蓝光所致人视网膜色素上皮细胞损伤与细胞内钙离子含量变化的关系

背景 对蓝光照射所致视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤与细胞内钙离子含量变化关系的深入研究可能对探讨视网膜变性类疾病的发生机制及防治具有重要意义. 目的 建立人RPE细胞蓝光损伤模型,探讨RPE细胞损伤与细胞内钙离子含量变化的关系.方法 将人RPE细胞系培养传代,锥虫蓝染色评估细胞活力.第4代人RPE细胞分别用(2000±500) lx蓝光照射3、6、9、12h,终止细胞培养24 h后,采用TUNEL法检测不同时间点细胞的凋亡情况,确定最适宜的光照度.然后将RPE细胞分为无光照组、光照组、硝苯地平组、光照+硝苯地平组、(-)BayK8644组、光照+(-)BayK8644组.除无光照组外,其他各组细胞均用蓝光照射6h,终止细胞培养24h,采用激光扫描共焦显微镜检测细胞内游离钙离子含量,激发光波长为488 nm,发射光波长为505 nm,每组随机选取30个细胞,扫描细胞图像,采用分析软件分析各组细胞内游离钙离子的荧光强度.结果 锥虫蓝染色证实RPE细胞的活力均在90％以上,TUNEL染色和免疫组织化学染色证实光照3h组未见细胞凋亡,而光照后6、9、12h发现不同数量的凋亡细胞.硝苯地平组RPE细胞内游离钙离子荧光强度比无光照组和光照+硝苯地平组低,差异均有统计学意义(均P=0.000);光照组、(-)BayK8644组、光照+(-)BayK8644组RPE细胞内钙离子荧光强度高于无光照组,差异均有统计学意义(均P=0.000);光照+硝苯地平组与无光照组相比较,(-)BayK8644组与光照+(-)BayK8644组比较,差异均无统计学意义(P=0.339、0.410). 结论 光照度(2000±500)1x、光照6h、终止培养24 h为建立蓝光照射致人RPE细胞损伤模型的最适合条件.蓝光照射所致的人RPE细胞损伤与细胞内游离钙离子含量增加有关.     

雌激素对光诱导的视网膜电图损害的保护作用

目的:探讨雌激素对光诱导的视网膜电图损害的保护作用。方法:雌性SD大鼠30只,随机分为去势组、去势+雌激素组和正常对照组,每组10只。去势组、去势+雌激素组大鼠接受12h亮12h暗(12∶12)的循环光照射,共14次。行右眼的暗视蓝光ERG、暗视白光ERG检测。结果:正常对照组大鼠暗视蓝光、暗视白光ERGb波振幅分别为87.6±20.2μV、231.2±27.7μV,去势组为24.3±8.4μV、38.5±11.9μV,去势+雌激素组40.0±10.6μV、66.6±17.0μV。去势组与去势+雌激素组之间的差异有显著的统计学差异(q=-3.0129,P=0.005;q=-3.4822,P=0.002)。结论:雌激素对光诱导的视网膜电图损害具有保护作用。     

小鼠视网膜紫外线光损伤中MDA与SOD的作用

目的:探讨视网膜紫外线光损伤中MDA与SOD的作用。方法:取健康成年昆明小鼠30只,随机分成正常对照组和实验组,实验组再分为光损伤后1,2,3,4wk组,每组6只,各组小鼠均在12h明(30～50Lux)12h暗环境中饲养7d,然后暗适应36h。正常对照组不予紫外线照射,实验组小鼠采用2200±138Lux波长为300～400nm的紫外线灯照射,每日连续光照8h。在模型制作完成后摘取眼球,左眼行视网膜匀浆中SOD活力与MDA含量测定。结果:紫外线光照组光照后SOD活力、MDA含量与正常对照组比较差别有统计学意义(P<0.05)。结论:慢性紫外线光损伤与脂质过氧化及自由基的产生有关。     

