食源性栀子方保护CCl4诱导小鼠急性和亚急性肝损伤的机制

目的 探讨食源性栀子方（ZZP）对四氯化碳（CCl₄）所致急性和亚急性肝损伤的保护作用及机制。方法 建立急性和亚急性肝损伤动物模型。C57小鼠随机分为正常组、模型组、奥贝胆酸组、食源性栀子方（简称复方）高、低剂量组（0.5、0.25 g·kg^-1）,根据急性、亚急性实验设计,末次给药后,分别收集各组小鼠的血清和肝脏组织。苏木素-伊红（HE）和天狼猩红染色观察肝脏病理变化;试剂盒测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）,肝匀浆羟脯氨酸（Hyp）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肝脏组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肝组织胶原1a1（Col1a1）、胶原3a1（Col3a1）、纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子β受体Ⅱ（Tgfbr2）及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA） mRNA表达。结果 急性肝损伤：与正常组比较,模型组小鼠的ALT、AST、TBIL、MDA、水平均显著升高（P<0.01）,肝SOD酶活性显著性降低（P<0.01）。与模型组比较,复方高、低剂量组复方可明显降低肝细胞损伤程度,均能保护CCl₄所诱导的急性肝损伤,复方高剂量组效果优于低剂量组。亚急性肝损伤：模型组小鼠的ALT、AST、MDA、TNF-α和IL-6水平均显著升高（P<0.01）,肝SOD酶活性显著降低（P<0.01）。与模型组小鼠比较,复方高、低剂量组肝脏Hyp含量显著降低（P<0.01）,两组肝组织胶原沉积程度明显减轻,复方高剂量组亦可明显下调小鼠肝脏α-SMA、Col1a1、Col3a1、FN和Tgfbr2 mRNA表达（P<0.05,P<0.01）。结论 复方可有效保护CCl₄诱导的急性和亚急性肝损伤,保护效应与浓度成正比,其机制可能与增加肝组织抗氧化酶的活性,降低脂质过氧化水平,抑制炎性反应有关,从而减少胶原沉积,改善早期肝纤维化。     

龙胆苦苷通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻小鼠急性肝损伤的作用

目的 探究龙胆苦苷（GPS）对四氯化碳（CCl₄）诱导的急性肝损伤小鼠模型是否有保肝疗效及其对Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响。方法 将60只小鼠随机分为6组,每组10只,分别为正常组、模型组、水飞蓟素（150 mg·kg^-1）组及GPS高、中、低剂量组（200,100,50 mg·kg^-1）。给药组的小鼠按10 mL·kg^-1灌胃处理,正常组和模型组灌胃相同量的蒸馏水,每天1次,连续灌胃给药10 d后,除正常组腹腔注射花生油（10 mL·kg^-1）,其余各组腹腔注射0.12% CCl₄花生油（10 mL·kg^-1）溶液建立小鼠急性肝损伤模型。腹腔注射后禁食16 h,摘除小鼠眼球取血,收集肝脏组织。苏木素-伊红（HE）染色观察肝组织病理学改变。生化法检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）,天门冬氨酸氨基转移酶（AST）,总胆红素（TBIL）,碱性磷酸酶（ALP）,总超氧化物歧化酶（T-SOD）,γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）的水平,肝组织中丙二醛（MDA）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的水平;酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠肝脏组织中的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-6（IL-6）含量。蛋白免疫印迹法（Western blot）测定肝脏组织中TLR4,MyD88,NF-κB蛋白表达情况;免疫组化检测磷酸化NF-κB（p-NF-κB）的表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠的ALT,AST,ALP,TBIL,γ-GT及MDA水平显著升高（P<0.01）,T-SOD,GSH-Px活性显著降低（P<0.01）;与模型组比较,GPS中、高剂量组小鼠的ALT,AST,ALP,TBIL,γ-GT及MDA水平降低（P<0.05,P<0.01）,T-SOD、GSH-Px活性明显上升（P<0.05,P<0.01）;与正常组比较,模型组小鼠肝组织中TNF-α,IL-1β,IL-6含量显著升高（P<0.01）,TLR4,MyD88,p-NF-κB蛋白表达显著上升（P<0.01）;与模型组比较,GPS中、高剂量组小鼠肝组织中TNF-α,IL-1β,IL-6含量明显降低（P<0.05,P<0.01）,TLR4,MyD88,p-NF-κB蛋白表达明显下调（P<0.05,P<0.01）。结论 GPS对CCl₄引起的急性肝损伤小鼠具有一定的保肝效果,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及减弱氧化应激反应相关。     

