益气活血中药对脑出血大鼠脑组织Tie-2受体蛋白表达的影响

目的测定补阳还五汤及其益气组分、活血组分干预后脑出血大鼠脑损伤区组织Tie-2的表达,初步探讨益气活血中药治疗脑出血的作用机制。方法SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、益气活血组、益气组和活血组。用Ⅶ型胶原酶诱导脑出血大鼠模型。各组分别灌服相应益气活血法代表方补阳还五汤全方及其益气组分、活血组分药物,于术后1、4、7、14、21和28d分别检测血肿侧脑组织Tie-2的表达。结果正常组、假手术组各时间点Tie-2的表达未见明显阳性信号;模型组、益气组、活血组及益气活血组脑出血后1d即有Tie-2表达,模型组在21d达到高峰、随后下降,益气组、活血组及益气活血组表达高峰时间提前至14d,益气活血组各个时间点表达均高于同时间点其它组。结论益气活血中药可能通过使脑出血血肿周围脑组织Tie-2受体的表达增强,而促进脑出血损伤区血管新生和成熟的作用,并促进脑出血大鼠神经功能的恢复。     

脑脉通对老龄大鼠脑缺血/再灌注后Ang/Tie系统表达的影响

目的:从血管生成素(Ang)及酪氨酸激酶受体(Tie)表达方面揭示脑脉通促进老龄大鼠脑缺血/再灌注血管生成的作用机制。方法:将SD雄性老龄大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、脑脉通组,运用免疫组化和原位杂交等方法测定Ang-1、Ang-2,及其受体Tie-2的蛋白与基因表达。结果:脑脉通组各时间点Ang-1、Ang-2、Tie-2蛋白表达均较模型组增强(P<0.05,P<0.01)。脑脉通组缺血3h及脑缺血/再灌注3d、6d、12dAng-2 mRNA以及各时间点Ang-1 mRNA、Tie-2 mRNA表达水平均较模型组增强(P<0.01)。结论:脑脉通促进老年脑缺血/再灌注微血管生成的机制可能与提高Ang/Tie系统蛋白和基因表达有关。     

益气活血中药对脑出血大鼠脑组织促血管生成素-1蛋白表达的影响

目的:通过研究益气活血中药方剂对脑出血大鼠脑损伤区组织促血管生成素-1(Ang-1)表达的影响,探讨益气活血法治疗脑出血的作用机制。方法:155只SD大鼠被随机分为正常组5只,假手术组、模型组、益气活血组、益气组和活血组各30只。用Ⅶ型胶原酶诱导脑出血大鼠模型。各组相应灌服益气活血法代表方补阳还五汤全方及其益气组分、活血组分药物。各组于术后1、4、7、14、21和28d各取5只大鼠,采用Western blotting方法检测Ang-1的表达,结果进行光密度扫描半定量分析。结果:正常组及假手术组不同时间点Ang-1表达未见明显阳性信号;模型组、益气组、活血组及益气活血组脑出血后1d即有Ang-1表达,模型组至21d达到高峰,随后开始下降,益气组、活血组及益气活血组表达高峰时间提前至14d,活血组及益气活血组至21d仍维持一定的表达水平;各个时间点益气活血组表达均高于其他组。结论:益气活血中药可能通过使脑出血血肿周围脑组织Ang-1的表达增强,而促进脑出血损伤区血管新生和成熟,并促进脑出血大鼠神经功能的恢复。     

补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠TLR4表达的影响

目的探讨补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠脑组织TLR4表达的影响。方法 72只大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组,每组按给药后7、14、21 d 3个时间点再各分3组,用免疫组化、Western blot、RT-PCR法检测各组不同时间点TLR4的蛋白和基因表达。结果模型组和补阳还五汤组各时间点TLR4蛋白和mRNA表达均高于假手术组(P<0.05),补阳还五汤组在第7、14天TLR4蛋白表达明显低于模型组,但TLR4mRNA水平在第7天、14天却明显高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论补阳还五汤通过调节缺血后脑组织TLR4的表达可能是其治疗脑缺血的作用机制之一。     