强光照致TgAPPswePS1转基因鼠视网膜功能障碍和结构损伤

目的 初步研究在光照损伤作用下TgAPPswePS1转基因鼠视网膜结构和功能的改变情况.方法 给予6月龄阿尔茨海默病转基因鼠(TgAPPswePS1鼠)10 000 lux光照处理,每天光照12 h,连续光照6个月,光照处理为实验组,设鼠龄匹配的转基因鼠为对照组,在光照6个月后(即小鼠12个月时)对实验组与对照组小鼠进行视网膜电图检测,取材并进行切片,行HE染色并观察视网膜各层结构改变,予以视网膜厚度测量并进行统计学分析.结果 对照组Rod反应a、b波波幅分别为(18.33±3.53) μV、(107.58±14.72)μV,Max反应a、b波波幅分别为(64.80±7.57)μV、(178.76±14.47) μV;实验组光照6个月后小鼠视网膜电图Rod反应a、b波波幅分别为(17.92±4.89) μV、(21.83±5.51) μV,Max反应的a、b波波幅分别为(18.23±4.44) μV、(24.50±4.49) μV;与对照组比较,Rod反应的b波和Max反应的a、b波的波幅下降明显,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);在Rod和Max反应里a波和b波的潜伏期改变不明显.与对照组比较,经过光照处理后,实验组小鼠视网膜结构发生明显改变,以外核层与感光细胞外节明显,视网膜厚度明显变薄,为(102.34±9.38) μm,与对照组(181.32±13.47) μm比较差异有统计学意义(P=0.017).结论 高强度光照可以造成TgAPPswePS1鼠视网膜结构损伤和功能障碍.     

蓝光照射后视网膜αA-和αB-晶体蛋白表达变化

目的　观察蓝光照射后大鼠视网膜中αA和αB晶体蛋白的表达。方法　40只雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组,蓝光照射6、12、24 h组共4组,每组10只。正常对照组不给予任何处理,蓝光照射6、12、24 h组分别给予蓝光照射6、12、24 h后给予12 h暗适应,麻醉后摘取眼球。采用免疫组织化学和蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测视网膜中αA和αB晶体蛋白表达。结果　免疫组织化学染色检测显示,正常对照组以及蓝光照射6、12、24 h组视网膜αA 晶体蛋白吸光度［A,旧称光密度（OD）］值分别为1.405 73±0.707 48、4.317 51±0.412 97、7.397 08±1.947 90、9.634 32±2.377 61,组间比较差异均有统计学意义（F=24.569,P＜0.001）。正常对照组以及蓝光照射6、12、24 h组视网膜αB 晶体蛋白A值分别为0.129 36±0.033 93、0.507 17±0.117 55、7.345 43±2.292 97、4.042 26±3.890 23,组间比较差异均有统计学意义（F=40.102,P＜0.001）。Western blot 检测发现,蓝光照射6、12、24 h后视网膜αA-及αB-晶体蛋白表达明显高于正常对照组。结论 蓝光可诱导大鼠视网膜αA-晶体蛋白和αB-晶体蛋白表达上调。      

视网膜电图在早产儿视网膜病变激光术后视网膜功能评价中的应用

目的 应用视网膜电图(electroretinogram,ERG)评价早产儿视网膜病变(retinopathyofpremature,ROP)激光术后视网膜功能的变化。方法 选取2011年1月至2012年12月在我院行激光光凝术的ROP患儿30例(60眼)为观察组,另选取同期视网膜发育正常的健康早产儿30例(60眼)为对照组,记录激光术后6个月的暗适应与明适应ERG,并对两组结果进行统计比较。结果 观察组视杆反应b波振幅为(131.47±36.20)μV,对照组为(149.33±40.14)μV,差异有统计学意义(P<0.05);观察组最大混合反应a波、b波振幅分别为(96.52±23.71)μV、(222.76±53.44)μV,对照组分别为(109.85±23.17)μV、(26044±52.28)μV,差异均有统计学意义(均为P<0.05);观察组振荡电位峰值为(37.71±22.23)μV,对照组为(49.70±32.24)μV,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组视杆反应b波及最大混合反应a波、b波潜伏期与对照组差异均无统计学意义(均为P>0.05)。观察组视锥反应a波、b波振幅与对照组差异均无统计学意义(均为P>0.05),观察组视锥反应a波、b波潜伏期与对照组差异也均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 经过激光光凝术治疗,ROP患儿视网膜视锥细胞功能发育与正常早产儿没有差别,而视杆细胞功能发育略差。     

