蓝光照射对人视网膜色素上皮细胞L-型钙通道mRNA表达的影响

目的 观察蓝光照射对人视网膜色素上皮(RPE)细胞L-型钙通道mRNA表达的影响.方法 体外培养的第4代人RPE细胞按随机数字表法分为无光照组、光照组、光照+硝苯地平组和光照+(-)BayK8644组.(2000±500) Lux蓝光照射6h,终止细胞培养24 h.光照前加入硝苯地平和(-)BayK8644,浓度均为1×10-5 mmol/L.荧光定量聚合酶链(PCR)技术检测各组人RPE细胞L-型钙通道α1C亚型、α1D亚型和α1F亚型mRNA的表达.结果 荧光定量PCR产物α1C、α1D、α1F和内参β-肌动蛋白的cDNA逆转录PCR扩增产物长度分别为68、157、125、186碱基对,产物的凝胶电泳结果显示扩增条带位置与以上片段相吻合.荧光定量PCR检测结果显示,光照组、光照+硝苯地平组、光照+(-)BayK8644组α1C mRNA的表达均高于无光照组,差异有统计学意义(P＜0.05);光照+硝苯地平组、光照+(-)BayK8644组α1C mRNA的表达均高于光照组,差异有统计学意义(P＜0.05);光照+(-)BayK8644组α1C mRNA的表达高于光照+硝苯地平组,差异有统计学意义(P＜0.05).光照组、光照+硝苯地平组、光照+(-)BayK8644组α1D mRNA的表达均高于无光照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);光照+(-)BayK8644组α1D mRNA的表达与光照组和光照+硝苯地平组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);光照+硝苯地平组与光照组α1D mRNA的表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05).光照组、光照+硝苯地平组、光照+(-)BayK8644组α1F mRNA的表达均高于无光照组,差异有统计学意义(P＜0.05);光照+硝苯地平组、光照+(-)BayK8644组α1F mRNA的表达均高于光照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 蓝光照射可引起人RPE细胞L-型钙通道中α1C、α1D及α1F亚型mRNA表达不同程度的增高;1×10-5 mmol/L硝苯地平不能对抗蓝光对RPE细胞L-型钙通道作用,而1×10-5 mmol/L(-)Bay K8644可以增加以上3个亚基的表达.     

蓝光照射对人视网膜色素上皮细胞钙离子蛋白激酶C信号通路的影响

 目的 观察蓝光照射对人视网膜色素上皮细胞钙离子（Ca2+）蛋白激酶C（PKC）信号通路的影响。方法 体外培养并鉴定人视网膜色素上皮（RPE）细胞,取第4代人RPE细胞随机分组进行实验。采用蛋白免疫印迹法测定培养细胞PKC蛋白表达,检测佛波酯（PMA）和钙磷酸结合蛋白（calphostin C）对PKC活性的影响,确定PMA与calphostin C影响PKC活性的最适宜浓度。采用非放射性核素法测定蓝光照射处理对培养细胞PKC活性的影响。采用20 W,波长450～500 nm医用蓝光灯作为光源,光照强度（2000±500） Lux,照射6 h,24 h后终止培养,以此制造体外培养人RPE细胞光损伤。将培养细胞随机分成5个组,即无光照、单纯光照、光照联合硝苯地平、光照联合calphostin C、光照联合PMA组。其中,无光照组不接受光照;单纯光照组仅接受光照;光照联合硝苯地平组接受光照和0.1 mmol/L的硝苯地平;光照联合calphostin C组接受光照和100.0 nmol/L的calphostin C;光照联合PMA组接受光照和100.0 nmol/L的PMA。用乙酰氧基甲基酯Ca²⁺荧光探针标记各组培养细胞,激光扫描共焦显微镜测定各组细胞内Ca2+浓度。比较各组细胞内Ca2+浓度差异。结果 经鉴定,体外培养人RPE细胞成功。100.0、200.0 nmol/L PMA处理的RPE细胞中PKC蛋白相对表达量高于0.1、1.0、10.0、50.0 nmol/L PMA处理的RPE细胞,差异有统计学意义（F=217.537,P＜0.05）,但100.0、200.0 nmol/L PMA处理组间PKC蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义（P=0.072）。100.0、200.0 nmol/L calphostin C处理的RPE细胞中PKC蛋白相对表达量低于5.0、25.0、50.0、75.0 nmol/L calphostin C处理的RPE细胞,差异有统计学意义（F=164.543,P＜0.05）,但100.0、200.0 nmol/L calphostin C处理组间PKC蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义（P=0.385）。蓝光照射处理后,RPE细胞的PKC活性显著升高,与未接受蓝光照射处理的RPE细胞的PKC活性比较,差异有统计学意义（t=-9.869,P＜0.05）。单纯光照、光照联合硝苯地平、光照联合Calphostin C、光照联合PMA组的RPE细胞内Ca²⁺浓度均高于无光照组,差异有统计学意义（F=26 764.92,P＜0.05）;光照联合PMA组RPE细胞内Ca²⁺浓度高于单纯光照、光照联合硝苯地平及光照联合calphostin C组（P＜0.05）,单纯光照组高于光照联合硝苯地平和光照联合calphostin C组（P＜0.05）。结论 蓝光照射后人RPE细胞内PKC活性增高,Ca²⁺浓度增高。硝苯地平和calphostin C均能降低蓝光照射后人RPE细胞内Ca²⁺浓度,PMA增加细胞内Ca²⁺浓度。     