土家药竹节参多糖通过Nrf2-ARE信号通路对四氯化碳致大鼠急性肝损伤的抗氧化保护作用

目的 基于核因子E2相关因子2（nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2）-抗氧化反应元件（antioxidant response element,ARE）信号通路研究竹节参多糖（Panax japonicus polysaccharide）保护四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl₄）所致大鼠急性肝损伤的作用机制。方法 通过CCl₄间隔诱导法建立急性肝损伤大鼠模型,给予水提醇沉法制备的竹节参多糖治疗7 d后取材,通过苏木素-伊红（HE）染色观察肝组织病理变化;全自动生化仪检测大鼠血清中肝功能相关指标;ELISA法检测肝组织氧化应激水平;免疫组化法观察大鼠肝组织Nrf2表达;Western blotting测定大鼠肝组织Nrf2-ARE通路相关蛋白表达。结果 与模型组比较,竹节参多糖组大鼠血清中肝功能相关指标呈不同程度的降低（P<0.05、0.01）,肝组织中Nrf2-ARE信号通路明显激活（P<0.01）,肝脏中脂类过氧化产物丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平降低（P<0.01）,抗氧化酶活性明显升高（P<0.05、0.01）,细胞质中氧化应激效应物Nrf2阳性的细胞数有所减少（P<0.01）,大鼠肝脏损伤程度明显减轻。结论 竹节参多糖可激活Nrf2-ARE信号通路,增强机体的抗氧化酶系表达,减轻CCl₄引起的氧化损伤。     

CCl4致大鼠肝损伤24 h生物标志物水平的变化规律

目的：采用四氯化碳（CCl₄）复制大鼠肝损伤的动物模型,研究肝损伤早期生物标志物谷氨酸脱氢酶（GLDH）,嘌呤核苷酸磷酸化酶（PNP）,α-谷胱甘肽-S-转移酶（α-GST）,精氨酸酶1（Arg1）的动态变化,为急性肝损伤的早期发现提供实验依据。方法： 48只Wistar大鼠,随机分为正常组和模型组,模型组腹腔注射10%的CCl₄橄榄油溶液10 mL·kg^-1,禁食不禁水,于3,6,12,24 h后处死各组动物,测定血清肝功能丙氨酸氨基转移酶（ALT）,天门冬氨酸氨基转移酶（AST）,胆红素（TBIL）,碱性磷酸酶（ALP）的水平,α-GST,Arg1,GLDH,PNP水平,肝匀浆超氧化物歧化酶（SOD）,谷胱甘肽（GSH）,丙二醛（MDA）的水平。结果：与正常组比较,给药3 h后ALT,AST,TBIL,α-GST,Arg1,GLDH,PNP,MDA水平显著升高,SOD明显下降（P<0.01）,给药6,12 h后ALT,AST,α-GST,Arg1,GLDH,TBIL,ALP,MDA水平显著升高,GSH,SOD明显下降（P<0.05,P<0.01）,给药24 h后ALT,AST,α-GST,Arg1,TBIL,ALP,MDA水平显著升高,GSH,SOD显著下降（P<0.01）。结论： α-GST,Arg1,GLDH,PNP较传统肝功能检测指标具有较好的灵敏性,可用于CCl₄致大鼠肝损伤早期检测。     

