分子识别法提取中药伏毛铁棒锤有效成分实验研究

目的:探讨CD分子识别用于提取分离中药伏毛铁棒锤有效成分的技术方法。方法:以紫外分光光度法测定伏毛铁棒锤与CD的包合常数,预测包合可能性;分子识别提取分离伏毛铁棒锤有效成分;UV验证包合物;HPLC分析包合前后伏毛铁棒锤化学成分变化;醋酸致小鼠扭体试验筛选包合物镇痛活性。结果:UV图谱确证了伏毛铁棒锤-β-CD包合物的形成;包合物组分简单,活性成分含量显著提高;该包合物有良好的镇痛作用。结论:分子识别法用于中药伏毛铁棒锤提取分离技术可行,效果显著。     

基于UV法优化铁棒锤种子生物碱提取工艺测定总碱含量

目的建立铁棒锤种子中生物碱的最佳提取方法,为铁棒锤种子生物碱的有效利用提供科学依据。方法采用生物碱显色反应、薄层色谱法对铁棒锤种子生物碱类成分进行定性鉴别;采用正交实验设计,运用紫外分光光度法进行定量分析。结果总生物碱的最佳提取工艺条件:提取时间30 min,乙醇浓度60%,料液比1:20。铁棒锤种子总生物碱含量为0.19%。结论方法简便,超声提取法提取率高,有可利用价值,可为铁棒锤种子化学成分进一步研究提供科学依据。     

刺五加与短梗五加种子的蛋白质电泳分析

目的:建立适用于刺五加和短梗五加种子的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴别方法,为二者种子的鉴别及质量评价提供参考。方法:采用15%分离胶的SDS-PAGE电泳对15个产地的刺五加种子和2个产地的短梗五加种子中可溶性蛋白进行电泳分析,利用Band Scan 5.0软件对蛋白谱带蛋数目、谱带强度和相对分子质量等方面的差异进行比较。结果:17个种子样品共分离出31条清晰的蛋白谱带,其中2种种子的10条共有特征谱带和各自的1条标准特征谱带可作为刺五加和短梗五加种子的标准蛋白图谱。不同产地的刺五加种子蛋白电泳图谱具有一定的种内差异性。结论:该电泳方法和标准蛋白图谱可作为刺五加及短梗五加种子的鉴别依据。     

道地产区不同产地厚朴种子的电泳指纹图谱研究

目的:研究道地产区湖北恩施5个不同产地厚朴种子的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳图谱,以探索厚朴种子不同产地的鉴别方法,从而为厚朴的良种选育及种子质量评价提供依据.方法:应用SDS-PAGE方法比较不同产地厚朴种子的蛋白电泳图谱在谱带数目、谱带强度和相对分子质量等方面的差异.结果:5个产地的厚朴种子的电泳图谱存在明显产地差异.结论:该电泳方法可为厚朴种子的产地鉴别提供依据.     

全蝎蛋白药效组分的生物鉴定法研究

目的 :研究全蝎蛋白药效组分的提取方法,摸索全蝎蛋白药效组分SDS-PAGE的最佳电泳条件,测定全蝎蛋白药效组分电泳图谱条带的大致分子质量,确定其SDS-PAGE的表达特征,从而建立全蝎蛋白药效组分的电泳鉴别法。 方法 :采用水提与盐析法获得全蝎蛋白药效组分,考马斯亮蓝法测定蛋白药效组分的蛋白质含量,SDS-PAGE法和Alpha Ease FC 4.0.0软件测定全蝎蛋白药效组分的蛋白质相对分子质量。 结果 :全蝎蛋白药效组分的蛋白质质量分数为50.37%;得到较好的全蝎蛋白药效组分的10条电泳谱带,相对分子质量分别为94.162 0,66.400 0,40.357 0,27.541 0,22.518 0,19.520 0,12.766 0,11.190 0,9.665 3,8.534 2 KDa。 结论 :这10条谱带是全蝎蛋白药效组分的特征谱带,可用于全蝎蛋白药效组分的鉴别。     