蓝光照射致人视网膜色素上皮细胞线粒体凋亡的途径及机制

背景 研究已证实蓝光照射可导致视网膜色素上皮细胞(RPE)凋亡,但其机制目前尚不完全清楚. 目的 探讨线粒体凋亡通路是否参与蓝光照射诱导体外培养的人RPE细胞凋亡过程.方法 分离新鲜的供体视网膜,对人RPE细胞进行原代培养和传代,用角蛋白单克隆抗体行细胞鉴定.将体外培养的人RPE细胞分为无光照组、单纯光照组、光照+硝苯地平组、光照+钙磷酸结合蛋白C(calphostin C)组、光照+佛波酯(PMA)组.光照组细胞用(2 000±500) lx的蓝光照射人RPE细胞6h,然后继续培养24 h后终止.采用Western blot法比较两个组间RPE细胞中凋亡相关调控因子bax、bcl-2、bcl-xl的相对表达,以评价蓝光照射对RPE细胞凋亡的影响.光照+硝苯地平组、光照+calphostin C组、光照+PMA组细胞在蓝光照射前1h分别在培养基中加入相应药物,然后以(2 000±500) lx的蓝光照射人RPE细胞6h,并继续培养24 h,采用Westernblot法检测5个组细胞中caspase-9蛋白表达量的变化,观察钙通道和蛋白激酶C(PKC)通路对RPE细胞线粒体的影响.结果 培养的细胞生长良好,细胞质内充满色素颗粒,呈铺路石样排列,对角蛋白呈阳性反应.无光照组和单纯光照组均可见bax、bcl-2及bcl-xl蛋白条带,相对分子质量分别为23 000、26 000和30 000.与无光照组比较,单纯光照组bax、bcl-2和bcl-xl蛋白表达相对值(A)下降,差异均有统计学意义(t=-4.409,P=0.012;t=7.575,P=0.002;t=6.068,P=0.004).与无光照组比较,单纯光照组、光照+calphostin C组、光照+PMA组细胞中caspase-9蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P=0.005、0.002、0.000),而光照+硝苯地平组与无光照组比较差异无统计学意义(P=0.191).与单纯光照组比较,光照+PMA组caspase-9蛋白表达升高,差异有统计学意义(P=0.005);而光照+硝苯地平组及光照+calphostin C组caspase-9蛋白表达差异均无统计学意义(P=0.057、0.643). 结论 蓝光致体外培养的人RPE细胞凋亡,同时细胞中caspase-9表达增强,凋亡抑制基因bcl-2及bcl-xl表达下降,凋亡促进基因bax蛋白表达增强.线粒体凋亡通路参与蓝光照射致RPE细胞凋亡的过程;PKC通路可能参与了蓝光导致的人RPE细胞凋亡.     

可见光对视网膜色素上皮细胞氧化损伤的影响

目的 观察可见光对体外培养视网膜色素上皮(RPE)细胞内活性氧(ROS)、8-羟基-2＇-脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)和8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(hOGG1)表达的影响。方法 人RPE-19细胞按1∶4至1∶6传代培养。取第4～6代80％融合细胞用于实验。细胞分为白光、红光、蓝光照射组和对照组,细胞平面光照强度为600 Lux。白光、红光分别照射6、12、24、48 h;蓝光照射1、3、6、12 h;对照组以锡纸包裹避光培养。2＇,7＇-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞内ROS表达量,免疫细胞化学(ICG)法检测细胞内8-OHdG表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内hOGG1表达情况。结果 DCFH-DA法检测结果显示,白光、红光照射组分别照射12、24、48 h,蓝光照射组照射1、3、6、12 h,细胞内ROS表达量均升高且随时间延长而增加,与对照组细胞内ROS表达量比较,差异均有统计学意义（F白光=11.611,F红光=6.706,F蓝光=23.259;P＜0.05）。ICG法检测结果显示,白光、红光照射组分别照射12、24、48 h,细胞胞浆8-OHdG表达量增高,照射后12、24 h表达量随时间延长而增加,48 h有所降低,与对照组细胞胞浆8-OHdG表达量比较,差异均有统计学意义（F白光 =16.032,F红光=6.378;P＜0.05）;蓝光照射组照射后1、3、6、12 h,细胞胞浆8-OHdG表达量均增高,照射后6、12h细胞胞浆8-OHdG表达量较1、3h细胞胞浆8-OHdG表达量有所降低,但与对照组细胞胞浆8-OHdG表达量比较,差异均有统计学意义(F蓝光=19.484,P＜0.01)。Western blot检测结果显示,白光、红光照射组照射12、24、48 h,蓝光照射组照射6、12h,细胞内hOGG1表达量均增高,与对照组细胞内hOGG1表达量比较,差异均有统计学意义(F白光=15.121,F红光=21.041;F蓝光=12.479,P＜0.05)。结论 白光、红光、蓝光能以时间依赖性方式诱导RPE细胞ROS生成增加并导致RPE细胞DNA氧化损伤。RPE细胞在可见光作用下能增加DNA糖基化酶hOGG1的表达量以对DNA氧化损伤进行修复。     

