蛋白激酶GIa基因在血性脑脊液致大鼠脑动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的 观察血性脑脊液对大鼠脑动脉平滑肌细胞蛋白激酶Gia mRNA及其蛋白表达水平变化与增殖的关系,探讨蛋白激酶Gla基因在蛛网膜下腔出血后继发慢性脑血管痉挛分子机制中的调控作用.方法 组织块法原代培养脑动脉平滑肌细胞.采用半定量逆转录多聚酶链反应技术检测对照组、血性脑脊液处理24 h组、血性脑脊液处理48 h组蛋白激酶Gia基因mRNA的表达水平;采用蛋白质印迹技术检测相应的蛋白的表达水平.采用甲基噻唑基四唑法、氚标记胸腺嘧啶核苷掺入法检测脑动脉平滑肌细胞增殖改变.结果 血性脑脊液诱导脑动脉平滑肌细胞不断增殖.各组均检测出蛋白激酶Gia基因的mRNA以及蛋白表达的变化,图像定量分析光密度值显示各组表达的mRNA以及蛋白表达与细胞增殖改变密切相关.结论 蛋白激酶Gia基因可能在蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中调节脑动脉平滑肌细胞增殖.     

依那普利对高血压大鼠血管平滑肌细胞内游离钙及蛋白激酶C活性的影响

目的观察依那普利抑制培养的血管平滑肌细胞增殖的机制。方法以组织贴块法行自发性高血压大鼠(spontaneouslyhypertensiverats,SHR)主动脉血管平滑肌细胞的分离培养,并以倒置显微镜α-SM肌动蛋白免疫组化法鉴定;分别采用甲基噻唑基四唑(MTT)法、氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法、荧光染料(FURA-2/AM)标记法。酶底物反应法观察依那普利含药血清对血管平滑肌增殖、细胞内游离钙、蛋白激酶C活性的影响。结果与模型组比较,依那普利含药血清对血管平滑肌增殖、脱氧核糖核酸(DNA)合成、细胞内游离钙、蛋白激酶C活性均有明显的抑制作用(P<0.01)。结论依那普利可能通过降低细胞内游离钙水平及抑制蛋白激酶C活性而发挥抑制血管平滑肌增殖和高血压血管重构的作用。     

低氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞中PTEN/Akt1表达的变化与细胞增殖的关系

目的 通过观察低氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)与细胞张力蛋白同源在10号染色体有缺失的磷酸酶(PTEN)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(Akt1)mRNA及其蛋白表达水平的变化与低氧PASMC增殖的关系,探讨PTEN/Akt1信号途径在低氧肺血管重建中的可能调控作用.方法 用组织块法培养PASMC.采用半定量逆转录-PCR技术检测常氧组、低氧2、8、12、24 h组PTEN、Akt1基因mRNA的表达水平,采用Western blot技术检测相应的蛋白表达水平.采用噻唑蓝比色法和氚-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入法检测PASMC的增殖改变.数据用x±s表示,采用Excel 2003软件进行t检验,P<0.05为差异有统计学意义.结果低氧刺激PASMC不断增殖,3H-TdR法检测的吸光度值低氧12 h组(0.70±0.10)比常氧组(0.37±0.06)明显增高(t=14.29,P<0.01);噻唑蓝法检测的吸光度值低氧24 h组(11 208±679)比常氧组(8374±545)明显增高(t=19.56,P<0.01).各组均检测出PTEN、Akt1基因mRNA及蛋白表达的变化.常氧组Akt1的mRNA、总蛋白、磷酸化蛋白的吸光度值分别为0.76±0.09、25±6和48±8,随着低氧培养时间延长,吸光度值逐渐升高,低氧8 h组达到高峰,分别为1.05±0.09、41±7和79±14,与常氧组比较,差异均有统计学意义(t值为8.31～168.00,P<0.05和P<0.01),随后开始下降,低氧24 h组恢复至常氧组水平.常氧组PTEN的mRNA、磷酸化蛋白的吸光度值分别为0.25±0.06和98±8,并随着低氧培养时间延长而逐渐升高,低氧24 h组达到高峰,分别为0.38±0.05和232±12,与常氧组比较,差异均有统计学意义(t值分别为22.04和50.46,均P<0.01).结论 PTEN/Akt1的转录和激活与低氧肺血管重建的PASMC增殖密切相关.     

