密蒙花总黄酮含药血浆对干眼症细胞模型Bax mRNA及Bcl-2 mRNA表达的影响

目的：观察密蒙花总黄酮含药血浆对干眼症细胞模型中泪腺上皮细胞Bax mRNA及Bcl-2 mRNA表达的影响。

方法：将培养生长状态良好的泪腺上皮细胞,随机分为无雄激素培养黄酮治疗组(以下简称密蒙花总黄酮组),含雄激素培养对照组(以下简称雄激素组),无雄激素培养空白组(以下简称空白组)。分别加入含密蒙花总黄酮血浆、丙酸睾酮、含空白血浆开始进行干预。建立干眼症细胞模型。用Trizol试剂提取细胞总RNA。RT-PCR法检测泪腺上皮细胞中Bax mRNA及Bcl-2 mRNA的表达。

结果：密蒙花组、雄激素组能够抑制泪腺上皮细胞中Bax mRNA的表达,与空白组比较差异有显著性(P<0.01); 密蒙花组Bax mRNA的表达低于雄激素组,比较差异有显著性(P<0.01)。密蒙花组、雄激素组Bcl-2 mRNA的表达均高于空白组,比较差异有显著性(P<0.01); 密蒙花组Bcl-2 mRNA的表达高于雄激素组,比较差异有显著性(P<0.01)。

结论：密蒙花总黄酮含药血浆作用于雄激素水平下降所致干眼症的细胞模型可抑制Bax mRNA的表达,使Bax mRNA的表达量降低,同时促进Bcl-2 mRNA的表达,使Bcl-2 mRNA的表达量增加。密蒙花总黄酮含药血浆很可能是通过抑制泪腺上皮细胞中Bax mRNA及促进Bcl-2 mRNA表达的途径而达到抑制细胞凋亡的作用。     

高糖对人视网膜色素上皮细胞神经钙黏连蛋白和纤维连接蛋白表达的影响

目的：体外建立高糖培养人视网膜色素上皮(hRPE)细胞模型,观察高糖条件下RPE细胞神经钙黏连蛋白(N-cadherin)和纤维连接蛋白(fibronectin)的表达变化,探讨高糖对RPE细胞发生上皮间质转化(EMT)的影响。

方法：体外培养hRPE细胞,以60mmol/L的葡萄糖建立高糖模型,实验分对照组(5.5mmol/L的葡萄糖)和高糖24,48,72h组,用免疫组织化学法及Real-time PCR技术检测各组RPE细胞N-cadherin和fibronectin的表达。

结果：高糖组RPE细胞出现排列紊乱,胞体变长变大,高糖72h组最明显。免疫组织化学法检测结果显示：与对照组相比,高糖组RPE细胞N-cadherin表达呈下降趋势; 而fibronectin表达出现并呈升高趋势。Real-time PCR检测结果显示：与对照组相比,高糖组RPE细胞N-cadherin mRNA表达水平在24h时出现下降,72h时降低最明显(F=12.252,P=0.000),24h组与对照组相比差异无统计学意义,48h及72h组分别与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05); 与对照组相比,高糖组RPE细胞fibronectin mRNA表达水平在24h时出现升高,72h时升高最明显(F=50.543,P=0.000),24h组与对照组相比差异无统计学意义,48h及72h组fibronectin mRNA表达水平明显升高,分别与对照组相比差异有统计学意义(P=0.000,P=0.000)。

结论：高糖条件下RPE细胞上皮标记物N-cadherin表达下调,间质标记物fibronectin表达出现,发生EMT改变,这一现象为探讨增生性糖尿病视网膜病变的发病机制及其防治提供新的思路。     

