内异康复片对子宫内膜异位症异位和在位内膜血管形成相关因子的实验研究

目的探讨内异康复片对子宫内膜异位症（EMT）大鼠异位和在位内膜血管形成的不同影响,揭示内异康复片治疗EMT的作用机理。方法建立大鼠EMT模型,随机分为内异康复片高、中剂量组、丹那唑组、丹莪妇康煎膏组、模型组和空白组,采用免疫组化SP法染色,半定量检测血管内皮生长因子（VEGF）、内皮抑制素（ENS）在异位和在位内膜中的表达,并通过CD31标记异位子宫内膜血管内皮细胞,测定其微血管密度（MVD）。结果内异康复片高、中剂量组均能显著降低EMT大鼠异位内膜VEGF的表达（P〈0.01）,升高ENS的表达（P〈0.01）,并能显著降低EMT大鼠异位内膜血管内皮生长因子/内皮抑制素（V/E）值、MVD（P〈0.01）和微血管数目（P〈0.05）,而对大鼠在位内膜V/E值、MVD及微血管数目的表达与空白组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论内异康复片可能通过对血管形成过程的影响,抑制异位内膜组织血管的生成,促进异位病灶消退,同时使血管形成刺激因子和抑制因子之间相互平衡,但不抑制在位内膜正常血管增生的生理过程。内异康复片可降低异位子宫内膜微血管密度（MVD）,可能与异位内膜组织血管生成受到抑制有关。     

活血化瘀中药对大鼠异位子宫内膜组织细胞凋亡的影响

目的：探讨活血化瘀中药对子宫内膜异位症（EMT）模型大鼠异位组织细胞凋亡的影响。为临床用药提供实验依据。方法：制作大鼠EMT动物模型，将模型鼠随机分为2组，实险组每日以每ml含生药3．25g的中药溶液按26g／kg／d灌胃，连续用药1个月后观察异位组织细胞凋亡指数。结果：对照组细胞凋亡指数小于实验组（P〈0．01）。结论：活血化瘀中药能促进异位组织细胞凋亡，抑制异位组织增殖。     

中药异位宁对子宫内膜异位症模型大鼠Fas/FasL基因表达影响的实验研究

目的：通过研究异位宁对Fas/FasL蛋白表达的影响来阐述异位宁治疗子宫内膜异位症的作用机制。方法：取雌性Wistar大鼠,随机分为5组,正常对照组、模型对照组、异位宁高、低剂量组及西药丹那唑对照组;造模成功后各给药组灌胃给药1个月后,观察各组子宫内膜局部组织中Fas及FasL蛋白的表达情况。结果：治疗后异位宁高、低剂量组以及西药对照组Fas、FasL表达增多,染色较深,与模型组比较有显著性差异（P〈0.05）。结论：异位宁具有诱导Fas、FasL基因表达,提高异位内膜凋亡能力,使异位病灶得以萎缩、消失的作用。     

祛异康对子宫内膜异位症模型大鼠血管内皮生长因子的影响

目的：观察中药祛异康对子宫内膜异位症大鼠在位、异位子宫内膜组织血管内皮因子（VEGF）的表达情况，探讨其治疗子宫内膜异位症的机理。方法：将40只健康雌性SD大鼠分为4组：A组只行开关腹，B、C、D组均行内膜移植，造模完成后，A、B组以生理盐水灌胃，C、D组分别给予西药丹那唑、中药祛异康灌胃，4周后于动情期处死，用免疫组化方法检测在位、异位子宫内膜组织VEGF的表达情况。结果：在降低异位内膜组织VEGF的表达上丹那唑组、祛异康组与模型组比较均有显著性差异（P〈0．05；P〈0．05）；祛异康组与丹那唑组比较对降低VEGF的表达无明显差异（P〉0．05）。结论：祛异康能明显抑制子宫内膜异位症模型大鼠异位内膜的生长，使异位内膜萎缩，并能明显抑制异位内膜周围血管的形成；其治疗机理可能是通过降低VEGF在异位内膜组织中的表达而实现的。     

异位宁对实验性子宫内膜异位症大鼠的治疗作用

目的:探讨异位宁治疗子宫内膜异位症的作用机制。方法:采用大鼠自体子宫内膜移植建立实验性子宫内膜异位症模型,分别观察异位宁和达那唑对模型大鼠外周血清白介素2(IL2)、白介素10(IL10)、雌二醇(E2)、孕酮(P)含量及血管内皮细胞生长因子(VEGF)在大鼠异位内膜组织中表达的影响。结果:异位宁对上述指标均有不同的下调或抑制作用,与模型组比较有显著性差异(P<0.05),异位宁高剂量组与达那唑相比无显著性差异(P>0.05)。结论:异位宁具有调节免疫、内分泌及血管内皮细胞生长因子作用,能够有效抑制异位子宫内膜的种植。     