蓝光致人视网膜色素上皮细胞凋亡与线粒体膜电位和细胞色素C的关系

目的探讨蓝光光照对体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡及对线粒体膜通透性转运功能的影响。方法用蓝光光照体外培养的人RPE细胞。实验分为三部分。第一部分:不同光照度,分为3组,第1组光照度(500±100)lx,第2组光照度(2000±500)lx,第3组光照度(3000±500)lx;光照RPE细胞时间6h,光照结束后24h终止培养。第二部分:同一光照度、不同光照时间,检测RPE细胞亚型时分为3组,第1组光照时间6h,第2组光照时间12h,第3组光照时间24h,光照度均为(2000±500)lx;检测线粒体膜电位时也分为3组,第1组光照时间3h,第2组光照时间6h,第3组光照时间12h,光照度均为(2000±500)lx。第三部分:同一光照度和光照时间,光照度(2000±500)lx,光照RPE细胞时间6h;不同细胞培养终止时间分为4组,第1组终止细胞培养时间为光照后6h,第2组为光照后12h,第3组为光照后24h,第4组为光照后36h。利用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)染色、荧光素标记的AnnexinV-FITC和PI双染流式细胞检测、透射电镜等手段观察RPE细胞凋亡情况。罗丹明123荧光染料孵育人RPE细胞,流式细胞仪检测线粒体膜电位,酶联免疫法测定细胞色素C活性,比色测定法测定Caspase-3的活性。结果第二部分第1组TUNEL染色阳性细胞的体积缩小变圆,胞核浓缩,边聚成新月形或帽状,细胞核碎裂成数个,细胞膜出胞。透射电镜观察发现细胞内线粒体肿胀,线粒体内膜嵴消失,粗面内质网扩张,溶酶体增加。第一部分(500±100)lx光照未引起明显的RPE细胞损伤,但线粒体膜电位明显下降;随着光照度增加,RPE细胞出现凋亡、凋亡继发性坏死及坏死,同时线粒体膜电位逐渐下降。第二部分光照6和12h,凋亡细胞百分比增加,荧光强度明显下降;光照24h凋亡继发性坏死细胞、坏死细胞百分比增加。第三部分光照后6和12h,RPE细胞凋亡百分比逐渐增加;光照后24、36h凋亡继发性坏死细胞和坏死细胞百分比明显增加,光照后各时间点RPE细胞荧光强度明显下降。以光照度(2000±500)lx照射6和12h,可见光照后24和36h两组的细胞色素C浓度明显升高,未检测到Caspase-3活性变化。结论蓝光照射可导致体外培养的人RPE细胞凋亡、凋亡继发性坏死及坏死,其损伤程度与光照度和时间相关;蓝光照射导致培养的人RPE细胞损伤过程与线粒体膜电位降低、细胞色素C释放有关;线粒体膜电位可作为检测蓝光致人RPE细胞凋亡的早期指标。     

蓝光诱导体外培养的人视网膜色素上皮细胞凋亡

目的 观察蓝光光照对体外培养的人视网膜色素上皮（RPE）细胞凋亡的影响。 方法 用蓝光照射体外培养的人RPE细胞，分为3组，A组：不同光照强度；B组：同一光照强度，不同光照时间；C组：同一光照强度和光照时间，不同细胞培养终止时间。利用末端脱氧核酸转移酶介导的原位缺口末端标记（TUNEL）、荧光素标记的连接素V/碘化吡啶（Annexin V-FITC/PI）双染流式细胞检测、透射电子显微镜等手段观察细胞凋亡。 结果 TUNEL染色阳性细胞的体积缩小变圆，细胞核浓缩，边聚成新月形或帽状，细胞核碎裂成数个，细胞膜出胞。透射电子显微镜观察发现细胞内线粒体肿胀，线粒体内膜嵴消失；粗面内质网扩张；溶酶体增加，内含代谢产物。A组低于一定阈值［（500±100）lx］的蓝光光照对RPE细胞损伤较轻，细胞凋亡及坏死随光照强度的增强而增加；B组随着光照时间延长，RPE细胞凋亡数量没有增加，而细胞坏死逐渐增加；C组光照后6、12h，损伤以细胞凋亡为主，但随着光照时间延长，凋亡继发坏死细胞和坏死细胞明显增加。 结论 蓝光照射可引起体外培养的人RPE细胞损伤，损伤形式有凋亡、凋亡继发坏死及坏死；损伤程度呈光照强度和光照时间依赖性。 (中华眼底病杂志, 2005, 21: 384-387)     

