痰方的统计学趋势。结论:平喘方及拆方可减少哮喘小鼠IL-4、IL-17、GATA-3表达,升高INF-γ、IL-10、T-bet表达,改善Th1/Th2免疫失衡,祛瘀与化痰两种治法相比较,祛瘀法在改善气道炎症方面疗效较优。     

双氢青蒿素与火把花配伍的免疫抑制作用及机制研究

目的:研究双氢青蒿素与火把花配伍对迟发型超敏反应小鼠的免疫抑制作用及可能的作用机制。方法:建立迟发型超敏反应(delayed-type hypersensitivity,DTH)小鼠模型,观察双氢青蒿素、火把花及两者配伍对DTH小鼠的免疫抑制效应;ELISA法检测血清中γ干扰素(Interferon,IFN-γ)和白介素4(Interleukin,IL-4)含量;RT-qPCR技术检测淋巴结中Th1/Th2细胞转录因子T-bet及GATA-3的基因表达。结果:与正常对照比较,模型对照组小鼠耳肿胀度、胸腺、脾脏指数显著升高,血清中IL-4、IFN-γ含量及IFN-γ/IL-4比值显著升高,淋巴结中T-bet mRNA表达水平显著上调,GATA-3 mRNA表达水平显著下调;与模型对照组比较,双氢青蒿素与火把花配伍组(0.2+7.5)g/kg小鼠耳肿胀度、胸腺、脾脏指数显著降低,血清中IFN-γ含量显著降低、IL-4含量显著升高,IFN-γ/IL-4比值显著降低,淋巴结中T-bet的mRNA表达水平显著下调,GATA-3的mRNA表达水平显著上调。结论:青蒿素与火把花配伍能够明显抑制DTH反应,其可能通过降低IFN-γ含量、升高IL-4含量,以及调节Thl/Th2免疫平衡从而发挥免疫抑制作用。     

补肺平喘汤对支气管哮喘大鼠Th1/Th2失衡及JAK/STAT信号通路影响

目的观察补肺平喘汤对支气管哮喘大鼠Th1/Th2细胞因子失衡及JAK/STAT信号通路影响。方法将50只健康大鼠随机分为正常组,模型组,中药低剂量组,中药中剂量组,中药高剂量组5组,每组10只。除正常组外,其余各组给予卵白蛋白和氢氧化铝免疫反应制备支气管哮喘大鼠模型。造模4周后,中药低、中、高剂量组分别按照生药量10.8,21.6,32.4 g/kg进行灌胃给药,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃,灌胃4周后,分离大鼠血清和肺组织,Elisa法检测大鼠血清IFN-γ、IL-4水平变化,RT-PCR法检测大鼠肺组织JAK/STAT信号通路变化。结果与正常组比较,模型组大鼠血清IL-4水平显著升高(P0.01),而IFN-γ呈显著下降趋势(P0.01),IL-4/IFN-γ提示免疫调节显著向Th2水平失衡,肺组织JAK1、STAT6 mRNA水平明显升高;与模型组比较,中药中、高剂量组大鼠血清IL-4水平显著降低(P0.05,P0.01),IFN-γ水平显著升高(P0.05),免疫调节明显向Th1方向调节(P0.01),肺组织JAK1、STAT6 mRNA水平明显降低(P0.05,P0.01)。结论补肺平喘汤能有效改善支气管哮喘大鼠Th1/Th2细胞因子失衡,降低JAK1、STAT6 mRNA表达,调节Th1/Th2细胞因子平衡。     

