实时荧光定量PCR法与常规细菌鉴定法检测肠道致病菌的对比研究

目的探讨常规细菌鉴定法及实时荧光定量PCR法检测肠道致病菌的价值。方法就诊的3330例腹泻患者的粪便标本,同时进行常规细菌鉴定法及实时荧光定量PCR法检测,观察肠道致病菌中沙门菌及志贺菌检测阳性率。结果 3330例粪便标本中,常规细菌鉴定法检测沙门菌阳性率为3.90%(130/3330),志贺菌阳性率为1.65%(55/3330);实时荧光定量PCR法检测沙门菌阳性率为4.11%(55/3330),志贺菌阳性率为1.80%(60/3330),两种方法检测沙门菌及志贺菌阳性率比较,差异无统计学意义(P均0.05)。所有实时荧光定量PCR法检测阳性标本均经常规细菌鉴定确诊,阳性率为100%。结论实时荧光定量PCR法可直接从粪便中提取DNA,检测肠道致病菌,具有简便、快速等优点,大大缩短了检出时间,为临床早期诊断和治疗提供了依据,值得临床推广。     

沙门菌、志贺菌和副溶血性弧菌的多重PCR快速检测技术的建立与应用

目的建立快速同时检测沙门菌、志贺菌和副溶血弧菌的多重聚合酶链反应(PCR)技术。方法根据沙门菌hilA基因、志贺菌ipaH基因及副溶血性弧菌tdh基因序列设计引物,进行PCR扩增及电泳检测。同时优化反应体系,测定特异性和灵敏度。结果该多重PCR技术能在8 h内同时检测3种目的菌,通过检测其他9种常见食源性致病菌,结果表明该方法特异性好,多重PCR检测灵敏度分别为:沙门菌104cfu/mL,志贺菌102cfu/mL,副溶血性弧菌104cfu/mL。并进行了人工模拟食品和粪便样品的检测。结论初步建立能在8h内快速、灵敏、特异地同时测定沙门菌、志贺菌和副溶血性弧菌的多重PCR检测技术。     

多重实时PCR检测致泻性大肠埃希菌志贺毒素和紧密素基因

目的 建立多重实时PCR检测志贺毒素（stx1、stx2）基因和紧密素基因（eae）的方法。方法 优化多重实时PCR反应条件，检测系列稀释的阳性菌DNA提取物及纯化阳性质粒。检测42株携带已知毒力基因的大肠埃希菌株，并比较其阳性和阴性符合率。对比3种粪便样品处理和DNA提取方法，选出最适方法。同时用该方法对36份腹泻患者粪便标本进行直接检测且对阳性标本进行菌株分离和鉴定。结果 多重实时PCR方法最低可以检测到10^1拷贝／pJ的毒力基因和10。CFU／p．1的DEL933大肠埃希菌。检测42株携带已知毒力基因的大肠埃希菌的阳性和阴性符合率均为100％。粪便样品的DNA提取以BP肉汤增菌6h后煮沸提取效果最好。36份腹泻患者粪便中2份eae阳性，均鉴定为大肠埃希菌。结论 建立的同时检测stx1、stx2、eae基因的多重实时PCR方法，具有较高的敏感性，可用于产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）和肠致病性大肠埃希菌（EPEC）毒力基因鉴定及临床腹泻粪便标本的快速筛检。     

沙门菌、志贺菌和副溶血性弧菌的多重PCR快速检测技术的建立与应用

目的建立快速同时检测沙门菌、志贺菌和副溶血弧菌的多重聚合酶链反应（PCR）技术。方法根据沙门菌hilA基因、志贺菌ipaH基因及副溶血性弧菌tdh基因序列设计引物，进行PCR扩增及电泳检测。同时优化反应体系，测定特异性和灵敏度。结果该多重PCR技术能在8h内同时检测3种目的菌，通过检测其他9种常见食源性致病菌，结果表明该方法特异性好，多重PCR检测灵敏度分别为：沙门菌10^4cfu／mL，志贺菌10^2cfu／mL，副溶血性弧菌10^4cfu／mL。并进行了人工模拟食品和粪便样品的检测。结论初步建立能在8h内快速、灵敏、特异地同时测定沙门菌、志贺菌和副溶血性弧菌的多重PCR检测技术。     

多重PCR快速检测3种食源性致病菌

目的建立一种能同时检测金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌和沙门菌3种致病菌的多重PCR检测方法。方法采用LB培养液对金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌和沙门菌标准菌株进行增菌。根据金黄色葡萄球菌的nuc基因、产单核李斯特氏菌的hlvA基因、沙门氏菌的invA基因设计引物,通过多重聚合酶链反应（PCR）对上述3种食源性致病菌的目的基因进行扩增,同时对反应体系进行优化。结果对平均浓度为5cfu／ml的金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌和沙门氏菌在LB培养液中进行8h振荡培养,可以检出阳性结果;把金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌、沙门菌、志贺菌、蜡样芽孢杆菌、大肠埃希菌0157、阪崎肠杆菌7种菌混合在一起提取混合基因组DNA进行PCR扩增,显示出很好的特异性结果。结论建立的多重PCR检测方法适用于金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌和沙门菌的快速检测,具有快速、简便、灵敏的特点,可广泛应用于食品卫生检测、食物中毒应急处理和临床检验等领域。     