异位宁对子宫内膜异位症大鼠血清白介素2及白介素10作用的实验研究

目的通过研究异位宁对子宫内膜异位症大鼠血清IL-2、IL-10的影响来阐述异位宁的作用机理。方法采用自体子宫组织块移植法建立子宫内膜异位症大鼠模型。应用ELISA的方法,检测大鼠异位子宫内膜IL-2,IL-10含量。结果异位宁高剂量组IL-2含量明显高于模型对照,有显著性差异(P<0.01);IL-10含量明显低于模型对照组,有显著性差异(P<0.01)。结论异位宁可以通过降低IL-10水平,而升高IL-2进而提高细胞免疫功能,从而达到治疗子宫内膜异位症的目的。     

益气活血中药对大鼠异位子宫内膜组织IL-2、IL-6的影响

目的探讨益气活血中药对大鼠异位子宫内膜组织IL-2、IL-6的影响。方法建立大鼠子宫内膜异位症模型,造模大鼠饲养3周后,随机分为模型组、中药低剂量组、中药高剂量组及西药组,每组6只,各组大鼠进行相应的药物干预。4周后取各组大鼠异位子宫内膜组织固定、切片,采用免疫组化法检测IL-2、IL-6的表达水平。结果与模型组及中药低剂量组比较,中药高剂量组及西药组IL-2的表达升高,IL-6的表达下降,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论益气活血中药可调节异位子宫内膜组织中IL-2、IL-6的含量,干扰异位内膜的生长,从而起到治疗作用。     

健脾益气中药对小鼠异位内膜黏附因子的干预作用

目的观察健脾益气中药对子宫内膜异位症模型小鼠异位内膜的影响，以初步探讨子宫内膜异位症中健脾益气中药对小鼠异位内膜黏附的作用。方法用增强型绿色荧光蛋白（EGFP）转基因和野生型C57BL/6J小鼠建立子宫内膜异位症模型，模型组给予等量的生理盐水腹腔注射，中药组给予健脾益气中药灌胃。2周后处死动物，成像并比较两组小鼠荧光表达的强弱；Westem blot和Real time PCR等技术检测异位内膜的黏附因子ICAM-1（CD54）、CD44。结果镜下可见模型小鼠肠管间、腹壁下、肝小叶下或脾周形成绿色团块状或星点状内膜异位病灶，中药组异位灶体积及荧光表达强度明显低于模型组（P〈0．01）；中药组和模型组与空白对照组异位内膜细胞的凋亡率差异均具有显著性（P〈0．01），中药组与模型组间的凋亡率无显著性差异；中药组CD44、CD54 mRNA表达显著低于模型组（P〈0．01）；以2^-△△α”计算CD44、CD54 mRNA表达量（空白对照组为1），模型组、中药组的CD44 mRNA表达量分别是空白对照组的16．34、2．06倍；CD54 mRNA表达量分别是空白对照组的1．53、1．15倍。结论健脾益气中药可抑制子宫内膜异位症模型小鼠异位内膜的黏附和病灶的产生，这种作用可能与降低黏附因子ICAM-1、CD44的表达有关。     

内异康复栓对子宫内膜异位症异位和在位内膜组织形态学的影响

目的：探讨内异康复栓直肠给药对子宫内膜异位症（EMT）大鼠异位和在位内膜组织形态学的不同影响。方法：建立大鼠EMT模型,随机设内异康复栓高、中剂量组、丹那唑组、丹莪妇康煎膏组、模型组、空白组,造模30天后连续给药30天,观察各组药物对EMT大鼠异位和在位内膜组织形态学的影响。结果：内异康复栓中剂量组和丹那唑组显著减少EMT大鼠异位内膜的腺体数目（P〈0.05）,内异康复栓高、中剂量组明显缩小EMT大鼠异位内膜被覆上皮面积,使被覆上皮厚度明显变薄,但对EMT大鼠在位内膜的腺体数目和面积无明显影响。结论：内异康复栓可促进异位病灶组织萎缩,而对在位内膜组织结构无明显影响。     