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互调节

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互调节王培勇刘健于中和许蜀闽王俊元孙秉庸采用３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入和流式细胞技术，观察在常氧及缺氧条件下，肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）与肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）混合培养、共同培养时增殖的...     

普罗布考抑制过氧化氢刺激大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的机制

目的研究普罗布考抑制过氧化氢促大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的机制。方法采用MTT3、H-胸腺嘧啶核苷掺入法、流式细胞术和逆转录聚合酶链反应观察过氧化氢刺激条件下普罗布考对血管平滑肌细胞细胞周期、DNA合成、细胞增殖和凋亡的影响。结果普罗布考抑制过氧化氢刺激血管平滑肌细胞增殖和DNA合成。与过氧化氢组比较,普罗布考 过氧化氢组细胞计数、吸光度值和3H-胸腺嘧啶核苷掺入量分别下降了46.9%、45.0%和39.5%(P<0.05)。普罗布考通过使血管平滑肌细胞生长停滞在G0/G1期抑制过氧化氢刺激细胞增殖。过氧化氢使细胞外信号调节激酶1 mRNA相对表达量增加近6倍,丝裂原活化蛋白激酶磷酯酶1 mRNA相对表达量下降了82.2%。普罗布考抑制细胞外信号调节蛋白激酶1 mRNA的表达,增强丝裂原活化蛋白激酶磷酯酶1 mRNA的表达。普罗布考诱导过氧化氢刺激条件下血管平滑肌细胞凋亡。结论普罗布考通过下调细胞外信号调节蛋白激酶1 mRNA的表达抑制细胞周期运转和诱导血管平滑肌细胞凋亡两种机制抑制过氧化氢刺激血管平滑肌细胞增殖。     

硫化氢供体对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞小窝蛋白的影响

目的 探讨硫化氢供体硫氢化钠（NaHS）对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞小窝蛋白1（Cav-1）的影响。方法 采用间断常压低氧法建立低氧大鼠模型。利用混合气体培养法制备大鼠低氧肺动脉平滑肌细胞模型。将32只SD大鼠随机分为4组（每组8只）：常氧组、低氧组、常氧＋NaHS组和低氧＋NaHS组。免疫组织化学方法检测肺小动脉中膜厚度、肌化及增殖程度。采用荧光探针法检测活性氧（ROS）含量。蛋白免疫印迹法检测Cav-1的表达。结果 低氧组大鼠右心室收缩压、右心室质量指数、肺小动脉中膜厚度、肌化及平滑肌增殖程度明显增加;低氧组大鼠肺动脉平滑肌细胞ROS产生增加及Cav-1表达降低;NaHS给予大鼠可改善肺动脉血流,缓解肺动脉中膜增厚,抑制肺动脉平滑肌细胞增殖,减少肺动脉平滑肌细胞ROS产生及增加Cav-1表达。结论 NaHS可通过降低低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞ROS产生,上调Cav-1表达,抑制肺动脉平滑肌细胞增殖,缓解肺动脉重构。     

表皮生长因子受体在血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨表皮生长因子受体在血管紧张素Ⅱ促大鼠血管平滑肌细胞增殖效应中的作用。方法用反义表皮生长因子受体寡核苷酸脂质体复合物转染SD大鼠血管平滑肌细胞,用逆转录聚合酶链反应、Western-Blot-ing分别检测转染后表皮生长因子受体mRNA及蛋白的表达情况,用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验检测血管平滑肌细胞的增殖情况。结果反义组大鼠血管平滑肌细胞表皮生长因子受体mRNA表达(0.18±0.03)较正义组(0.61±0.11)及对照组(0.66±0.09)明显减少(P<0.05),反义组大鼠血管平滑肌细胞表皮生长因子受体蛋白的表达(43.1±8.4)较正义组(92.6±10.5)及对照组(100.7±11.3)明显减少(P<0.05);反义组细胞的氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入率(1055.1±95.7)较正义组(1882.4±129.7)及对照组(2013.3±121.3)明显降低(P<0.05)。结论表皮生长因子受体在血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖中起重要作用。     

