基于Wnt/β-catenin调控EMT探讨益肾化瘀方对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞损伤的干预机制

目的 探讨基于Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）调控上皮-间充质细胞转化（EMT）途径益肾化瘀方对糖尿病肾病（DN）肾小球足细胞损伤的干预机制。方法 60只SD大鼠分为正常组,模型组,Wnt-C59组（Wnt/β-catenin通路抑制剂,0.03 g·kg^-1）,低、中、高剂量益肾化瘀方组（8,16,32 g·kg^-1）,12周后,比较各组一般体征变化及血肌酐（SCr）,尿素氮（BUN）,肾指数,尿蛋白量,血糖,肾脏病理改变,足细胞和肾小球基底膜损伤情况及足细胞损伤相关蛋白［去氧肾上腺素（nephrin）,肾小球蛋白（synaptopodin）］,Wnt/β-catenin通路相关蛋白（Wnt1,β-catenin）,足细胞EMT相关蛋白［α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,E-钙黏蛋白（E-cadherin）］表达水平。结果 与正常组比较,模型组肾组织出现明显病理改变,肾小球系膜基质弥漫性增厚,足突融合较为严重,SCr,BUN,肾指数,尿蛋白量,血糖及Wnt1,β-catenin,α-SMA表达水平明显升高（P<0.05）,nephrin,synaptopodin,E-cadherin表达水平明显下降（P<0.05）;与模型组比较,各干预组SCr,BUN,肾指数,尿蛋白量,血糖及Wnt1,β-catenin,α-SMA表达水平明显下降（P<0.05）,nephrin,synaptopodin,E-cadherin表达水平明显升高（P<0.05）;各干预组中,高剂量益肾化瘀方组对于上述指标的改善程度明显优于低、中剂量益肾化瘀方组（P<0.05）,与Wnt-C59组比较无显著差异。结论 益肾化瘀方通过抑制Wnt/β-catenin通路阻止足细胞EMT,从而修复DN大鼠肾小球足细胞损伤。     

膜肾1号方对大鼠肾脏病理及PI3K/Akt/mTOR信号通路表达的影响

[目的] 观察膜肾1号方对膜性肾病大鼠肾脏病理的改善作用及其对自噬通路磷脂肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）相关蛋白表达的影响。[方法] 将大鼠随机分为对照组、模型组、膜肾1号方高剂量组、中剂量组、低剂量组,盐酸贝那普利组。采用大鼠尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）的方法建立MN大鼠模型,灌胃、取材。苏木精-伊红（HE ）染色法观察大鼠肾脏组织病理改变;免疫球蛋白G（IgG）免疫荧光染色观察大鼠IgG沉积;蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测PI3K/Akt/mTOR 信号通路相关蛋白及自噬相关蛋白轻链3（LC3）表达。[结果] 药物干预后,膜肾1号方组大鼠24 h尿蛋白、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白下降且低于模型组,并具有统计学差异（P＜0.05）。光镜下观察,HE染色示正常组肾组织整体结构基本正常,膜性肾病（MN）模型组肾小球毛细血管丛充血,系膜增生,基底膜出现增厚,部分肾小管细胞空泡变、组织内可见炎症细胞浸润,可见嗜复红蛋白及IgG沉积。经膜肾1号方和盐酸贝那普利干预后,大鼠肾脏病理学改变均有所减轻。各组大鼠IgG沉积显示,与对照组比较模型组IgG沉积明显,IgG荧光表达升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）,盐酸贝那普利组和膜肾1号方组IgG荧光表达下降且低于模型组,具有统计学差异（P＜0.05）。Western Blot检测显示,药物干预后,盐酸贝那普利组和膜肾1号方组大鼠PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达下降,LC3 表达增加,并具有统计学差异（P＜0.05）。[结论] 膜肾1号方可改善大鼠肾脏病理损伤,膜肾1号方干预后PI3K-Akt信号通路相关蛋白磷酸化磷酸肌醇3激酶（p-PI3K）,磷酸化Akt蛋白（p-Akt）,磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）表达明显降低,自噬相关蛋白LC3表达升高,其分子机制与自噬信号通路的调控有关。     