牡丹花总黄酮对痛风性肾病大鼠NLRP3炎症小体及炎症因子表达的影响

目的 探究牡丹花总黄酮对大鼠痛风性肾病模型保护作用的可能机制。为治疗痛风性肾病的药物研究提供科研数据支撑。方法 使用腺嘌呤合并乙胺丁醇复制大鼠痛风性肾病模型，大鼠随机每12只分为空白组、模型组、别嘌醇组（42 mg·kg^-1）、阳性药痛风舒片组（600 mg·kg^-1）、牡丹花总黄酮高、中、低剂量组（TFPF，260、130、65 mg·kg^-1）；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）含量，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠肾脏组织匀浆中转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、IL-1β含量；苏木素-伊红（HE）染色观察肾脏组织细胞形态变化；原位末端标记法（TUNEL）观察肾脏组织细胞DNA损伤情况；免疫组化法观察肾脏NOD样受体蛋白3（NLRP3）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、IL-1β蛋白表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾脏组织中NLRP3、Caspase-1、核转录因子-κB（NF-κB）蛋白的表达量。结果 与空白组比较，模型组大鼠血清中TNF-α、MCP-1、IL-1β、IL-18含量均显著增加（P<0.01），模型组大鼠肾脏NLRP3、Caspase-1、NF-κB、IL-1β表达量均显著升高（P<0.01），肾组织细胞呈现胞质肿胀、细胞膜破裂，细胞核固缩断裂数量增加，模型组大鼠肾组织细胞TUNEL染色阳性率显著升高（P<0.01），大鼠肾组织匀浆中IL-1β、TGF-β₁的含量均显著上升（P<0.01）；与模型组比较，牡丹花总黄酮高、中剂量组可不同程度的降低大鼠血清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-18含量（P<0.05，P<0.01），牡丹花总黄酮高剂量组MCP-1含量明显降低（P<0.01），牡丹花总黄酮高、中剂量组明显降低肾组织匀浆中TGF-β₁含量（P<0.05，P<0.01），牡丹花总黄酮中剂量组肾组织匀浆中IL-1β含量显著降低（P<0.01）；HE染色显示牡丹花总黄酮各剂量组可不同程度的改善肾小管上皮细胞状态，减轻胞质肿胀，细胞核固缩的数量；降低肾组织细胞TUNEL染色阳性率（P<0.01），肾脏细胞DNA损伤减少；抑制肾脏组织细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、NF-κB蛋白的表达（P<0.05，P<0.01）。结论 牡丹花总黄酮对痛风性肾病模型大鼠的肾脏保护作用与抑制炎症因子分泌相关，其抗炎作用机制可能是通过抑制NF-κB信号通路与NLRP3/Caspase-1通路的活化，从而下调IL-1β、IL-18等炎性因子表达、成熟及释放，遏制肾脏细胞程序性死亡的初始阶段细胞焦亡的发生，从而逆转痛风性肾病肾脏的炎症损伤。     

玉郎伞豆甾醇的体外抗氧化活性研究

目的：研究玉郎伞一种甾醇类化合物豆甾醇（stigmaserol）的体外抗氧化活性。方法：配制含磷酸盐缓冲液（pH 8.3）50 mmol·L^-1、连苯三酚0.2 mmol·L^-1 的溶液,建立连苯三酚氧自由化产生氧自由基（O₂^-·）发生体系;配制含邻二氮菲0.75 mmol·L^-1,FeSO₄ 0.75 mmol·L^-1、磷酸盐缓冲液（pH 7.3）150 mmol·L^-1的溶液,建立由邻二氮菲-Fe²⁺/H₂O₂产生羟自由基（·OH）的发生体系,以维生素C（Vit C）为阳性对照,采用紫外-可见分光光度法,测定豆甾醇对O₂^-·和·OH的清除及抑制作用。结果：高、中浓度豆甾醇对·OH有明显的清除作用,清除率分别为39.3%,9.9%（P<0.01或P<0.05）;对O₂^-·有明显的清除作用,清除率分别为61.2%,30.4%（P<0.01）,且能显著减小O₂^-·的生成速率,抑制率分别为38.3%,47.8%（P<0.01）。结论：豆甾醇在体外具有较强的抗氧化活性。     