硼替佐米通过PPARγ途径抑制肺动脉平滑肌细胞TRPC蛋白的表达

目的验证蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib,BTZ)对调节肺动脉平滑肌细胞瞬时受体通道蛋白表达的影响,探讨其对调节瞬时受体通道蛋白表达的分子机制。方法原代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,将细胞分为常氧组、常氧+BTZ组、低氧组及低氧+BTZ组,60 h后,通过免疫印迹法测定PPARγ、TRPC1、6蛋白的表达。另将原代培养的肺动脉平滑肌细胞分为低氧组、低氧+BTZ组、低氧+BTZ+T0070907组,60 h后,通过免疫印迹法测定TRPC1、6蛋白的表达。结果(1)与常氧组相比,低氧组、低氧+BTZ组细胞TRPC1蛋白的相对表达量分别为(158±11)%和(112±8)%,低氧+BTZ组细胞TRPC1蛋白表达量相较于低氧组明显降低(P<0.05);(2)与常氧组相比,低氧组、低氧+BTZ组细胞TRPC6蛋白的相对表达量分别为(146±9)%和(107±6)%,低氧+BTZ组细胞TRPC6蛋白表达量相较于低氧组明显降低(P<0.05);(3)与常氧组相比,低氧组、低氧+BTZ组细胞PPARγ蛋白的相对表达量分别为(65±7)%和(98±6)%,低氧+BTZ组细胞PPARγ蛋白表达量相较于低氧组明显升高(P<0.05);(4)与低氧组相比,低氧+BTZ组、低氧+BTZ+T0070907组,TRPC1蛋白的相关表达量分别为(65±7)%和(92±9)%,低氧+BTZ+T0070907组细胞TRPC1蛋白表达量相较于低氧+BTZ组明显升高(P<0.05);(5)与低氧组相比,低氧+BTZ组、低氧+BTZ+T0070907组TRPC6蛋白的相关表达量分别为(71±5)%和(97±7)%,低氧+BTZ+T0070907组细胞TRPC6蛋白表达量相较于低氧+BTZ组明显升高(P<0.05)。结论硼替佐米通过抑制低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞PPARγ的下调,调节TRPC蛋白的表达。     

新型KATP通道开放剂埃他卡林对人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究新型KATP通道开放剂埃他卡林（iptakalim）对内皮素-1（ET-1）诱导培养的人肺动脉平滑肌细胞（HPASMC）增殖的影响。方法 内皮素-1诱导培养建立人肺动脉平滑肌细胞增殖模型；氚-胸腺嘧啶核苷（3H—TdR）掺入法观察脱氧核糖核酸（DNA）合成；流式细胞仪技术检测HPASMC细胞周期。结果埃他卡林能剂量依赖性抑制内皮素-1所致的3H—TdR掺入量增多，阻止HPASMC由静止期（G0／G1期）进入DNA合成期（S期）和有丝分裂期（G2／M期）。特异性KATP通道阻断剂格列本脲可拮抗埃他卡林对。H—TdR掺入的抑制作用。结论 埃他卡林可能通过激活KATP通道来抑制ET-1诱导入肺动脉平滑肌细胞的增殖作用，有望成为治疗肺动脉高压的新药。     

碱性成纤维细胞生长因子反义寡脱氧核苷酸抑制胰岛素诱导动 …

为研究胰岛素诱导的动脉平滑肌细胞增殖作用和碱性成纤维细胞生长因子反义寡脱氧核苷对培养的Ｗｉｓｔａｒ大鼠主动脉平滑肌细胞生长的影响。采用胰岛素和碱性成纤维细胞生长因子反义寡脱氧核苷酸处理培养的Ｗｉｓｔａｒ大鼠主动脉平滑肌细胞,Ｎｏｒｔｈｅｎｂｌｏｔ检测碱性成纤维细胞生长因子基因ｍＲＮＡ表达,并测定氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入和细胞计数。结果发现胰岛素能明显诱导平滑肌细胞碱性成纤维细胞生长因子ｍＲＮＡ表     