内质网应激对光照诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的促进作用

背景 视网膜色素上皮(RPE)细胞的光损伤模型是多种视网膜变性类疾病的研究工具,光诱导RPE细胞损伤的主要病理基础是凋亡及炎症反应,但是内质网应激(ERS)反应是否参与其病理机制的研究国内外少有报道. 目的 探讨ERS对光损伤诱导的人RPE细胞凋亡的作用及其机制.方法 体外培养人RPE细胞株(ARPE-19),将培养的细胞分为正常对照组及光照3、6、12和24 h组,各光照组在培养箱内以(2 000± 500) lx的白色荧光灯光照细胞建立光损伤模型,正常对照组细胞在暗环境中培养且不给予光照射,筛选实验最适光照时间.将细胞分为正常对照组、光照组(光照12h)和苯基丁酸(4-PBA)预处理+光照组,4-PBA预处理+光照组先用ERS抑制剂4-PBA培养细胞30 min,然后光照细胞12h.采用流式细胞仪检测各组人RPE细胞的凋亡率和细胞内活性氧(ROS)的荧光强度;采用ELISA法检测各组细胞上清液中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)质量浓度;分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测人RPE细胞中ERS标志物活化转录因子-6(ATF-6)、C/增强结合蛋白同源蛋白(CHOP)和细胞凋亡标志物半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12) mRNA及其蛋白的表达. 结果 光照后细胞形态呈长梭形改变,边界不清,细胞质脱颗粒,细胞碎片增多,且随光照时间的延长而加重.流式细胞仪检测发现,随光照时间的延长,人RPE细胞内ROS含量逐渐增加,细胞凋亡率逐渐升高,差异均有统计学意义(F=763.00、119.30,均P＜0.01).ELISA法检测发现,与正常对照组比较,光照后6h细胞上清液中IL-1β和TNF-α质量浓度均明显升高,12h达峰.实时荧光定量PCR和Western blot检测显示,与正常对照组比较,光照后人RPE细胞中ATF-6、CHOP和caspase-12 mRNA及其蛋白的相对表达量均明显升高,均于光照后12h达峰或升高,故选择光照12 h为最适光照时间作为后续研究.4-PBA预处理+光照组细胞中ATF-6、CHOP和caspase-12 mRNA的相对表达量均明显低于光照组,差异均有统计学意义(F=281.69、473.88、308.45,均P＜0.01);ATF-6、CHOP和caspase-12蛋白的相对表达量均明显低于光照组,差异均有统计学意义(F=47.86、57.93、106.59,均P＜0.01);细胞凋亡率、细胞上清液中IL-1β和TNF-α质量浓度均明显低于光照组,差异均有统计学意义(F=88.64、245.47、101.01,均P＜0.01). 结论 (2 000±500)lx的光照可诱导人RPE细胞内ROS增加,并激活细胞的ERS反应,导致RPE细胞凋亡及炎症反应.ERS抑制剂4-PBA可抑制光损伤导致的ERS反应,进而降低RPE细胞凋亡率并抑制炎症反应过程.     