地塞米松对视网膜蓝光损伤的保护作用及机制探讨

目的 观察地塞米松(DXM)对视网膜蓝光损伤的保护作用及对c-Fos蛋白表达的影响.方法 将44只Lewis大鼠分为正常对照组4只,DXM治疗组和生理盐水(NS)组各20只,分别于腹腔内注射DXM(35 mg/kg)及NS(5 mL/kg).持续蓝光(3 012±115)Lux照射1 h后暗适应0、6、12、24、48 h,摘除眼球行形态学、免疫组织化学及TUNEL检测.结果 NS组光照后0 h视网膜外核层(ONL)中凋亡细胞及c-Fos蛋白的表达立即上调,24 h达峰值,48 h明显下降.DXM治疗组的变化规律基本同上,但光照后6、12、24 h视网膜ONL中凋亡细胞数目明显下降;c-Fos的表达水平明显降低.结论 DXM对蓝光诱导的大鼠视网膜光损伤具有保护作用,该作用可能与c-Fos蛋白表达的降低有关.     

蓝光照射致人视网膜色素上皮细胞线粒体凋亡的途径及机制

背景 研究已证实蓝光照射可导致视网膜色素上皮细胞(RPE)凋亡,但其机制目前尚不完全清楚. 目的 探讨线粒体凋亡通路是否参与蓝光照射诱导体外培养的人RPE细胞凋亡过程.方法 分离新鲜的供体视网膜,对人RPE细胞进行原代培养和传代,用角蛋白单克隆抗体行细胞鉴定.将体外培养的人RPE细胞分为无光照组、单纯光照组、光照+硝苯地平组、光照+钙磷酸结合蛋白C(calphostin C)组、光照+佛波酯(PMA)组.光照组细胞用(2 000±500) lx的蓝光照射人RPE细胞6h,然后继续培养24 h后终止.采用Western blot法比较两个组间RPE细胞中凋亡相关调控因子bax、bcl-2、bcl-xl的相对表达,以评价蓝光照射对RPE细胞凋亡的影响.光照+硝苯地平组、光照+calphostin C组、光照+PMA组细胞在蓝光照射前1h分别在培养基中加入相应药物,然后以(2 000±500) lx的蓝光照射人RPE细胞6h,并继续培养24 h,采用Westernblot法检测5个组细胞中caspase-9蛋白表达量的变化,观察钙通道和蛋白激酶C(PKC)通路对RPE细胞线粒体的影响.结果 培养的细胞生长良好,细胞质内充满色素颗粒,呈铺路石样排列,对角蛋白呈阳性反应.无光照组和单纯光照组均可见bax、bcl-2及bcl-xl蛋白条带,相对分子质量分别为23 000、26 000和30 000.与无光照组比较,单纯光照组bax、bcl-2和bcl-xl蛋白表达相对值(A)下降,差异均有统计学意义(t=-4.409,P=0.012;t=7.575,P=0.002;t=6.068,P=0.004).与无光照组比较,单纯光照组、光照+calphostin C组、光照+PMA组细胞中caspase-9蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P=0.005、0.002、0.000),而光照+硝苯地平组与无光照组比较差异无统计学意义(P=0.191).与单纯光照组比较,光照+PMA组caspase-9蛋白表达升高,差异有统计学意义(P=0.005);而光照+硝苯地平组及光照+calphostin C组caspase-9蛋白表达差异均无统计学意义(P=0.057、0.643). 结论 蓝光致体外培养的人RPE细胞凋亡,同时细胞中caspase-9表达增强,凋亡抑制基因bcl-2及bcl-xl表达下降,凋亡促进基因bax蛋白表达增强.线粒体凋亡通路参与蓝光照射致RPE细胞凋亡的过程;PKC通路可能参与了蓝光导致的人RPE细胞凋亡.     

