平喘方及其拆方对支气管哮喘小鼠肺组织转录因子T-bet/GATA-3表达的影响

目的：观察平喘方及其拆方对支气管哮喘模型小鼠转录因子T—bet、GATA－3表达的影响,研究平喘方及其拆方防治支气管哮喘的作用机理。方法：通过对BALB／C小鼠用卵蛋白等腹腔注射致敏、雾化吸入激发,建立支气管哮喘动物模型。将120只清洁级雄性BALB／C小鼠,随机分为6组：对照组、模型组、平喘方组、拆方1组、拆方2组、拆方3组。各组分别于雾化激发哮喘后7d、21d分两批处死、取样、检测,动态观察。采用RT—PCR（Real Time PCR）法检测小鼠肺组织T—bet、GATA-3 mRNA的表达。结果：哮喘激发7d,拆方1、2、3组T—bet升高（P〈0．05）;平喘方组和拆方2、3组GATA-3降低（P〈0．05）;拆方3组T—bet／GATA-3比值升高（P〈0．05）。哮喘激发21d,平喘方及拆方1、2、3组T—bet升高（P〈0．01）,GATA-3降低（P〈0．01）,T—bet／GATA-3比值升高（P〈0．01）;其中平喘方组、拆方3组T—bet表达高于拆方1、2组（P〈0．05）,GATA-3低于拆方1、2组（P〈0．01）,T—bet／GATA-3的比值高于拆方1、2组（P〈0．05或P〈0．01）。结论：平喘方及拆方各组均能不同程度地调节支气管哮喘小鼠Th1／Th2上游因子T—bet／GATA-3 mRNA的表达,对Th1／Th2细胞的失衡有纠正作用,拆方3组疗效接近平喘方组。     

五虎汤对病毒诱发幼年哮喘大鼠肺组织初始CD4~+T细胞转录因子表达的影响

目的:探讨五虎汤对病毒诱发幼年SD哮喘大鼠肺组织初始CD4+T细胞转录因子mRNA及蛋白表达的影响。方法:采用RSV诱导,OVA致敏加激发制备大鼠哮喘模型。造模成功后,随机分成五虎汤高、中、低(4.752g/kg、2.376g/kg、1.188g/kg)剂量组,阳性对照组(地塞米松片,2.4mg/kg),哮喘模型组和空白对照组6组。治疗14d后,取肺组织,分别采用RT-PCR及免疫印迹法检测肺组织初始CD4+T细胞转录因子T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA及其蛋白表达情况。结果:模型组T-bet、Foxp3 mRNA及蛋白较正常对照组表达降低(P0.05),GATA-3、RORγt mRNA及蛋白较正常对照组表达升高(P0.05);与模型组比较,五虎汤干预后,高剂量组T-bet、Foxp3 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.01),GATA-3、RORγt mRNA及蛋白表达显著降低(P0.01);中剂量组T-bet、Foxp3 mRNA及蛋白表达升高(P0.05)、GATA-3、RORγt mRNA及蛋白表达降低(P0.05)。结论:五虎汤通过抑制转录因子GATA-3、RORγt表达、促进转录因子T-bet、Foxp3表达,进一步调控Thl/Th2、Th17/Treg细胞平衡和免疫功能进而抑制哮喘气道炎症形成。     

基于PI3K信号通路探讨肺“俞募配穴”艾炷灸对哮喘小鼠RORγt/Foxp3表达的影响

目的:观察肺"俞募配穴"艾炷灸对哮喘小鼠血清及肺泡灌洗液(BALF)中相关炎性因子含量及对肺组织中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、叉头/翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达的影响,并探讨其机制。方法:将60只雄性Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、LY剂组、电针组、艾炷灸组,每组12只。采用卵蛋白(OVA)致敏法复制哮喘小鼠模型。LY剂组予尾静脉注射PI3K抑制剂LY294002;电针组、艾炷灸组分别予电针、艾炷灸"肺俞""中府",1次/d,连续2周。ELISA法检测小鼠血清和BALF中免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)含量,荧光定量PCR法及免疫组织化学法检测肺组织中PI3K、RORγt、Foxp3的mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清和BALF中IgE及IL-4含量、肺组织中PI3K及RORγt mRNA和蛋白表达明显升高(P0.01),血清和BALF中IFN-γ含量、肺组织中Foxp3 mRNA和蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组比较,LY剂组、电针组及艾炷灸组血清和BALF中IgE及IL-4含量、肺组织中PI3K及RORγt mRNA和蛋白表达明显降低(P0.01,P0.05),血清和BALF中IFN-γ含量、肺组织中Foxp3 mRNA和蛋白表达明显升高(P0.01)。结论:肺"俞募配穴"艾炷灸能通过PI3K信号通路调节RORγt和Foxp3表达,从而减轻气道炎性反应,控制哮喘发作。     

黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎小鼠Th17/Treg细胞免疫平衡的影响

目的研究16k D黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠Th17/Treg细胞免疫平衡的影响,探讨黄芪糖蛋白治疗胶原诱导性关节炎小鼠的免疫作用机理。方法采用雄性Balb/c小鼠建立牛Ⅱ型胶原诱导性关节炎小鼠模型,将造模成功的小鼠随机分为CIA模型组、氢化可的松阳性对照组、黄芪糖蛋白高、中、低剂量组,另设空白对照组;各治疗组腹腔注射药物14天,对照组与模型组注射等体积生理盐水。采用流式细胞术检测各组小鼠外周血CD3~+CD4~+IL-17A~+Th17细胞、CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比例;Western blot法检测各组小鼠脾组织中维甲酸相关孤独受体γt(retinoid-related orphan receptorγt,RORγt)和叉头状转录因子3(forkhead box protein 3,Foxp3)的蛋白表达水平。结果流式检测结果显示,黄芪糖蛋白可显著降低模型组小鼠外周血中CD3~+CD4~+IL-17A~+Th17细胞比例(P0.01),提高CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的比例(P0.01)。Western blot结果显示黄芪糖蛋白可显著降低模型组小鼠脾组织中RORγt的表达(P0.01),提高Foxp3的表达(P0.01)。结论黄芪糖蛋白提高Foxp3的表达水平,降低RORγt的表达水平,恢复Th17/Treg细胞之间的平衡,可能是黄芪糖蛋白治疗胶原诱导性关节炎小鼠的机制之一。     

五虎汤对病毒诱发幼年哮喘大鼠脾组织T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA表达的影响

目的:研究五虎汤对病毒诱发幼年哮喘大鼠脾细胞悬液T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 m RNA表达的影响。方法:采用RSV诱导OVA致敏大鼠哮喘模型。造模成功后,随机分成五虎汤高、中、低[4.752 g/(kg·d)、2.376 g/(kg·d)、1.188 g/(kg·d)]剂量组、地塞米松组[地塞米松片,2.4 mg/(kg·d))]、模型组。干预14 d后,取脾组织,采用RT-PCR法检测脾细胞悬液中T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 m RNA表达情况。结果:模型组脾组织T-bet、Foxp3m RNA表达低于空白组(P0.05),而GATA-3、RORγt m RNA表达高于空白对照组(P0.05)。五虎汤高、中剂量组脾组织GATA-3、RORγt m RNA表达均明显低于模型组(P0.01或P0.05),而T-bet、Foxp3 m RNA表达均明显高于模型组(P0.01或P0.05)。结论:五虎汤能调控病毒诱发幼年哮喘大鼠脾组织转录因子T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 m RNA的表达,调控Thl、Th2、Thl7、Treg细胞,重建免疫平衡,抑制哮喘气道炎症形成。     

