氧化槐果碱在Caco-2细胞模型中的吸收机制研究

目的:研究氧化槐果碱在Caco-2细胞模型中的吸收机制.方法:MTT实验考察氧化槐果碱在Caco-2细胞中的安全浓度范围,再利用Caco-2细胞单层模型研究氧化槐果碱的双向转运机制,以转运量及表观渗透系数(Papp)为观测指标,考察时间、浓度、pH和P-gp抑制剂维拉帕米对其吸收的影响.结果:氧化槐果碱在Caco-2细胞模型中的转运与时间和浓度呈正相关,并受pH影响;P-gp抑制剂维拉帕米对其转运无影响,从单层细胞层顶端(AP)到基底端(BL)的转运与基底端到顶端的转运大致相同.结论:氧化槐果碱在Caco-2细胞模型中的吸收是被动转运.     

黄芩总黄酮在Caco-2细胞上的吸收特征

目的建立同时测定Caco-2细胞模型中黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A的HPLC法,探讨黄芩总黄酮在Caco-2细胞上的吸收机制。方法利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型研究黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A由肠腔侧(AP侧)到基底侧(BL侧)和BL侧到AP侧两个方向的转运过程。应用HPLC-UV对上述4个黄酮成分进行分析,计算转运参数和表观渗透系数(Papp)。结果黄芩总黄酮给药后,黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素和千层纸素A由AP→BL侧的Papp分别为(1.65±0.38)×10-6、(1.58±0.21)×10-6、(1.57±0.15)×10-6和(5.74±0.18)×10-6cm/s,由BL→AP侧的Papp分别为(1.23±0.24)×10-6、(1.22±0.16)×10-6、(1.27±0.07)和(5.13±0.19)×10-6cm/s;表观渗透率(PDR)分别为0.75、0.77、0.80和0.89。结论 4个黄酮类主要以被动吸收方式进入体内。     

小柴胡汤在Caco-2细胞模型的吸收特性和转运机制研究

目的:研究小柴胡汤在Caco-2细胞模型的吸收特性和转运机制.方法:利用MTT实验筛选小柴胡汤在Caco-2细胞中的安全浓度,用Caco-2细胞模型研究小柴胡汤的双向转运情况,采用高效液相色谱法进行含量测定,考察时间对小柴胡汤吸收的影响.结果:汉黄芩苷(wogonoside,WGS)和汉黄芩一素(wogonin,WGN)由AP侧到BL侧的Papp分别为(1.23±0.09)×10-6,(1.07±0.89)×10-5,由BL侧到AP侧的Papp分别为(2.12±0.19)×10-6,(7.12±1.02)×10-6,二者的转运率随着时间的增加而增加,WGS和WGN的PappAP→BL/PappBL→AP分别为0.58,1.49.黄芩苷、黄芩素和甘草酸不能透过Caco-2细胞单层.结论:WGS和WGN在Caco-2,细胞单层模型中的转运途径可能为被动转运.     

3-乙酰基-11-羰基-β-乙酰乳香酸在Caco-2和MDCK细胞模型中的吸收研究

目的 研究乳香提取物中3-乙酰基-11-羰基-β-乙酰乳香酸(AKBA)在Caco-2、MDCK-MDR1和MDCK-Wild细胞模型中的吸收转运机制.方法 利用Caco-2、MDCK-MDR1和MDCK-Wild细胞模型,研究AKBA由细胞层顶端(AP)→基底端(BL)和BL→AP的双向转运过程;采用LC-MS/MS法测定AKBA的量,计算表观渗透系数(Papp).结果 在Caco-2细胞模型中,50 μmol/L AKBA由AP→BL、BL→AP的Papp分别为7.9×10-7、1.5×10-7 cm/s,在MDCK-MDR1细胞模型中,50 μmol/L AKBA由AP→BL、BL→AP的Papp分别为2.6×10-7、0.8×10-7 cm/s,在MDCK-Wild细胞模型中,50 μmol/LAKBA由AP→BL、BL→AP的Papp分别为2.4×10-7、0.6×10 7 cm/s,3种细胞模型中外排率均小于2.结论 AKBA在肠道中吸收不良,不是P-糖蛋白的底物,推测其通过摄入型主动转运和被动扩散两种机制透过小肠上皮细胞.     