人工种植伏毛铁棒锤的化学成分研究

目的 研究人工种植伏毛铁棒锤的化学成分.方法 采用超声波乙醇提取法和正、反相硅胶柱色谱分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定结构.结果 从人工种植的伏毛铁棒锤中分离鉴定出11个化合物,分别为3脱氧乌头碱(Ⅰ)、3-乙酰乌头碱(Ⅱ)、乌头碱(Ⅲ)、3-脱氧乌头原碱-8亚油酸酯(Ⅳ)、尼奥灵(Ⅴ)、宋果灵(Ⅵ)、乌头原碱-8亚油酸酯(Ⅶ)、16,17-二氢-12β,16β-环氧欧乌头碱(Ⅷ)、12-表-欧乌头碱(Ⅸ)、欧乌头碱(Ⅹ)和6-O-去甲基尼奥灵(Ⅺ).结论 人工种植的伏毛铁棒锤的化学成分与已报道野生的基本相同,人工种植的伏毛铁棒锤能够满足药用需要.     

响应面法优化伏毛铁棒锤根部总生物碱提取工艺

目的:研究伏毛铁棒锤根中总生物碱的最佳提取工艺。方法:采用3因素3水平响应面法对伏毛铁棒锤总生物碱乙醇回流提取工艺进行了优化。结果:建立了一个总生物碱得率与影响因子的多元二次回归方程,得到总生物碱的最佳提取工艺条件:提取时间1.72 h,乙醇浓度64.00%,料液比8.18 mL/g,总生物碱得率的预测值可达0.526%,实测值为0.521%,与预测值非常接近。结论:二次多项式建立的数学模型具有良好的预测性,所选工艺条件重现性好。     

雪莲组织中蛋白质提取方法比较

目的:比较雪莲组织中蛋白质的提取方法.方法:采用酚法、TCA/丙酮法、尿素法提取雪莲组织中蛋白质,所得蛋白质进行一维SDS-PAGE和双向电泳检测,通过比较电泳图谱确定雪莲组织中蛋白质的最佳提取方法.结果:酚法提取的雪莲组织蛋白质杂质量最少、纯度最高,一维SDS-PAGE和双向电泳图谱显示其具有较多的蛋白质点,且蛋白质种类较多.结论:3种提取方法均有一定的蛋白质损失,建议采用酚法从雪莲组织中提取蛋白质,为雪莲蛋白质组学研究提供参考.     

党参种子真实性鉴定研究

目的：研究党参种子真实性鉴别方法,为党参种子品种鉴定以及党参种子质量标准的制定提供依据。方法：对不同来源党参分别进行了种子蛋白的SDS-PAGE电泳,子叶蛋白的SDS-PAGE电泳,子叶蛋白的非变性凝胶电泳。结果：三种电泳结果显示,种子蛋白的SDS-PAGE电泳,谱带清晰,分离到的差异谱带多;子叶蛋白的SDS-PAGE电泳,谱带模糊;子叶蛋白的PAGE电泳,谱带虽然清晰但是没有分离到有差异的谱带。结论：党参种子真实性鉴定应选择种子蛋白的SDS-PAGE电泳,通过电泳分析得到陕西凤县,甘肃文县,四川野生的亲缘关系比较近,比其他地方的党参种子多出一条Rf值大约为0.060的谱带,根据Marker蛋白谱带可以初步推断这个差异蛋白的分子量为170 KDa。     

黄芪蛋白提取方法的比较

目的:应用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术筛选建立黄芪蛋白质指纹图谱及蛋白提取方法。方法:采用8种提取方法(稀释4倍的浓缩胶缓冲液,双蒸水,Tris-HCl法,柠檬酸盐法,PVP buffer,改良饱和酚法,TCA-丙酮法,植物蛋白提取试剂盒)提取黄芪药材的水溶性蛋白质,根据PAGE谱带的多少和清晰度优选建立黄芪药材蛋白质指纹图谱的蛋白提取条件。结果:植物蛋白质提取液、稀释4倍的浓缩胶缓冲液和Tris-HCl缓冲液提取的蛋白含量较高,但杂质较多,条带拖尾,部分特征峰不能得到有效分离。TCA-丙酮法、改良饱和酚法、柠檬酸盐缓冲液和PVP buffer提取的蛋白含量较低,谱带数目较少,辨识度低。以双蒸水为提取溶剂时可辨识谱带数目最多,清晰度较好,电泳指纹图谱中各峰的分离度较高。结论:双蒸水直接提取法更适用于建立黄芪药材的蛋白质指纹图谱。     