儿茶素对变应性鼻炎小鼠Th17/Treg表达的影响

目的观察儿茶素(Catechin)对变应性鼻炎小鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)表达的影响。方法将48只雌性Balb/c小鼠随机分为6组,即正常对照组,模型组,儿茶素低、中、高剂量组(75,150,300 mg·kg~(-1))和氯雷他定组(2.05 mg·kg~(-1)),每组8只。采用卵清蛋白(OVA)致敏和激发构建变应性鼻炎小鼠模型。记录小鼠打喷嚏、挠鼻等鼻部症状积分;采用HE染色观察鼻黏膜组织病理改变;采用流式细胞微球芯片捕获技术(Cytometric Bead Array,CBA)检测肺组织匀浆液中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、调节正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)的含量;采用q PCR法检测鼻黏膜中Th17、Treg特异性转录因子维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、Forkhead家族转录因子3(Foxp3)m RNA表达水平。结果与正常对照组比较,模型组小鼠挠鼻、打喷嚏次数明显增加(P0.05),MCP-1、RANTES及RORγt m RNA表达量明显升高(P0.05),Foxp3 m RNA表达量明显降低(P0.05)。与模型组比较,儿茶素高剂量组可显著减少挠鼻次数,降低RANTES表达量(P0.05);儿茶素各剂量组均可明显减少打喷嚏次数和降低MCP-1表达量(P0.05);儿茶素中、高剂量组可显著降低鼻黏膜RORγt m RNA表达水平(P0.05),提高Foxp3 m RNA表达水平(P0.05)。结论儿茶素可有效缓解变应性鼻炎小鼠鼻黏膜炎性症状,可能与恢复Th17/Treg平衡有关。     

针灸对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖及Star5-Foxp3通路影响

目的探索针灸“大椎穴”调节肿瘤免疫抑制的作用机制。方法将48只雄性Balb／c小鼠随机分为电针组、艾灸组、荷瘤组和正常组，每组12只。在小鼠左腋皮下接种H22肿瘤细胞，建立肿瘤模型。分别采用电针、艾灸大椎治疗。观察生存率、抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数。AlamarBlue法检测ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖，增殖能力以还原值表示。RT—PCR方法检测脾淋巴细胞Foxp3 mRNA、Stat5a mRNA、Stat5b mRNA以及胸腺Foxp3 mRNA表达。结果艾灸组荷瘤小鼠生存率高于荷瘤组，但差异无统计学意义（P〉0．05）：艾灸组抑瘤率为39．3％：电针组与艾灸组荷瘤小鼠脾脏指数较荷瘤组升高（P〈0．05）：电针组与艾灸组荷瘤小鼠胸腺指数较荷瘤组胸腺指数升高，但差异无统计学意义（P〉0．05）。AlamarBlue法检测电针组、艾灸组、荷瘤组小鼠脾淋巴细胞增殖还原值均高于正常组（P〈0．05）：艾灸组还原值高于荷瘤组（P〈0.05）：荷瘤组小鼠脾淋巴细胞Foxp3 mRNA、Stat5a mRNA、Stat5b mRNA表达较正常组增高（P〈0．05）：艾灸组、电针组小鼠脾淋巴细胞Foxp3 mRNA、Stat5a mRNA、Stat5b mRNA较荷瘤组表达降低（P〈0．05）：荷瘤组小鼠胸腺Foxp3 mRNA表达较正常组增高（P〈0．05）：艾灸组小鼠胸腺Foxp3 mRNA表达较荷瘤组降低（P〈0．05）：电针组小鼠胸腺Foxp3 mRNA表达较荷瘤组降低，但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论艾灸治疗具有抑制H22荷瘤小鼠瘤体生长、提高H22荷瘤小鼠生存率的趋势：电针和艾灸治疗能提高H22荷瘤小鼠脾脏指数、增强H22荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖能力：针灸调节肿瘤免疫抑制效应与电针和艾灸下调H22荷瘤小鼠脾淋巴细胞Foxp3 mRNA、Stat5a mRNA、Stat5b mRNA表达，胸腺Foxp3 mRNA表达有关。     