基于IRS-1/PI3K/AKT通路探讨枳葛口服液对酒精性肝病大鼠胰岛素抵抗的影响＊

目的 探讨枳葛口服液对酒精性肝病大鼠胰岛素抵抗的影响及可能机制。方法 SD雄性大鼠100只随机分为5组，正常组（蒸馏水）、模型组（52%老白干）、枳葛口服液高、中、低剂量组（52%老白干 + 不同剂量枳葛口服液）灌胃。各组大鼠每四周取尾静脉血测定FBG、FINS，持续16周后处死大鼠，取肝组织行HE染色、免疫组化，取肝脏总蛋白Western blotting检测IRS-1、PI3K、AKT、GLUT-2等IRS-1/PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组FBG、FINS明显升高（P < 0.05），IRS-1/PI3K/AKT通路相关蛋白水平均显著降低（P < 0.01），HE染色及免疫组化可见细胞内较多的脂肪空泡；与模型组比较，枳葛口服液高、中剂量组以上指标均有所改善（P < 0.05），低剂量组以上指标无明显改善（P > 0.05）。结论 乙醇诱导的酒精性肝损伤大鼠存在着胰岛素抵抗及IRS-1/PI3K/AKT通路的改变，一定剂量的枳葛口服液可能通过IRS-1/PI3K/AKT信号通路改善胰岛素抵抗状态。     

芎归不忘散对脑缺血大鼠学习记忆障碍及其线粒体、PI3K/Akt信号通路作用机制研究＊

目的 探讨芎归不忘散对血管性痴呆（vascular dementia，VD）模型大鼠线粒体保护及对PI3K/AKT信号通路的影响，揭示其抗血管性痴呆的作用机制。方法 采用微血栓栓塞法制备VD大鼠模型；采用Morris水迷宫评价其学习记忆能力；HE染色法观察海马CA1区病理学形态学；流式细胞术检测大鼠海马线粒体肿胀及膜电位；HPLC测定脑组织ATP、ADP以及AMP的含量；Western Blot测定脑组织PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果 与模型组比较，芎归不忘散显著缩短模型大鼠逃避潜伏期（P < 0.05），明显增加穿越平台次数（P < 0.05），海马CA1区病理损害明显减轻；芎归不忘散高剂量组海马线粒体肿胀度明显减轻（P < 0.05）；高、低剂量组海马线粒膜电位显著增高（P < 0.05），海马能荷值显著增高（P < 0.05），p-PI3K、p-AKT表达显著增强。结论 芎归不忘散能改善血管性痴呆学习记忆功能，激活PI3K/AKT信号通路保护线粒体功能是其主要作用机制之一。     

三七总皂苷调控PI3K/Akt/mTOR通路对乳腺增生大鼠乳腺组织细胞凋亡的影响

目的 探究三七总皂苷对乳腺增生大鼠乳腺组织细胞凋亡的影响及调控机制。方法 将60只雌性未孕SD大鼠随机分为正常组、模型组、三七总皂苷低、中、高剂量（10、20、40 mg·kg^-1）组及三苯氧胺组（1.8 mg·kg^-1），每组10只。采用肌肉注射苯甲酸雌二醇和黄体酮构建乳腺增生大鼠模型。按照实验分组剂量进行灌胃给药。每日1次，连续30 d。正常组和模型组大鼠给予每日等量的生理盐水灌胃。给药结束后，游标卡尺测量大鼠第2对乳头直径；留取组织标本，苏木素-伊红（HE）染色观察乳腺组织病理形态变化；免疫组织化学法观察细胞凋亡调控蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、Bcl-2表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠第2对乳头直径明显增大（P<0.05），乳房小叶体积增大，腺泡数量增加，乳腺组织呈现弥散性增生，乳腺组织Bcl-2蛋白表达及磷酸化（p）-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR明显增加（P<0.05），Bax表达明显降低（P<0.05），与模型组比较，三七总皂苷低、中、高剂量组和三苯氧胺组大鼠第2对乳头直径明显减小（P<0.05），乳腺小叶数量、腺泡数、分泌物量均较少，乳腺增生减轻，乳腺组织Bcl-2蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR明显降低（P<0.05），Bax表达明显升高（P<0.05）。结论 三七总皂苷能够改善大鼠乳腺增生，其机制与调控PI3K/Akt/mTOR通路，促进乳腺组织细胞凋亡有关。     