利用Caco-2细胞单层模型预测柯楠碱、育亨宾、 阿马碱、萝芙木碱的人肠吸收

目的：研究中药化学成分柯楠碱(corynanthine, COR)、育亨宾(yohimbine, YOH)、阿马碱(ajmalicine, AMC)和萝芙木碱(ajmaline, AML)在人肠Caco-2细胞单层模型的转运吸收。方法：利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型研究COR，YOH，AMC和AML由绒毛面(AP侧)到基底面(BL侧)，BL侧到AP侧两个方向的转运吸收过程。应用高效液相色谱法分离、紫外检测法检测对上述4个生物碱进行定量分析，计算转运参数和表观渗透系数(Papp)，并与在Caco-2细胞单层模型上呈易吸收的阳性对照药普萘洛尔和难吸收的阳性对照药阿替洛尔的进行比较。用药物的ADMET预测软件，考察4个化合物的Papp值与其log D值之间的关系。结果：COR，YOH，AMC和AML由AP侧到BL侧的Papp值分别为(1.863±0.055)×10-5，(1.540±0.082)×10-5，(2.522±0.246)×10-5，(1.155±0.099)×10-5 cm·s-1；由BL侧到AP侧的Papp值分别为(2.390±0.017)×10-5，(1.987±0.154)×10-5，(1.374±0.260)×10-5，(2.418±0.124)×10-5 cm·s-1，与普萘洛尔的Papp A→B值［(2.23±0.10)×10-5 cm·s-1］基本一致。COR，YOH，AMC和AML的Papp B→A/Papp A→B分别为1.28，1.29，0.54和2.09；AML外流是摄取的2.09倍。结论：COR，YOH，AMC和AML能够通过Caco-2细胞单层被动吸收，属于良好吸收的化合物。其中，AML在Caco-2细胞单层模型的转运可能存在外流机制。在4个生物碱的转运吸收过程中，油/水分配系数起着关键性的作用。     

复方苦参注射液中4种生物碱在大鼠体内组织分布研究

目的:建立LC-MS法测定大鼠血浆和其他组织中苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱的浓度,研究复方苦参注射液在大鼠体内心、肝、脾、肺、肾等12个脏器组织的分布。方法:在血浆和组织样品中加入内标,用氯仿提取,以甲醇:10 mmolNH4Ac-0.02%HCOOH-水=90:10(v:v);CN柱分离,LC-MS法检测健康大鼠给予复方苦参注射液后3个时间点(15min、1h、4h)的血浆及组织样品中4种生物碱的浓度。结果:在给药后3个时间点,苦参碱和槐果碱在各组织中的分布量依次为:肝>肾/脾>肌肉/肠>肺/胃>心/脑>脂肪/子宫>睾丸;氧化苦参碱和氧化槐果碱在各组织中的分布量依次为:肾/肺>肌肉>肠/胃>心/脾>子宫>脂肪/睾丸>脑/肝;随着时间的推移,苦参碱和槐果碱浓度下降速度明显缓于氧化苦参碱和氧化槐果碱;苦参碱和槐果碱在肝脏分布最多,而氧化苦参碱和氧化槐果碱在肝脏分布最低。结论:复方苦参注射液4种生物碱在组织脏器中的分布,氧化态和非氧化态存在较大差异,尤其在肝脏,氧化苦参碱、氧化槐果碱浓度很低,而苦参碱、槐果碱浓度很高;而且在各组织中苦参碱和槐果碱的浓度显著高于氧化苦参碱和氧化槐果碱,与血浆中的分布相反,说明苦参碱和槐果碱相对于氧化苦参碱和氧化槐果碱而言主要分布于组织脏器中。     

舒胸方在Caco-2细胞单层模型的转运研究

舒胸方(三七、川芎和红花)具有活血化瘀、通络止痛功效,该文研究舒胸方在Caco-2细胞单层模型的转运特征。采用MTT法确定舒胸方对Caco-2细胞单层模型作用的安全浓度范围;采用Caco-2细胞单层模型探讨舒胸方对地高辛吸收转运的影响;采用HPLC测定并计算地高辛表观渗透系数Papp。结果显示,从顶侧(AP)到底侧(BL)(AP→BL),三七提取液、红花提取液、川芎提取液、(川芎+红花)混合提取液及舒胸方复方提取液表观渗透系数(Papp)分别为(3. 12±0. 73)×10~(-6),(2. 58±0. 41)×10~(-6),(4. 97±0. 64)×10~(-6),(4. 63±0. 57)×10~(-6),(5. 79±0. 68)×10~(-6)cm·s-1,表明地高辛在Caco-2单层细胞膜转运中主要以主动吸收为主,且需要P-gp蛋白参与;川芎的加入能显著降低地高辛BL→AP方向的转运(P 0. 01),且能显著增加地高辛AP→BL方向的转运(P 0. 05);舒胸方提取液加入后,BL→AP方向地高辛转运受到显著抑制(P 0. 01)。研究结果提示,红花提取液不影响P-gp蛋白转运也未对地高辛自主扩散产生影响;川芎提取液和舒胸方提取液均显著降低了地高辛BL→AP方向的转运;三七对地高辛自主扩散并无影响;川芎红花混合提取液与川芎提取液实验结果类似。     