野生型蛋白激酶GIα腺病毒抑制低氧肺动脉平滑肌细胞表型转换及细胞增殖

目的 观察携带野生型蛋白激酶GIα腺病毒(Ad-PKGIα)抑制低氧诱导人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)表型转换及其增殖的影响,探讨其在低氧肺血管重建(HPVR)中的作用.方法 组织块法建立人PASMC细胞系.Ad-PKGIα转染PASMC;采用荧光显微镜观察转染效率;RT-PCR、Western blot检测PASMC中PKGIα mRNA表达、Ad-PKGIα转染对低氧PASMC表型转换中平滑肌α肌动蛋白(SM-α-actin)表达的影响.流式细胞仪检测Ad-PKGIα转染后低氧对PASMC细胞周期的影响;~3H-TdR掺入法检测PASMC增殖.结果 (1)Ad-PKGIα转染后PASMC中PKGIα mRNA水平、磷酸化PKGIα蛋白水平显著增高.(2)常氧时PASMC中SM-α-actin蛋白表达为44.25±5.34;3% O_2处理12 h PASMC中SM-α-actin蛋白表达水平降至32.18±4.19,处理24 h SM-α-actin蛋白表达水平降至21.90±2.44.(3)低氧条件下,PASMC开始增殖,随着低氧时间延长,PASMC增殖逐渐增加,至24 h PASMC增殖最多[(14 924±1491)次/min].与未转染对照组、腺病毒空载体组比较,Ad-PKGIα转染组PASMC增殖明显受到抑制.(4)低氧使未转染对照组和腺病毒空载体组的PASMC进入有丝分裂期,随着低氧时间延长,G_0/G_1期细胞比例逐渐减少,S+G_2/M期细胞比例逐渐增加.Ad-PKGIα转染后常氧状态下PASMC G_0/G_1期细胞比例下降、S+G_2/M期细胞比例上升趋势均明显减缓.结论 PKGIα基因在低氧肺血管重建信号转导途径中有重要的调节作用,可作为基因治疗的靶点之一.     

Gax基因双向调节低氧性肺动脉内皮细胞增殖及影响HIF-1α基因表达的研究

目的观察Gax基因对低氧性肺动脉内皮细胞（PAECs）增殖和低氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因表达的影响,为进一步研究Gax基因调节低氧性肺动脉高压（HPH）的作用与机制奠定基础。方法取大鼠肺动脉,用酶消化法获取PAECs并进行原代培养;PAECs分4组：未转染常氧对照组（常氧组）、未转染低氧处理组（低氧组）、Ad—SGal转染再行低氧处理组（Ad—SGal＋低氧组）、Ad—Gax转染再行低氧处理组（Ad—Gax＋低氧组）。分别在常氧（21％O2）和低氧（2．5％O2）1h、3h、6h和12h各时相点,采用3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法检测PAECs增殖;使用RT—PCR和Weatern blot方法分别检测PAECs中HIF-1α mRNA和蛋白表达水平。结果①PAECs的3H-TdR掺入量：与常氧组同时相点比较,低氧组和Ad—pGaJ＋低氧组均显著升高（P均〈0．01）,在低氧6h达最大值;Ad．Gax＋低氧组与常氧组同时相点比较均显著升高（P均〈0．01）,但与低氧组比较却均明显降低（P〈0．01、P〈0．05）,到低氧6h降幅最大;②在低氧处理6h,与常氧组比较,低氧组和Ad—BGal＋低氧组HIF-1α mRNA和蛋白表达均明显上调;与低氧组或Ad—BGal＋低氧组比较,Ad—Gax＋低氧组HIF-1α mRNA和蛋白表达皆显著下调,差异有统计学意义（P〈0．05、P〈0．01）。低氧早期内皮细胞异常增殖加速,而此时增强Gax基因的表达可抑制细胞的异常增殖;随着低氧时间的不断延长,细胞增殖受到抑制,而此时增强内皮细胞中Gax基因表达却又促进细胞增殖,以此来维持细胞的数量。结论Gax基因对维持内皮细胞数量的稳态具有双向调节作用。增强Gax基因的表达能下调低氧诱导的HIF-1α mRNA和蛋白表达,这可能与Gax基因抑制低氧性内皮细胞异常增殖的机制相关。     