基于miRNA126调控PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨肾衰泄浊汤干预慢性肾脏病合并动脉粥样硬化作用机制

目的 探讨微小核糖核酸126（miRNA126）调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在慢性肾脏病合并动脉粥样硬化（CKD AS）中的作用,以及肾衰泄浊汤干预5/6肾切除术联合高脂饲养的CKD AS大鼠的作用机制。方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、氯沙坦组、肾衰泄浊汤低、中、高剂量组。通过5/6肾切除术联合高脂饲养10周建立大鼠CKD AS模型,肾衰泄浊汤低、中、高剂量组（6.0、12.0、24.0 g·kg^-1·d^-1）,氯沙坦组（20 mg·kg^-1·d^-1）剂量灌胃,进行相应的干预8周,然后处死大鼠,取材进行相应检测。全自动生化分析仪器检测大鼠肾功能和血脂：血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平;苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）染色主动脉组织并在光学显微镜下进行病理学观察;通过透射电子显微镜观察自噬体和自噬溶酶体;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠miRNA126、PI3K、Akt、mTOR mRNA水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠磷酸化（p）-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR、苄氯素-1（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/LC3Ⅰ）蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠血清SCr、BUN、TC、TG、LDL-C均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,氯沙坦组与肾衰泄浊汤低、中、高剂量组大鼠SCr、BUN、TC、TG、LDL-C明显降低（P<0.05）;与假手术组比较,模型组大鼠内膜可见增厚斑块形成,单核巨噬细胞浸润,少量泡沫细胞,中膜平滑肌纤维排列紊乱,胶原纤维增多,氯沙坦组与肾衰泄浊汤各组较模型组病变减轻;与模型组比较,肾衰泄浊汤中、高剂量组中电镜的自噬小体及自噬溶酶体的数量增多;与假手术组比较,模型组大鼠主动脉组织miRNA126表达显著下降（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,肾衰泄浊汤高、中、低剂量组及氯沙坦组大鼠主动脉组织miRNA126表达显著升高（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达显著降低（P<0.01）。与假手术组比较,模型组p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达显著升高（P<0.01）,Beclin-1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白水平显著降低（P<0.01）。与模型组比较,氯沙坦组和肾衰泄浊汤低、中、高剂量组的p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达降低（P<0.05）,Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平升高（P<0.05）。结论 CKD AS大鼠主动脉组织miRNA126表达降低,激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制自噬通量;肾衰泄浊汤通过miRNA126调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,恢复主动脉内皮细胞的自噬,保护CKD血管损伤,减少As斑块的形成,减缓心血管并发症的发展。     

桑叶调节PI3K/Akt/PPARα/CPT-1通路改善2型糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢紊乱机制

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/过氧化物酶体增殖物激活受体α/肉毒碱棕榈酰基转移酶-1（PI3K/Akt/PPARα/CPT-1）信号通路探讨桑叶水提物对2型糖尿病（T2DM）大鼠肝脏糖脂代谢紊乱的作用及其机制。方法 高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ）方法制备T2DM模型,按血糖、体质量将造模成功大鼠随机分为模型组、二甲双胍（0.2 g·kg^-1）组和桑叶水提物（含生药4.0 g·kg^-1）组,连续给药8周,每周相同时间测定空腹血糖。苏木素-伊红（HE）染色、油红O染色观察肝脏组织形态学和脂肪变化;生化分析法测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨基酸氨基转移酶（AST）水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝脏磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、PI3K、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、Akt、PPAR-α、CPT-1蛋白表达。结果 给药8周后,与正常组比较,模型组大鼠血糖显著升高（P<0.01）;与模型组比较,桑叶水提物组大鼠血糖显著降低（P<0.01）。HE染色显示,正常组大鼠肝组织结构完整,肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列;模型组大鼠肝细胞损伤明显;与模型组比较,桑叶水提物组大鼠空泡变性程度显著降低,未见小胆管增生等病变。油红O染色显示,正常组大鼠肝细胞无明显脂肪变性、坏死,肝细胞几乎无脂滴;模型组大鼠肝内脂滴较正常组明显增加;桑叶给药可明显减少大鼠肝脏脂滴。模型组大鼠TC、TG、LDL-C、AST、ALT水平较正常组显著升高（P<0.01）;桑叶水提物组大鼠TC、TG、LDL-C、AST、ALT水平较模型组明显降低（P<0.05,P<0.01）。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、PPARα和CPT-1的蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,桑叶水提物能明显增加p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、PPARα和CPT-1的蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 桑叶水提物可改善T2DM大鼠肝脏糖代谢紊乱,降糖机制可能与调控PI3K/Akt/PPAR-α/CPT-1信号通路有关。     