川芎嗪对急性放射损伤小鼠骨髓碱性成纤维细胞生长因子及其受体表达水平的影响

目的 探讨急性放射损伤小鼠骨髓碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及其受体(basic fibroblast growth factor receptor,bFGFR)的表达及川芎嗪对其影响。方法 56只清洁级昆明小鼠,随机分为3组：正常组,急性放射损伤对照组,川芎嗪组。将对照组和川芎嗪组小鼠用6．0Gy^60Coγ射线一次性全身均匀照射,吸收剂量率为0．56Gy／min。照射后即分别胃饲生理盐水0．2ml／只及川芎嗪2mg／只,每天2次,连续13天。分别于照射后第3、7、14天颈椎脱臼法处死小鼠,取双侧股骨骨髓细胞制备单个核细胞(bone marrow mono-nuclear cells,BMMNC)悬液,用流式细胞仪检测小鼠BMMNC表面bFGFR的表达水平;取单侧肱骨切片后用免疫组织化学SABC—AP法检测小鼠骨髓组织中bFGF的表达水平。结果 急性放射损伤后第3、7、14天,对照组、川芎嗪组小鼠骨髓组织中bFGF表达显著低于正常组(P<0．05或P<0．01),同一时间点川芎嗪组bFGF、bFGFR的表达均显著高于对照组(P<0．05或P<0．01)。结论 川芎嗪通过促进骨髓组织中bFGF、BMMNC表面bFGFR的表达加速骨髓造血微环境的修复,可能是川芎嗪促进急性放射损伤后骨髓造血重建机制之一。     

针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠Th17/Treg细胞及其细胞因子表达影响的研究

目的:观察针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠的影响,并探讨针灸对调节性T细胞(Treg)及辅助性T细胞17 (Th17)分化及其细胞因子表达的调控作用。方法:将MRL/lpr狼疮性肾炎模型小鼠随机分为针灸组、地塞米松组、模型组,每组10只。另取10只C57BL/6小鼠作为正常组。采用HE染色法检测小鼠肾脏病理改变;PI单染流式细胞术检测各组小鼠肾脏组织中Th17/Treg比例;采用q RT-PCR和ELISA法检测肾脏中叉头样转录因子3 (Foxp3)、维A酸相关孤儿受体-γt (RORγt)及白细胞介素-17 (IL-17)的水平。结果:与正常组比较,模型组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及RORγt、IL-17蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),Foxp3蛋白及mRNA表达水平均下降(P<0.05)。与模型组比较,地塞米松组、针灸组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及肾脏组织RORγt、IL-17蛋白及m RNA表达水平均显著降低(P<0.05);Foxp3蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。结论:针灸能显著减少狼疮性肾炎小鼠肾脏RORγt及IL-17表达,增加Foxp3水平,调控Th17/Treg比例,改善肾脏病理改变,从而对MRL/lpr狼疮肾炎小鼠肾脏起到保护作用。     

不同体质MRL/lpr狼疮鼠RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白质的表达

目的:观察不同体质MRL/lpr雌性狼疮鼠RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白质的表达情况,证实狼疮鼠体质差异的物质基础。方法:将3月龄狼疮鼠按体质分为常体、热体、寒体,饲养1月后,采用RT-PCT、Western Blot方法检测不同组别狼疮鼠血清ds-DNA,肾脏RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白质的表达。结果:不同体质MRL/lpr雌性狼疮鼠间RORγt mRNA的表达无明显差异,RORγt蛋白质的表达、Foxp3 mRNA及蛋白质的表达存在明显差异。MRL/lpr热体组小鼠RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白水平均偏低。结论:MRL/lpr狼疮鼠体质差异与RORγt、Foxp3基因及蛋白质的表达有关。     

补骨脂素通过调控CD4~+T细胞分化抑制RAW264.7向破骨细胞分化和骨吸收

探讨补骨脂素(psoralen)是否通过调控CD4~+T细胞分化抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化及骨吸收作用,初步阐明补骨脂素抗骨质疏松作用的骨免疫学机制。采用免疫磁珠分选法从Balb/c小鼠脾脏细胞分离制备CD4~+T细胞,分为空白组和补骨脂素组接种于24孔板,加入补骨脂素诱导培养3 d,第4天收集各组细胞用于共培养实验。共培养实验分为RAW264.7细胞组(a组)、RAW264.7细胞~+psoralen-CD~+4T细胞组(b组)、RAW264.7细胞~+补骨脂素组(终浓度为10μmol·L-1,c组)、RAW264.7细胞~+psoralen+CD4~+T细胞组(d组)等4组,共培养5 d后,TRAP染色检测破骨细胞数目,共培养8 d后,骨片用甲苯胺蓝染色评价骨吸收情况,RT-PCR检测CD4~+T细胞RORγt,Foxp3,IL-17,TNF-α,TGF-β和IL-10等基因的表达,以及破骨细胞相关基因MMP-9,TRAP和Cat-K的表达,ELISA试剂盒检测IL-17,TNF-α,TGF-β和IL-10等细胞因子的水平。结果显示,补骨脂素显著促进CD4~+T细胞的Foxp3,TGF-β和IL-10的表达,抑制CD4~+T细胞的RORγt,IL-17和TNF-α的表达。psoralen-CD~+4T细胞能显著促进RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化,psoralen~+CD4~+T细胞能显著抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化及骨吸收作用。补骨脂素通过促进CD4~+T细胞中CD4~+CD25~+Treg/Th17平衡向CD4~+CD25~+Treg发展,从而抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化及骨吸收作用。     