基于NLRP3/Caspase-1信号通路研究三叶香茶菜抗小鼠CCL4急性肝损伤机制＊

目的 研究三叶香茶菜对四氯化碳（carbon tetrachloride， CCL₄）急性肝损伤小鼠NLRP3/casepase-1信号通路的影响。方法 采用CCL₄小鼠急性肝损伤动物模型，随机分为模型组，正常组，联苯双脂组，三叶香茶菜组分别为高（150 g·kg^-1）、中（75 g·kg^-1）、低（37.5 g·kg^-1）剂量组（按生药量计）。各组干预7天后，于第7天晚上注射CCL₄油溶液诱导急性肝损小鼠动物模型（除正常组外）。12 h后，称量各组肝、脾重量，并计算肝、脾指数，生化法检测各组小鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）活力、谷草转氨酶（AST）活力，ELISA法检测小鼠血清半胱肽氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、白细胞介素-1β（interleukin- 1β， IL-1β）水平及肝组织NLR家族含有Pyrin结构域的蛋白质3（NLR Family， Pyrin Domain Containing Protein 3， NLRP3）含量。同时，采用免疫组化检测肝组织中NLRP3含量。取肝组织制成病理切片，苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining， HE）染色后观察肝组织细胞形态学变化，并评分。结果 ①各组肝指数与模型组比较无明显变化（P < 0.05）；与模型组比较，正常组、联苯双脂组、三叶香茶菜低剂量组脾指数均显著下降（P < 0.05）。②与正常组对比，模型组小鼠血清ALT、AST、Caspase-1、IL-1β以及小鼠肝组织NLRP3显著升高（P < 0.05或P < 0.01）；与模型组比较，各组小鼠血清ALT、AST、Caspase-1、IL-1β以及小鼠肝组织NLRP3显著下降（P < 0.05或P < 0.01）；但模型组与三叶香茶菜低剂量组对比，小鼠血清ALT、Caspase-1、IL-1β无显著性差异（P < 0.05）。③光镜下观察发现，与模型组相比，三叶香茶菜高、中、低剂量组小鼠肝组织损伤明显减少，肝组织细胞坏死细胞减轻，有少量炎性浸润，各组病理评分差异具显著性差异（P < 0.05）。结论 三叶香茶菜对CCL₄诱导急性肝损伤小鼠具有保护作用，其护肝作用机制可能是是通过抑制NLRP3/Caspase-1信号通路的活化，减少炎症介质释放，从而抑制肝组织炎症损害。     

泽兰提取物对慢性前列腺炎的治疗作用及调控炎性小体NLRP3信号通路的机制

目的 探讨泽兰提取物对慢性前列腺炎（CNP）的治疗作用,并基于炎性小体NOD样受体蛋白3（NLRP3）通路探讨其抗CNP的可能作用机制。方法 采用5 mg·L^-1脂多糖（LPS）诱导人正常前列腺基质细胞WPMY-1,通过酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测3.125、6.25、12.5、25、50、100 mg·L^-1泽兰提取物对LPS诱导WPMY-1细胞分泌IL-6含量的影响,并计算其半抑制浓度（IC₅₀）值。WPMY-1细胞给药50、75、100 mg·L^-1泽兰提取物后,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测NLRP3通路关键蛋白表达。应用角叉菜胶诱导法复制CNP大鼠模型。苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠前列腺组织病理学变化;测定大鼠前列腺器官指数;ELISA检测大鼠血清5α-二氢睾酮（5α-DHT）及前列腺组织IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、环氧合酶-2（COX-2）、前列腺素E₂（PGE₂）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的含量;Western blot检测大鼠前列腺组织中COX-2、TGF-β₁及NLRP3通路关键蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠前列腺组织COX-2、白细胞介素-1β（IL-1β）、TGF-β₁、TNF-α mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组细胞分泌IL-6浓度显著升高（P<0.01）;细胞NLRP3、ASC、Caspase-1和IL-1β的蛋白表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,泽兰提取物对LPS诱导WPMY-1细胞分泌IL-6的IC₅₀为38.26 mg·L^-1;泽兰提取物低、中、高剂量组NLRP3、ASC和IL-1β蛋白表达水平明显下调（P<0.05,P<0.01）,泽兰提取物中、高剂量组细胞Caspase-1蛋白表达水平明显下调（P<0.05,P<0.01）。与假手术组比较,模型组大鼠前列腺器官指数显著升高（P<0.01）,前列腺组织大量炎细胞浸润,组织病理学评分明显升高（P<0.05）,血清5α-DHT含量、前列腺组织TNF-α、PGE₂、IL-6、TGF-β₁、NOS₂/iNOS、COX-2含量,COX-2、IL-1β、TGF-β₁ mRNA表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,前列腺组织COX-2、TGF-β₁、NLRP3、Caspase-1、ASC及IL-1β蛋白表达水平明显上调（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,泽兰提取物低、高剂量均能有效减轻角叉菜胶所致的前列腺组织病理学改变,明显降低血清5α-DHT含量、前列腺组织TNF-α、PGE₂、TGF-β₁及iNOS含量（P<0.05,P<0.01）及COX-2、IL-1β、TGF-β₁ mRNA表达水平（P<0.05,P<0.01）,明显下调前列腺组织COX-2、Caspase-1、ASC及NLRP3蛋白表达水平（P<0.05,P<0.01）。泽兰提取物低剂量组前列腺器官指数显著降低（P<0.01）。泽兰提取物高剂量组前列腺组织COX-2含量明显降低,TGF-β₁及IL-1β蛋白表达水平明显下调（P<0.05）。结论 泽兰提取物对CNP有明显的治疗作用并可能通过抑制炎性小体NLRP3信号通路的激活来减轻炎症反应。     