组织因子靶向肽对蓝光诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用

背景 视网膜光损伤可造成视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤,是影响年龄相关性黄斑变性(AMD)发生和发展的重要因素之一.研究表明,组织因子(TF)在氧化损伤的RPE细胞中和AMD患者的脉络膜新生血管(CNV)中呈高表达,推测抑制TF可预防RPE细胞的损伤以及抑制CNV. 目的 观察TF靶向肽(TF-TP)对蓝光诱导的人RPE细胞损伤的保护作用. 方法 体外分离和培养人RPE细胞并分为空白对照组、蓝光照射组和TF-TP组.空白对照组细胞在常规条件下进行处理;蓝光照射组细胞用辐照强度为(4.0±0.5)mW/cm2的蓝光照射12h建立蓝光损伤细胞模型;TF-TP组先分别用不同浓度(10、100、150、200、300 μmol/L)TF-TP培养细胞24 h,再用蓝光照射12h.采用CCK-8法检测各组细胞的存活率;分别在普通倒置显微镜和透射电子显微镜下观察RPE细胞的形态和超微结构变化;采用Hoechst染色法检测各组细胞的凋亡情况;采用Western blot法检测各组细胞中TF蛋白和相关凋亡蛋白bax和bcl-2的表达.结果 不同浓度TF-TP组间RPE细胞存活率比较,差异无统计学意义(F=2.15,P=0.11).空白对照组、蓝光照射组和150 μmol/L TF-TP组细胞存活率分别为(100.0±0.00)％、(43.79±6.55)％和(63.45±3.57)％,150 μmol/LTF-TP组细胞存活率较蓝光照射组明显增加,差异有统计学意义(P=0.00),以150.μmol/L TF-TP为后续实验的最适浓度.光学显微镜下和透射电子显微镜下显示,蓝光照射组有较多皱缩、变形、悬浮细胞,可见细胞微绒毛数量减少,部分线粒体嵴断裂和缺失以及细胞空泡样变性,而150 μmol/L TF-TP组异常形态的细胞较少,细胞绒毛结构较完整,细胞质中空泡样结构改变和线粒体损伤改变明显减轻.空白对照组、蓝光照射组和150 μmol/L TF-TP组细胞凋亡率分别为(0.98±0.19)％、(9.98±0.82)％和(5.73±0.88)％,组间总体比较差异有统计学差异(F=206.18,P=0.00),其中150 μmol/L TF-TP组细胞凋亡率明显低于蓝光照射组,差异有统计学意义(P＜0.05).与空白对照组相比,蓝光照射组细胞中bax蛋白和TF蛋白的相对表达量明显增加,bcl-2蛋白的相对表达量显著下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05);与蓝光照射组相比,150 μmol/L TF-TP组细胞中bax蛋白和TF蛋白的相对表达量均明显下降,而bcl-2蛋白的相对表达量明显增加,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 TF-TP预处理后可减少蓝光损伤的人RPE细胞的凋亡及增加细胞的存活率,从而对蓝光诱导的人RPE细胞损伤发挥保护作用,其作用机制可能与TF-TP抑制TF介导的bax/bcl-2凋亡通路有关.     

蓝光照射对小鼠视网膜形态和功能的损伤作用

目的通过观察蓝光照射对C57BL/6J小鼠视网膜形态和功能的影响,探讨非渗出性年龄相关性黄斑变性(AMD)的模型。方法采用投币法将20只8周龄清洁级C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常对照组和蓝光照射组。蓝光照射组小鼠暗适应24 h后暴露于10000 lx蓝光下5 d,正常对照组小鼠按12 h/12 h正常光照/黑暗的周期饲养于正常光照环境5 d。采用光相干断层扫描成像(OCT)活体检查各组小鼠视网膜厚度变化,采用视网膜电图(ERG)检查各组小鼠视网膜功能变化。于光照结束后24 h采用颈椎脱臼法处死小鼠并制备眼球壁标本,采用免疫荧光染色法测定小鼠视网膜中视紫红质(Rho)、紧密连接蛋白(ZO-1)和β-catenin蛋白表达。结果蓝光照射组小鼠视网膜上部和下部距视盘200、400、600、800和1000μm处视网膜外核层厚度均较正常对照组变薄,差异均有统计学意义(均P<0.05)。蓝光照射组小鼠暗适应和明适应b波振幅分别为(305.50±41.52)μV和(119.50±6.67)μV,分别低于正常对照组的(415.50±28.77)μV和(139.75±8.26)μV,差异均有统计学意义(均P<0.05)。正常对照组小鼠RPE细胞呈正六边形,视网膜各层形态规则,Rho、ZO-1和β-catenin荧光较强;蓝光照射组小鼠RPE细胞形态不规则,ZO-1染色减弱或消失,β-catenin染色和Rho蛋白荧光强度减弱。结论蓝光照射小鼠视网膜变薄,视网膜功能减弱。     

手机光照刺激对视网膜色素上皮细胞的影响

目的：观察手机光照刺激体外培养人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium; RPE)后形态及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl2-Associated X(Bax)、半胱天冬酶-3(Caspase-3)的mRNA表达变化。

方法：将体外培养的人RPE细胞随机分成4组,根据RPE细胞光照时间长短分为照射3h光照组、6h光照组、12h光照组和0h光照组。在特制的培养箱内,将智能手机屏幕开到最大亮度(200±20Lx)做为光源,持续静音情况下循环播放彩色图片。然后应用苏木精-伊红(HE)染色法,末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)染色,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法观察各实验组RPE细胞形态学改变,并运用聚合酶链反应(PCR)技术检测各组细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3的mRNA表达变化。

结果：用HE染色、TUNEL染色、MTT法观察发现各光照组RPE细胞形态学无明显改变,差异均无统计学意义(P>0.05)。应用PCR技术检测发现RPE细胞在光照刺激3h光照组和6h光照组,细胞内的Bcl-2、Bax、Caspase-3的mRNA表达与0h光照组的差异均无统计学意义(P>0.05)。但随着光照时间持续延长(12h),细胞内的Bcl-2表达下调,Bax、Caspase-3表达水平均上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。