补阳还五汤对脑出血大鼠血肿周围新生血管整合素αvβ3和β3亚基表达的影响

目的 通过观察益气活血中药补阳还五汤对脑出血大鼠血肿周围新生血管内皮整合素αvβ3和整合素β3亚基表达的影响,探讨益气活血法治疗脑出血的作用机制。方法 150只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、益气组、活血组、益气活血组（补阳还五汤）,通过立体定位向脑内苍白球注入Ⅶ型胶原酶0.5 U建立脑出血模型。假手术和模型组灌服蒸馏水,余各组灌服补阳还五汤及其益气组分、活血组分药物。运用免疫组织化学方法,并对结果进行半定量分析,检测各组术后3、7、14、21、28d各时点血肿周围新生血管内皮整合素αvβ3和整合素β3亚基的时空表达。结果 除假手术组,各组新生血管内皮整合素αvβ3和β3亚基的表达趋势大致相近,7d时各组表达达到高峰,益气活血组高峰延长至14 d,且各时点的表达较模型组增高(P＜0.05)。结论 补阳还五汤通过益气活血作用,能调节脑出血大鼠血肿周围新生血管整合素αvβ3和β3亚基的表达;通过参与脑出血后的血管新生,影响微血管系统重建,从而达到修复损伤组织的目的。     

熄风通络方与补阳还五汤对大鼠脑缺血神经细胞凋亡调控基因(bcl-2、bax)的影响

目的:比较熄风通络方与补阳还五汤对大鼠脑缺血神经细胞凋亡调控基因bcl-2、bax的影响.方法:造成大鼠全脑缺血后,分别予以熄风通络方与补阳还五汤治疗,于缺血后24小时检测海马区细胞凋亡调控基因bcl-2、bax的表达量(定性与定量).结果:模型组bcl-2 mRNA的表达较正常对照组与假手术组明显降低,而熄风通络方组呈过表达,高于正常对照组与假手术组,也高于补阳还五汤组,差异均有统计学意义(P<0.01);模型组bax mRNA表达量则较正常组与假手术组增高,而熄风通络方组明显低于模型组,也低于补阳还五汤组,但高于正常对照组与假手术组,差异均有统计学意义(P<0.01).结论:熄风通络方防治大鼠脑缺血的可能机制是影响细胞凋亡调控基因bcl-2、bax的表达,其对凋亡调控基因的影响优于补阳还五汤.     

益气活血法对脑出血大鼠脑内VEGF及其受体Flt-1和Flk-1 mRNA表达的影响

目的观察益气活血对脑出血大鼠脑内损伤区血管内皮生长因子（VEGF）mRNA及其受体Flt—1 mRNA和Flk—1 mRNA表达的影响，探讨益气活血法的作用机制。方法通过立体定位向脑内苍白球注入Ⅶ型胶原酶0．5U建立脑出血模型。SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、益气活血组、益气组、活血组，分别灌服益气活血法代表方补阳还五汤全方及其益气组分、活血组分药物（剂量为临床70kg成人用量的3倍），运用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）检测正常组及其它各组于造模术后1、4、7、14、21、28d各时间点VEGFmRNA、Flt—1 mRNA和Flk—1 mRNA的动态变化。结果正常组及假手术组不同时间点VEGFmR．NA、Flt—1 mRNA和Flk—1 mRNA均未见明显表达；模型组VEGFmRNA、Flt-1 mRNA和Flk—1 mRNA在脑出血后1d即开始表达，21d达到高峰，然后逐渐减弱；益气活血组VEGFmRNA、Flt—1 mRNA和Flk—1 mRNA表达在7～21d明显高于其他各组，VEGFmRNA和Flk—1 mRNA表达在术后14d达高峰，Flt—1 mRNA在术后21d达高峰。结论益气活血法能促进脑出血大鼠脑内VEGFmRNA、Flt—1 mRNA和Flk—1 mRNA的表达而调整血管新生过程，可能是其促进组织修复的机制之一。     