芍药甘草汤对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响

目的:研究芍药甘草汤(SGT)对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)的功能和表达的影响。方法:采用Caco-2单层细胞模型,以P-gp底物3H-地高辛为探针,P-gp抑制剂维拉帕米(Ver)为阳性对照药,测定SGT对Caco-2细胞P-gp功能的影响;用免疫组化法检测SGT对Caco-2细胞膜上的P-gp表达的影响。结果:在Caco-2模型上,3H-地高辛从基底侧(BL)到肠腔侧(AP)与肠腔侧(AP)到基底侧(BL)的表观渗透系数(apparent permeabilities,Papp)比值Papp(BL→AP)/Papp(AP→BL)约为27倍,证明3H-地高辛在Caco-2模型上的吸收方式为主动吸收。阳性药Ver与3H-地高辛联合时,明显增高了3H-地高辛在AP→BL方向的Papp(BL→AP)达3.82倍,但对BL→AP方向的转运影响不明显,说明Ver可明显抑制P-gp活性。SGT在1/25 IC5,1/5IC5,IC5浓度范围对P-gp底物3H-地高辛从AP→BL方向的转运分别促进了159.83%,217.95%,160.26%。1/25 IC5,1/5 IC5浓度下对3H-地高辛在BL→AP方向的转运分别促进了59.16%,50.73%,而相对于IC5浓度下SGT对3H-地高辛在BL→AP方向的转运则无影响。免疫组化结果显示SGT对P-gp的表达有抑制作用。结论:SGT可抑制P-gp的功能和表达,从而促进P-gp底物的吸收。     

阿魏酸在Caco-2细胞模型的通透性及其在大鼠体内吸收特性研究

目的 研究阿魏酸在大鼠体内的绝对生物利用度(Fabs)及其吸收特点.方法 建立人源结肠腺癌细胞系Caeo-2单层细胞模型,LC-MS/MS法分析阿魏酸由绒毛面(AP侧)到基底面(BL侧)和由BL侧到AP侧两个方向的转运过程;用大鼠原位肠肝血管灌流模型研究阿魏酸在肠道的吸收率;通过测定大鼠ig和iv阿魏酸后的血药浓度计算其Fabs.结果 阿魏酸的表观渗透系数(Papp)分别为Papp AP→BL:(10.24±1.58)×10 6cm/s,Papp BL→AP:(11.25±1.45)×10-6 cm/s;在肠肝血管灌流模型中的吸收率为59.00％;在大鼠体内的Fabs为64.91％.结论 LC-MS/MS定量分析法灵敏、简单、专属性强;阿魏酸在Caco-2细胞具有良好的转运,在肠肝血管灌流模型中吸收速度快,主要吸收部位为小肠,阿魏酸ig给药后在大鼠体内达峰时间短,吸收、分布、消除较快.     

硫辛酰胺与硫辛酸在Caco-2细胞单层模型中的转运研究

目的研究硫辛酰胺与硫辛酸在体外Caco-2细胞单层模型的转运。方法采用MTS法考察硫辛酰胺与硫辛酸对Caco-2细胞存活率的影响;考察硫辛酰胺与硫辛酸在肠腔侧(apical side,AP)与基底侧(basolateral side,BL)的双向转运,计算累计转运量,表观渗透系数(Papp)及转运百分比,进一步探究转运量与浓度和时间之间的关系。结果硫辛酰胺与硫辛酸转运量与浓度和时间呈依赖性增加,AP→BL硫辛酰胺与硫辛酸Papp值分别为2.44344×10^-5~2.39291×10^-5、8.17978×10^-6~7.89725×10^-6 cm·s^-1,BL→AP硫辛酰胺与硫辛酸Papp值分别为2.25813×10^-5~2.2143×10^-5、8.26798×10^-6~7.92673×10^-6 cm·s^-1。结论在Caco-2细胞的转运实验中硫辛酰胺优于硫辛酸,提示其口服吸收好,生物利用度高,但仍需体内药动学数据的验证。     