补肾温阳法诱导Foxp3+调节性T细胞在哮喘免疫治疗中的作用

目的探讨补肾温阳中药通过诱导转录因子Foxp3活化、调控调节性T细胞,而发挥对变应性哮喘的免疫治疗作用。方法80只BALB/c(白变种实验室老鼠)小鼠随机分成4组:对照组、哮喘组、中药干预组及中药+抗体干预组,用屋尘螨(HDM)变应原经腹腔注射致敏、滴鼻激发复制变应性哮喘样肺部炎症模型。中药干预组、中药+抗体干预组每只小鼠给予补肾温阳中药(用淫羊藿、巴戟天免煎颗粒配制500 ul灌胃qod,对照组给予500 ul NS。观察各组支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数结果;检测各组BALF上清细胞因子IL-10、IFN-γ、TGF-β1浓度及血清Ig E水平;分离小鼠脾脏细胞,以流式细胞仪方法检测CD4+CD25+Treg细胞;用实时荧光定量PCR检测Foxp3-m RNA。结果正常对照组、中药干预组BALF中IL-10、IFN-γ、TGF-β1浓度分别高于哮喘模型组(P0.01)和中药+抗体干预组(P0.05);中药干预组BALF中IL-10、IFN-γ、TGF-β1浓度低于正常对照组(P0.05);哮喘模型组BALF上清细胞因子(IL-10、IFN-γ、TGF-β1)浓度高于中药+抗体干预组(P0.05)。血清Ig E水平正常对照组、中药干预组均分别低于哮喘模型组(均为P0.01)及中药+抗体干预组(均为P0.05);中药干预组血清Ig E水平低于正常对照组(P0.05)。哮喘模型组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、Foxp3-m RNA表达水平较正常对照组、中药干预组均明显减低,差异有统计学意义(分别为P0.01,P0.05)。与哮喘模型组、中药+抗体干预组比较,中药干预组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、Foxp3-m RNA表达水平显著增高,差异有统计学意义(均为P0.05)。与正常对照组比较,中药干预组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、Foxp3-m RNA表达水平较低,差异有统计学意义(P0.01)。与哮喘模型组比较,中药+抗体干预组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、Foxp3-m RNA表达水平降低,差异有统计学意义(均为P0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞、Foxp3-m RNA、细胞因子(IL-10、IFN-γ、TGF-β1)均参与了支气管哮喘的发病过程,补肾温阳中药可通过上调CD4+CD25+调节性T细胞数量、诱导Foxp3-m RNA的表达与活化、降低血清Ig E水平及增加IL-10、IFN-γ、TGF-β1含量等机制来达到减轻哮喘炎症的作用。     