姜黄素对人翼状胬肉成纤维细胞增殖和凋亡及迁移的影响

目的：探讨姜黄素对体外培养的人翼状胬肉成纤维(HPF)细胞增殖和凋亡及迁移的影响。

方法：收集我院2021-11-24/12-16手术切除的翼状胬肉组织7例,进行原代成纤维细胞体外培养,并采用免疫荧光染色法进行细胞鉴定。采用含等量二甲基亚砜的0、10、20、40、80、160μmol/L姜黄素处理HPF细胞24h后,用CCK8法检测细胞增殖情况。根据CCK8检测结果将细胞分为对照组(不含姜黄素)、20μmol/L姜黄素组、40μmol/L姜黄素组,每组分别处理HPF细胞24h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell迁移实验检测细胞迁移,实时荧光定量PCR法和Western blot法检测Bax、Bcl-2、Cyclin D1及MMP2的mRNA与蛋白表达。

结果：与对照组相比,20μmol/L姜黄素组和40μmol/L姜黄素组均能抑制HPF细胞的增殖和迁移,并诱导其凋亡(均P<0.05)。与对照组相比,20μmol/L姜黄素组能下调Cyclin D1及MMP2,上调Bax的mRNA表达,下调Bcl-2的蛋白表达(均P<0.05)。与对照组相比,40μmol/L姜黄素组能下调Bcl-2、Cyclin D1及MMP2的mRNA与蛋白表达,上调Bax的mRNA与蛋白表达(均P<0.05)。与20μmol/L姜黄素组相比,40μmol/L姜黄素组能下调MMP2的mRNA表达,下调Bcl-2的蛋白表达,上调Bax的mRNA与蛋白表达(均P< 0.05)。

结论：姜黄素可通过抑制Cyclin D1的表达抑制HPF细胞的增殖,通过下调Bcl-2并上调Bax的表达来诱导HPF细胞的凋亡,通过下调MMP2的表达来抑制HPF细胞的迁移。     

不同光照形式对豚鼠视网膜色素上皮细胞TGF-β2表达的影响

目的：探讨不同光照形式对豚鼠视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞表达转化生长因子-β₂(transforming growth factor β₂,TGF-β₂)的影响。

方法：幼年健康豚鼠(2周龄)10只,体外培养RPE细胞,传代、鉴定后,将细胞分为聚焦光组、离焦光组、平行光组和空白对照组,前3组分别接受聚焦光、离焦光(均为将平行光经透镜转化)和平行光照射,空白对照组不接受照射。于照射后24h采用免疫细胞化学法、实时荧光定量PCR法(real-time fluorescence quantitative PCR, RTFQ-PCR)检测细胞中TGF-β₂及TGF-β₂ mRNA的表达,分析不同光照形式与效应的关系。

结果：免疫细胞化学法显示各组TGF-β₂表达均为阳性,病理VISTA图像分析软件测量单位面积中平均光密度(optical density,OD)值进行半定量分析,聚焦光组明显高于其它各组,组间比较有统计学差异(F=11.08,P<0.05); RTFQ-PCR法显示,聚焦光组TGF-β₂mRNA表达水平较其它各组明显增加,组间比较有统计学差异(F=133.01,P<0.05)。

结论：不同形式光线可影响豚鼠RPE细胞TGF-β₂表达,以聚焦光最明显。     

[已撤稿]人视网膜色素上皮细胞在缺氧和高糖环境中VEGF165及VEGF165b的表达及意义

目的：研究体外培养的人视网膜色素上皮细胞在人工模拟的缺氧和高糖环境中VEGF₁₆₅ 及VEGF_165b 表达的情况。

方法：正常接种并体外培养人视网膜色素上皮细胞,待细胞稳定生长后以150μmol/L CoCl₂ 和25mmol/L 葡萄糖浓度分别模拟细胞缺氧和高糖环境,将接种细胞分为正常组(5.56mmol/L 葡萄糖)、缺氧组(5.56mmol/L 葡萄糖+150μmol/L CoCl₂)、高糖组(25mmol/L 葡萄糖,不加CoCl₂)、联合组(25mmol/L 葡萄糖+150μmol/L CoCl₂)共四组。每组分别于12、24、36、48h提取RNA。MTT 比色法检测细胞活力及增长趋势; RT-PCR 法检测不同时间点四组RPE 细胞VEGF₁₆₅ mRNA 和VEGF_165b mRNA 的相对表达量。