保肝汤对小鼠四氯化碳致慢性化学性肝损伤的保护作用

[目的] 研究保肝汤对四氯化碳（CCl₄）致慢性化学性肝损伤的保护作用。[方法] 将84只昆明小鼠随机分为正常组、模型组、护肝片组、保肝汤高、中、低剂量组共6组,每组14只。除正常组外,其余各组分别在实验第1、3、10、16、22、25、28天腹腔注射0.5% CCl₄;于造模后第10天开始灌胃,其中正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,护肝片及保肝汤高、中、低剂量组给予灌胃药液。第30天灌胃2 h后称质量、处死,并收集各组肝组织及血清标本,检测指标含量,计算肝脏指数并进行肝组织病理学检查。[结果] 与正常组比较,模型组丙氨酶转氨酶（ALT）、天门冬氨酶氨基转移酶（AST）、丙二醛（MDA）明显升高（P<0.05）。模型组肝组织病理学,可见多处大片肝细胞脂肪变性,并见多处灶状坏死;与模型组比较,保肝汤高、中、低剂量组ALT、AST降低,AST/ALT升高（P<0.05）,保肝汤中、低剂量组MDA降低（P<0.05）;保肝汤各剂量组明显改善肝组织及形态结构。[结论] 保肝汤能够减轻CCl₄对肝细胞的损伤程度,以保肝汤中剂量组作用最优;作用机制与抑制肝损伤后脂质过氧化反应有关。     

加味升降散通过介导RIP1/RIP3/MLKL通路抑制坏死性凋亡减轻糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化

目的 探讨加味升降散基于刺激受体相互作用蛋白（RIP）1/RIP3/混合谱系激酶结构域样假激酶（MLKL）通路对糖尿病肾病大鼠坏死性凋亡及肾纤维化的干预机制。方法 75只SD大鼠分为正常组、模型组、加味升降散低、中、高剂量组（4.365、8.73、17.46 g·kg^-1）和厄贝沙坦组（0.013 5 g·kg^-1），灌胃给药干预4周后，检测各组大鼠24 h尿蛋白定量（UTP），血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平，肾脏病理变化程度；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法和免疫组化分别检测大鼠肾组织中IL-1β、TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、核转录因子-κB（NF-κB）mRNA和蛋白表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测RIP1/RIP3/MLKL信号通路关键蛋白的表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠肾脏间质纤维化明显，24 h UTP、IL-1β、TNF-α水平明显升高（P<0.05），肾组织中IL-1β、TNF-α、MCP-1、TGF-β₁、NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05），RIP1、RIP3、磷酸化（p）-MLKL、MLKL蛋白表达量明显增多（P<0.05）；与模型组比较，加味升降散各剂量组及厄贝沙坦组大鼠肾脏间质纤维化水平均有不同程度改善，24 h UTP水平均有不同程度降低（P<0.05），血清中IL-1β、TNF-α含量明显降低（P<0.05），肾组织中IL-1β，TNF-α，MCP-1，TGF-β₁，NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显下调（P<0.05），RIP1、RIP3、p-MLKL、MLKL蛋白表达量明显下调（P<0.05）。结论 加味升降散可以改善糖尿病肾病大鼠肾损伤，其机制可能与下调RIP1/RIP3/MLKL信号通路，阻止肾组织坏死性凋亡，抑制肾纤维化有关。     