基于PI3K/Akt/mTOR通路探讨助卵汤对大鼠早发性卵巢功能不全的保护作用机制

目的 观察助卵汤对环磷酰胺诱导的早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢储备功能的影响,并基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路探讨助卵汤对大鼠早发性卵巢功能不全的保护机制。方法 60只雌性SD大鼠随机分为正常组10只,模型组50只,模型组采用环磷酰胺（第1天50 mg·kg^-1负荷剂量+第2~15天8 mg·kg^-1小剂量维持）腹腔注射进行造模,造模成功后随机分为模型组、阳性药物补佳乐组（0.1 mg·kg^-1·d^-1）、助卵汤低、中、高剂量组（14、28、56 g·kg^-1·d^-1）,每组10只,模型组与正常组予以等体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续给药21 d。检测各组大鼠动情周期、体质量,计算卵巢脏器指数与子宫脏器指数,苏木素-伊红（HE）染色检测卵巢组织病理情况及卵巢切面各级卵泡计数,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清抗苗勒激素（AMH）、促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）、抑制素-B（INH-B）激素含量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠卵巢组织PI3K、Akt、mTOR蛋白表达,免疫组化检测大鼠卵巢组织微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）蛋白的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠动情周期紊乱,体质量及卵巢脏器指数与子宫脏器指数减少,原始卵泡数量减少,次级卵泡和闭锁卵泡数量增多,FSH升高（P<0.01）,LH升高（P<0.05）,AMH水平下降（P<0.05）,卵巢组织PI3K、Akt、mTOR蛋白表达量均降低（P<0.01）,LC3B蛋白表达量显著增加（P<0.01）;与模型组比较,补佳乐和助卵汤各剂量组上述指标均改善,AMH含量升高（P<0.05）,FSH降低（P<0.05）,LC3B蛋白表达量显著降低（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR蛋白表达量均有升高趋势,且补佳乐组和助卵汤低、中剂量组升高差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 助卵汤可能通过激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制卵巢颗粒细胞过度自噬的发生,从而逆转造模对大鼠卵巢储备功能的影响。     

藏红花素对糖尿病肾病大鼠肾纤维化的影响及机制研究

[目的] 研究藏红花素对糖尿病肾病（DN）大鼠肾纤维化的影响并探索其机制。[方法] 通过高糖高脂饲养4周后腹腔注射链尿佐菌素建立DN大鼠模型,将50只模型大鼠随机平均分为模型组（给予生理盐水）、二甲双胍（500 mg/kg）组和藏红花素低、中、高剂量组（25、50、100 mg/kg）组,另设正常对照组（给予生理盐水）,连续12周,每日1次灌胃给药。测定空腹血糖（FBG）水平,称量体质量,检测肾功能指标,分别通过苏木精-尹红（HE）染色、马森（Masson）染色进行肾组织病理学和纤维化检查,免疫蛋白印迹法检测克洛索蛋白（Klotho）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、磷酸化Smad2（p-Smad2）表达。[结果] 与模型组相比,藏红花素中、高剂量组和二甲双胍组体质量升高,FBG、24 h尿蛋白量（UPro）、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）水平降低;肾小球增大、肾间质炎性细胞浸润、系膜和基底膜增生等病变及肾小球、肾间质纤维化均明显改善,胶原容积分数（CVF）降低;Klotho表达上调,TGF-β1、p-Smad2表达下调,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。与二甲双胍组比较,藏红花素高剂量组大鼠体质量升高,UPro和BUN、Scr水平降低,CVF降低,Klotho表达上调且TGF-β1、p-Smad2表达下调,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。[结论] 藏红花素对DN大鼠肾纤维化具有抑制作用,其机制可能与抑制Klotho/TGF-β/Smad信号通路有关。     