内质网应激对光照诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的促进作用

背景 视网膜色素上皮(RPE)细胞的光损伤模型是多种视网膜变性类疾病的研究工具,光诱导RPE细胞损伤的主要病理基础是凋亡及炎症反应,但是内质网应激(ERS)反应是否参与其病理机制的研究国内外少有报道. 目的 探讨ERS对光损伤诱导的人RPE细胞凋亡的作用及其机制.方法 体外培养人RPE细胞株(ARPE-19),将培养的细胞分为正常对照组及光照3、6、12和24 h组,各光照组在培养箱内以(2 000± 500) lx的白色荧光灯光照细胞建立光损伤模型,正常对照组细胞在暗环境中培养且不给予光照射,筛选实验最适光照时间.将细胞分为正常对照组、光照组(光照12h)和苯基丁酸(4-PBA)预处理+光照组,4-PBA预处理+光照组先用ERS抑制剂4-PBA培养细胞30 min,然后光照细胞12h.采用流式细胞仪检测各组人RPE细胞的凋亡率和细胞内活性氧(ROS)的荧光强度;采用ELISA法检测各组细胞上清液中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)质量浓度;分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测人RPE细胞中ERS标志物活化转录因子-6(ATF-6)、C/增强结合蛋白同源蛋白(CHOP)和细胞凋亡标志物半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12) mRNA及其蛋白的表达. 结果 光照后细胞形态呈长梭形改变,边界不清,细胞质脱颗粒,细胞碎片增多,且随光照时间的延长而加重.流式细胞仪检测发现,随光照时间的延长,人RPE细胞内ROS含量逐渐增加,细胞凋亡率逐渐升高,差异均有统计学意义(F=763.00、119.30,均P＜0.01).ELISA法检测发现,与正常对照组比较,光照后6h细胞上清液中IL-1β和TNF-α质量浓度均明显升高,12h达峰.实时荧光定量PCR和Western blot检测显示,与正常对照组比较,光照后人RPE细胞中ATF-6、CHOP和caspase-12 mRNA及其蛋白的相对表达量均明显升高,均于光照后12h达峰或升高,故选择光照12 h为最适光照时间作为后续研究.4-PBA预处理+光照组细胞中ATF-6、CHOP和caspase-12 mRNA的相对表达量均明显低于光照组,差异均有统计学意义(F=281.69、473.88、308.45,均P＜0.01);ATF-6、CHOP和caspase-12蛋白的相对表达量均明显低于光照组,差异均有统计学意义(F=47.86、57.93、106.59,均P＜0.01);细胞凋亡率、细胞上清液中IL-1β和TNF-α质量浓度均明显低于光照组,差异均有统计学意义(F=88.64、245.47、101.01,均P＜0.01). 结论 (2 000±500)lx的光照可诱导人RPE细胞内ROS增加,并激活细胞的ERS反应,导致RPE细胞凋亡及炎症反应.ERS抑制剂4-PBA可抑制光损伤导致的ERS反应,进而降低RPE细胞凋亡率并抑制炎症反应过程.     