Intermedin modulates hypoxic pulmonary vascular remodeling by inhibiting pulmonary artery smooth muscle cell proliferation

BackgroundHypoxic pulmonary arterial hypertension (PAH) is a disabling disease with limited treatment options. Hypoxic pulmonary vascular remodeling is a major cause of hypoxic PAH. Pharmacological agents that can inhibit the remodeling process may have great therapeutic value.ObjectiveTo examine the effect of intermedin (IMD), a new calcitonin gene-related peptide family of peptide, on hypoxic pulmonary vascular remodeling.MethodsRats were exposed to normoxia or hypoxia (∼10% O₂), or exposed to hypoxia and treated with IMD, administered by an implanted mini-osmotic pump (6.5 μg/rat/day), for 4 weeks. The effects of IMD infusion on the development of hypoxic PAH and right ventricle (RV) hypertrophy, on pulmonary vascular remodeling, on pulmonary artery smooth muscle cell (PASMC) proliferation and apoptosis, and on the activations of l-arginine nitric oxide (NO) pathway and endoplasmic reticulum stress apoptotic pathway were examined.ResultsRats exposed to hypoxia developed PAH and RV hypertrophy. IMD treatment alleviated PAH and prevented RV hypertrophy. IMD inhibited hypoxic pulmonary vascular remodeling as indicated by reduced wall thickness and increased lumen diameter of pulmonary arterioles, and decreased muscularization of distal pulmonary vasculature in hypoxia-exposed rats. IMD treatment inhibited PASMC proliferation and promoted PASMC apoptosis. IMD treatment increased tissue level of constitutive NO synthase activity and tissue NO content in lungs, and enhanced l-arginine uptake into pulmonary vascular tissues. IMD treatment increased cellular levels of glucose-regulated protein (GRP) 78 and GRP94, two major markers of endoplasmic reticulum (ER) stress, and increased caspase-12 expression, the ER stress-specific caspase, in lungs and cultured PASMCs.ConclusionsThese results demonstrate that IMD treatment attenuates hypoxic pulmonary vascular remodeling, and thereby hypoxic PAH mainly by inhibiting PASMC proliferation. Promotion of PASMC apoptosis may also contribute to the inhibitory effect of IMD. Activations l-arginine–NO pathway and of ER stress-specific apoptosis pathway could be the mechanisms mediating the anti-proliferative and pro-apoptotic effects of IMD.     

急性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞电压门控钾通道电流的影响

目的：研究急性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞电压门控钾通道（Kv）电流的影响。方法：雄性SD大鼠20只随机分为常氧对照组和急性缺氧组（各10只）。急性缺氧组大鼠在低氧仓中缺氧停留8h后进行实验。应用全细胞膜片钳技术记录肺动脉平滑肌细胞电压门控钾通道电流（Ik）。结果：急性缺氧显著降低大鼠肺动脉平滑肌细胞的Ik密度。在大鼠肺动脉平滑肌细胞静息膜电位-60mV至-10mV时,急性缺氧降低大鼠肺动脉平滑肌细胞的IK密度不明显（P〉0．05）。在0mV时,大鼠肺动脉平滑肌细胞的峰值Ik密度显著下降[从（38．1±5．2）pA／pF→（9．82±2．1）pA／pF,P〈0．05）],此后随着细胞静息膜电位的增加,平滑肌细胞的Ik密度下降幅度逐渐增加（P〈0．05）;从＋30mV至＋60mV时,平滑肌细胞的Ik密度下降幅度更大（P〈0．01）。在＋60mV时,IK密度峰值从（135．4±16．5）pA／pF降到（73．1±10．6）pA／pF,降幅达（46．8±3．3）％。结论：急性缺氧可降低肺动脉平滑肌细胞Kv电流,导致肺血管缺氧性收缩。     