天南星、半夏的PCR-RFLP鉴别

目的：近年来,随着半夏和天南星的野生资源急剧下降、药材栽培技术不成熟等问题出现,市场的混伪品频繁出现,而其主要鉴别特征在药材流通中大多消失。因此,迫切需要建立一种可以快速、有效鉴别天南星和半夏特异性的分子鉴定方法。方法：通过比对天南星、半夏及其混伪品的rbc L序列,分别选择了天南星和半夏的特异性酶切位点HaeⅢ和DraⅠ,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）进行鉴定,建立并优化了PCR-RFLP反应主要体系条件,并对其耐用性和正品、掺杂品及混伪品的检出能力进行了考察。结果：建立了天南星和半夏药材的PCR-RFLP鉴别方法,在退火温度为54℃、循环次数为35个,DNA模板量为3～30 ng时,天南星和半夏经过特异性引物扩增后,分别能被HaeⅢ和DraⅠ限制性内切酶酶切,产生两片段或切开的小片段,并在100～250 bp出现单一条带,而混伪品无法酶切,且均在250 bp出现条带,该方法对天南星或半夏的掺杂品和混伪品具有高度准确的鉴别能力。结论：该研究建立的PCR-RFLP方法可以快速鉴别天南星、半夏。     

化风丹中As2S2及As2O3的含量测定

目的:建立化风丹中不溶性砷盐和可溶性砷盐的含量测定方法,为该制剂的质量控制提供参考。方法:采用滴定法和紫外分光光度法分别测定18批化风丹中二硫化二砷和三氧化二砷的含量。结果:建立的二硫化二砷含量测定方法重复性好,平均加样回收率97.61%,RSD 2.0%。三氧化二砷在4~16μg与吸光度线性关系良好,平均回收率97.77%,RSD2.1%。18批化风丹中二硫化二砷质量分数0.012~0.021 3 g·g-1,平均质量分数0.018 4 g·g-1,差异系数13.3%;三氧化二砷质量分数75.24~124.55μg·g-1,平均质量分数92.99μg·g-1,差异系数15.3%。结论:建立的含量测定方法简单、准确,为化风丹质量标准提升提供实验依据。不同批次化风丹中二硫化二砷和三氧化二砷含量差异较大。     

姜黄素mPEG114-PCL36纳米胶束的制备及体外释药考察

目的:制备载姜黄素mPEG114-PCL36纳米胶束并考察其体外释药情况.方法:利用开环聚合法合成聚乙二醇单甲醚-聚己内酯(mPEG114-PCL36)嵌段共聚物,通过FT-IR和1H-NMR确证其结构,芘荧光探针法测定其临界胶束浓度.采用透析法制备姜黄素聚合物胶束,通过正交试验考察共聚物质量浓度、姜黄素质量浓度、水相与有机相的体积比对包封率、载药率和胶束粒径的影响.利用HPLC测定载药率、包封率,激光散射法测定粒径,动态透析法考察体外释药特性.结果:制备的纳米胶束平均粒径(48.5±1.7) nm,粒径多分散系数(0.20±0.07),包封率(49.12±1.26)％,载药率(4.46±0.12)％,72 h体外累计释放率41.9％,无明显突释现象.结论:透析法制备的姜黄素mPEG-PCL纳米胶束粒径小且分布均匀,具有良好的缓释性能.     