白蒺藜对光损伤小鼠光感受器细胞的保护作用

目的 探讨白蒺藜对小鼠视网膜光损伤的保护作用.方法 采用10 000 lux白炽光光照30 min建立视网膜光损伤模型,将BALB/c小鼠分为正常对照组、模型组和治疗组,每组各6只.光照前0.5h治疗组腹腔注射白蒺藜水煎液100 μL(生药100mg/20 g),正常对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水.光照后3h、7d分别通过OCT检测小鼠视网膜形态学改变;造模后7d处死小鼠,取眼球固定、包埋、切片进行HE染色,视紫红质和短波敏感视蛋白(short wave-length sensitivity opsin,M-opsin)的免疫荧光化学染色,观察视网膜病理改变情况.结果 正常对照组内外核层结构清楚、界限明显,视网膜视杆细胞内外节排列整齐;模型组视网膜结构层次模糊且外核层变薄,与正常对照组差异显著;治疗组小鼠视网膜结构与正常对照组没有显著差异.与正常对照组比较,模型组视紫红质和M-opsin表达降低,治疗组显著提高了视紫红质和M-opsin的表达.模型组较正常对照组视网膜外核层厚度显著变薄(P＜0.05);治疗组较模型组能显著性预防小鼠视网膜外核层变薄(P＜0.05).结论 小鼠视网膜光损伤模型造模成功,白蒺藜对光损伤视网膜具有显著的保护作用.     

模拟失重对成年小鼠闪光视网膜电图和视网膜微循环的影响

目的:小鼠通过悬尾来模拟失重状态下体液头向重分布,然后观察视网膜电图(ERG)和视网膜微循环的变化。方法:正常成年雄性C57BL/6J小鼠随机分到3个实验组和3个对照组,最终每组6只。具体分组如下:实验1组(尾悬15d),实验2组(尾悬30d),实验3组(悬吊30d后恢复体位30d);对照1组(正常饲养15d),对照2组(正常饲养30d),对照3组(正常饲养60d)。时间满足后马上检测暗适应闪光ERG,记录混合反应和振荡电位(OPs),并进行荧光素眼底血管造影(FFA)。然后提取视网膜组织,用免疫组化法检测感光细胞视色素或视蛋白的表达,用TUNEL试剂盒检测视网膜组织细胞的凋亡情况。结果:悬吊15d组,暗适应ERG的混合反应,b波较大而OPs振幅明显降低,后者第二个子波(O 2)幅值197±33μV,15d未悬吊组336±47μV(t=-5.938,P<0.001)。悬吊30d组,小鼠ERG恢复,O 2幅值264±39μV,与30d未悬吊组308±41μV无差异(t=-1.887,P>0.05)。悬吊15d组FFA,视网膜微血管较对照组更密集,呈迂曲扩张的表现,其他实验组基本正常。各实验组感光细胞视色素或视蛋白的表达未见明显异常,视网膜未见凋亡阳性细胞。结论:模拟失重状态下体液头向重分布,短期内小鼠ERG和视网膜微循环可能受到影响,但未对视网膜产生明显的永久性损伤。     

Altered expression and interaction of adherens junction proteins in the developing OLM of the Rho(-/-) mouse

Retinitis Pigmentosa (RP) represents a major cause of progressive retinal disease worldwide and comprises a heterogeneous group of inherited diseases that are characterised by primary degeneration of rod photoreceptors and secondary degeneration of cone photoreceptors in the retina. The outer limiting membrane (OLM) which allows for the interaction of photoreceptors with surrounding photoreceptors and Müller cells is compromised in many degenerative retinal diseases. Using indirect immunostaining of retinal cryosections from C-129 Wild Type (WT) and C-129 Rho(-/-) mice, we have determined levels of expression of the adherens junction associated proteins ZO-1, beta-catenin and p120-catenin at the OLM from newborn and 1, 2, 3, 4 and 5-week old animals. We have also used immunoprecipitation analysis to determine changes in the association of E-cadherin with ZO-1, beta-catenin and p120-catenin and the association of alpha-catenin with ZO-1 and beta-catenin at these time points in WT and Rho(-/-) mice. We have found that ZO-1 expression at the OLM is present in WT and Rho(-/-) mice after 2weeks, but that levels of expression at the OLM decrease after this time point in the Rho(-/-) mice. beta-catenin expression in the Rho(-/-) mice became compromised at the OLM after 3 weeks, showing a distinct change in staining pattern after 4 weeks and no staining at the OLM after 5 weeks. Moreover, we have shown that p120-catenin expression is not evident at the OLM of the Rho(-/-) mice at the 4 or 5 week time point. To complement this data, we have performed immunoprecipitation analysis on neural retinal lysates from WT and Rho(-/-) mice and herein report fluctuations in the association of E-cadherin with ZO-1, and beta-catenin, while showing that the interaction of E-cadherin with p120-catenin is not established in the retina of C-129 WT and Rho(-/-) mice until 4 weeks after birth and remains un-changed up to and including 5 weeks after birth. Meanwhile, we report that the association of alpha-catenin with ZO-1 is decreased in retinas of the Rho(-/-) from newborn animals up to and including 5 weeks after birth. We have also shown that the association of alpha-catenin and beta-catenin is not well established in WT and Rho(-/-) mice until at least 5 weeks after birth. We hypothesize that these retinal changes at the OLM may contribute significantly to the pathogenesis of retinal degenerations and may represent a unique therapeutic target for intervention in conditions involving rapid photoreceptor cell death.     