补阳还五汤对脑出血大鼠模型相关蛋白表达的作用

目的:研究补阳还五汤对脑出血大鼠模型基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、谷氨酸(Glu)及PI3K、AKT表达的作用。方法:选取90只SD大鼠,以随机抽签法分成模型组、正常对照组及补阳还五汤组。模型组与补阳还五汤组建立脑出血模型,造模后第2 d。补阳还五汤组行补阳还五汤灌胃,模型组行生理盐水灌胃,给药14 d。比较3组MMP-9、TIMP-1、Glu,脑组织PI3K、AKT以及Bcl-2、BAX蛋白表达。结果:补阳还五汤组、模型组的MMP-9、TIMP-1、Glu均高于正常对照组,且补阳还五汤组MMP-9、Glu低于模型组,而TIMP-1高于模型组(均P<0.05);补阳还五汤组、模型组脑组织PI3K、AKT蛋白表达较正常对照组更高,补阳还五汤组脑组织PI3K、AKT蛋白表达较模型组更高(均P<0.05);补阳还五汤组、模型组脑组织Bcl-2、BAX蛋白表达均高于模型组,补阳还五汤组脑组织Bcl-2、BAX蛋白表达较模型组更高(均P<0.05)。结论:补阳还五汤可改善脑出血大鼠MMP-9、TIMP-1、Glu,可由激活PI3K/AKT信号转导通路,调控Bcl-2、BAX表达,继而发挥保护脑组织作用。     

活血、利水中药对脑出血大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α、核转录因子-κB及水通道蛋白-4表达的影响

目的探讨活血、利水中药对脑出血急性期大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-al-pha,TNF-α)、核转录因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)及水通道蛋白-4(aquaporin-4,AQP-4)表达的影响及其治疗脑水肿的可能机制。方法自体股动脉血注入脑尾状核建立大鼠脑出血模型,SD雄性大鼠随机分为假手术组(42只)、模型组(42只)、活血组(42只)和利水组(42只),其中活血组予活血中药复方(每毫升含生药量分别为:大黄0.2g、水蛭0.02g、三七0.3g)10mL/kg灌胃,1次/日;利水组予利水中药复方(每毫升含生药量分别为:茯苓0.2g、泽泻0.2g、石菖蒲0.2g)10mL/kg灌胃,1次/日。模型组和假手术组予生理盐水4.0mL/kg灌胃,1次/日。1、3、5d取材,免疫组织化学染色法和实时荧光定量PCR法检测大鼠脑组织TNF-α、NF-κB p65和AQP-4mRNA和蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠各时间点脑组织TNF-α、NF-κBp65和AQP-4蛋白及mRNA表达明显增加(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,活血组和利水组各时间点AQP-4和TNF-α表达显著降低(P<0.05);活血组NF-κB p65表达亦明显低于模型组(P<0.05),利水组NF-κB p65表达差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,活血组和利水组各时间点脑组织含水量均有不同程度的降低,活血组与利水组间比较,差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论活血、利水中药均可抑制炎性因子TNF-α的释放,下调AQP-4的表达,减轻大鼠血肿周围脑水肿,但作用强度和作用环节有差异。     

基于Ang/Tie-2信号通路研究补肾活血方导法调控大鼠种植窗期子宫组织血管生成的助孕机制＊

目的 基于Ang/Tie-2信号通路，探讨补肾活血方孕前导法给药调控肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫组织血管生成的助孕机制。方法 阴道涂片HE染色法观察，选取动情周期规律的健康未交配雌性SD大鼠60只，随机分为5组：空白组、模型组、阿司匹林组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组，动情前期时入组，分组给药并合笼，于妊娠第5天处死，腹主动脉采血后，迅速剖取子宫并制片，采用光镜观察各组大鼠子宫内膜组织形态，采用免疫组化法（IHC）检测各组大鼠子宫组织中VEGF、FLK-1表达水平及螺旋动脉数量，采用Western-Blot检测各组大鼠子宫组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2蛋白表达水平，采用Real-Time PCR检测各组大鼠子宫组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2 mRNA表达水平。结果 给药组能明显改善肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫内膜组织形态，并接近空白组水平；模型组大鼠子宫湿重、子宫脏器指数、螺旋动脉数量、VEGF、FLK-1及子宫组织Tie-2蛋白表达、Ang-1mRNA、Ang-2mRNA和Tie-2mRNA表达等均较空白组降低（P < 0.05）；补肾活血方高剂量组大鼠妊娠第5天子宫组织VEGF、FLK-1、螺旋动脉数量、Ang-1蛋白、Tie-2蛋白及Ang-1mRNA、Tie-2mRNA表达量较模型组明显增加（P< 0.01）。结论 补肾活血方孕前导法给药，改善肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫内膜组织形态，促进子宫组织血管生成，改善组织血瘀状态，促进胚胎着床，可能与其提高大鼠子宫组织VEGF、FLK-1、Ang-1、Tie-2表达水平，并维持Ang-2正常表达有关。     