结果：缺氧和高糖环境下RPE 细胞分裂增殖受限,细胞活力降低。同一组细胞不同时间点比较,正常组VEGF₁₆₅和VEGF_165b随时间变化的表达差异无统计学意义(P >0.05),而缺氧组、高糖组、联合组VEGF₁₆₅和VEGF_165b的表达则随时间变化而变化,差异有统计学意义(P<0.05)。同一时间点各组相互比较,在缺氧模型建立后12h 各组细胞间VEGF₁₆₅和VEGF_165b的表达差异无统计学意义(P >0.05),而24、36、48h 时各组细胞VEGF₁₆₅和VEGF_165b的表达差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：体外培养RPE细胞能够正常表达VEGF_165b,缺氧和高糖是在转录水平诱导VEGF₁₆₅ mRNA的表达上调,同时降低了VEGF_165b mRNA的表达量。     

视网膜色素上皮细胞表达IL-1β和IL-6与细胞自噬的关系

目的：研究细胞自噬在缺氧条件下视网膜色素上皮(RPE)细胞表达炎性因子IL-1β和IL-6中的作用。

方法：将体外培养的人RPE细胞系随机分为缺氧组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)+缺氧组、氯喹(CQ)+缺氧组和对照组。培养24h后采用Western blot法检测各组细胞的自噬关键蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、Beclin-1及p62的相对表达水平; 采用ELISA法检测各组细胞上清液中IL-1β和IL-6的浓度。

结果：缺氧组IL-1β和IL-6的浓度明显高于对照组、3-MA+缺氧组和CQ+缺氧组(均P<0.01)。缺氧组细胞中LC3B-Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的相对蛋白表达量均明显高于对照组和3-MA+缺氧组,缺氧组中LC3B-Ⅱ/Ⅰ的相对蛋白表达量低于CQ+缺氧组(均P<0.01)。缺氧组细胞中p62相对蛋白表达量明显低于对照组、3-MA+缺氧组和CQ+缺氧组(均P<0.01)。

结论：缺氧使RPE细胞LC3B-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1表达增强,p62表达减弱,并促进细胞分泌IL-1β和IL-6,自噬抑制剂3-MA和CQ能够减少RPE细胞表达IL-1β和IL-6。     

银杏内酯B联合视网膜干细胞移植对青光眼大鼠的影响及机制研究

目的：研究银杏内酯B联合干细胞移植对青光眼大鼠的影响及相关机制。

方法：实验共分为五组：正常对照组(Control)、青光眼模型组(GLA)、干细胞组(RSCs)、银杏内酯B组(GKB)与混合组(RSCs+ GKB)。眼球组织进行HE染色,TUNEL染色检测视网膜神经节细胞的凋亡,免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2、Bax以及Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-9的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测各组组织中Bcl-2、Bax mRNA表达水平。

结果：HE染色结果显示,给予干细胞或银杏内酯B处理,减少纤维间质水肿与空泡的出现,混合组纤维间质少见水肿与空泡; 银杏内酯B联合干细胞处理后显著减少视网膜神经节细胞的凋亡,上调Bcl-2的蛋白与mRNA表达水平,并下调Bax的蛋白与mRNA表达水平、Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-9的蛋白表达水平。

结论：银杏内酯B联合干细胞能够抑制青光眼大鼠视网膜神经节细胞的凋亡,改善青光眼,其作用机制可能与调控Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-9因子的表达有关。     