黄连吴茱萸药对在Caco-2单层细胞模型中的跨膜转运研究

目的:研究黄连吴茱萸不同配比在Caco-2单层细胞模型中的跨膜转运,比较小檗碱等四种主要化学成分表观穿透系数Papp的异同。方法:复制Caco-2细胞模型,采用HPLC测定转运后药液5种化学成分含量,并计算吸收系数,考察黄连吴茱萸不同配比时小檗碱等四种化学成分在细胞模型中的吸收特征。结果:随着配比中黄连比例的增加,无论是AP-BL还是BL-AP,4种化学成分的Papp均随时间的推移呈线性增加趋势,即黄连:吴茱萸为6:1时吸收率最大,差异有显著性(P<0.01)。结论:增加黄连的配伍比例,有利于黄连和吴茱萸主要化学成份的吸收,黄连吴茱萸为6:1时各主要化学成分的吸收最多。     

卡莫氟在 Caco - 2 细胞模型中的吸收和转运特性

  目的 应用 Caco-2 细胞模型对卡莫氟 （ carmofur ， 1-hexylcarbamoyl-5-fluorouracil ， HCFU ） 的吸收、转运特性及其机制进行研究。 方法 分别考察时间、 pH 、浓度及抑制剂对 HCFU 吸收的影响；测定药物在不同时间双向转运的速度，计算 HCFU 的表观渗透系数，研究不同药物浓度对其转运的影响。 结果 Caco-2 细胞对 HCFU 的吸收在 20 min 内呈线性，药物摄取时间定为 10 min ； pH 对 HCFU 的吸收没有显著影响，浓度依赖性结果显示， HCFU 的吸收由一个饱和成分和一个非饱和成分组成； P- 糖蛋白（ P-glycoprotein ， P-gp ）抑制剂维拉帕米对 HCFU 的吸收基本没有影响，而耐药相关性蛋白（ MRP ）抑制剂 MK571 的存在可显著增加对 HCFU 的吸收（ P <0.05 ）。双向转运的表观渗透性存在方向性差异，且受浓度的影响。 结论 HCFU 在 Caco-2 细胞中以主动和被动 2 种形式吸收，其吸收存在外排机制， MRP2 可能对 HCFU 的吸收有外排作用。     

盐酸黄连碱和小檗红碱在人源Caco-2细胞单层模型中的吸收研究

目的：研究中药化学成分盐酸黄连碱(coptisine chloride,COP)和小檗红碱(berberrubine,BRB)在人肠的吸收。方法：采用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型研究COP和BRB由绒毛面(AP侧)到基底面(BL侧)、BL侧到AP侧两个方向的转运过程。应用高效液相色谱、紫外检测法对COP和BRB进行定量分析,计算转运参数和表观渗透系数,并与阳性对照药普萘洛尔和阿替洛尔进行比较。结果：COP和BRB由AP侧到BL侧的表观渗透系数(P_app) 分别为(1.103±0.162)×10^-5,(1.309±0.102)×10^-5cm·s^-1；由BL侧到AP侧的P_app分别为(0.300±0.041)×10^-5,(1.955±0.055)×10^-5cm·s^{-1,与在Caco-2细胞单层模型上呈良好吸收的阳性对照药普萘洛尔［(2.23±0.10)×10-5 cm·s-1］的基本一致。COP和BRB的P_{app A→B}/Papp B→A分别为3.67和0.67；BRB外流是摄取的1.49倍。结论：COP和BRB可以通过小肠上皮细胞被动吸收进入体内,属于良好吸收的药物,在两者的吸收转运过程中,油/水分配系数起着关键性的作用；BRB在Caco-2细胞单层模型中的转运可能存在外流机制。}     