四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 探讨四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎（UC）模型大鼠结肠组织磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路相关基因mRNA和蛋白以及血清中细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-10（IL-10）表达水平的影响。方法 将120只SPF级Wistar大鼠在SPF级实验室适应性喂养7 d后分为空白组和造模组,造模组大鼠采用二硝基苯磺酸盐（DNBS）/乙醇溶液灌肠+皮下注射氢化可的松+番泻叶灌胃法建立脾肾阳虚型UC大鼠模型。将成功建立模型的大鼠随机分为5组,分别为模型组,美沙拉嗪（0.36 g·kg^-1）组,四神丸高、中、低剂量（3.2,1.6,0.8 g·kg^-1）组,灌胃体积均为10 mL·kg^-1,模型组和空白组灌服等体积蒸馏水,1次/d,连续21 d。每日观察大鼠一般情况,并记录小鼠体质量、粪便性状及隐血情况进行疾病活动指数（DAI）评分。取大鼠结肠组织,观察大体形态及结肠损伤情况,进行结肠黏膜损伤指数（CMDI）评分。采用苏木素-伊红（HE）染色观察各组大鼠结肠组织病理改变,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测结肠组织PI3K,Akt,mTOR mRNA的表达水平,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清IL-1β,IL-10的含量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织PI3K,磷酸化（p-）PI3K,Akt,p-Akt,mTOR,p-mTOR蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠一般生存状况相对较差,DAI评分,CMDI评分显著升高（P<0.01）;大鼠病理切片见肠黏膜部分消失,腺体消失,有大量的炎性细胞浸润,聚集于黏膜层和基层;PI3K,Akt,mTOR mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;IL-1β含量显著升高,IL-10含量显著降低（P<0.01）;p-PI3K,p-Akt,p-mTOR蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,四神丸高、中剂量组及美沙拉嗪组大鼠DAI评分明显下降（P<0.05）;四神丸高、中、低剂量组及美沙拉嗪组大鼠CMDI评分显著降低（P<0.01）;大鼠病理切片显示各给药组炎性细胞减少,黏膜层结构不同程度的恢复正常,美沙拉嗪组和四神丸中剂量组效果最好,黏膜结构接近空白组;四神丸高、中剂量组及美沙拉嗪组大鼠PI3K,Akt,mTOR mRNA及四神丸低剂量组Akt mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,四神丸低剂量组PI3K,mTOR mRNA的表达水平虽有降低,但差异无统计学意义;四神丸高、中剂量组及美沙拉嗪组IL-1β含量明显降低,IL-10含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,四神丸低剂量组IL-1β含量降低,IL-10含量升高,但差异无统计学意义;四神丸高、中、低剂量组及美沙拉嗪组p-PI3K,p-Akt,p-mTOR蛋白表达水平均有不同程度下降（P<0.05,P<0.01）。结论 四神丸具有改善脾肾阳虚型UC模型大鼠的一般情况和肠黏膜损伤的作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

知母药材的HPLC/PDA/ELSD指纹图谱研究

[目的]建立知母药材的高效液相色谱仪-二极管阵列检测器-蒸发光散射检测器联用(HPLC/PDA/ELSD)指纹图谱。[方法]采用Waters Symmetry Shield TM RP C18(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%冰醋酸,梯度洗脱流速1.0 m L/min,柱温30℃,检测波长258 nm,ELSD检测器载气气压30 Psi,漂移管温度80℃。[结果]建立了知母的HPLC/PDA/ELSD指纹图谱,在HPLC-PDA色谱图中标定了17个共有峰,HPLC-ELSD色谱图中标定了14个共有峰。[结论]该方法重复性好,可用于知母药材的全面质量控制。     

