活血、利水中药对脑出血大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α、核转录因子-κB及水通道蛋白-4表达的影响

目的探讨活血、利水中药对脑出血急性期大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-al-pha,TNF-α)、核转录因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)及水通道蛋白-4(aquaporin-4,AQP-4)表达的影响及其治疗脑水肿的可能机制。方法自体股动脉血注入脑尾状核建立大鼠脑出血模型,SD雄性大鼠随机分为假手术组(42只)、模型组(42只)、活血组(42只)和利水组(42只),其中活血组予活血中药复方(每毫升含生药量分别为:大黄0.2g、水蛭0.02g、三七0.3g)10mL/kg灌胃,1次/日;利水组予利水中药复方(每毫升含生药量分别为:茯苓0.2g、泽泻0.2g、石菖蒲0.2g)10mL/kg灌胃,1次/日。模型组和假手术组予生理盐水4.0mL/kg灌胃,1次/日。1、3、5d取材,免疫组织化学染色法和实时荧光定量PCR法检测大鼠脑组织TNF-α、NF-κB p65和AQP-4mRNA和蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠各时间点脑组织TNF-α、NF-κBp65和AQP-4蛋白及mRNA表达明显增加(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,活血组和利水组各时间点AQP-4和TNF-α表达显著降低(P<0.05);活血组NF-κB p65表达亦明显低于模型组(P<0.05),利水组NF-κB p65表达差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,活血组和利水组各时间点脑组织含水量均有不同程度的降低,活血组与利水组间比较,差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论活血、利水中药均可抑制炎性因子TNF-α的释放,下调AQP-4的表达,减轻大鼠血肿周围脑水肿,但作用强度和作用环节有差异。     

活血化瘀中药对脑出血大鼠脑组织 含水量及AQP4表达的影响

目的:观察活血化瘀药对脑出血大鼠脑组织含水量及AQP4表达的影响,以期从分子水平探讨其治疗出血性脑水肿的机制。方法:将80只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,活血高、低剂量组(10.4,2.6 g.kg-1),采用自体不凝血注入尾状核法制作大鼠脑出血模型,组织干湿重法计算脑含水量,免疫组织化学法和real-timePCR法检测脑组织AQP4蛋白和基因的表达。结果:模型组大鼠各时间点病灶侧脑含水量、血肿周围组织AQP4蛋白和基因的表达均明显高于假手术组(P<0.01);活血高、低剂量组大鼠病灶侧脑含水量及血肿周围组织AQP4的表达与同一时间点模型组相比均明显降低,活血高、低剂量组间也有统计学意义。结论:活血化瘀药能够减轻脑出血后脑水肿,其机制可能与降低AQP4表达有关。     

补肾活血化痰方对脑出血大鼠脑组织MMP-9表达及血清NSE的影响

目的观察补肾活血化痰方对大鼠脑出血后脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达及血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)的影响。方法采用自体不凝血注入尾状核法制备脑出血模型。将大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾活血化痰方组,假手术组和模型组每日给予生理盐水灌胃,补肾活血化痰方组给予补肾活血化痰方煎剂。各组分别在脑出血术后24、48、72、120 h各个时点取血,留取脑组织标本。于各时点观测大鼠脑含水量,用免疫组化法检测大鼠脑组织MMP-9的表达水平,用酶联免疫吸附法测定血清中NSE的含量。结果补肾活血化痰方组各时点脑含水量明显低于模型组(P0.05),各时点脑组织MMP-9阳性表达较模型组明显减少(P0.01),血清NSE水平在48、72、120 h时较模型组显著降低(P0.01)。结论补肾活血化痰方能减轻脑水肿,减轻脑组织损伤,其作用可能和有效抑制脑出血大鼠脑组织MMP-9表达,降低血清NSE水平有关。     

