野生全蝎粉可溶性蛋白质SDS-PAGE电泳分析研究

目的:探索野生全蝎粉水溶性蛋白质SDS-PAGE电泳的最佳分离条件,测定各蛋白质的大体分子量。方法:采用55%乙醇提取,75%以上乙醇沉淀的方法获得全蝎粉水溶性蛋白质,考马斯亮蓝法测定其蛋白质含量,SDS-PAGE法和Quantity one软件测定全蝎粉水溶性蛋白质的相对分子量。结果:全蝎粉水溶性蛋白质的含量为4.649 mg/mL;得到较好全蝎粉可溶性蛋白质的7条电泳谱带,相对分子质量分别为70.447,64.730,54.139,40.832,29.939,26.494,19.172 kDa。结论:这7条全蝎粉水溶性蛋白质的特征谱带可用于全蝎粉水溶性蛋白质的种类鉴别。     

全蝎可溶性蛋白质TRICINE-SDS-PAGE电泳法分离研究

目的:探索全蝎可溶性蛋白质电泳法分离的最佳体系。方法:用TRICINE-SDS-PAGE法对全蝎蛋白提取液所含混合蛋白进行分离,用Quantity One软件确定各蛋白谱带分子量。结果:用该法可获得11条较高分辨率的蛋白谱带,其对应分子量分别为42.000,33.515,27.509,25.524,21.615,17.640,15.839,13.994,11.318,10.000,8.357 kDa。结论:TRICINE-SDS-PAGE电泳法可用于全蝎可溶性蛋白的分离。     

全蝎蛋白药效组分的生物鉴定法研究

目的 :研究全蝎蛋白药效组分的提取方法,摸索全蝎蛋白药效组分SDS-PAGE的最佳电泳条件,测定全蝎蛋白药效组分电泳图谱条带的大致分子质量,确定其SDS-PAGE的表达特征,从而建立全蝎蛋白药效组分的电泳鉴别法。 方法 :采用水提与盐析法获得全蝎蛋白药效组分,考马斯亮蓝法测定蛋白药效组分的蛋白质含量,SDS-PAGE法和Alpha Ease FC 4.0.0软件测定全蝎蛋白药效组分的蛋白质相对分子质量。 结果 :全蝎蛋白药效组分的蛋白质质量分数为50.37%;得到较好的全蝎蛋白药效组分的10条电泳谱带,相对分子质量分别为94.162 0,66.400 0,40.357 0,27.541 0,22.518 0,19.520 0,12.766 0,11.190 0,9.665 3,8.534 2 KDa。 结论 :这10条谱带是全蝎蛋白药效组分的特征谱带,可用于全蝎蛋白药效组分的鉴别。     

不同产地全蝎可溶性蛋白质含量比较研究

目的:比较不同产地野生全蝎可溶性蛋白质的含量,寻找优质全蝎药材资源。方法:用考马斯亮蓝法分别测定四种全蝎可溶性蛋白质的含量。结果:四种产地野生全蝎可溶性蛋白质的含量差异较大,含量最高者是最低者的1.8倍。结论:不同生长环境的野生全蝎,其可溶性蛋白质的含量相差很大,含量较高者的药材品质较好。     

刺五加与短梗五加种子的蛋白质电泳分析

目的:建立适用于刺五加和短梗五加种子的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴别方法,为二者种子的鉴别及质量评价提供参考。方法:采用15%分离胶的SDS-PAGE电泳对15个产地的刺五加种子和2个产地的短梗五加种子中可溶性蛋白进行电泳分析,利用Band Scan 5.0软件对蛋白谱带蛋数目、谱带强度和相对分子质量等方面的差异进行比较。结果:17个种子样品共分离出31条清晰的蛋白谱带,其中2种种子的10条共有特征谱带和各自的1条标准特征谱带可作为刺五加和短梗五加种子的标准蛋白图谱。不同产地的刺五加种子蛋白电泳图谱具有一定的种内差异性。结论:该电泳方法和标准蛋白图谱可作为刺五加及短梗五加种子的鉴别依据。     