结论：手机屏幕等作为人造光源在长期持续高亮度照射下会引起体外培养人视网膜色素上皮细胞的损伤。     

双氯酚酸钠玻璃体内应用对视网膜结构和功能的影响

目的 了解非甾体类抗炎药物双氯酚酸钠（diclofenac sodium,DFS)玻璃体内注射对视网膜的毒性作用，探索眼内应用DFS的安全剂量范围。方法 28只健康成年大耳白兔，随机分为7组，分别于每组右眼玻璃体内注入4、5、6、7、8、9、10mg/ml的DFS溶液0.1ml，左眼为对照组。注药前及注药后1、3、7、14、21、28d分别行双眼视网膜电图（electroretinogram,ERG)检查。注药后10、28、30d分别摘除眼球行光学显微镜和透射电镜检查。结果 注药剂量0.4、0．5mg组ERG明、暗适应b波波幅比率与注药前相比差异无显著意义，透射电镜及光学显微镜检查均未见组织结构有明显异常。0.6mg组在注药后1d ERG明适应b波波幅比率较注药前明显下降（P＜0．05），注药后3d开始恢复，至注药后14d已达注药前水平（P＞0．05），光学显微镜及透射电镜检查显示视网膜组织已出现水肿等可逆改变，部分仍维持正常结构。0.7-1.0mg组ERG b波波幅比率与注药前相比明显下降（P＜0．05），且不能恢复，光学显微镜及透射电镜检查显示视网膜各层结构损伤，在注药后10、30d均可见到细胞核染色质浓缩集聚、细胞坏死等不可逆改变。结论 DFS玻璃体内注射的最大安全剂量不得超过0.6mg。当注药剂量大于或等于0.7mg时，对视网膜各层结构产生毒性，主要表现为锥、杆细胞的不可逆损害。     

增生型糖尿病视网膜病变者玻璃体手术后无光感原因分析

目的 分析增生型糖尿病视网膜病变(PDR)患者玻璃体视网膜手术后无光感的危险因素。 方法 回顾分析882例PDR患者1000只患眼行玻璃体视网膜手术治疗的随访观察资料，以暗室中一只眼完全遮盖，另一只眼不能辨别距眼前30 cm的烛光光亮为无光感的标准判断无光感眼的眼数，比较有无光感眼的临床资料，并使用χ²检验对导致无光感眼发生的可能相关危险因素进行分析。 结果 接受玻璃体视网膜手术治疗的1000只PDR患眼中，手术后22只眼视力为无光感，占2.2%；有光感眼978只，占97.8%。与有光感组患者比较,无光感眼患者病变严重，其中36.4%手术前即为新生血管性青光眼(NVG)，50.0%为牵拉合并孔源性视网膜脱离，45.5%为手术中需要联合晶状体切除，63.6%手术结束时需要硅油填充。手术后14只眼为NVG, 5只眼视网膜未复位(手术前均为PDRⅥ期),3只眼视神经萎缩伴视网膜血管闭锁。这些情况的发生比例与有光感组相比差异均有统计学意义(P<0.001，P=0.004，P＜0.001）。但有无光感者性别、糖尿病类型及PDR分期没有表现出统计学差异(P=0.136，P=0.681,P=0.955）。 结论 PDR患者玻璃体视网膜手术后无光感发生率较低，导致手术后无光感的主要危险因素有手术后NVG、视神经萎缩伴视网膜血管闭锁、视网膜未复位；而患者性别、糖尿病类型，尤其是PDR分期在有无光感患眼中没有表现出有统计学意义的差异。(中华眼底病杂志,2007,23:244-247)     

中间葡萄膜炎的临床特征与治疗

目的 观察中间葡萄膜炎的临床表现、并发症和治疗效果。方法 回顾分析36例中间葡萄膜炎患者66只眼的临床表现、荧光素眼底血管造影（FFA）特征、治疗效果和预后。患者中男21例，女15例，年龄8～70岁，平均年龄34.8岁。双眼30例，单眼6例。结果 主要临床表现为玻璃体混浊，周边部视网膜血管病变，视盘水肿，黄斑水肿和后囊下白内障。FFA表现为周边部视网膜血管炎性病变，视盘强荧光，黄斑囊样水肿和视网膜静脉染色。经治疗后，31例患者60只眼视力提高，占90.9%；4例5只眼视力稳定，占7.6%；1例1只眼视力下降，占1.5%。导致视力损害的主要并发症有黄斑囊样水肿、后囊下白内障和玻璃体积血。结论 中间葡萄膜炎是一种较常见的双眼慢性进行性眼内炎症，主要累及前部玻璃体、睫状体扁平部和周边部视网膜血管，早期发现和及时治疗可防止发生永久性视力损害。     

应用闭角型青光眼新的分类和定义指导临床治疗

用国际上新的闭角型青光眼分类和定义指导临床治疗具有简捷和可操作性的优点。对可疑原发性房角关闭除了密切随访外，有选择性地行周边虹膜切除术；对急性和慢性原发性房角关闭可根据发生机制和临床特征对患者进行不同的临床处理；对原发性闭角型青光眼可根据视神经损害程度和靶眼压选择药物、激光或滤过性手术等治疗。（眼科,2007,16：12-13）     