健神利水方对脑出血大鼠水通道蛋白AQP-4表达的影响

目的:明确健神利水方对脑出血大鼠水通道蛋白-4 (AQP-4)表达的影响。方法:实验大鼠分为空白组、假手术组、模型组、健神利水组,空白组不予任何处理,健神利水组和模型组采用胶原酶制作脑出血大鼠模型,假手术组以等量生理盐水代替胶原酶造模,模型组以生理盐水灌胃,健神利水组给予健神利水方灌胃,取相应时间点(6 h、24h、3 d、7 d)的各组大鼠,断头取脑,根据脑组织干湿重测算脑组织水含量,并采用免疫印迹(Western blot)检测AQP-4表达水平,观察各组大鼠各个时间点AQP-4表达水平。结果:①空白组、假手术组未出现脑组织含水量变化,其余各组脑组织含水量从6h时起均逐渐增多;模型组和健神利水组于3 d时脑组织含水量达到顶峰。健神利水组6 h、24 h、3 d、7 d时间点脑组织含水量均低于模型组(P 0. 05)。②空白组、假手术组未出现AQP-4上调,其余各组AQP-4从6 h时起均逐渐升高;模型组和健神利水组于3 d时AQP-4表达值达到顶峰。健神利水组6 h、24 h、3 d、7 d时间点AQP-4表达均低于模型组(P 0. 05)。结论:健神利水方可以减少脑出血大鼠脑组织含水量,可抑制AQP-4表达。     

滋阴活血解毒超微中药方对脑缺血大鼠凝血酶原和蛋白酶激活受体-1 mRNA表达的影响

目的:观察滋阴活血解毒超微中药方对大鼠局灶性脑缺血后脑组织凝血酶原mRNA和蛋白酶激活受体-1(PAR-1)mRNA表达的影响。方法:24只大鼠随机分为假手术组、模型组、滋阴活血解毒超微中药方组和阿加曲班组,每组又分1、3d两个观察时相。用线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测脑组织中凝血酶原mRNA及PAR-1 mRNA表达水平。结果:假手术组可见凝血酶原和PAR-1 mRNA微量表达;模型组、滋阴活血解毒超微中药方组和阿加曲班组脑组织凝血酶原和PAR-1 mRNA表达明显增强,与假手术组比较有显著性差异(P<0.01);但与模型组比较,滋阴活血解毒超微中药方组和阿加曲班组脑组织中凝血酶原和PAR-1 mRNA表达明显下降(P<0.01);治疗第1天后滋阴活血解毒超微中药方组凝血酶原和PAR-1 mRNA表达明显高于阿加曲班组(P<0.05),但第3d后PAR-1 mRNA表达两组无显著性差异。结论:滋阴活血解毒超微中药方和凝血酶抑制剂阿加曲班均能下调脑缺血模型大鼠脑内凝血酶原和PAR-1 mRNA的表达,减轻凝血酶的毒性损伤可能是滋阴活血解毒超微中药方发挥脑保护作用的机制之一。     

电颈针干预对急性脑出血大鼠脑组织水通道蛋白4表达及脑含水量的影响

目的研究电颈针干预对急性脑出血大鼠脑组织水通道蛋白4(AQP4)表达、脑含水量等的影响,探讨电颈针对急性期脑出血后脑水肿的治疗作用。方法研究将84只成年SD大鼠随机分为假手术组,模型组,电颈针组;模型组和电颈针组依据干预时间分别设1、3、5 d 3个亚组,对相应组进行脑组织含水量、AQP4含量和m RNA含量检测。结果模型组与电颈针各组AQP4蛋白含量均高于假手术组,且电颈针组较模型组减低。电颈针3 d组AQP4 m RNA表达低于模型3 d组,且均高于假手术组。模型与电颈针各组大鼠脑组织含水量均高于假手术组(P0.01),电颈针组各亚组脑组织含水量均低于模型组(P0.05)。结论电颈针能显著降低脑出血大鼠AQP4蛋白和基因表达、脑组织含水量,可以抑制脑出血后脑水肿,起到神经保护作用。     

针刺“百会”透“曲鬓”穴对急性脑出血大鼠血肿及CD36、HO-1表达的影响

目的:探讨针刺“百会”透“曲鬓”穴对急性脑出血大鼠血肿及其周围组织CD36、HO-1表达的影响,阐明针刺治疗脑出血的相关机制。方法:将108只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和针刺组,每组按1 d、3 d和7 d时间点再分3个亚组,每组12只。自体血注入法建立脑出血大鼠模型。采用针刺“百会”透“曲鬓”穴对模型大鼠进行干预。术后各时间点进行mNSS评分、血肿体积及脑水肿含量评估大鼠神经功能损伤以及脑损伤程度;Western-blot法检测血肿周围组织HO-1、CD36蛋白表达。结果:术后各时间点,与模型组比较,针刺组大鼠神经功能缺损评分降低(P0.01);大鼠脑组织含水量降低(P0.01);血肿周围脑组织HO-1、CD36蛋白表达升高(P0.01)。术后3 d、7 d针刺组大鼠脑组织血肿体积缩小(P0.05)。结论:针刺“百会”透“曲鬓”穴能促进脑出血大鼠血肿周围组织HO-1、CD36蛋白表达,减小血肿体积,减轻脑水含量,改善神经功能缺损。     