狼疮方对体外扩增小鼠CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的影响

目的:狼疮方对体外扩增小鼠CD4+CD25+调节性T细胞数量的影响。方法:免疫磁珠法分离狼疮方治疗组与未治疗组小鼠CD4+CD2+5T细胞;通过流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞Foxp3表达情况;用抗CD3和抗CD28包被的微珠来进行刺激,体外扩增小鼠的CD4+CD25+调节性T细胞;用CFSE法检测CD4+CD25+调节性T细胞体外抑制CD4+CD2-5T细胞的增殖情况。结果:经抗CD3和抗CD28包被的微珠刺激后,在TGF-β1和IL-2存在的环境中CD4+CD25+T细胞数量明显升高,扩增后的CD4+CD25+T细胞高表达Foxp3。与此同时,经狼疮方处理后的小鼠CD4+CD25+T细胞扩增后数量增加133.3±18.9倍,未经狼疮方处理的对照细胞数量增加104.7±10.8倍,两者比较有显著性差异(P0.05)。狼疮方治疗组与未治疗组中分离的CD4+CD2+5T细胞和扩增的CD4+CD25+T细胞对CD4+CD2-5T细胞的增殖皆有明显抑制作用,荧光强度分别为32.1±4.8,33.1±4.9,30.1±3.8,32.9±4.2。结论:狼疮方有助于提高小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的扩增效率,扩增的CD4+CD25+调节性T细胞表达Foxp3,具有体外免疫抑制功能。     

逍遥散对CUMS大鼠海马CA1区PI3K/AKT信号通路的调节作用研究

目的：本研究旨在探讨逍遥散通过调节PI3K/AKT信号通路进而改善由谷氨酸引起的兴奋性损伤的机制。 方法：100只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、逍遥散组和氟西汀组,利用CUMS方法造模成为抑郁模型大鼠,上述组别分别予以双蒸水、双蒸水、逍遥散药液、氟西汀溶液连续灌胃3周,后进行行为学观察及相关指标检测。采用旷场试验(OFT)和蔗糖偏好试验(SPT)评价逍遥散的抗抑郁作用;ELISA法测定海马组织中5-HT、NE水平;比色法检测各组大鼠海马CA1区谷氨酸水平; RT-qPCR检测海马CA1区NR2B、PI3K的mRNA水平;western blot检测海马CA1区NR2B、PI3K、P-AKT、Akt的蛋白表达。 结果：逍遥散的体内干预可显著提高抑郁大鼠海马组织中的5-HT、NE水平、降低海马CA1区谷氨酸水平、增加了海马CA1区NR2B、PI3K及P-AKT/AKT比值,显著改善了大鼠的抑郁症状。 结论:逍遥散可显著改善经慢性应激刺激后大鼠的抑郁样行为,其机制可能与降低谷氨酸兴奋性毒性,从而提高PI3K/Akt信号通路活性有关。     

不同产地雄黄及其炮制品中二硫化二砷和可溶性砷含量比较

目的:比较研究不同产地雄黄及其炮制品中主成分As2S2及可溶性砷盐As2O3的含量差异。方法:采用2010年版《中国药典》雄黄项下的滴定法测定不同产地雄黄及其炮制品中As2S2的含量,采用AFS-230E型原子荧光光度计检测上述样品中可溶性砷盐As2O3含量。结果:不同产地的雄黄及其炮制品中As2S2,As2O3含量存在显著差异。雄黄炮制后,炮制品中As2S2含量均提高,As2O3含量均明显降低。除吉林和江苏2个产地的的雄黄及其炮制品中As2S2含量<90.0%,其余样品均符合药典规定;且雄黄炮制品中As2O3含量均能控制在1.7 mg.g-1以下。结论:研究结果可为指导雄黄临床合理用药提供参考依据。     

CD_4~+CD_(29)~+T细胞在湿热型溃疡性结肠炎中的表达及意义

目的:探讨CD4+CD2+9T细胞在湿热型溃疡性结肠炎中的表达及意义。方法:按照年龄及性别构成无统计学差异的原则,将临床观察对象入选分为正常组(n=32)、单纯湿热组(n=18)、非湿热型UC组(n=29)及湿热型UC组(n=16)共4组;将40只SD大鼠随机分为健康组(n=10)、单纯湿热组(n=10)、非湿热型UC组(n=10)及湿热型UC组(n=10)共4组,采用高脂、高糖饲料联合人工气候箱法造出大鼠湿热型模型,再结合三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法制作湿热型UC模型,非湿热型UC组单独用TNBS法。使用流式细胞分析仪检测以上各组患者和大鼠外周血CD4+CD2+9T细胞所占的百分比。结果:单纯湿热组、非湿热型UC组和湿热型UC组患者和大鼠外周血中CD4+CD2+9T细胞的表达均显著升高(P<0.05),其中以湿热型UC组表达最高。结论:CD4+CD2+9T细胞在湿热型UC患者和大鼠中表达显著升高,可能参与了湿热型UC的发病。     