全蝎三种产地加工方法的对比研究

目的:比较三种产地加工全蝎粉的含水量、含盐量、醇提取物含量、蛋白质含量、平衡吸湿量以及牛磺酸含量的不同,找出最适合的产地加工方法。方法:用快速水分测定仪测定含水量;用滴定法测定全蝎粉含盐量;用lowry法测定蛋白质含量;用重量法测定醇提取物含量;用平衡吸湿曲线测定临界相对温度(CRH)值;用高效液相外标一点法测牛磺酸含量。结果:比较三种产地加工方法在各种指标上的差异性,结果显示,常温风干蝎和冷冻干燥蝎之间差异较小,而高温盐蝎与前两者之间有显著差异。结论:全蝎冷冻干燥和常温风干可作为产地加工方法。     

全蝎可溶性蛋白质的提取工艺研究

目的:寻找全蝎可溶性蛋白质的最佳提取工艺。方法:用正交设计试验法研究在不同的乙醇浓度、不同的溶媒量、不同的超声提取时间等条件下,全蝎中可溶性蛋白质的提取量。结果:55%浓度的乙醇对提取量影响最大。结论:最佳提取工艺为:乙醇浓度为55%,溶媒加入量为20 ml,超声提取时间为120 min。     

人参水溶性蛋白的提取及SOD活性测定

目的提取人参水溶性蛋白,测定其蛋白含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力。方法采用缓冲溶液抽提及硫酸铵分级沉淀法制备人参水溶性总蛋白,采用Bradford蛋白含量试剂盒测定蛋白质含量、SDS-PAGE法进行蛋白鉴定、邻苯三酚自氧化法进行SOD活力测定,并采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行活力显示。结果通过Bradford蛋白含量试剂盒测定蛋白质含量达80%,蛋白收率达1%,SDS-PAGE电泳检测显示人参中主要含有8种蛋白亚基。邻苯三酚自氧化法测得SOD活力达16.048 U/mg蛋白,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条活性谱带。结论人参中具有较丰富的水溶性蛋白,且这些水溶性蛋白具有较高的SOD活性。     

党参种子真实性鉴定研究

目的：研究党参种子真实性鉴别方法,为党参种子品种鉴定以及党参种子质量标准的制定提供依据。方法：对不同来源党参分别进行了种子蛋白的SDS-PAGE电泳,子叶蛋白的SDS-PAGE电泳,子叶蛋白的非变性凝胶电泳。结果：三种电泳结果显示,种子蛋白的SDS-PAGE电泳,谱带清晰,分离到的差异谱带多;子叶蛋白的SDS-PAGE电泳,谱带模糊;子叶蛋白的PAGE电泳,谱带虽然清晰但是没有分离到有差异的谱带。结论：党参种子真实性鉴定应选择种子蛋白的SDS-PAGE电泳,通过电泳分析得到陕西凤县,甘肃文县,四川野生的亲缘关系比较近,比其他地方的党参种子多出一条Rf值大约为0.060的谱带,根据Marker蛋白谱带可以初步推断这个差异蛋白的分子量为170 KDa。     

全蝎白术白头翁混合发酵品不同极性部位体外抗病毒研究

目的探讨全蝎白术白头翁混合发酵品(SAPHFP)不同极性部位体外抗病毒作用及可能活性成分的含量。方法对SAPHFP分别采用超声水提、50%、80%乙醇回流提取,提取物通过MTT法分别对RSV、EV71、COX-B2、HSV四种病毒株进行体外抗病毒作用的实验;采用Lowry法、苯酚-硫酸法及NaNO_2-AlCl_3-NaOH比色法分别测定三种极性部位中的总蛋白、总多糖及总黄酮的含量。结果 SAPHFP三种提取成分中,50%乙醇提取物对病毒的抑制率最好,尤其是对EV71和HSV病毒,TI指数分别为46.30、56.82。三者的体外抗病毒有效率均高于阳性对照药利巴韦林;SAPHFP的50%乙醇提取液与未发酵品比较,感染了HSV病毒的正常细胞其存活率显著提高;水提液中总蛋白、总多糖、总黄酮含量最高,分别为:177.1269、517.7191、9.624298。结论 SAPHFP水提、50%、80%乙醇提取物体外对四种病毒均有一定的抑制作用,体外抗以上病毒株的活性与供试品中所含的总蛋白、总多糖、总黄酮含量不完全成对等关系。     