麻黄细辛附子汤干预树突状细胞IL-4/STAT6的研究

目的:研究麻黄细辛附子汤干预树突状细胞24 h后,树突状细胞STAT6磷酸化程度(p STAT6)及其STAT6 mRNA、IL-4 mRNA、IFN-γmRNA表达的影响。方法:体外培养小鼠骨髓来源的树突状细胞,7 d后收集细胞,用麻黄细辛附子汤干预24 h,收集细胞,检测IL-4、IL-5和IL-13的含量,p STAT6的表达、检测IL-4 mRNA、STAT6 mRNA、GATA-3 mRNA的表达。结果:麻黄细辛附子汤干预树突状细胞后降低IL-4(P0.05)、IL-13(P0.01)的含量,对IL-5的分泌影响不大,p STAT6的表达下降(P0.01);IL-4 mRNA、STAT6 mRNA,以及GATA-3 mRNA表达降低(P0.01)结论:麻黄细辛附子汤能调控IL-4/STAT6通路,调节Th2调节Th1/Th2失衡,减轻了变应性炎性反应的发生,可对过敏性鼻炎发挥治疗作用。     

桂芍知母汤及其加味对佐剂性关节炎大鼠Th1/Th2漂移的影响

目的:通过对桂芍知母汤及加味对佐剂性关节炎大鼠INF-γ、IL-4、T-bet、Gata-3表达影响的研究,分析其对Th漂移的影响。方法:以桂芍知母汤及桂芍知母加活血方、桂芍知母加藤类方为干预因素,采用佐剂性关节炎大鼠模型,检测大鼠足肿胀度的变化,ELISA法检测血清INF-γ、IL-4水平,Rt-QPCR检测足掌软组织T-bet、Gata-3mRNA表达;以INF-γ/IL-4、T-bet/Gata-3比值代表Th漂移方向。结果:桂芍知母组(17.325g/kg)、桂芍知母加活血组(21g/kg)与桂芍知母加藤类组(25.2 g/kg)均能显著降低足肿胀度,下调INF-γ,上调IL-4;使T-bet表达减弱,Gata-3表达增强(P<0.05或P<0.01),INF-γ/IL-4与T-bet/Gata-3比值趋势相同,相关性分析提示两者有密切关系。结论:桂芍知母汤及加味能有效缓解AA大鼠局部炎症反应,其免疫调控机理与促进Th细胞向左漂移有关。     

泻肺清肝饮治疗哮喘热哮证的临床研究

目的:通过观察40例哮喘热哮证患者服用泻肺清肝饮前后症状积分、血清炎症因子水平、肺功能等指标的变化,评价哮喘热哮证发病与Th1/Th2失衡、炎症反应的关系,探讨泻肺清肝饮对哮喘热哮证患者Th1/Th2失衡、炎症干预的可能机制。方法:抽取40例正常对照组、41例哮喘发作热哮证常规治疗组,40例哮喘发作热哮证泻肺清肝饮治疗。采用ELISA法观察哮喘患者血浆中IFN-γ、IL-4水平及外周血Th1、Th2细胞比例变化。结果:治疗前常规组、中西医结合组IFN-γ/IL-4比值明显低于正常组(P<0.05),治疗后常规、中西医结合组IFN-γ/IL-4比值明显均低于治疗前(P<0.05),治疗后IFN-γ/IL-4比值常规组低于中西医结合组(P<0.05)。结论:哮喘发病与Th1/Th2失衡导致的炎症反应关系密切,泻肺清肝饮能调节Th1/Th2失衡,从而抑制炎症反应、调控变态反应,减轻或抑制哮喘发作。     

金银花、连翘对大肠杆菌感染模型小鼠血清Th1/Th2细胞因子的调节作用

目的探讨金银花、连翘对大肠杆菌感染小鼠的保护作用机制。方法将雌性昆明种小白鼠随机分为金银花组和连翘组,每组再分为正常组、中药组、模型组和治疗组4个亚组进行处理,观察小鼠的临床状态,双抗体夹心法酶联免疫吸附实验(Elisa)检测血清γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-10(IL-10)的表达水平。结果金银花(0.01 kg/L)、连翘(0.01 kg/L)水煎液对小鼠大肠杆菌的感染有保护作用。与正常组及中药组比较,模型组与治疗组小鼠血清IFN-γ、IL-4表达及IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10比值均显著升高(P均<0.01);金银花治疗组较模型组IL-10表达显著升高(P<0.05),IFN-γ表达与IFN-γ/IL-4比值有升高趋势,IL-4表达和IFN-γ/IL-10比值有下降趋势;连翘治疗组较模型组IFN-γ和IL-4表达以及IFN-γ/IL-10比值有下降趋势,IL-10表达和IFN-γ/IL-4比值有升高趋势,但均无显著性差异(P>0.05)。结论感染模型小鼠辅助性T淋巴细胞1型/2型(Th1/Th2)细胞因子分泌亢进,Th1/Th2平衡有向Th1型漂移的特点。金银花、连翘水煎液均能有效保护感染模型小鼠,其调节小鼠的免疫功能可能与调节Th1/Th2平衡相关。     