蛋白激酶C对低氧猪肺动脉平滑肌细胞结构型一氧化氮合酶mRNA表达作用的探讨

目的 探讨蛋白激酶C（PKC）信号传导通道对低氧猪肺动脉平滑肌细胞（PASMC）结构型一氧化氮合酶（cNOS)mRNA表达的影响。方法 采用逆转录－聚合酶链（RT－PCR）方法测定了低氧条件下猪PASMC中PKC－α和cNOS mRNA表达情况,并观察了PKC激活剂和抑制剂对cNOS mRNA表达的影响。结果 低氧48、72h PKC-α mRNA的表达明显升高（P＜0．01）,cNOS mRNA的表达明显降低（P＜0．01）,cNOS mRNA的表达与PKC－α mRNA的表达呈显著负相关（P＜0．001）。PKC激活剂豆寇酸佛波醇乙酯（PMA）可使cNOS mRNA在低氧PASMC中的表达进一步降低,而KC抑制剂RO 31－8220的作用相反,使cNOS mRNA的表达明显升高（P＜0．01）。NO激活剂左旋精氨酸（L－Arg)和抑制剂N^ω－硝基－L－精氨酸甲酯（L－NAME）对PKC-α mRNA的表达无明显影响。结论 PKC可抑制cNOS mRNA在低氧PASMC中的表达。PKC在低氧性肺动脉高压的形成机制中的作用可能是通过抑制cNOS mRNA在PASMC的表达和对NO的调控来实现的,PKC信号通道可能作用在NO的上游,但其机制还有待于进一步的研究。     

脂联素改善低氧诱导的大鼠肺微血管内皮细胞功能障碍及机制研究

目的研究重组人球状脂联素(APN)改善低氧诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)功能障碍,探讨其潜在的分子机制。方法取SD雄性大鼠PMVECs原代培养,传至第三代行细胞鉴定;PMVECs分3组,常氧(210ml/L O_2,37℃)组;低氧(20 ml/L O_2,37℃)组;低氧(20 ml/L O_2,37℃)+APN(1μg/ml)处理组,分别培养3 h、6 h、9 h和12 h,收集细胞上清测NO浓度;3组PMVEC行RT-PCR测定eNOS基因表达;BCA法测定各组总蛋白含量;行Western blot检测AMPK/p-AMPK、PI3K/p-PI3K、Akt/p-Akt和eNOS/p-eNOS表达。结果 (1)鉴定培养细胞为PMVECs;(2)在相应时间点,与正常组比较,低氧诱导的NO浓度、eNOS mRNA表达水平、总蛋白表达显著下降(P0.01);与低氧组对比,低氧+APN组显著增加了低氧诱导的NO浓度、eNOS mRNA表达水平、总蛋白表达(P0.01);(3)3组AMPK、PI3K、Akt和eNOS总蛋白表达水平不变;与正常组比较,低氧诱导的AMPK、PI3K、Akt、eNOS磷酸化表达水平下降(P0.05);与低氧组对比,低氧+APN组增加了低氧诱导的AMPK、PI3K、Akt、eNOS磷酸化表达水平(P0.05)。结论在细胞水平上,APN能改善低氧条件下诱导的PMVECs功能障碍,促进肺血管具有舒张作用的NO产生,其可能机制可能是伴随着AMPK/PI3K/Akt/eNOS/NO信号通路的激活,APN可能成为潜在治疗低氧性肺动脉高压的辅助药物。     

Antagonism of leukotriene receptors and administration of a 5-lipoxygenase inhibitor do not affect hypoxic vasoconstriction