祛异康对子宫内膜异位症模型大鼠基质金属蛋白酶—2,7的影响

目的：观察祛异康对子宫内膜异位症模型大鼠基质金属蛋白酶-2、7表达的影响,探讨祛异康治疗子宫内膜异位症的机制。方法：采用手术移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型,随机分为对照组、模型组、丹那唑组、祛异康大、中、小剂量组。造模成功各组给药4周,免疫组化方法检测大鼠在位、异位内膜中MMP-2、MMP-7的表达。结果：模型组MMP-2及MMP-7的阳性表达率明显高于对照组及各治疗组（P〈0.05）;祛异康大、中剂量组异位内膜MMP-2、MMP-7的表达与模型组比较明显降低（P〈0.05）,与丹那唑组比较无明显差异（P〉0.05）。结论：祛异康能明显抑制模型大鼠异位内膜的生长,其治疗机理可能是通过下调MMP-2,MMP-7在异位内膜组织的过度表达及酶活性,达到降低其侵袭、转移、种植的能力起到治疗目的。     

小柴胡汤对大鼠子宫内膜异位症COX-2表达的影响

目的探讨小柴胡汤治疗大鼠子宫内膜异位症的作用机制。方法建立大鼠内异症动物模型,将成模鼠随机分为对照组、小柴胡汤组、丹那唑组及联合用药组(小柴胡汤 丹那唑),分别给药进行治疗。采用免疫组化方法,观察分析各用药组在位、异位内膜环氧合酶-2(COX-2)的表达。结果小柴胡汤组和联合用药组大鼠异位内膜COX-2的表达水平明显低于其在位内膜,丹那唑组和对照组则正好相反,异位内膜COX-2的表达明显高于在位内膜。结论小柴胡汤治疗大鼠子宫内膜异位症的作用机制可能是通过下调异位内膜COX-2的表达,从而减少前列腺素的产生而实现的。     

NF-κB在马钱子碱抑制非小细胞肺癌细胞环氧化酶2生成中的作用研究

目的:探讨马钱子碱抑制环氧化酶2(COX-2),从而诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的分子机制。方法:构建COX-2启动子若干转录因子缺失突变体与含COX-2 mRNA 3’-UTR的报告质粒,与Renillia共转染至非小细胞肺癌A549细胞,测报告基因luciferase活性研究COX-2启动子受马钱子碱抑制的最小顺式作用元件;采用蛋白质免疫印迹法研究马钱子碱对IκBα磷酸化与p65进核的影响。结果:马钱子碱显著性抑制LPS诱导的COX-2启动子的激活,而对COX-2 mRNA转录后调控影响不大,COX-2启动子-262位附近NF-κB是马钱子碱抑制COX-2启动子活性的重要顺式作用元件。马钱子碱能抑制IκBα的磷酸化,并能抑制p65的进核。结论:马钱子碱抑制NF-κB的激活,进而从转录水平COX-2的基因表达,促进A549细胞凋亡。     

枳术颗粒对慢性萎缩性胃炎大鼠胃组织COX-2和VEGF表达的影响

目的:观察枳术颗粒对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠的疗效,并探讨其作用机制。方法:选取已建立CAG模型的大鼠,分为模型组,胃复春(0.86 g·kg-1)组,枳术颗粒高、中、低剂量(20,10,5 g·kg-1)组。用蛋白免疫印迹法(Western blot),免疫组化及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法检测胃组织中环氧合酶-2(COX-2),血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜腺腔结构不完整,炎细胞浸润黏膜全层,体重增长率降低,COX-2,VEGF蛋白及mRNA表达显著增加(P0.01);与模型组比较,枳术颗粒高、中、低剂量组及胃复春组均显著增加CAG大鼠体重增长率(P0.01),下调大鼠胃组织COX-2,VEGF蛋白及mRNA表达(P0.01);与胃复春组比较,枳术颗粒高、中、低剂量组均显著增加CAG大鼠体重增长率(P0.01),高剂量组可下调大鼠胃组织COX-2,VEGF蛋白及mRNA表达,但无明显差异。结论:枳术颗粒可加快大鼠体重增长,使CAG大鼠胃黏膜组织得到改善和恢复。其作用机制可能为下调胃黏膜破坏因子COX-2,VEGF的表达,起到预防及治疗作用。     