可见光对体外培养兔视网膜色素上皮细胞凋亡的实验研究

目的研究可见光对体外培养的兔视网膜色素上皮(retinal pigmen tepithelium,RPE)细胞凋亡的影响。方法用两步酶法消化分离、培养并鉴定RPE细胞。RPE细胞分为对照组及实验组,实验组用(3652±213)Lux的白色荧光灯照射6h。分别于光照前及光照后3h、12h、24h、72h终止培养,取细胞行Bcl-2mRNA原位杂交检测,观察细胞Bcl-2基因表达情况。选取部分光照后24h组细胞进行透射电镜的观察。结果对照组各时间点Bcl-2mRNA原位杂交阳性细胞率无统计学差异(P>0.05)。实验组光照后3h阳性细胞率为(82.29±5.65)%,有轻度增高,但无统计学意义(P>0.05);光照后72h阳性细胞率为(44.07±7.11)%,光照后12h、24h、72h阳性细胞逐渐减少,均有统计学意义(P<0.05)。RPE细胞光照后透射电镜观察到染色质碎裂、凋亡小体等细胞凋亡的典型形态学变化。结论一定强度的可见光照射可引起体外RPE的凋亡。光照后一定时间内可以刺激并启动细胞自身的保护机制。     

DHA玻璃体注射对ARMD大鼠模型光感受器细胞凋亡和PI3K/Akt通路的影响

目的：探讨二十二碳六烯酸(DHA)玻璃体注射对年龄相关性黄斑变性(ARMD)大鼠光感受器细胞凋亡和磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)通路的影响。

方法：大鼠随机分为空白对照组、模型组、低剂量DHA组(L-DHA组)、中剂量DHA组(M-DHA组)和高剂量DHA组(H-DHA组)。采用光损伤法建立干性ARMD大鼠模型。HE染色观察视网膜病理变化，TUNEL法检测视网膜细胞凋亡情况，透射电镜观察视网膜神经节细胞超微结构，酶联免疫吸附法测定视网膜组织TNF-α和IL-6水平，Western Blot检测视网膜组织p-PI3K、p-Akt、Bax、Bcl-2、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白表达。

结果：与空白对照组比较，模型组大鼠视网膜总厚度、外核层和内核层厚度、视网膜组织p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达均降低(P<0.05)，神经节细胞层和外核层细胞凋亡指数、视网膜组织TNF-α和IL-6水平、Bax、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05)。与模型组比较，M-DHA组和H-DHA组大鼠视网膜总厚度、外核层和内核层厚度、视网膜组织p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达均升高(P<0.05)，神经节细胞层和外核层细胞凋亡指数、视网膜组织TNF-α和IL-6水平、Bax、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白表达均降低(P<0.05)。

结论：DHA可能通过激活PI3K/Akt通路抑制ARMD大鼠光感受器细胞凋亡。     

脂联素对视网膜血管内皮细胞缺氧损伤的保护作用及机制研究

目的：研究脂联素对缺氧损伤的恒河猴脉络膜/视网膜内皮(RF/6A)细胞的保护作用及相关机制。

方法：将体外培养的RF/6A细胞随机分为对照组、缺氧损伤(CoCl₂刺激诱导24h)组和缺氧损伤+脂联素(5、50、100μmol/L脂联素预处理6h)组。采用MTT法检测细胞活力,选择合适的脂联素内皮细胞保护作用浓度,并采用Western blot检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2的表达情况,同时测定细胞内活力氧簇(ROS)的表达水平。

结果：与对照组相比,缺氧损伤组和各浓度脂联素预处理的RF/6A细胞活力均下降(均P<0.01); 与缺氧损伤组相比,各浓度脂联素预处理后细胞活力均显著增加(均P<0.05),其中50μmol/L脂联素是较为合适的保护作用浓度。与对照组相比,缺氧损伤组细胞活力降低,Bax蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量降低,ROS生成增加(P<0.01); 与缺氧损伤组相比,脂联素预处理后细胞活力增加,Bax蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量增加,ROS生成减少(P<0.01)。