增生型糖尿病视网膜病变玻璃体切除手术后再出血病因及治疗

目的 分析增生型糖尿病视网膜病变(PDR)玻璃体切割手术后再出血病因，观察再治疗效果。 方法 回顾分析302例PDR患者315只患眼接受玻璃体切割手术治疗后32只眼再出血并再次治疗后随访3~48个月（平均随访时间12个月）的临床资料。 结果 PDR玻璃体切割手术后再出血发生率为10%，再出血发生时间为手术后1～210 d，平均时间为51 d。再出血的主要原因中，28%为巩膜切口纤维血管向内生长，19%为视盘表面残存新生血管膜或血管残端处理不当，22%为视网膜激光光凝不足，9%为视网膜表面新生血管膜剥除不彻底，6%为视网膜静脉阻塞，16%为外力作用。通过冷凝巩膜切口处纤维血管、剥离视盘和视网膜表面残存新生血管膜并电凝视盘表面血管残端、补充视网膜激光光凝、 包扎双眼等治疗，再出血眼视力提高者占91%，视力下降者占9%。再次手术后并发症主要包括再次出血、虹膜后粘连、晶状体混浊加重、角膜上皮愈合延迟等。 结论 PDR玻璃体切割手术治疗后再出血的主要原因是巩膜切口纤维血管向内生长、视盘表面和（或）视网膜表面新生血管膜剥除不彻底、血管残端处理不当、视网膜激光光凝不足和外力作用。处理好巩膜切口、彻底剥离视盘和视网膜表面新生血管膜、电凝血管残端以及足够的视网膜激光光凝是预防和治疗PDR玻璃体切割手术后再出血的有效方法。(中华眼底病杂志,2007,23:238-240)      

糖尿病视网膜病变玻璃体切除术后玻璃体出血的临床分析

目的 探讨糖尿病视网膜病变(DR)玻璃体切割手术后玻璃体积血的原因，处理措施以及对预后的影响。 方法 回顾性分析98例DRⅣ期患者122只眼行玻璃体手术治疗后发生玻璃体积血25只眼的临床资料。 结果 玻璃体切割手术后发生玻璃体积血占本组玻璃体切割手术患者的20.5%。积血发生在手术后1周内者8只眼，1周至1个月者6只眼，1个月以上者11只眼。25只眼中C₃ F₈填充眼占31.1%,硅油填充眼占6.1%；空气填充眼占33.3%；灌注液填充眼占26.3%。视网膜周边部新生血管增生9只眼。3只硅油填充眼中2只眼积血自行吸收，1只眼局部形成视网膜前膜，在硅油取出同时行前膜剥除；22只非硅油填充眼中6只眼积血自行吸收；2只眼积血加重，但未及时处理，1只眼发生新生血管性青光眼，1只眼广泛玻璃体视网膜增生脱离，视力无光感；14只眼观察2周积血无吸收后进行了再次手术治疗，12只眼1次手术处理后未再积血。随访结束时，视力无光感者3只眼，手动者2只眼，数指～0.1者10只眼，0.3及以下者4只眼，0.3以上者6只眼。 结论 DR玻璃体切割手术后发生玻璃体积血的患者多数有周边部新生血管增生，经过及时手术治疗，预后较好。 (中华眼底病杂志,2007,23:241-243)     

玻璃体内注射曲安奈德治疗黄斑水肿

目的 观察玻璃体内注射曲安奈德（TA）治疗黄斑水肿的效果。 方法 经检眼镜、光相干断层扫描(OCT)或（和）视网膜厚度分析仪(RTA)及荧光素眼底血管造影（FFA）检查证实的糖尿病、视网膜静脉阻塞所致的弥漫性或（和）囊样黄斑水肿患者33例37只眼，玻璃体内注射40 mg/ml的TA 0.1 ml，随访1～9个月，观察视力、眼压、炎症反应、晶状体、眼底情况，OCT或RTA检查视网膜厚度改变，FFA观察毛细血管渗漏情况。 结果 治疗后1、2、3个月视网膜厚度分别为（244.07±118.80）、（195.53±57.70）、（181.42±54.79） μm，与治疗前的视网膜厚度（724.35±227.41） μm相比，差异具有统计学意义（t值分别为10.72、12.84、13.90，P 值均<0.001）。视力分别为0.39±0.19、0.45±0.24、0.43±0.21，与治疗前的视力0.20±0.16比较，其差异具有统计学意义（t 值分别为4.445、4.349、3.474，P值分别为<0.001、<0.001、0.03）。FFA显示治疗后荧光素渗漏明显减少，增生性改变减轻。9例患者眼压≥20 mm Hg（1 mm Hg =0.133 kPa），其中4例≥25 mm Hg。3例患者4只眼分别在治疗后4、6个月黄斑水肿复发。未见晶状体混浊加重，无感染发生。 结论 玻璃体内注射TA可以有效治疗糖尿病、视网膜静脉阻塞所致的黄斑水肿；但有部分患眼黄斑水肿复发、部分患眼出现眼压升高。(中华眼底病杂志,2005,21:205-208)     