大黄素对脑出血大鼠血肿周围脑组织水通道蛋白-4及脑水肿的影响

目的:探讨大黄素对脑出血大鼠周围组织水通道蛋白-4表达的影响及其治疗脑水肿的机制;方法:自体股动脉血约100μL注入大鼠纹状体区域,采用随机分组法分为假手术组(n=30)、脑出血模型组(n=30)和大黄素治疗组(n=30),其中假手术组和脑出血模型组每次给予生理盐水0.6 mL/100 g体质量,每天2次灌胃,大黄素治疗组每次10 mg/100 g体质量灌胃,每天1次;1 d、2 d、3 d、5 d、7 d分别取材,免疫组化法测定脑组织中AQP-4的表达情况;结果:与假手术组相比较,脑出血模型组在不同时间点大鼠改良Bederson评分、脑组织含水量、脑组织中AQP-4含量变化和脑组织中AQP-4免疫组化变化均增高,差异均有统计学意义(P0.05);与脑出血模型组相比较,大黄素治疗组不同时间点大鼠改良Bederson评分、脑组织含水量、脑组织中AQP-4含量变化和脑组织中AQP-4免疫组化变化均降低,差异均有统计学意义(P0.05);结论:大黄素能够降低炎症因子的释放,下调水通道蛋白-4的表达,减轻脑出血后脑组织周围水肿,减少神经元的凋亡,促进神经功能的修复。     

三七总皂苷对脑出血大鼠脑含水量及血肿周围脑组织PAR-1、MMP-9表达的影响

目的研究三七总皂苷对脑出血大鼠脑含水量及水肿周围脑组织基因表达情况的干预作用。方法实验用健康SD同系雄性大鼠150只,体重230~250 g,随机分为假手术、模型、用药3组,每组又分为6 h、24 h、48 h、72h、7天5个时间点,每组每个时间点10只大鼠。采用Ⅳ型胶原酶匀速缓慢打入尾壳核建立大鼠脑出血模型,用药组给予三七总皂苷腹腔注射,每天1次。于相应时间点麻醉大鼠后,断头取脑,立即称重并记录每只大鼠鼠脑的湿重,用锡箔纸包裹,并标号,然后放入-70o冰箱冻存,集中放入110℃恒温箱中烘干至恒重,24 h后取出立即称取干重。取材后,采用逆转录-聚合酶链反应检测指标PAR-1、MMP-9基因表达水平。结果各时间点模型组脑含水量较假手术明显升高,差异有统计学意(P0.05),除6 h、7天外,各时间点模型组和用药组比较,用药组脑含水量明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。模型组与假手术组相比,各时间点PAR-1、MMP-9差异均有统计学意义(P0.05),用药治疗后,模型组和用药组相比,各时间点PAR-1、MMP-9差异有统计学意义(P0.05)。结论 6 h开始,脑含水量明显增高,到48 h达到高峰,以后逐渐下降,三七总皂苷可以明显下调脑含水量。PAR-1和MMP-9在模型组的表达呈现了先升后降的趋势,从6h开始逐渐升高,在48h达高峰,而后逐渐下降。用药治疗后,相应各时间点PAR-1和MMP-9均下降,三七总皂苷可以明显下调血肿周围脑组织PAR-1、MMP-9的表达。     

蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠脑组织AQP-4、MMP-9及TIMP-1蛋白表达的影响

目的:观察蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠脑组织AQP-4、MMP-9、TIMP-1蛋白表达的影响,探讨蛭龙活血通瘀胶囊对脑组织的保护作用机制。方法:将45只SD大鼠随机分为5组:假手术组,模型组,蛭龙活血通瘀胶囊高、中、低剂量组,各组又分为12 h、48 h、72 h 3个亚组。采用自体尾部血注入法制备脑出血大鼠模型,Western blot法检测AQP-4、MMP-9、TIMP-1蛋白的表达。结果:与模型组比较,蛭龙活血通瘀胶囊各剂量组AQP-4、MMP-9蛋白表达均有不同程度的降低,TIMP-1蛋白表达均有不同程度的升高,具有显著性差异(P0.01);蛭龙活血通瘀胶囊各剂量组之间比较,低、中剂量组在各时间点脑组织AQP-4、MMP-9、TIMP-1蛋白表达与高剂量组差异有显著性意义(P0.01)。结论:蛭龙活血通瘀胶囊能够明显降低脑出血大鼠脑组织AQP-4、MMP-9蛋白的表达,并升高TIMP-1蛋白的表达,该作用存在一定的量效关系,蛭龙活血通瘀胶囊高剂量组作用最为明显。     