结论：脂联素可明显减轻缺氧造成的视网膜血管内皮细胞损伤和凋亡,其机制可能与脂联素减轻氧化应激有关。     

薯蓣皂苷对高糖诱导的视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨薯蓣皂苷(Dio)对高糖(HG)诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤的保护作用,并分析其机制.方法 用细胞计数试剂8(CCK-8)法筛选葡萄糖浓度和无细胞毒性的Dio剂量范围.将ARPE-19细胞分为对照组(5 mmol·L-1葡萄糖处理48 h)、模型组(50 mmol·L-1葡萄糖处理48 h)和低、中...     

硫辛酸烟酸二联体对蓝光致大鼠视网膜损伤的防治作用

目的:探讨硫辛酸烟酸二联体(N2L)对蓝光致SD大鼠视网膜损伤的防治作用及最佳药物剂量,探寻其可能存在的保护机制。方法:选取150-200 g的SPF级雄性SD大鼠36只,随机分为正常对照组、蓝光损伤组、N2L低剂量组(1.0 mg/kg)、N2L中剂量组(2.5 mg/kg)、N2L高剂量组(5.0 mg/kg)及生理盐水组,每组各6只。正常对照组12 h明暗循环饲养,其余组每日接受9 h日常光照,3 h波长455 nm、强度3000±50 lx蓝光照射及12 h黑夜来建立损伤模型,持续14 d。同时每日腹腔注射1 mL对应剂量的药物。14 d后,所有组常规12 h明暗循环再饲养5 d,采用视网膜电图检查。过量麻醉法处死大鼠制备标本,HE染色,在光学显微镜下观察外核层厚度;CheKine^TM超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒检测SOD活性;Western Blot检测大鼠视网膜Caspase-3、醌氧化还原酶1(NQO1)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、Bcl-2和Bax蛋白表达量。结果:蓝光损伤组暗视ERG 3.0、10.0 (cd·s)/m^2<...     

五花血藤提取物对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中凋亡相关因子表达的影响

目的　探讨五花血藤提取物（sargentodoxa cuneata extracts,SCE）对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤（RIRI）中凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的影响。方法　选取健康清洁级成年SD大鼠90只,随机分成对照组、RIRI组与SCE组,每组30只。于RIRI后6 h、12 h、24 h、48 h与72 h时,每组分别随机处死6只大鼠进行相关实验。通过Nissl染色观察各组大鼠视网膜神经细胞形态学的变化,免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜内各细胞层凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达。结果　对照组视网膜神经节细胞内Nissl小体丰富,染色较深,呈块状分布;RIRI组Nissl小体较对照组少,染色浅且分布不均;SCE组染色情况均较RIRI组有所改善。Bcl-2蛋白在对照组中几乎不表达,在24 h RIRI组中其阳性表达开始增强,48 h时达到高峰,在SCE组各个时间点上Bcl-2蛋白阳性表达均多于RIRI组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。Bax蛋白在对照组中略有表达,在12 h RIRI组中其阳性表达持续增多,24 h时达到高峰,在SCE组各个时间点上Bax蛋白阳性表达均低于RIRI组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。Caspase-3蛋白在对照组中几乎不表达,在6 h RIRI组中表达开始升高,12 h时达到高峰,在SCE组各个时间点上Caspase-3蛋白阳性表达均低于RIRI组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　SCE可能通过上调Bcl-2蛋白表达的同时下调Bax、Caspase-3蛋白的表达来发挥抗凋亡作用,从而对大鼠RIRI起到保护作用。     