浅视杯小视盘与前部缺血性视神经病变发病的关系

目的 观察非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)患者视盘视杯形态特征与发病的关系.方法 符合NAION诊断标准,病史≥3个月,水肿消退期的96例NAION患者的96只患眼、96只对侧眼和80只正常对照眼纳入研究.应用德国Carl Zeiss公司Humphrey2000型光相干断层扫描(OCT)检查系统进行"十字交叉"和"环形"扫描,分别测量视盘、视杯水平垂直直径、视杯深度及视盘周围(盘周)视网膜神经纤维层(RNFL)厚度,依OCT视杯深浅形态图像分为4级:Ⅰ级,视杯底部高于盘周神经上皮层前表面水平;Ⅱ级,视杯底部高于盘周神经上皮层面水平;Ⅲ级,视杯底部位于盘周神经上皮层面与脉络膜色素上皮水平之间;Ⅳ级,视杯底部位于脉络膜色素上皮水平连线之下,对视杯分级情况和各组测量数值进行统计分析.随访观察6个月～3年,平均随访观察15个月.结果 患眼、对侧眼、正常对照眼视盘水平扫描直径分别为(1.29±0.19)、(1.32±0.17)、(1.40±0.15)mm,垂直扫描直径分别为(1.52 4±0.14)、(1.49±0.17)、(1.60±0.22)mm.患眼、对侧眼视盘水平扫描直径平均值与正常对照眼视盘水平扫描直径平均值比较,差异有统计学意义(t=4.291,3.315;P<0.05);视盘垂直扫描直径平均值与正常对照眼垂直扫描直径平均值比较,差异有统计学意义(t=2.812,3.654;P<0.05);患眼视盘水平、垂直扫描直径平均值与对侧眼视盘水平、垂直扫描直径平均值比较,差异无统计学意义(t=1.153,1.335;P>0.05).患眼中Ⅰ级视杯者36只眼,占37.50%,Ⅱ～Ⅲ级视杯者52只眼,占54.17%,Ⅳ级视杯者8只眼,占8.33%,Ⅰ～Ⅲ级视杯者共88只眼,占91.67%;对侧眼中Ⅰ级视杯者18只眼,占18.75%,Ⅱ～Ⅲ级视杯者69只眼,占71.88%,Ⅳ级视杯者9只眼,占9.34%,Ⅰ～Ⅲ级视杯者87只眼,占90.66%.依颞侧、上、鼻、下各象限顺序患眼RNFL测量平均值与对侧眼、正常对照眼比较,差异有统计学意义(t=12.862,10.147,15.046,8.180,12.859,9.562,12.174,8.632;P<0.001);对侧眼与正常对照眼各象限RNFL厚度平均值比较,差异无统计学意义(t=1.040,1.576,1.062,1.192;P>0.05).在观察期内,患眼8只眼复发,其视杯为Ⅰ、Ⅱ级形态;对侧眼44只眼发病,占45.8%,相关性分析显示发病率和视杯深度呈负相关(t=-0.757,P=0.000).结论 NAION患跟及对侧眼视杯及视盘明显小于正常人,浅视杯和小视盘的解剖学特点是NAION发病的基础之一.     

睫状神经营养因子及其受体在正常及变性视网膜中表达水平与分布的变化

目的 观察正常Sprague-Dawley（SD）和遗传性视网膜变性Royal College of Surgeons (RCS)大鼠视网膜发育过程中睫状神经营养因子(CNTF)及其受体(CNTFR)的表达水平与分布特点。 方法 新生至成年(12个月龄) SD和RCS大鼠视网膜石蜡切片，免疫组织化学染色显示睫状神经营养因子及其受体表达水平和分布变化。 结果 出生后0～7 d,SD大鼠神经视网膜全层染色呈阳性，随着周龄增加，节细胞染色明显增强，而其他细胞染色减弱，至28 d时节细胞染色达高峰，并持续至老年；RCS大鼠视网膜CNTF免疫组织化学染色结果与SD大鼠基本相同。出生后0～3 d, SD大鼠神经视网膜全层CNTFR的表达呈弱阳性，节细胞染色稍深，在将来要发育成外节处可见断续阳性染色；随着周龄增加，光感受器外节处阳性染色逐渐增强，14～28 d染色达到高峰；56 d时外节染色减弱，而节细胞染色却明显增强，直至老年。3～14 d RCS大鼠视网膜CNTFR染色基本与同龄SD大鼠一致，但21 d起外节染色明显减弱，28 d时外节染色基本呈阴性，但节细胞仍呈强阳性，一直持续到老年。 结论 CNTF的表达在正常和变性大鼠间无明显差异；CNTFR主要在节细胞和光感受器外节处高水平表达，正常和变性RCS大鼠间存在显著差异，为利用CNTF治疗视网膜变性提供了实验证据。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 120-123)