“邵氏五针法”对慢性哮喘大鼠GATA-3/T-bet表达的影响

目的:探讨"邵氏五针法"对慢性哮喘大鼠Thl/Th2细胞失衡相关因子的影响。方法:SD大鼠40只按随机数字表法分为空白组、模型组、针刺组、艾灸组,通过HE染色观察各组大鼠肺组织病理学变化,通过酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清白介素(IL)-5、γ干扰素(IFN-γ)含量,荧光定量PCR检测各组大鼠肺组织中GATA结合蛋白3(GATA-3)、T盒子转录因子(T-bet)mRNA表达水平。结果:肺组织病理显示针刺组和艾灸组大鼠气道炎症较模型组明显减轻,针刺组和艾灸组大鼠血清中IL-5含量及肺组织中GATA-3mRNA表达明显低于模型组,血清IFN-γ含量及肺组织T-betmRNA表达明显高于模型组。结论:针刺和艾灸能降低哮喘大鼠气道炎症,抑制Th2特异性转录因子GATA-3的表达,促进Thl特异性转录因子T-bet的表达,可能通过纠正Th1/Th2失衡,调控哮喘大鼠免疫功能,从而降低哮喘大鼠的气道高反应性及慢性炎症,达到防治哮喘的作用。     

麻黄细辛附子汤干预Notch通路调控Treg细胞纠正Th2偏移的研究

目的 探究麻黄细辛附子汤对Th2偏移、Treg细胞功能及Notch信号通路的干预作用。方法 体外培养CD4+T细胞,流式细胞仪鉴定纯度,使用白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ抗体（Anti-IFN-γ）诱导建立Th2细胞分化模型,DAPT及麻黄细辛附子汤干预24 h后收集上清及细胞,ELISA检测白细胞介素-5(IL-5)、干扰素-γ(IFN-γ)、转化生长因子β1(TGF-β1)含量,RT-PCR检测T细胞特异性转录因子（T-bet）、转录因子结合蛋白-3(GATA-3)、叉头翼状螺旋转录因子3(FOXP3)、Notch1 mRNA表达,Western blotting检测T-bet、GATA-3、FOXP3、Notch1蛋白表达。结果 1）较之空白组,模型组IL-5含量升高,IFN-γ、TGF-β1含量降低（P <0.01）;较之模型组,各给药组IL-5含量降低,IFN-γ、TGF-β1含量升高（P <0.01）。2）较之空白组,模型组Tbet、FOXP3 mRNA表达降低,GATA-3、Notch1 m RNA表达升高（P <0.01）;较之模型组,各给药组...     

73例成年支气管哮喘缓解期患者Th1/Th2失衡与健康管理的相关性研究

目的：观察健康管理对成年支气管哮喘缓解期不同证型患者Th1/Th2变化的影响。方法：73例患者分为肺虚型、脾虚型、肾虚型、兼痰浊型及兼瘀血型,随机单盲对照将每型患者分为治疗组和对照组,对照组口服孟鲁司特钠片,治疗组在对照组基础上予以健康管理,检测各组患者治疗前后IFN-γ、IL-4水平并计算IFN-γ/IL-4比值。结果：各证型治疗组IFN-γ、IL-4和IFN-γ/IL-4差值均显著高于对照组（P〈0.05）。结论：哮喘缓解期患者通过系统的健康管理可以改变Th1/Th2失衡,系统健康管理计划对哮喘缓解期起到积极的防治作用。