白藜芦醇对碘酸钠诱导后人视网膜色素上皮细胞凋亡的抑制作用

目的　研究白藜芦醇（resveratrol，RES）对碘酸钠诱导的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial，RPE）细胞凋亡的抑制作用及机制，探索该药是否可用于干性年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration,AMD)的治疗。方法　通过碘酸钠诱导的RPE细胞模拟干性AMD。RPE细胞传代培养分为空白对照组、碘酸钠损伤组、RES+碘酸钠损伤组，并观察各组细胞形态。MTT法检测RES对RPE细胞最佳保护作用的浓度以及最佳浓度下对不同浓度碘酸钠损伤的RPE细胞的保护作用。Western blot检测各组细胞的凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达情况。Hosste33342及流式细胞术检测各组细胞的凋亡总量变化以及凋亡种类之间的差别。结果　5 μmol·L^-1 RES对RPE细胞有较强的保护作用且此浓度下对不同损伤程度的RPE细胞都有较强的保护作用。RES+碘酸钠损伤组Bax蛋白的相对表达量（0.45±0.07）明显低于碘酸钠损伤组（0.90±0.09），差异有统计学意义（P<0.05），与空白对照组（0.34±0.06）差异无统计学意义（P>0.05）。RES+碘酸钠损伤组Bcl-2蛋白的相对表达量（0.56±0.14）与碘酸钠损伤组（0.24±0.04）差异有统计学意义（P<0.05），与空白对照组（0.73±0.08）差异无统计学意义（P>0.05）。Hosste33342检测结果显示，RES+碘酸钠损伤组凋亡细胞含量明显低于碘酸钠损伤组（P<0.05），且流式细胞术检测发现，RES+碘酸钠损伤组和碘酸钠损伤组比较，RES+碘酸钠损伤组早期凋亡的细胞含量相对较高，晚期凋亡细胞含量相对较少。结论　RES对碘酸钠诱导损伤的RPE细胞的凋亡具有良好的抑制作用，对干性AMD的治疗具有潜在价值。     

银杏内酯B对H2O2诱导人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的　探讨银杏内酯Ｂ对体外培养的人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ,ＲＰＥ）细胞氧化损伤的保护作用及可能机制。方法　ＲＰＥ细胞传代培养２４ｈ后,随机分为阴性对照组、氧化损伤组、银杏内酯Ｂ低浓度组（１ｍｏｌ?Ｌ－１）和银杏内酯Ｂ高浓度组（１０ｍｏｌ?Ｌ－１）,银杏内酯Ｂ预处理２４ｈ后,加入１００μｍｏｌ?Ｌ－１Ｈ２Ｏ２继续孵育１２ｈ,ＭＴＴ比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Ｈｏｃｈｅｓｔ３３２５８染色观察凋亡细胞形态,比色法检测凋亡相关因子Ｃａｓｐａｓｅ-３及Ｃａｓｐａｓｅ-９的表达。结果　银杏内酯Ｂ能明显抑制Ｈ２Ｏ２诱导的ＲＰＥ细胞活力的下降,ＭＴＴ结果显示银杏内酯Ｂ低浓度组和银杏内酯Ｂ高浓度组细胞活性分别为（５３．３７±２．５３）％和（６９．５７±３．１７）％,与氧化损伤组的（３１．３３±２．４１）％比较,差异均具有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;流式细胞计数结果显示银杏内酯Ｂ低浓度组和银杏内酯Ｂ高浓度组细胞凋亡率分别下降至（２７．５３±３．３４）％和（１３．３０±２．２５）％,与氧化损伤组的（４８．１３±２．６８）％比较,差异均具有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。此外,银杏内酯Ｂ还可以减少Ｈ２Ｏ２所致ＲＰＥ细胞内Ｃａｓｐａｓｅ-３及Ｃａｓｐａｓｅ-９的表达。结论　银杏内酯Ｂ通过抑制Ｃａｓｐａｓｅ-３及Ｃａｓｐａｓｅ-９的表达有效抑制了Ｈ２Ｏ２对ＲＰＥ细胞的损伤,从而为其用于治疗ＲＰＥ细胞损伤提供可靠的实验依据。     