山东菟丝子类药材及与伪品的凝胶电泳鉴别

目的 :准确、有效、快速地鉴别山东菟丝子类中药及其伪品。方法 :采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法。结果 :山东四种菟丝子均具有 4条相同的谱带 ,与伪品有较大差异。同一亚属菟丝子各有 6条相同的谱带 ,表明同亚属的菟丝子具有较近的亲缘关系。结论 :种子蛋白凝胶电泳的结果可作为菟丝子药材与混伪品之间以及同属菟丝子植物之间的鉴别依据。     

酸浆种子蛋白提取方法的比较研究

目的:建立适用于酸浆种子的SDS-PAGE和2-D PAGE蛋白样品提取方法。方法:比较直接提取法、TCA-丙酮法、Tris-丙酮法、饱和酚法、改良饱和酚法等7种提取方法所获酸浆种子总蛋白含量以及SDS-PAGE电泳的谱带数目、强度和电泳分辨率等方面的差异。结果:HEPES buffer直接提取法提取蛋白效率较高,杂质少,电泳谱带清晰,分辨率高;PVP buffer和Lysis buffer A直接提取法次之,但杂质较多;TCA-丙酮法、Tris-丙酮法、饱和酚法和改良的饱和酚法差别不大,蛋白纯度较高,但提取效率低,谱带数目少;此外,Lysis buffer A法、丙酮法和酚法易产生高丰度蛋白的干扰。结论:直接提取法中的HEPES buffer法最好,优于丙酮法、酚法和其它直接提取法。     

地龙的鲜品和干品可溶性蛋白及纤溶酶活性的对比研究

目的:对比研究地龙的鲜品和干品的可溶性蛋白及纤溶酶活性.方法:采用Bradfold方法测定蛋白含量,SDS-PAGE进行蛋白谱带的分析,并采用琼脂糖-纤维蛋白平板法进行纤溶酶活性的测定.结果:以干燥品计,鲜品的蛋白提取率为( 13.89±0.86)％,蛋白含量为(63.14±0.38)％,体外纤溶酶活性为(8 743 ±17) IU·g-1;干品蛋白提取率为(9.82±0.75)％,蛋白含量为(45.16 ±0.12)％,体外纤溶酶活性为(206±14) IU·g-1;SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,鲜品共显示12条蛋白谱带,干品的谱带较少,且不清晰.结论:鲜地龙的可溶性蛋白提取率、含量及体外纤溶酶活性均明显高于干品,且蛋白组分有较大的差异.     

蜥蜴及其伪品石龙子鉴别方法比较

目的比较蜥蜴Eremias argus Peters及其伪品石龙子Eumeces chinensis(Gray)的鉴别方法。方法采用薄层色谱法(TLC)、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Native-PAGE)对不同来源的10批蜥蜴药材和3批石龙子药材进行对比研究。结果不同来源蜥蜴药材及其伪品石龙子薄层色谱在相同位置出现相同颜色的斑点,不能对两者进行区分;SDS-PAGE结果显示,不同来源的蜥蜴有3条共有谱带,其中1条是区别于石龙子的特征谱带,且3批石龙子样品在14.6 kDa处的蛋白条带染色程度明显高于蜥蜴;Native-PAGE结果显示,10批蜥蜴样品3条共有谱带中1条是区别于石龙子的特征谱带,3批石龙子样品7条共有谱带中有3条特征谱带,二者特征谱带位置差别很大,进行遗传距离聚类分析,SDS-PAGE法不能将蜥蜴和石龙子完全分开,Native-PAGE法可将2种药材聚为2类。结论 Native-PAGE法可作为中药蜥蜴与其伪品石龙子的快速鉴别方法。     

不同产地火麻仁的蛋白电泳分析

目的:鉴定不同产地火麻仁,并探讨火麻仁的遗传多样性。方法:利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对不同外观性状的火麻仁进行蛋白电泳聚类分析。结果:火麻仁蛋白电泳图谱表现出可观察到的谱带18条,其中7条较明显的谱带为共有谱带,另外11条谱带具有多态性,反映了火麻仁的遗传多样性。结论:火麻仁蛋白稳定且具有丰富的遗传多样性,实验结果可为准确鉴定药用火麻仁提供辅助依据。     