疏肝平喘方通过转化生长因子-β1/Smad信号通路对哮喘小鼠免疫平衡的影响

目的：阐明疏肝平喘方对哮喘小鼠维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）/叉头框蛋白P3（Foxp3）以及辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）平衡的干预作用,对转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad信号通路的影响。方法：建立空白对照组、哮喘模型组、疏肝平喘组及地塞米松组实验动物模型。酶联免疫吸附试验检测肺组织匀浆中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-17A（IL-17A）和TGF-β1水平,流式细胞仪检测肺组织中Th17/Treg细胞量,蛋白质印迹法检测肺组织中RORγt、Foxp3的蛋白表达,以及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺组织TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA表达水平。结果：疏肝平喘方能够降低哮喘小鼠肺组织IL-6、TGF-β1,与地塞米松比较,差异均有统计学意义（均P<0.05）,调节IL-10、IL-17A,与地塞米松组相当（均P>0.05）;Th17/Treg细胞量,RORγt、Foxp3的蛋白表达量,与地塞米松相当（均P>0.05）。与哮喘模型组比较,疏肝平喘方组、地塞米松组的TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA表达水平下降,而Smad7的mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论：疏肝平喘方在改善气道炎症方面,和地塞米松疗效相当,是通过TGF-β1/Smad信号通路,从而调节哮喘小鼠的Th17/Treg免疫平衡。     

龙胆泻肝汤对变应性接触性皮炎模型小鼠Treg/Th17细胞平衡调节作用的实验研究

目的:观察变应性接触性皮炎Treg/Th17细胞平衡的变化,探讨龙胆泻肝汤治疗变应性接触性皮炎的部分干预机制。方法:将40只小白鼠随机分为4组:空白组、模型组、龙胆泻肝汤组、氢化可的松琥珀酸钠组,每组10只。采用DNCB皮肤涂抹方法制备小鼠背部ACD模型。模型复制成功后,龙胆泻肝汤组、氢化可的松琥珀酸钠组小鼠均按照成人2倍等效剂量灌胃,连续给药21 d,空白组、模型组给予等量蒸馏水灌胃。实验结束后,取小鼠致敏部位皮肤,对皮肤组织中Foxp3、RORγt、IL-17 mRNA及蛋白的表达水平进行检测。结果:与空白对照组比较,模型对照组、西药组、龙胆泻肝汤组小鼠皮肤组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01);而IL-17、RORγt mRNA及蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型对照组比较,西药组和龙胆泻肝汤组小鼠皮肤组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P0.01);而IL-17、RORγt mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论:Treg/Th17细胞失衡可能是变应性接触性皮炎的发病机制之一,而龙胆泻肝汤可能就是通过作用于该靶点,调节Treg/Th17细胞平衡,而实现其对变应性接触性皮炎的治疗作用。     

氧化苦参碱对CIA大鼠Treg和Th17细胞的作用

目的探讨氧化苦参碱(OMT)对胶原诱导性关节炎大鼠Treg和Th17细胞的影响。方法构建牛II型胶原和完全弗氏佐剂诱导的SD大鼠关节炎模型(CIA),腹腔注射不同剂量的氧化苦参碱进行治疗。检测CIA大鼠的关节肿胀度及关节炎评分;提取脾细胞,采用RT-PCR法检测Foxp3和RORγt mRNA的转录水平,Western-blot技术测定Foxp3和RORγt的蛋白表达。结果氧化苦参碱明显降低CIA大鼠的足爪肿胀度及关节炎指数,缓解其关节滑膜的增生,促进Foxp3 mRNA的转录及其蛋白的表达而抑制RORγt mRNA的转录及其蛋白表达。结论氧化苦参碱可调节Treg和Th17细胞失衡而治疗类风湿关节炎。     

健脾药对免疫介导再生障碍性贫血小鼠IL-3、IFN-γ影响的实验研究

目的：检测免疫介导再生障碍性贫血(简称再障)小鼠骨髓造血细胞在含健脾药血清的液体培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度，探讨健脾药治疗再障的作用机理。方法：用健脾药灌喂SD大鼠，抽取、制备含中药血清；Balb／C小鼠经^60Co5．5Gyγ射线照射后由尾静脉输入取自DBA／2小鼠胸腺淋巴结混合细胞悬液形成免疫介导再障模型。在含健脾药血清的液体培养体系中培养再障小鼠骨髓造血细胞，检测培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度。结果：健脾药对再障小鼠IL-3、IFN-γ的总量无明显影响。结论：健脾药可能通过使局部IFN-γ浓度降低进而影响造血干／祖细胞增殖、分化。     