The role of leukotrienes in hypoxic vasoconstriction remains controversial. Our previous study using the lipoxygenase inhibitor BW 755C in dogs failed to show a substantive role for leukotrienes in hypoxic vasoconstriction. To clarify further the role of leukotrienes, we designed 3 protocols. In the first protocol, we examined the effects of LTD₄ boluses on the pulmonary circulation in 6 anesthetized dogs. LTD₄, 1 μg/kg, (a large dose relative to other species) produced no detectable constriction of the pulmonary artery, while systemic vascular resistance increased 41±17% (SD), left atrial pressure rose 3.5±1.5 mmHg, and cardiac output fell 18±8%. Two leukotriene receptor antagonists, LY171883 and L-648051, decreased these effects by more than 50%. In the second protocol, we tested these antagonists in 7 anesthetized, paralyzed, closed-chest dogs with acute left lower lobe atelectasis. Two manifestations of hypoxic vasoconstriction were examined: shunt fraction (as an inverse indicator of regional constriction in response to local hypoxia) and the pulmonary pressor response to global alveolar hypoxia (as an index of general hypoxic vasoconstriction). During normoxia before administration of the inhibitor, shunt fraction, measured using an SF₆ infusion, was 25±7%. The pulmonary pressor response to hypoxia, defined as the increase in pulmonary end-diastolic gradient (PDG) produced by 10% O₂ inhalation, averaged +10.5±3.6 mmHg. The increase in pulmonary vascular resistance (PVR) with hypoxia was +2.4±1.7 mmHg/L/min. Then, during normoxia, 1 of the 2 antagonists was administered. Shunt fraction was unchanged (26±4%; p=0.5). The pressor response to hypoxia was slightly less but remained substantial (the increase in PDG with hypoxia was +7.9±2.8 mmHg; p<0.05; the increase in PVR was +1.8±1.2 mmHg/L/min, p<0.10). In the third protocol we gave RG 5901, a relatively specific 5-lipoxygenase inhibitor, to 5 dogs with lobar atelectasis. The indices of hypoxic vasoconstriction were not affected by RG 5901. Shunt fraction was 29.5±8.1% before and 27.0±7.4% after RG 5901 (p>0.05). The pressor response to hypoxia was + 8.9±2.1 mmHg before and +8.7±3.7 mmHg after RG 5901 (p>0.05). We conclude that in dogs, hypoxic vasoconstriction does not appear to be mediated by leukotrienes.     

慢性缺氧改变肺内动脉平滑肌细胞环氧合酶基因的表达

目的研究慢性缺氧对肺动脉平滑肌细胞环氧合酶基因表达的影响.方法根据常氧(PaO2152mmHg)及慢性缺氧(PaO240±5nmHg)的不同培养条件,将平滑肌细胞分为常氧组和慢性缺氧组,采用半定量RT-PCR技术检测大鼠肺内动脉平滑肌细胞环氧合酶(COX)基因的表达及其对急性缺氧刺激的反应.结果COX-1mRNA的表达不受缺氧及传代的影响,而COX-2mRNA的表达随慢性缺氧时间延长而增加,在4、6代慢性缺氧培养组均高于同代常氧组水平(P＜0.05).急性缺氧后COX-2mRNA增加的幅度在慢性缺氧组均大于同代常氧组,以第四代最为显著.结论慢性缺氧可增强急性缺氧时肺内动脉平滑肌细胞COX-2基因的表达,在慢性缺氧所致肺血管对缺氧的反应性降低中可能起作用.     

慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉内PTEN蛋白表达的变化

目的 通过观察慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉内人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）蛋白表达水平的变化,初步探讨PTEN在慢性低氧性肺动脉高压的发生、发展过程中所起的作用.方法 将6周龄健康雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、低氧1d、3d、7d、14d和21d组,除对照组外,其他各组先建立慢性低氧肺动脉高压大鼠模型,然后检测各组大鼠右心室收缩压（right ventricle systolic pressure,RVSP）和右心室肥厚指数（right ventricle hypertrophy index,RVHI）,采用HE染色观察肺动脉病理学改变,采用Western blot技术检测肺动脉内PTEN蛋白的表达水平.结果 ①与正常对照组（23.76±0.82）mmHg相比,低氧暴露1d、3d、7d、14 d、21d后RVSP均明显上升（P＜0.05）;RVHI低氧3d、7d、14 d、21d组均较正常对照组（100％）明显上升（P＜0.05）;低氧暴露3d、7d和21d组肺动脉中膜明显增厚、管腔明显变小.②PTEN和p-PTEN在正常对照组和低氧各组均有表达.低氧各组肺动脉内PTEN蛋白的表达较对照组下降,但差异无统计学意义（P＞0.05）;而p-PTEN蛋白与PTEN总蛋白表达量的比值随低氧时间的延长有上升趋势,且在慢性低氧21d组（1.71±0.25）较正常对照组（1.00）明显增高（P＜0.05）.结论 PTEN蛋白表达的降低和p-PTEN蛋白表达的增高可能参与了大鼠慢性低氧性肺动脉高压的发生和发展过程.