密花石斛的HPLC/UV/MS指纹图谱研究

目的 采用HPLC／UV／MS法对密花石斛进行指纹图谱研究。方法 采用Agilent Zorbax SB—C18柱；甲醇和水为流动相进行梯度洗脱；流速为1．0mL／min。结果 得到分离度较好的密花石斛HPLC／UV指纹图谱，标示了9个共有峰，并用HPLC／MS对其部分色谱峰进行了初步定性。结论 该方法可用于密花石斛指纹图谱的测定，并为其全面质量控制提供参考。     

牛膝的HPLC/UV/MS指纹图谱研究

目的：采用HPLC／UV／MS法构建牛膝药材的指纹图谱。方法：采用Agilent ZorbaxSB-C18柱；甲醇与0．1％甲酸进行梯度洗脱；流速为1．0ml／min。结果：得到分离度、重现性均较好的牛膝药材HPLC／UV指纹图谱，标示了4个共有峰，并借助HPLC／MS技术对其主要色谱峰进行了初步归属。结论：牛膝药材指纹图谱的构建，为控制其质量提供了依据。     

285例HIV/AIDS患者腹泻状况的调查研究

目的 了解我国因有偿采供血感染的艾滋病病毒/获得性免疫缺陷综合征(HIV/AIDS)患者腹泻的发生情况.方法 采用一对一的调查问卷形式,收集河南因有偿采供血感染的HIV/AIDS患者共285例,根据"艾滋病腹泻病例选择标准"选择有腹泻症状的HIV/AIDS患者,分析其证候特点.结果 285例HIV/AIDS患者中有腹泻者41例(14.39%).证候以虚证及虚实夹杂为主.结论 我国因有偿采供血感染的HIV/AIDS患者腹泻的发生率低于国外某些报道,涉及的脏腑主要有脾、肝、肾、胃、肺.

Abstract：

Objective To get overview about diarrhea condition of HIV/AIDS cases among paid blood donors in our country. Methods One-to-one questionnaire was adopted to investigate a total of 285 HIV/AIDS cases among paid blood donors in Henan province. Diarrhea HIV/AIDS patients were further picked out according to 'Criteria of HIV/AIDS diarrhea'and their syndrome characteristics were analyzed. Results There was 41 diarrhea HIV/AIDS patients in all 285 HIV/AIDS cases (14.39%). Deficiency Syndrome and mixed insufficiency and excess syndrome were predominant Syndromes in these patients. Conclusion The rate of diarrhea in HIV/AIDS cases among paid blood donors of our country was lower than some foreign countries. Such internal organs as spleen, liver, kidney, stomach and lung were mainly involved in the disease.     

清开灵注射液HPLC/UV/MS/MS指纹图谱研究

目的:建立一种HPLC/UV/MS/MS清开灵注射液(板蓝根,栀子,金银花等)指纹图谱研究方法,为其质量控制提供新思路。方法:采用Phenom enex Luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相分别为0.1%甲酸水溶液和乙腈梯度洗脱,流速0.5 mL/m in;采用电喷雾离子阱质谱(ESI-ITMS)分析,正、负离子二级扫描。结果:得到分离度和重现性良好的HPLC/UV/MS/MS指纹图谱,对其指纹图上13个色谱峰进行了初步定性,成功鉴别了新绿原酸、绿原酸和异绿原酸3个异构体。结论:本方法建立了清开灵注射液HPLC/UV/MS/MS指纹图谱,为中药复杂体系的分析及其质量控制提供了一种有效、可靠的模式。     

LC/MS/MS测定龙胆苦苷的尿药浓度

目的建立龙胆苦苷尿药浓度的液质联用测定方法(LC/MS/MS).方法以咖啡因作内标,固相萃取法处理尿样.色谱柱:RESCEK C8柱(150 mm×2.1 mm,5 μm),流动相为甲醇-10 mmol·L-1醋酸铵缓冲液(pH=6.5)-乙腈(50:40:10),流速为0.2 mL·min-1.样品经电喷雾离子源(ESI)正离子化后,通过三级四极杆串联质谱仪,采用多反应离子监测方式测定龙胆苦苷(m/z 374.1→195.2)和咖啡因(m/z 195.2→138.2)浓度.结果尿液中龙胆苦苷在30～9000 ng·mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9980),方法回收率为91.10%～96.21%,提取回收率为100.52%～103.83%,日内、日间精密度均＜10%.结论该方法灵敏、准确、快速、特异性强.     