脑宁康颗粒对脑出血大鼠的脑保护作用

目的研究依据清热解毒法制成的脑宁康颗粒对脑出血大鼠脑组织的保护作用及机制。方法将大鼠随机分为5组：假手术组、脑出血模型组、脑宁康小、中、大剂量组,采用胶原酶Ⅶ诱导大鼠脑出血模型,术后2h各治疗组给予不同剂量脑宁康颗粒灌胃,余组给予等容量生理盐水,连续用药3天和7天后取脑组织,采用HE染色观察脑组织病理形态学改变,免疫组织化学法和TUNEL法分别检测脑出血周围组织凝血酶受体-1（PAR-1）的表达和神经细胞凋亡情况,干湿比重法测定脑组织水肿情况。结果脑出血大鼠脑组织PAR-1表达增强,各脑宁康治疗组脑组织病理形态明显改善,脑组织PAR-1表达减少,TUNEL阳性细胞数减少,脑水肿减轻,与模型组比较差异有显著性（P〈0.05,P〈0.01）。结论脑出血后的脑组织PAR-1高表达可能介导了神经细胞凋亡和脑水肿,脑宁康颗粒对出血脑组织有保护作用,可能与其抑制脑出血后脑组织PAR-1表达、减少细胞凋亡,从而减轻脑水肿相关。     

黄芩苷对脑出血大鼠脑组织凝血酶受体-1表达及细胞凋亡的影响

目的研究黄芩苷对大鼠脑出血后神经组织的保护作用及其机制。方法大鼠随机分为5组:假手术组、脑出血模型组、黄芩苷小、中、大剂量组,采用胶原酶Ⅶ诱导大鼠脑出血模型,术后2h各治疗组给予不同剂量的黄芩苷腹腔注射,余组给予等容量生理盐水,每天1次,连续用药1、3、5、10天后取脑组织,Western blot法检测脑出血周围脑组织凝血酶受体1(protease-activated receptor-1,PAR-1)表达,TUNEL法检测细胞凋亡情况,干湿比重法测定脑组织水肿情况。结果与脑出血模型组比较,黄芩苷各治疗组的大鼠脑组织PAR-1表达和TUNEL阳性细胞数明显减少、脑水肿减轻,差异均有统计学意义(P0.01)。结论脑出血后的脑组织PAR-1高表达可能介导了细胞凋亡和脑水肿,黄芩苷对脑出血大鼠有保护作用,可能参与抑制脑出血后脑组织PAR-1表达、减少细胞凋亡,从而减轻脑水肿症状。     

脑脉Ⅱ号胶囊对急性脑出血大鼠PAR-1动态表达的影响

目的：探讨急性脑出血后蛋白酶激活的受体(PAR-1)的动态表达及脑脉Ⅱ号胶囊(NMCⅡ)的干预作用。方法：将72只大鼠随机分为9组（n＝8），即正常组、脑出血模型6,24 h，3，7 d组和NMCII 6，24 h，3，7 d组。用Ⅶ-S型胶原酶诱导大鼠脑出血模型。免疫组化方法测定各时间点大鼠脑出血后血肿周围水肿组织PAR-1蛋白的表达；RT-PCR检测PAR-1 mRNA的表达。结果：正常组大鼠脑出血后可见有PAR-1mRNA和PAR-1蛋白表达，模型组大鼠脑出血后6 h表达明显增多，24 h进一步增多，于3 d时达到高峰,7 d时表达明显减少。在6,24 h,3,7 d各时间点，模型组、NMCII组PAR-1 mRNA吸光度及PAR-1阳性细胞数升高，与正常组比较均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)，NMCII组PAR-1阳性细胞数、PAR-1 mRNA吸光度比值降低,与模型组比较各时间点均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论：脑出血后PAR-1受到凝血酶的持续活化，脑出血后凝血酶的作用可能是通过PAR-1介导的；NMCII可抑制PAR-1的表达,这可能是其治疗学机制之一。     