全蝎两种产地加工方法的对比研究

目的:探讨高温盐蝎(简称盐蝎)与常温非盐蝎(简称非盐蝎)产地加工对全蝎药材含水量、含盐量及可溶性蛋白含量的影响。方法:盐蝎采用沸盐水煮,非盐蝎采用冰箱快速冷冻常温风干,分别测定其含水量、含盐量及可溶性蛋白的含量。结果:非盐蝎的含水量、含盐量均低于盐蝎,可溶性蛋白含量明显高于盐蝎。结论:两种产地加工方法对全蝎的质量有显著的影响,常温非盐蝎产地加工方法较好。     

发酵前后全蝎粉中水溶性活性物质的含量比较研究

目的:对全蝎粉发酵前后水溶性活性物质的含量进行比较。方法:全蝎粉、发酵全蝎粉经过超声水提,分别采用改良Lowry法测定蛋白质的含量、苯酚-硫酸法测定多糖的含量、磷测定法测定磷的含量进而计算出核酸的含量。结果 :全蝎粉发酵前蛋白含量为136.332 mg·g~(-1),发酵后33.885 mg·g~(-1);全蝎粉发酵前多糖含量为5.832 mg·g~(-1),发酵后为12.024 mg·g~(-1);而全蝎粉发酵前核酸含量为24.789 mg·g~(-1),发酵后为58.034 mg·g~(-1)。结论:全蝎发酵前的蛋白含量较高,而全蝎发酵后的多糖和核酸含量较高。     

道地产区不同产地厚朴种子的电泳指纹图谱研究

目的:研究道地产区湖北恩施5个不同产地厚朴种子的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳图谱,以探索厚朴种子不同产地的鉴别方法,从而为厚朴的良种选育及种子质量评价提供依据.方法:应用SDS-PAGE方法比较不同产地厚朴种子的蛋白电泳图谱在谱带数目、谱带强度和相对分子质量等方面的差异.结果:5个产地的厚朴种子的电泳图谱存在明显产地差异.结论:该电泳方法可为厚朴种子的产地鉴别提供依据.     

哈蟆油蛋白抗疲劳活性及SDS-PAGE凝胶成像分析研究

目的对哈蟆油蛋白抗疲劳活性及不同来源的哈蟆油与混伪品的鉴别研究。方法采用Lowry法测定哈蟆油总蛋白的含量,并运用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离哈蟆油总蛋白;采用整体动物实验观察小鼠游泳和爬杆时间;利用SDS-PAGE和凝胶成像分析系统对不同来源哈蟆油及其混伪品进行鉴别。结果测得哈蟆油水溶性蛋白的含量为42%,哈蟆油中蛋白的分子量在1万~12万可以分离出较清晰的蛋白质点,并具有7条主蛋白带;哈蟆油组和哈蟆油蛋白组相对于对照组均能延长小鼠游泳和爬杆的时间,差异具有统计学意义,且哈蟆油蛋白组优于哈蟆油组;经SDS-PAGE电泳的凝胶成像分析系统分析,表明4个不同地区的哈蟆油均有相同的电泳行为,泳道上有6条主带,而伪品大蟾蜍的干燥输卵管只有一条明显的主谱带。结论哈蟆油总蛋白是哈蟆油中抗疲劳有效组分,SDS-PAGE电泳的凝胶成像分析法可用于不同来源的哈蟆油与混伪品的鉴别,为哈蟆油的开发利用提供了必要的科学依据。     

冬虫夏草可溶性蛋白质多样性与产地关联度初探

采用bradford法,以双向电泳技术对不同产地、不同初加工方式的冬虫夏草中可溶性蛋白质的含量、种类进行分析,发现冬虫夏草不同加工方法后可溶性蛋白差异明显.不同产地冬虫夏草中可溶性蛋白质多样性差异也较为明显.初步表明可溶性蛋白质含量、多样性指标与冬虫夏草加工方式、产地有一定的相关性.