参芪抑瘤方抑制胃癌细胞MKN-45增殖和侵袭转移作用机制

目的:观察参芪抑瘤方(抑瘤方)血清抑制MKN-45增殖和侵袭转移作用,并探讨其作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;Trans-well和划痕实验观察细胞侵袭与迁移能力;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测环氧合酶-2(COX-2)和人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)mRNA表达;免疫组化检测细胞COX-2,PTEN蛋白表达。结果:参芪抑瘤方含药血清(2.8 g·m L-1)干预24,48,72 h后,抑制率为31.25%,33.09%,34.50%;参芪抑瘤方含药血清(2.8 g·m L-1)干预48 h后,细胞侵袭能力、转移能力和迁移能力分别下降了36.18%,49.46%,36.46%;COX-2 mRNA表达量下降90%,PTEN升高89.72%;与空白血清组比较,参芪抑瘤方组COX-2蛋白表达减弱;PTEN蛋白表达增强(P0.05)。结论:参芪抑瘤方药物血清通过影响COX-2,PTEN mRNA和蛋白表达,抑制MKN-45细胞的增殖,减弱其侵袭转移能力。     

Effects of taraxasterol on iNOS and COX-2 expression in LPS-induced RAW 264.7 macrophages

Ethnopharmacological relevance

Taraxasterol was isolated from the Chinese medicinal herb Taraxacum officinale which has been frequently used as a remedy for inflammatory diseases. Our previous study has shown that taraxasterol inhibited lipopolysaccharide (LPS)-induced nitric oxide (NO) and prostaglandin E₂ (PGE₂) production in RAW 264.7 macrophages. To elucidate the underlying mechanism responsible for these effects, in the present study, we investigated the effects of taraxasterol on inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2) expression, and mitogen-activated protein kinases (MAPKs) signaling pathway in LPS-induced RAW 264.7 macrophages.

Materials and methods

RAW 264.7 cells were pretreated with 2.5, 5 and 12.5 μg/ml of taraxasterol 1 h prior to treatment with 1 μg/ml of LPS. The mRNA expression levels of iNOS and COX-2 were examined by RT-PCR. The protein expression levels of iNOS and COX-2, and the phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2), p38 and c-Jun N-terminal kinase (JNK) MAPKs were measured by Western blot.

Results

The mRNA and protein expression levels of iNOS and COX-2 were inhibited by taraxasterol in a concentration-dependent manner. Further studies revealed that taraxasterol suppressed the phosphorylation of ERK1/2 and p38 in LPS-induced RAW 264.7 macrophages.

Conclusions

These results indicate that taraxasterol inhibits iNOS and COX-2 expression by blocking ERK1/2 and p38 MAPKs signaling pathway.     

四君子汤对脾胃虚弱证型消化性溃疡患者肠道微生态变化及COX-1、COX-2、PGE2表达的影响

目的探讨中药方剂四君子汤对脾胃虚弱症型消化性溃疡患者肠道菌群变化、环氧化酶(COX-1、COX-2)及前列腺素E2表达水平的影响。方法从2017年1月-2018年12月收治的消化性溃疡患者中按年龄组、性别、溃疡类型1∶1匹配后,随机分配于试验组与对照组(试验组与对照组各240名患者)。其中,对照组患者给予思密达治疗,试验组使用思密达协同四君子汤,分别治疗8周。比较治疗前后2组患者的治疗效果、肠道微生态变化、环氧化酶及前列腺素E2水平表达情况。结果治疗后,试验组的阳性与阴性杆菌数减少,阳性球菌数增多,且阳性球菌与阴性球菌数量均高于对照组。而对照组的阳性、阴性杆菌与阴性球菌均显著减少(P<0.05);2组的COX-1、COX-2、PGE2表达水平均增高(P<0.05),且中药组显著高于对照组(P<0.05)。结论在思密达基础上加用四君子汤治疗脾胃虚弱症型消化性溃疡可有效调节其胃肠道菌群平衡、增强对胃黏膜的覆盖保护作用。     

参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠IL-13,IL-23及COX-2,CREB表达的影响

目的:观察参苓白术散对脾虚湿困型溃疡型结肠炎大鼠结肠组织白细胞介素(IL)-13,IL-23及环氧合酶-2(COX-2),c AMP反应元件结合蛋白(CREB)表达的影响,探究其对溃疡性结肠炎作用机制。方法:将48只SPF级Wistar大鼠随机分为6组,分别是空白组、模型组、参苓白术散高、中、低剂量组和美沙拉秦组,每组8只,雌雄各半。除空白组,其余各组采用病证结合法复制脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠模型,即饮食、环境干预等措施联合2,4-二硝基苯磺酸灌肠。造模成功后,参苓白术散高、中、低剂量组分别按照24,12,6 g·kg-1·d-1,美沙拉秦组0.2 g·kg-1·d-1进行灌胃。连续灌胃21 d后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠结肠组织IL-13,IL-23含量;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测结肠组织IL-13,IL-23,COX-2,CREB mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织COX-2,CREB蛋白表达量。结果:与空白组比较,模型组大鼠结肠IL-13含量和IL-13 mRNA表达水平明显降低(P0.05),IL-23含量和IL-23 mRNA升高(P0.05),COX-2,CREB mRNA及蛋白相对表达量升高(P0.05)。与模型组比较,参苓白术散(高、中、低剂量)组大鼠结肠IL-13含量和IL-13 mRNA表达均升高,尤以参苓白术散高剂量组最显著(P0.05),IL-23含量和IL-23 mRNA降低(P0.05),COX-2,CREB mRNA表达及蛋白相对表达量降低(P0.05)。结论:参苓白术散可能调节脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠IL-13,IL-23及COX-2,CREB的表达,减少结肠的炎症反应。     