原纤维蛋白-2(FBN2)抗体玻璃体内注射对小鼠视网膜变性的影响

目的　探讨原纤维蛋白-2（fibrillin-2,FBN2）抗体玻璃体内注射对小鼠视网膜变性的影响。方法　选取18只8周龄C57BL/6J小鼠,随机分为3组:正常对照组、PBS组、FBN2抗体组,每组6只。正常组小鼠不做任何处理,PBS组小鼠双眼玻璃体内注射4 μL PBS溶液,FBN2抗体组小鼠双眼玻璃体内注射4 μL FBN2抗体（0.2 g·L^-1）,每周注射1次,连续3周。利用眼底照相和视网膜电流图（ERG）分别检测3组小鼠眼底改变和视网膜功能。PAS染色法观察小鼠视网膜形态并测量眼球后极部视网膜、外核层以及内核层厚度,采用实时定量PCR和ELISA检测小鼠视网膜中FBN2 mRNA和蛋白的表达。结果　眼底照相显示:FBN2抗体组小鼠眼底出现明显渗出,黄白色似玻璃膜疣样沉积物以及色素沉着的病理改变,且随时间延长病理改变加重。ERG结果显示:每次注射后FBN2抗体组暗适应视杆细胞反应b波和暗适应混合细胞反应a波振幅均低于正常对照组和PBS组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),且两者振幅在抗体注射3次后均最低,分别为(13.28±3.41)μV和(21.67±8.81)μV;在注射2次和3次后,FBN2抗体组暗适应混合细胞反应b波振幅均低于正常对照组和PBS组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）,且该波振幅在抗体注射2次时最低为(59.12±18.00)μV;正常对照组和PBS组之间,各振幅差异均无统计学意义（均为P＞0.05）。PAS染色结果表明:FBN2抗体组视网膜厚度和外核层厚度 ［（129.33±15.38）μm、（23.39±3.93）μm］均低于正常对照组［(197.68±13.50）μm、（46.54±7.44）μm］和PBS组［（198.27±8.28）μm、（38.92±2.39）μm］,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）;正常对照组和PBS组之间比较,差异均无统计学意义（均为P＞0.05）。ELISA检测显示:FBN2抗体组视网膜中FBN2蛋白的相对表达［(0.15±0.01）ng·mg^-1］低于正常组［(0.17±0.01）ng·mg^-1］和PBS组［(0.17±0.02）ng·mg^-1］ （均为P＜0.05）。PCR结果显示:FBN2抗体组视网膜中FBN2 mRNA的相对表达低于正对照组和PBS组。结论　玻璃体内注射FBN2抗体能够降低小鼠视网膜中FBN2蛋白的表达,引起小鼠发生视网膜变性 。     