H2O2对北苍术次生代谢影响及机制分析

目的：探讨外源H₂O₂对北苍术次生代谢的影响及其机制。方法：采用5.0、1.0、0.2、0.04 mmol·L^-1 H₂O₂溶液和清水处理北苍术鲜根,比较北苍术内活性氧含量、抗氧化酶活性、次生代谢产物关键酶活性及次生代谢产物含量之间的关系。结果：在外源H₂O₂的作用下,北苍术鲜根中活性氧和丙二醛(MDA)的含量在第4天有显著升高,并在第6～8天恢复至正常水平。超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性均呈现先上升后下降的趋势,SOD、CAT和POD的活性分别在第4、4～6、2～4天达到高峰。北苍术次生代谢产物关键酶羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)活性均有显著提升,且在不同浓度H₂O₂处理中,0.2 mmol·L^-1 H₂O₂处理组次生代谢产物合成关键酶活性提高幅...     

染料木素抗大鼠心肌肥厚作用及其与ATPase活性的关系

目的:观察染料木素(Gen)对异丙肾上腺素(iso)所致大鼠心肌肥厚的保护作用及其对心肌组织Na+-K+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase活性及羟脯氨酸含量的影响。方法:0.2 g·L-1的iso 5 mL·kg-1·d-1,背部皮下注射,连续10 d,建立大鼠心肌肥厚模型。造模第2天开始给予不同浓度的染料木素、二甲基亚砜或NS,连续14 d,末次给药后禁食12 h,称体重,麻醉,取心脏,称全心及左心室质量,计算全心质量指数及左心室质量指数,测定心肌组织Na+-K+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase活性及羟脯氨酸(Hyp)含量。结果:模型组全心质量指数及左心室质量指数分别为(3.30±0.24),(2.55±0.14)mg·kg-1,与正常对照组相比显著升高(P<0.001);心肌组织Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活力为(1.81±0.25),(1.00±0.22)U·mg-1,与正常对照组相比活性显著降低(P<0.01);Hyp含量为(0.80±0.05)mg·g-1,与正常对照组相比含量显著升高(P<0.001)。与模型组相比,染料木素高、低剂量组(0.3,0.1μmol.kg-1)全心质量指数分别为(2.83±0.22),(2.97±0.19)mg·kg-1;左心室质量指数分别为(2.32±0.16),(2.34±0.13)mg·kg-1均显著降低(P<0.01或P<0.05);高剂量组心肌组织Na+-K+-ATPase(2.58±0.40)U·mg-1及Ca2+-Mg2+-ATPase(1.35±0.22)U·mg-1活性升高(P<0.01或P<0.05),染料木素高、低剂量组心肌组织Hyp含量分别为(0.48±0.11),(0.57±0.14)mg·g-1显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论:染料木素可通过提高Na+-K+-ATPase及Ca2+-Mg2+-ATPase的活性,降低Hyp含量,从而抑制心脏纤维化,起抗心肌肥厚作用。     

三氧化二砷磁微球的制备工艺

目的:研究三氧化二砷磁微球的制备工艺。方法:采用化学共沉淀法制备四氧化三铁磁性粒子,采用超声乳化和溶剂萃取挥发法制备三氧化二砷磁微球,建立二乙基二硫代氨基甲酸银光度法检验微球包封率并确定优化工艺。结果:最佳工艺为A3B2C1,即Fe3O4-As2O3(1∶2),聚乳酸体积分数0.6%,PVA体积分数3%。制备的磁微球平均含量26%,包封率60%。结论:试验制备的三氧化二砷磁微球包封率高、毒性小。