不同来源黄芪药材蛋白质电泳鉴别研究

目的 :探讨利用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术鉴别黄芪药材的可行性。方法 :超声提取黄芪药材的水溶性蛋白质,对其进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,并采用凝胶成像系统分析电泳图谱。结果:黄芪药材的蛋白电泳图谱信息量丰富,不同来源黄芪药材的电泳图谱相似,存在11条明显的共有特征带,同时在条带数目、迁移率和蛋白质相对含量方面存在一定的差异性。结论:PAGE电泳具有分辨率高、谱带稳定、重现性好等优点,可用于黄芪药材的鉴别。     

燕窝鉴别中的蛋白质电泳研究

目的：探讨SDS-PAGE和等电聚焦电泳应用于燕窝蛋白分离及燕窝鉴定中的可行性。方法：提取印尼燕窝、怀集燕窝及常作为伪品的明胶、银耳、猪皮的蛋白质,进行SDS-PAGE和等电聚焦电泳研究。结果：印尼燕窝与怀集燕窝在SDS-PAGE图谱上可见明显差异,而明胶、银耳和猪皮等伪品可见特征性蛋白条带。燕窝蛋白经等电聚焦电泳可见清晰的蛋白条带,且主要集中于酸性端。结论：SDS-PAGE和等电聚焦电泳均可获得燕窝蛋白质的特征性电泳图谱,用于鉴别不同品种燕窝及掺伪燕窝是可行的。     

厚朴种子蛋白质成分分子量测定

目的:测定厚朴种子蛋白质成分的分子量,并由电泳图谱鉴别其品种.方法:应用SDS-PAGE技术进行研究.结果:不同品种的厚朴其SDSPAGE图谱存在明显差异,并由此确定各样品特征蛋白质的分子量.结论:清晰的电泳图谱如分子量数据为厚朴的鉴别提供依据.     

四种产地全蝎粉可溶性蛋白质SDS-PAGE法分离研究

目的:探索四种产地野生全蝎粉中可溶性蛋白质SDS-PAGE法所获得电泳图谱条带的一致性,并确定其大致分子量。方法:采用55%乙醇提取、75%以上乙醇沉淀的方法获得全蝎粉可溶性蛋白质,考马斯亮蓝法测定其蛋白质含量,SDS-PAGE法和Quantity one软件测定全蝎粉可溶性蛋白质的相对分子量。结果:山东平邑、山东龙口、山东长清、山东沂源四种产地全蝎粉的水溶性蛋白饱和溶液中的蛋白含量分别为4.006,2.894,3.795,4.649 mg/mL;四种产地全蝎粉可溶性蛋白质通过SDS-PAGE法均获得了7条较清晰的电泳谱带,对应的相对分子量分别为42.563,33.938,27.060,22.354,19.402,3.422,1.929 KDa。结论:这7条全蝎可溶性蛋白质的特征谱带可用于中药全蝎粉的真伪鉴别。     

燕窝鉴别中的蛋白质电泳研究

目的：探讨SDS-PAGE和等电聚焦电泳应用于燕窝蛋白分离及燕窝鉴定中的可行性。方法：提取印尼燕窝、怀集燕窝及常作为伪品的明胶、银耳、猪皮的蛋白质，进行SDS-PAGE和等电聚焦电泳研究。结果：印尼燕窝与怀集燕窝在SDS-PAGE图谱上可见明显差异，而明胶、银耳和猪皮等伪品可见特征性蛋白条带。燕窝蛋白经等电聚焦电泳可见清晰的蛋白条带，且主要集中于酸性端。结论：SDS-PAGE和等电聚焦电泳均可获得燕窝蛋白质的特征性电泳图谱，用于鉴别不同品种燕窝及掺伪燕窝是可行的。     