玻璃体内注射先锋霉素Ⅵ视网膜酶组织化学的实验研究

目的：研究先锋霉素Ⅵ玻璃体腔内注射的安全剂量。 方法：不同浓度的先锋霉素Ⅵ（100、200、250、300、400μg)注入不同组别的兔眼玻璃体腔内，以酶组织化学染色法确定注射后不同时间(1、3、7天)视网膜能量代谢酶琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase,SDH)和乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性的变化并观察视网膜的组织结构及超微结构损害。 结果：随用药剂量增大，视网膜内SDH、LDH活性均逐渐降低；各剂址组活性分别于术后3天和术后1天降至最低，然后开始恢复，至术后7天100、200μg组恢复至正常，其余剂量组仍低于正常.100、200μg剂量组视网膜内仅出现水肿，而250、300、400μg组均出现细胞变性坏死、杆锥体脱失等改变。 结论：先锋霉索Ⅵ玻璃体腔内注射的安全剂量为200μg。 （中华眼底病杂志，1997，13：139-142）     

眼部缺血综合征患者视网膜电图明视负向反应和震荡电位的变化特点

目的观察眼部缺血综合征(ocular ischemic syndrome,OIS)患者视网膜电图(electroretinogram,ERG)明视负向反应(PhNR)和震荡电位(oscillatory potentials,OPs)的变化特点。方法选取2009年6月至2010年2月在我院就诊的OIS患者12例15眼行常规闪光ERG检查,同时选取正常对照眼15人15眼,视网膜中央静脉阻塞(central retinal vein occlusion,CRVO)患者15例15眼行闪光ERG检查。比较OIS患眼与正常对照眼、CRVO患眼的PhNR和OPs,及其余各项ERG指标的振幅变化差异。采用Stata11统计学软件分析受试者工作曲线下面积(AUC),并进行数据分析,比较OPs及PhNR区分正常眼及OIS眼的敏感度及特异性。结果 PhNR振幅在OIS组为(49.36±12.20)μV、CRVO组为(25.62±6.72)μV、正常组为(59.79±11.83)μV。三组之间两两比较,差异有显著统计学意义(F=41.287,P<0.01)。OPs振幅在OIS组为(128.44±23.86)μV、CRVO组为(102.69±10.55)μV、正常组为(154.01±15.08)μV。三组之间两两比较,差异也有显著统计学意义(F=78.098,P<0.01)。PhNR指标的AUC为0.7240±0.0945,95%的可信区间为(0.53871,0.90925),其敏感度为73.3%,特异性为86.7%。OPs指标的AUC为0.8170±0.0810,95%的可信区间为(0.65814,0.97579),其敏感度为86.7%,特异性为80.0%。结论 OIS患者PhNR、OPs振幅较正常对照组明显降低,但较CRVO患者降低程度轻,表明OIS患者视网膜组织存在缺血的现象,但其缺血程度较CRVO患者轻。OPs在评估OIS患者内层视网膜的血液循环功能方面比PhNR更好。     

倍他洛尔对实验性视网膜缺血再灌注损伤后 视神经的保护作用

目的探讨倍他洛尔对实验性视网膜缺血再灌注损伤后视神经的保护作用及其可能的作用机制。方法采用升高眼内压的方法，制作大鼠实验性视网膜缺血再灌注损伤模型。将68只SD大鼠随机分为正常对照组（8只）、0.25%倍他洛尔治疗组（30只）和生理盐水对照组（30只）。其中后两组根据再灌注的不同时间各分为1、3、7 d组，每组10只大鼠。治疗组鼠右眼滴入0.25%倍他洛尔眼药水，生理盐水对照组鼠右眼滴入生理盐水。观察治疗组和生理盐水对照组及正常对照组鼠视网膜电图（ERG）b波振幅及光学显微镜、电子显微镜下视网膜结构变化；免疫组织化学法检测神经性一氧化氮合酶（nNOS）的表达,分光光度法测定丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果从再灌注1 d开始，生理盐水对照组ERG的b波振幅持续下降，病理组织损害逐渐加重，视网膜中nNOS阳性表达明显增多，MDA水平持续升高，SOD水平持续下降，其差异与正常对照组比较均有统计学意义（P＜0.01）；与生理盐水对照组相比，再灌注各时段倍他洛尔治疗组ERG的 b波振幅明显恢复（P＜0.01），病理组织损害明显减轻，nNOS阳性神经元明显减少（P＜0.01），MDA含量降低（P＜0.01），SOD活性升高（P＜0.01），其中nNOS阳性神经元与正常对照组的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论倍他洛尔可能通过减少细胞内Ca²⁺超载，抑制NO的产生和提高抗氧化能力，对大鼠实验性视网膜缺血再灌注损伤有一定的保护作用。(中华眼底病杂志,2005,21:249-252)      