利用Caco-2细胞单层模型预测柯楠碱、育亨宾、阿马碱、萝芙木碱的人肠吸收

目的：研究中药化学成分柯楠碱（corynanthine，COR）、育亨宾（yohimbine，YOH）、阿马碱（ajmalicine，AMC）和萝芙木碱（ajmaline，AML）在人肠Caco-2细胞单层模型的转运吸收。方法：利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型研究COR，YOH，AMC和AML由绒毛面（AP侧）到基底面（BL侧），BL侧到AP侧两个方向的转运吸收过程。应用高效液相色谱法分离、紫外检测法检测对上述4个生物碱进行定量分析，计算转运参数和表观渗透系数（Papp），并与在Caco-2细胞单层模型上呈易吸收的阳性对照药普萘洛尔和难吸收的阳性对照药阿替洛尔的进行比较。用药物的ADMET预测软件，考察4个化合物的P-值与其log D值之间的关系。结果：COR，YOH，AMC和AML由AP侧到BL侧的Papp值分别为（1．863&#177;0．055）&#215;10^-5，（1．540&#177;0．082）&#215;10^-5，（2．5224-0．246）&#215;10^-5，（1．155&#177;0．099）&#215;10^-5cm&#183;s^-1；由BL侧到AP侧的Papp值分别为（2．390&#177;0．017）&#215;10^-5，（1．987&#177;0．154）&#215;10^-5，（1．374&#177;0．260）&#215;10^-5，（2．418&#177;0．124）&#215;10^-5cm&#183;s^-1，与普萘洛尔的Papp A→B值[（2．23&#177;0．10）&#215;10^-5cm&#183;s^-1]基本一致。COR，YOH，AMC和AML的Papp B→A/PappA→B分别为1．28，1．29，0．54和2．09；AML外流是摄取的2．09倍。结论：COR，YOH，AMC和AML能够通过Caco-2细胞单层被动吸收，属于良好吸收的化合物。其中，AML在Caco-2细胞单层模型的转运可能存在外流机制。在4个生物碱的转运吸收过程中，油／水分配系数起着关键性的作用。     

维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯对Caco-2细胞模型转运宝藿苷Ⅰ的影响

目的 考察非离子表面活性剂维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)对宝藿苷Ⅰ在Caco-2细胞模型转运的影响.方法 采用Caco-2细胞模型研究不同浓度的TPGS对宝藿苷Ⅰ细胞转运行为的影响,以超高压液相色谱(UPLC)法测定细胞样品溶液中宝藿苷Ⅰ的浓度,计算表观渗透系数(Papp).结果 在应用TPGS后,宝藿苷Ⅰ从细胞绒毛面供给侧(AP)→基底面外侧(BL)的跨膜转运量明显增高(P＜0.05),外排比率显著下降(P＜0.05).当宝藿苷Ⅰ与TPGS比例分别为1:1、1:3、1:9时,宝藿苷Ⅰ的外排比率分别为1.978 8、1.779 8、1.609 0,与仅用宝藿苷Ⅰ相比分别下降了73％、76％、78％.结论 在Caco-2细胞模型上,TPGS可显著促进宝藿苷Ⅰ的吸收.     

左金丸类方的小檗碱、巴马汀、黄连碱和药根碱在Caco-2细胞转运的比较研究

目的:研究左金丸类方中4种生物碱的转运特征并比较其差异。方法:采用LC-MS/MS法测定左金丸类方中4种生物碱在Caco-2细胞上的转运特征,研讨其转运差异的机制。结果:环孢素A和维拉帕米均可增加4种生物碱的Papp(AP-BL),降低其Papp(BL-AB);MK-571对其转运均无影响;左金丸中的4种生物碱的Papp(AP-BL)均较黄连组增大;甘露散、茱萸丸中的药根碱、黄连碱和小檗碱的Papp(BL-AP)均较黄连减小。结论:小檗碱、黄连碱、药根碱和巴马汀均为P-gp底物,而非MRP2底物;吴茱萸可能具有抑制P-gp活性的作用。     

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??OBJECTIVE To study the absorption characteristics of cajanonic acid A using in vitro Caco-2 cell model. METHODS The toxicity of cajanonic acid A on Caco-2 cells was investigated by MTS, the bi-directional transport of cajanonic acid A from AP??BL and BL??AP was investigated, the cumulative transport and apparent permeability(P_app) were calculated,and the relationships between the transport amount and concentration, time, and the P-glycoprotein inhibitor verapamil were further studied. RESULTS The transport amount of cajanonic acid A increased with time and concentration, the P_app from apical(AP) side to basolateral(BL) side was 2.01??10^-6-3.95??10^-6 cms^-1, and the P_app from basolateral(BL) side to apical(AP) side was 2.51??10^-6-6.03??10^-6 cms^-1. CONCLUSION The current data suggests that the absorption of cajanonic acid A in the Caco-2 cell model is not a simple passive diffusion, the efflux ratio indicates that the efflux protein of P-gp may be involved, and the P_app suggests that the oral absorption is medium.