灯盏花素通过调节Bcl-2和Bax表达拮抗高糖诱导的RPE细胞损伤

目的:探讨灯盏花素对高糖环境下人视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化应激的影响。方法:常规培养RPE细胞,分为对照组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为30mmol/L)、灯盏花素低浓度组(30mmol/L葡萄糖+1μmol/L灯盏花素)和灯盏花素高浓度组(30mmol/L葡萄糖+10μmol/L灯盏花素)。细胞划痕实验观察RPE细胞的迁移性,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平变化,Hoechst染色法观察凋亡细胞比例,Western blot分析各组Bcl-2和Bax的变化。结果:细胞划痕实验结果显示,灯盏花素低浓度组和灯盏花素高浓度组RPE细胞形态较高糖组改善,细胞迁移性较高糖组增加;CCK-8结果显示,用1、10μmol/L浓度的灯盏花素处理后,RPE细胞存活率分别提高到61.06%±5.59%和79.81%±7.04%,与高糖组(40.63%±4.72%)比较有差异(P<0.05);2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(H2DCFDA)荧光探针染色结果显示,灯盏花素抑制了RPE细胞内ROS水平;Hoechst染色法显示,1、10μmol/L灯盏花素处理后发生凋亡的RPE细胞数量逐渐减少;Western blot结果显示,灯盏花素增强了Bcl-2蛋白的表达,降低了Bax蛋白的表达。结论:灯盏花素可以抑制高糖诱导的RPE细胞氧化损伤和凋亡的发生,为糖尿病视网膜病变的治疗靶点研究提供了理论支持。     

Inhibition of cell proliferation, migration and apoptosis in blue-light illuminated human retinal pigment epithelium cells by down-regulation of HtrA1

AIM: To investigate the effect of HtrA1 on the proliferation, migration and apoptosis of human retinal pigment epithelium (RPE) cells in the light injured model, as well as the expression of the apoptosis related molecules. METHODS: The human RPE cell line ARPE-19 was exposed to blue light to establish the light injured model. The cells were transfected with HtrA1 siRNA to knockdown HtrA1 expression. Subsequent expression of HtrA1 was determined by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot, respectively. Changes in cell proliferation, migration and apoptosis were assessed by cell counting kit-8 (CCK-8), Transwell assay and flow cytometry respectively, as well as changes in the mRNA and protein levels of Bax, Caspase-3 and Bcl-2 expression. RESULTS: HtrA1 was highly expressed in ARPE-19 cells after blue light irradiation. Knockdown of HtrA1 expression inhibited the proliferation, migration and apoptosis of the blue-light-irradiated ARPE-19 cells (P<0.05). Bax and Caspase-3 expression were significantly reduced both at mRNA and protein levels (P<0.05) after siRNA treatment. Bcl-2 expression significantly increased in blue-light-irradiated ARPE-19 cells after siRNA interference (P<0.05). CONCLUSION: Silence of HtrA1 may inhibit the proliferation, migration and apoptosis of ARPE-19 cells in light injured model. Moreover, HtrA1 suppression in blue-light-irradiated ARPE-19 cells may ameliorate cell apoptosis through down-regulation of Bax and Caspase-3, and up-regulation of Bcl-2 expression.     

手机微波辐射对体外培养大鼠晶状体Bax表达的影响

目的:探讨手机辐射对体外培养大鼠晶状体上皮细胞中Bax表达的影响。方法:采用ELISA和免疫组织化学法检测手机辐射后在MEM培养液培养28d晶状体中Bax的表达水平,裂隙灯下观察晶状体的混浊程度。结果:手机辐射组Bax的表达量均显著高于对照组(P<0.05),Bax的表达量随着手机辐射时间的增加而增加,且手机辐射组的晶状体混浊程度较对照组明显增加。结论:手机微波辐射可增加体外大鼠晶状体中Bax的表达,导致晶状体上皮细胞凋亡和白内障的发生。