头针透刺对脑出血大鼠脑组织ICAM-1表达影响的研究

目的:通过对细胞间粘附因子( ICAM -1)的研究探讨头穴透刺对急性脑出血(ICH)炎症反应的干预作用.方法:按完全随机设计将96只健康雄性Wistar大鼠平均分为模型组、针刺组和西药组.每组观察6h、24 h、48 h、72 h和168 h共5个时间点,每个时间点6只大鼠,另设6只大鼠作为空白对照组.制备ICH大鼠模型,采用免疫组化技术观察不同时间点头穴透刺对ICH大鼠脑组织ICAM -1表达的影响.结果:针刺组大鼠脑内ICAM -1表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05).结论:针刺可抑制ICAM -1表达及其所致的继发性脑损伤.     

头针透刺对脑出血大鼠脑组织IL-6表达影响的研究

目的:通过对白介素-6(IL-6)蛋白表达变化的观察,探讨头穴透刺对急性脑出血(Intracere-bral hemorrage,ICH)炎症反应的干预作用。方法:将96只健康雄性Wistar大鼠按完全随机方法平均分为模型组、针刺组和西药组。每组再按照6h、24h、48h、72h和168h分为5个亚组,每个亚组6只大鼠,另设6只大鼠作为空白对照组。制备ICH大鼠模型,采用免疫组化技术观察不同时间点头穴透刺对ICH大鼠脑组织IL-6蛋白表达的影响。结果:针刺组大鼠脑内IL-6表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较具有显著性差异(P0.05)。结论:针刺可抑制IL-6蛋白表达,减轻脑出血后炎症反应所致的继发性脑损伤。     

补阳还五汤含药鼠血清对血管平滑肌细胞Rho激酶及TFmRNA、基质金属蛋白酶MMP-2mRNA、MMP-9mRNA表达的影响

目的通过运用益气活血法的代表方剂补阳还五汤对血管平滑肌细胞的干预,观察各组血管平滑肌细胞Rho激酶及TFmRNA、基质金属蛋白酶MMP-2mRNA、MMP-9mRNA的表达等指标的变化。方法将30只SD大鼠随机分为3组,一组为正常对照组,另两组为补阳还五汤低剂量对照组(10 g·kg^-1)和补阳还五汤高剂量对照组(20 g·kg^-1);AS模型大鼠30只随机分为模型组,补阳还五汤低剂量治疗组(10 g·kg^-1)和补阳还五汤高剂量治疗组(20 g·kg^-1)。给SD正常大鼠和AS模型大鼠口服不同浓度的补阳还五汤以制备含药大鼠血清,并在用含药大鼠血清保护体外培养的血管平滑肌细胞之后,检测血管平滑肌细胞Rho激酶mRNA、TFmRNA、MMP-2mRNA、MMP-9mRNA的表达。结果与模型对照组相比,各组补阳还五汤高剂量治疗组血管平滑肌细胞Rho激酶、TFmRNA、MMP-2mRNA、MMP-9mRNA的表达均降低。差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论补阳还五汤含药鼠血清可以通过抑制Rho激酶的活性,下调ROCK1、TF、MMP-2、MMP-9的mRNA的表达水平抑制血管平滑肌细胞增殖,从而抑制AS病变的形成和发展。     