伏毛铁棒锤根部二萜生物碱的研究

 目的研究伏毛铁棒锤根部的二萜生物碱成分。方法采用正、反相硅胶柱色谱分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定结构。结果从伏毛铁棒锤根部的乙醇提取物中分离鉴定出11个二萜生物碱,分别为3-脱氧乌头碱(Ⅰ)、3-脱氧乌头原碱-8-亚油酸酯(Ⅱ)、3-乙酰乌头碱(Ⅲ)、16,17-二氢-12β,16β-环氧欧乌头碱(Ⅳ)、尼奥灵(Ⅴ)、宋果灵(Ⅵ)、乌头原碱-8-亚油酸酯(Ⅶ)、乌头碱(Ⅷ)、12-表-欧乌头碱(Ⅸ)、欧乌头碱(Ⅹ)和6-O-去甲基尼奥灵(Ⅺ)。结论二萜生物碱是伏毛铁棒锤药材的主要化学成分,其中Ⅱ,Ⅳ～Ⅶ和Ⅺ为首次从该植物中分离得到。     

不同种子处理方法对铁棒锤育苗质量的影响

目的研究不同种子处理方法对铁棒锤育苗质量的影响。方法对铁棒锤种子进行去皮、赤霉素(GA3)处理,测定不同种子处理方法对铁棒锤出苗数及苗栽质量的影响。结果搓去种皮或100 mg/L GA3处理14 h均有利于提高铁棒锤田间出苗数及苗栽质量,而以先去皮再经100 mg/L GA3处理14 h效果最好。结论本研究初步形成了铁棒锤大田育苗的技术方法。     

地黄块根总蛋白质提取及双向电泳条件优化

目的:建立一种有效的地黄块根总蛋白质提取、分离方法.方法:分析不同提取方法提取地黄块根总蛋白质的得率,同时对地黄块根总蛋白质双向电泳条件进行了优化比较.结果:三氯乙酸(TCA)-苯酚提取法的总蛋白质得率最高,所获蛋白质在SDS-PAGE一维图谱获得的蛋白质条带丰富,在2-DE图谱获得的蛋白质点数较多、清晰,且蛋白质点分离较完全,图谱背景清晰.自制管胶中两性电解质pH 3-10与pH 5-8比例为1∶5,上样量为170μg所获得的2-DE图谱效果最佳.结论:TCA/苯酚提取法适合于地黄块根总蛋白质的提取,本研究优化确定的双向电泳条件分离蛋白效果及重复性好.     

酸浆种子蛋白提取方法的比较研究

目的:建立适用于酸浆种子的SDS-PAGE和2-D PAGE蛋白样品提取方法。方法:比较直接提取法、TCA-丙酮法、Tris-丙酮法、饱和酚法、改良饱和酚法等7种提取方法所获酸浆种子总蛋白含量以及SDS-PAGE电泳的谱带数目、强度和电泳分辨率等方面的差异。结果:HEPES buffer直接提取法提取蛋白效率较高,杂质少,电泳谱带清晰,分辨率高;PVP buffer和Lysis buffer A直接提取法次之,但杂质较多;TCA-丙酮法、Tris-丙酮法、饱和酚法和改良的饱和酚法差别不大,蛋白纯度较高,但提取效率低,谱带数目少;此外,Lysis buffer A法、丙酮法和酚法易产生高丰度蛋白的干扰。结论:直接提取法中的HEPES buffer法最好,优于丙酮法、酚法和其它直接提取法。     

利用不同电泳技术对东亚蝎毒素ITX 蛋白组分分离的研究

目的 :初步建立蝎毒素ITX(Immunotoxin)蛋白组分的电泳分离方法和蛋白质组表达谱。 方法 :阴极电泳(T=18%,C=6%)对蝎毒进行分离,Bio-Rad Quantity-one电泳软件分析条带;双向电泳技术:第一向为固相pH梯度等电聚焦,第二向电泳为垂直平板SDS-PAGE(T=18%)。在以上过程中分别对上样方式、等电聚焦程序等条件进行优化控制,利用PDQ7.1软件分析获得二维凝胶图像。 结果 :阴极电泳图谱显示蝎毒素ITX由7个蛋白组分组成;二维凝胶图谱显示蝎毒素ITX包含相对分子质量相同(约为5.8×10³)而等电点不同9种蛋白组分,其中酸性蛋白质4种,碱性蛋白质5种。 结论 :通过各种条件的优化,初步建立了ITX的阴极电泳和双向电泳方法,获得了分辨率和重复性较好的阴极电泳图谱和二维凝胶图谱。