化浊解毒方含药血清对胃癌细胞VEGF及COX-2表达的影响

目的:研究化浊解毒方对胃癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)及环氧合酶-2(COX-2)表达的调控作用。方法:以不同剂量的化浊解毒方给Wistar大鼠灌胃制备含药血清,然后以含药血清培养胃癌细胞,共同培养2代后,分别用免疫组化法检测VEGF、COX-2的表达情况。结果:化浊解毒方高、中、低剂量组胃癌细胞中VEGF、COX-2的表达减弱,与对照组比较,差异均有显著性意义(P<0.01);而且高剂量组表达减弱更为明显,与低、中剂量组与较,差异均有非常显著性意义(P<0.01)。结论:化浊解毒方对胃癌细胞VEGF及COX-2的表达有抑制作用。     

三七总皂苷联用阿司匹林对后者抗血小板凝集作用的影响

目的:对比与三七总皂苷联用前后阿司匹林的抗血小板凝集作用,探讨三七总皂苷对阿司匹林药效的影响。方法:将24只大鼠随机分为4组,分别为正常组,三七总皂苷组(NTS,31.25 mg·kg~(-1)),阿司匹林组(ASA,20.83 mg·kg~(-1)),三七总皂苷与阿司匹林联用组(NTS,31.25 mg·kg~(-1)+ASA,20.83 mg·kg~(-1))。除正常组外,其余各组分别灌胃给药相应浓度药液。于第5,30,60,120,240,480 min时取血,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)测定血清中血栓素A_2(TXA_2),环氧化酶-1(COX-1),环氧化酶-2(COX-2)水平。结果:ASA组COX-1及COX-2含量与正常组无显著性差异。NTS组在5~240 min内COX-1含量显著低于正常组(P0.01),在30,60,120,480 min COX-2含量显著低于正常组(P0.01)。ASA与NTS联用组在5~60 min内COX-1含量显著低于正常组及ASA组(P0.05),在5~240 min内COX-2含量显著低于正常组和ASA组(P0.01)。各实验组大鼠血清中TXA_2含量在5~240 min内均显著低于正常组(P0.01),其中联用组在第30,60,240 min明显低于阿司匹林组(P0.05,P0.01)。联用组对TXA_2的抑制作用在60 min时达到峰值。结论:三七总皂苷与阿司匹林联用后抗血小板凝集作用优于阿司匹林或三七总皂苷单用组。二者对TXA_2的抑制为相加作用,其中三七总皂苷可抑制COX-1,COX-2的表达,可能是增强阿司匹林抗血小板凝集作用的途径之一。     

清浊安中汤对慢性胃炎脾胃湿热证大鼠模型环氧合酶-2的影响

目的:探讨清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制及脾胃湿热证大鼠模型的建立.方法:50只大鼠随机分为正常对照组、胃炎脾虚证组、胃炎湿热证组、清浊安中汤高、低剂量防治组,不同组用不同药物灌胃,连续20 d.采用“病证结合”方法,以2％水杨酸钠+高脂高糖+人工气候箱复制脾胃湿热证大鼠模型,并用清浊安中汤对脾胃湿热证大鼠模型防治,常规HE胃黏膜病理组织染色、免疫组化(SABC)法检测环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达.结果:脾胃湿热证组10只大鼠均有轻-重度炎症,COX-2蛋白表达为0.289±0.036;脾胃湿热证大鼠模型表现出的症状、体征与临床相符,胃黏膜炎症较正常组重而与脾虚证组无差异,COX-2蛋白表达大于脾虚组与正常组(P＜0.05),COX-2蛋白表达与炎症程度呈正相关,相关系数为0.662,P＜0.01,清浊安中汤防治组对此有改善治疗作用.结论:大鼠模型符合脾胃湿热证属性,调节COX-2蛋白表达可能是清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制之一.