生肌象皮膏对糖尿病溃疡大鼠Ang/Tie-2通路的影响

[目的]通过对糖尿病溃疡组织中酪氨酸激酶受体(Tie-2)、血管紧张素Ⅰ(Ang-1)及血管紧张素Ⅱ(Ang-2)mRNA转录水平的动态观察,探讨生肌象皮膏对糖尿病溃疡大鼠Ang/Tie-2通路的影响。[方法]首先应用链脲佐菌素(STZ)经大鼠尾静脉注射及背部打孔法制备2型糖尿病难愈性溃疡动物模型,按照血糖和体质量分层随机分为糖尿病对照组、生肌象皮膏组、凡士林组及空白对照组。生肌象皮膏组采用生肌象皮膏纱条于溃疡处外敷,凡士林组用凡士林纱条外敷,空白对照组、糖尿病对照组均以生理盐水纱条外敷,各组分别于创伤后1、3、7、14、21 d分别处死部分大鼠,并取溃疡组织,应用聚合酶链式反应(PCR)法检测各组大鼠溃疡组织中Ang-1、Ang-2和Tie-2 m RNA的转录水平。[结果]生肌象皮膏组各时间点肉芽组织中Ang-1、Tie-2蛋白表达水平均高于其余各组,Ang-2表达水平均低于其余各组(P0.05)。[结论]生肌象皮膏可能通过增加创面肉芽组织中Ang-1,Tie-2的表达水平,抑制Ang-2表达方式,促进糖尿病大鼠溃疡面血管新生,加快糖尿病溃疡愈合。     

益气活血法对脑出血大鼠脑内凝血酶敏感蛋白-2表达的影响

目的观察益气活血法对脑出血大鼠脑内损伤区凝血酶敏感蛋白-2（TSP-2）的影响，探讨益气活血法治疗脑出血的机制。方法sD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、益气活血组、益气组和活血组；采用Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型，再对相应的组分别灌服补阳还五汤及该方的益气药和活血药，在不同的时间点取脑组织并用免疫印迹分析鼠脑TSP-2的表达。结果正常组和假手术组不同时间点TSP-2表达无明显变化；模型组TSP-2在脑出血后1d即开始表达，1～7d各时间点表达无明显差异，7～28d表达呈逐渐上升趋势，并在28d达高峰；益气活血组TSP-2表达14～21d时上升趋势较其它三组缓慢，在21d表达较其它三组弱，在28d表达较其它三组强。结论益气活血法有可能通过影响脑出血后损伤区TSP-2的表达，在受损脑组织进行血管重建的阶段，抑制TSP-2的表达，降低其对血管新生的抑制作用，延长血管新生的时间，并在血管重建后期上调TSP-2表达，抑制血管过度增殖，以保证整个血管新生过程的顺利和效率。     

栀子总环烯醚萜苷对脑出血大鼠内皮屏障的影响

目的:探讨栀子总环烯醚萜苷对脑出血大鼠内皮屏障的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组和栀子总环烯醚萜苷(30、15和5mg/kg)组,采用自体血注入诱发大鼠脑出血模型,术后24、48、72和120h时间点各组各取10只大鼠脑组织标本,采用免疫组织化学染色检测脑出血周围血肿组织中内皮屏障抗原(endothelial barrier antigen,EBA)和血管内皮整合素αVβ3(αVβ3-Integrin)表达,ELISA法测定促血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang-1)和血栓调解蛋白(Thrombomodulin,TM)含量变化。结果:与假手术组比较,术后24～120h模型大鼠脑血肿周围组织中EBA免疫消失区面积增多,整合素αVβ3平均光密度值增加,Ang-1和TM浓度升高。与模型组比较,30mg/kg栀子总环烯醚萜苷组在术后24～120h各时间点EBA免疫消失区面积和整合素αVβ3表达降低,Ang-1和TM浓度降低。15mg/kg栀子总环烯醚萜苷组仅在术后24～72h有效。结论:栀子总环烯醚萜苷可保护或修复内皮屏障,减少EBA消失区面积和整合素αVβ3表达,降低Ang-1和TM水平。     

活血及利水中药对脑出血大鼠脑水肿及PAR-1表达的影响

目的:探讨活血、利水中药对脑出血大鼠蛋白酶激活受体-1(PAR-1)表达的影响。方法:168只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、活血组和利水组。采用自体不凝血注入尾状核法制作大鼠脑出血模型,分别于术后1、3、5d 3个时间点取材,组织干湿重法计算脑含水量,免疫组织化学法和Real-time PCR法检测脑组织PAR-1蛋白和基因的表达。结果:与假手术组相比,模型组各时间点大鼠脑组织含水量增多(P0.01),PAR-1蛋白和基因的表达均明显升高(P0.01);活血组和利水组大鼠脑组织含水量及PAR-1的表达较模型组降低(P0.05),且活血方优于利水方(P0.05)。结论:活血、利水中药均能减轻脑出血后脑水肿,其机制可能与降低PAR-1表达有关。