安脑平冲汤对大鼠脑出血后脑水肿及水通道蛋白表达的影响

目的观察安脑平冲汤对脑组织含水量和水通道蛋白-4（AQP-4）表达的影响。方法将sD雄性大鼠随机分为正常组、假手术组和造模组。以IV型胶原酶注射法建立大鼠脑出血模型,造模成功后分为模型组和治疗组,治疗组予安脑平冲汤灌胃,其他组予蒸馏水灌胃,每日2次,共5d。假手术组、模型组和治疗组按12、24、48、72、120h5个时间点分为5个亚组,每个亚组各6只用来测定脑含水量,另选96只大鼠采用同样的分组方法检测AQP-4的表达。结果与模型组比较,治疗组各时间点脑组织含水量下降（尸〈0．05）;AQP-4表达在24～120h时间点减低（P〈0．05）,12h时差异不明显（P〉0．05）。结论安脑平冲汤可以在一定程度上减少AQP-4的表达,从而减轻脑出血后脑水肿。     

头针透刺对脑出血大鼠脑组织ICAM-1表达影响的研究

目的:通过对细胞间粘附因子( ICAM -1)的研究探讨头穴透刺对急性脑出血(ICH)炎症反应的干预作用.方法:按完全随机设计将96只健康雄性Wistar大鼠平均分为模型组、针刺组和西药组.每组观察6h、24 h、48 h、72 h和168 h共5个时间点,每个时间点6只大鼠,另设6只大鼠作为空白对照组.制备ICH大鼠模型,采用免疫组化技术观察不同时间点头穴透刺对ICH大鼠脑组织ICAM -1表达的影响.结果:针刺组大鼠脑内ICAM -1表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05).结论:针刺可抑制ICAM -1表达及其所致的继发性脑损伤.     

蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠神经细胞凋亡与HIF-lα PAR-l蛋白表达的作用研究

目的：通过观察大鼠脑出血后神经细胞凋亡与缺氧诱导因子-1仅（HIF-la）、蛋白酶激活受体-1（PAR-1）表达的动态变化及蛭龙活血通瘀胶囊的干预作用,探讨蛭龙活血通瘀胶囊可能的脑保护作用。方法：将大鼠随机分为假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀胶囊低、中、高剂量组。采用自体血注入法制备脑出血大鼠模型。采用TUNEL法测定凋亡细胞的表达,免疫组化法测定HIF-1仪、PAR-1蛋白的表达。结果：与模型组比较,蛭龙活血通瘀胶囊低、中、高剂量组的凋亡细胞与PAR-1蛋白表达明显下降,而HIF-10t蛋白的表达明显升高,差异有统计学意义（P〈O．01）。与低剂量组比较,中、高剂量组各时间点的凋亡细胞与PAR-l蛋白表达均明显下降,而HIF-1仪蛋白的表达明显升高,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：蛭龙活血通瘀胶囊能明显抑制PAR-l活化,促进HIF-lOt表达,抑制细胞凋亡,对脑出血大鼠具有明显的脑保护作用,且存在一定量效关系。     

犀角地黄汤对大鼠脑出血后脑水肿及行为学影响的研究

目的观察犀角地黄汤对大鼠脑出血后脑水肿及行为学变化的影响,并探讨其作用机制。方法以自体血制作大鼠脑出血模型,将成功模型随机分为模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、尼莫地平组,不造模者分为正常组、假手术组,以脑含水量、脑指数作为脑水肿观察指标;以Rosenberg行为学评分法作为行为学观察指标。结果脑出血后第7日,中药各剂量组和尼莫地平组大鼠脑指数和脑组织含水量明显降低;脑出血后第3日,中药各剂量组和尼莫地平组大鼠神经功能缺损症状有不同程度的改善,第7日改善明显。结论犀角地黄汤和尼莫地平均能降低脑出血后大鼠脑指数和脑组织含水量,改善神经功能缺损症状。     

三七总皂苷对脑出血大鼠细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨三七总皂苷对脑出血大鼠细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达影响。方法将大鼠随机分为假手术组、脑出血组、三七总皂苷治疗组,用大鼠自体血脑内注入法建立脑出血动物模型。造模后72 h采用免疫组化法观察大鼠额顶部皮质Bcl-2和Bax蛋白表达,TUNEL法检测神经细胞凋亡。结果与假手术组比较,脑出血组凋亡细胞明显增加,Bcl-2和Bax表达增加;与脑出血组比较,三七总皂苷治疗组均显著凋亡细胞明显减少,增加Bcl-2表达、减少Bax表达。结论三七总皂苷对脑出血大鼠具有保护作用,其机制可能与通过增加Bcl-2表达,减少Bax表达,及抗凋亡有关。