玉屏风颗粒对变应性鼻炎大鼠Th17/Treg平衡及相关细胞因子的影响

目的研究玉屏风颗粒对变应性大鼠Th17/Treg免疫平衡的影响。方法采用OVA制备AR大鼠模型,大鼠随机分为正常组、模型组、氯雷他定组、玉屏风颗粒组(12、6 g/kg)。各组干预后评估大鼠AR行为学总分,HE和AB-PAS染色观察鼻黏膜组织病变情况,ELISA检测AR大鼠血清中的IL-17、TGF-β1水平,RT-PCR检测鼻黏膜组织中RORγt mRNA、Foxp3 mRNA的表达,Western blot检测鼻黏膜组织中RORγt、Foxp3蛋白表达。结果与模型组比较,玉屏风颗粒组(12、6 g/kg)大鼠挠鼻次数、打喷嚏次数等行为学总分降低(P0.05);上皮细胞结构完整、少量炎症细胞浸润、杯状细胞化生明显减少;血清中的IL-17水平降低、TGF-β1水平升高(P0.05);鼻黏膜RORγt mRNA表达降低、Foxp3 mRNA表达升高(P0.05);鼻黏膜组织RORγt/Foxp3蛋白表达比例升高(P0.05)。结论玉屏风颗粒能明显改善变应性大鼠鼻黏膜炎性症状,其作用机制可能与调节Th17/Treg平衡及相关细胞因子有关。     

制首乌总多糖对骨髓抑制贫血小鼠脾脏促红细胞生成素受体和转录因子 GATA-1 mRNA 表达的影响

目的观察制首乌总多糖(PPS)对放、化疗所致骨髓抑制贫血小鼠脾脏促红细胞生成素受体(EpoR)及转录因子GATA-1 mRNA表达的影响,探讨PPS补血作用的分子机制。方法建立骨髓抑制贫血小鼠模型,提取PPS,经ip给药,观察其对骨髓抑制贫血小鼠外周血及脾脏EpoR和GATA-1 mRNA表达的影响。结果PPS能促进骨髓抑制贫血小鼠外周血象恢复,并明显上调脾脏EpoR和GATA-1 mRNA的表达。结论PPS能通过促进EpoR和GATA-1 mRNA的表达,从而促进骨髓抑制贫血小鼠造血功能的恢复。     

黄芪注射液对小鼠4T1乳腺癌细胞移植瘤CyclinD1、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响

目的:通过构建小鼠4T1乳腺癌细胞移植瘤Balb/c小鼠模型,探讨黄芪注射液对移植瘤Cyclin1、Bcl-2及Caspase-3蛋白表达的影响。方法:体外培养小鼠乳腺癌4T1细胞,注射接种于Balb/c小鼠右侧腹股沟皮下构建乳腺癌移植瘤模型。50只成瘤小鼠随机分为模型对照组、黄芪注射液2. 60 g/kg、5. 20 g/kg、10. 40 g/kg组和顺铂2. 5×10-3g/kg组。观察黄芪注射液对移植瘤生长的影响; HE染色观察移植瘤形态改变;流式细胞仪分析移植瘤细胞周期;免疫组织化学法检测移植瘤组织细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达; Western Blot法检测移植瘤组织Cyclin D1蛋白及凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3蛋白水平。结果:不同浓度黄芩注射液对小鼠乳腺癌移植瘤生长有显著抑制作用,黄芪注射液2. 6 g/kg、5. 2 g/kg、10. 4 g/kg抑瘤率分别为9. 1%、27. 3%、45. 5%。与模型对照组相比较,黄芪注射液5. 2 g/kg、10. 4 g/kg组及顺铂组移植瘤体积和体质量明显降低(P <0. 05或P <0. 01),G1期细胞比例明显增高,S期细胞比例显著降低(P <0. 05或P <0. 01)。黄芪注射液2. 6 g/kg、5. 2 g/kg、10. 4 g/kg组、顺铂组移植瘤组织Cyclin D1阳性区域吸光度值显著降低,Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平明显下调,而Cleaved caspase-3蛋白水平显著上调(P <0. 05或P <0. 01)。结论:黄芪注射液对小鼠4T1乳腺癌细胞移植瘤生长有显著抑制作用,其机制与黄芪注射液下调Cyclin D1蛋白表达,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖有关。