基于UPLC-ESI/Q-TOF-MS/MS技术分析荷梗中的化学成分

应用高效液相色谱-电喷雾/四极杆飞行时间串联质谱联用技术(UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)对荷梗中的化学成分进行定性分析。以75%甲醇作为提取液制备供试液,色谱分离选用Agilent Zorbax SB-Aq柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),以乙腈-水(φCH₂O₂=0.05%)为流动相进行梯度洗脱,电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS/MS)正离子模式下进行检测,根据精确分子量和碎片离子分析,并结合数据库匹配技术进行结构鉴定。结果从荷梗中鉴定出了22个成分,包含了11个单苄基异喹啉生物碱,5个阿朴啡类生物碱、5个双苄基异喹啉生物碱以及1个原阿朴啡类生物碱,其中,N-methylhigenamine为首次在植物莲中发现,初步推测了1种新化合物6-O-methylotusine。该文结果为进一步研究和利用中药荷梗提供了参考。     

基于BDNF/TrkB/PI3K/Akt信号通路的滋肾醒脑汤对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的影响

目的基于BDNF/TrkB/PI3K/Akt信号通路观察滋肾醒脑汤对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用侧脑室注射β-淀粉样蛋白制备AD大鼠模型,假手术组注射等体积生理盐水,将成模大鼠随机分为模型组、中药组及阳性对照组,每组6只,中药组及阳性对照组分别予滋肾醒脑汤(16.74 g/kg)和盐酸多奈哌齐混悬液(0.45 mg/kg)灌胃,假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水,每日1次,连续4周。采用Morris水迷宫实验进行大鼠行为学检测,TUNEL染色检测海马组织神经细胞凋亡情况,Western blot检测海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)蛋白表达,免疫组化检测海马组织PI3K、Akt蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数减少,目标象限停留时间缩短(P<0.05,P<0.01),海马组织神经细胞凋亡率明显升高,BDNF、TrkB、PI3K、Akt蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,中药组及阳性对照组大鼠逃避潜伏期明显缩短,跨越平台次数增加,目标象限停留时间延长(P<0.01,P<0.05),海马组织神经细胞凋亡率明显降低,BDNF、TrkB、PI3K、Akt蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),中药组与阳性对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论滋肾醒脑汤可改善AD大鼠学习记忆能力,其机制可能与上调BDNF/TrkB/PI3K/Akt信号通路蛋白表达,减少神经细胞凋亡有关。     

忍冬、山银花HPLC/UV/MS指纹图谱研究

目的 :采用HPLC/UV/MS法对忍冬和山银花药材进行指纹图谱的研究 ,并对其主要成分进行定性。方法 :采用AgilentZORBAXSB C18柱 ( 15 0mm× 4 .6mm ,5 μm) ,甲醇和 0 .1%甲酸为流动相梯度洗脱 ,流速 :1mL·min-1。结果 :得到分离度和重复性均较好的忍冬和山银花药材HPLC/UV及HPLC/MS指纹图谱 ,分别对忍冬指纹图谱中 8个色谱峰和山银花图谱中 5个色谱峰进行了初步定性 ,并比较了 2种药材指纹图谱的差异。结论 :本方法可用于忍冬和山银花药材指纹图谱的测定。     

参麦注射液对缺氧/缺糖/复氧诱导神经细胞损伤的影响

目的探讨参麦注射液对缺氧/缺糖/复氧诱导神经细胞凋亡及胞浆内游离钙的影响,阐明参麦注射液治疗缺血性中风急性期的脑保护作用机制.方法用孕17～18 d的SD胎鼠大脑皮层作原代神经细胞培养,制作缺氧/缺糖/复氧致神经细胞损伤模型,采用AnnexinV/PI双染色法以流式细胞仪定量分析神经细胞凋亡率;FIuo-3负载,流式细胞仪定量分析胞浆内游离钙的变化.结果参麦注射液能降低缺氧/缺糖/复氧原代培养神经细胞的凋亡率和胞浆内游离钙浓度.结论参麦注射液治疗急性缺血性中风的疗效机制与提高神经细胞耐缺血缺氧能力,抑制细胞内钙超载,从而减轻凋亡有关.