670 nm近红外光对大鼠视网膜光损伤的保护作用

目的 观察670 nm近红外光对SD大鼠的视网膜光损伤模型是否具有保护作用。方法 将32只SD大鼠分成8组,1组为正常对照组; 2组为红外光对照组; 3、5、7组为光损伤组;第4、6、8组为光损伤加近红外光保护组。光损伤剂量为900,1800,2700 lx白光,持续照射3 h;在光损伤前3 h和光损伤后0、24、48 h,保护组先后4次给予50 mW近红外光照射30 min。光损伤后第5天将大鼠置于暗室过夜,第6天作视网膜电图（ERG）检测,并取眼球作病理检查。结果 1组和2组视网膜细胞结构正常,外核层细胞约11层,ERG b波振幅（1088±55）μV。3组和4组900 lx白光持续照射3 h,未造成大鼠视网膜的损伤。5组1800 lx白光持续照射3 h,外核层细胞的减少至1～2层,内节（IS）与外节（OS）结构完全消失;损伤范围占全视网膜的0.48±0.12,损伤厚度占外核层全厚的L5=0.39±0.07,ERG的b波低伏（431±120 ）μV。6组在1800 Lux白光照射前后实施近红外光保护,视网膜损伤范围缩小为M6=0.17±0.12, （P5/6=0.002);损失厚度减少到L6=0.22±0.09 (P5/6<0.01）;ERG b波振幅升高到（1011±83）μV（P5/6<0.001）。2700 lx白光持续照射3 h,7组和8组病理和ERG检查的差异均无统计学意义［损伤面积:M7=0.83±0.09, M8=0.70±0.10, P7/8=0.074;损伤厚度L7=0.81±0.08, L8=0.73±0.08, P=0.17;ERG：H7=（234±26）μV,H8=（253±29）μV,P7/8>0.05］。结论 在一定的照射强度和时间范围内,670 nm近红外光对大鼠视网膜光损伤有明确的保护作用。     

香烟烟雾对小鼠视网膜组织病理学结构的影响

目的　探讨香烟烟雾对小鼠视网膜组织病理学结构的影响。方法　选取12只C57BL雄性小鼠,随机分为对照组（6只）及实验组（6只）。对照组不做特殊处理,实验组小鼠暴露于香烟烟雾中,每天2次,每次30 min,持续暴露12周后处死。取两组小鼠左眼分别行HE染色、免疫荧光染色及TUNEL染色观察视网膜各层结构的变化、三级β-微管蛋白（class III β-tubulin,Tuj1）的表达及视网膜内细胞凋亡情况;两组小鼠右眼在透射电子显微镜下观察视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞超微结构的改变。结果　对照组及实验组小鼠视网膜全层厚度分别为（216.53±7.43）μm和（182.27±4.98）μm,视网膜神经纤维层厚度分别为（11.49±0.56）μm和（4.62±1.07）μm,内网状层厚度分别为（52.08±3.17）μm和（37.28±2.86）μm,两组相比差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。对照组和实验组视网膜神经节细胞层内细胞数分别为（389.72±4.56）个和（378.71±2.16）个,差异无统计学意义（P＞0.05）。与对照组比较,实验组神经节细胞的细胞核部分形状不规则,排列疏密不均,局部可见细胞核缺失,Tuj1免疫荧光染色的荧光强度实验组较对照组减弱。TUNEL染色结果显示,两组视网膜各层均未见明确阳性染色。透射电子显微镜下观察,实验组RPE细胞内细胞基底部褶皱数量明显减少、局部有缺失。结论　香烟烟雾对小鼠视网膜神经层的组织病理学结构及RPE细胞的超微结构均有一定影响。