大理地区志贺菌的血清型分布及多重PCR检测技术的应用

目的 探讨大理地区志贺菌的血清型分布以及多重PCR技术在志贺菌检测中的应用.方法 用常规分离培养、生化鉴定和血清学分型法对腹泻患者粪标本进行检测,分离到的标本再用多重PCR法对志贺菌的毒力基因shetA、shetB、ial和ipaH进行扩增检测.结果 通过常规培养和生化反应鉴定,得到68株志贺菌.血清学鉴定显示福氏志贺菌41株,宋内志贺菌25株,鲍氏志贺菌2株.通过多重PCR扩增后68株志贺菌均在423 bp(ipaH)处出现了条带,检出率为100%,其余在147 bp(shetB)、309 bp(shetA)处以及320 bp(ial)处均出现了至少一个条带,与常规鉴定法的符合率达100%.5份直接用阳性粪便标本提取DNA为模板进行多重PCR扩增后,也得到了同样的结果.结论 大理地区细菌性痢疾患者感染以福氏志贺菌为主,多重PCR技术可用于志贺菌的快速检测和流行病学调查.     

肠道致病菌的流行趋势调查

为了解本地区的肠道致病菌流行趋势及耐药变迁,对我院肠道门诊3480例急性肠道腹泻病人进行肠道致病菌分布调查和耐药性分析,现报道如下。1材料与方法1.1标本来源采自本院肠道门诊腹泻病人粪便。1.2培养基山梨醇麦康凯琼脂平板(SMAC)沙门、志贺菌琼脂平板(SS),4号琼脂平板,双糖铁琼脂,微量生化管均为浙江省军区后勤卫生防疫检验所产品。1.3仪器VITEK-AMS全自动微生物鉴定分析仪(BI0MERIEUX法国)。1.4诊断血清志贺菌抗血清、沙门菌抗血清均为中国兰州生物制品检定所产品。大肠埃希菌O157:NM抗血清、霍乱弧菌多价及单价抗血清均为浙…     

双重实时荧光定量PCR检测产志贺毒素大肠埃希菌stx1和stx2基因

摘要：目的：建立一种检测产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)的双重实时荧光定量PCR法。 方法：根据stx1和stx2及其变种序列,设计PCR引物和TaqMan探针,建立双重实时荧光定量PCR检测体系,进行灵敏度和特异性评价,并对STEC模拟粪便标本及动物粪便标本进行检测分析。 结果：双重实时荧光定量PCR检测含志贺毒素基因重组质粒的灵敏度为1×10² copies/反应体系;该法对17种常见肠道病原菌均无特异性扩增,对47株不同志贺毒素类型及变种的已知STEC菌株的检测特异性为100%;对模拟粪便标本的检测下限为3.55×10³ CFU/g;对动物粪便标本的检测阳性率高于细菌分离培养。 结论: 建立的双重实时荧光定量PCR可作为不同志贺毒素类型及变种的STEC菌株的快速鉴定方法,亦可用于人感染性腹泻标本和动物粪便标本STEC感染的快速筛查。     

多重PCR方法鉴定六类致泻性大肠埃希菌和志贺菌

目的 建立一种快速检测和鉴定六类致泻性大肠埃希菌和志贺菌的多重PCR方法。方法 根据六类致泻性大肠埃希菌和志贺菌的毒力基因eae、stx1、stx2、elt、estIa、estIb、aggR、ipaH、afaD及16S rRNA基因rrs建立多重PCR反应体系,优化引物浓度、PCR反应条件等,评价该方法的特异性和灵敏度,并用该方法鉴定本实验室保存的174株致泻性大肠埃希菌和24株志贺菌,将结果与单重PCR、本实验室已建立的鉴定五类致泻性大肠埃希菌和志贺菌的多重PCR方法结果进行对比。结果 10对PCR引物均可特异性扩增相应基因片段。该反应体系对174株致泻性大肠埃希菌和24株志贺菌的鉴定结果与单重PCR检测结果一致,本研究的多重PCR检测下限可达4.56 101 CFU/反应(1.14 104 CFU/ml)。结论 本研究采用毒力基因及内参照基因建立的多重PCR方法可在一个反应体系中鉴定和区分致泻性大肠埃希菌和志贺菌,为临床快速检测、疾病预防控制实验室筛查、腹泻的暴发溯源等提供了方便快捷的技术支持。     

2013年杭州市腹泻病原谱分析

目的了解2013年杭州市感染性腹泻的病原谱特征。方法收集腹泻患者的粪便标本。分离培养并鉴定非伤寒沙门菌、志贺菌、致泻性大肠埃希菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、气单胞菌、小肠结肠炎耶尔森菌、类志贺邻单胞菌8类细菌,荧光定量PCR法检测札如病毒、轮状病毒、肠道腺病毒、诺如病毒和星状病毒,多重PCR分析致泻性大肠埃希菌毒力基因。结果 532份标本共检出腹泻病原285株,总检出率为53.6%,包括细菌158株(占55.4%),病毒127株(占44.6%)。158株细菌中致泻性大肠埃希菌88株(占55.7%),副溶血弧菌31株(占19.6%),气单胞菌17株(占10.8%)。127株病毒中诺如病毒72株(占56.7%),轮状病毒42株(占33.1%),札如病毒10株(占7.9%),星状病毒3株(占2.4%),未检出肠道腺病毒。诺如病毒中Ⅰ型和Ⅱ型分别占9.7%(7/72)和90.3%(65/72)。结论杭州市感染性腹泻病原以致泻性大肠埃希菌、副溶血弧菌、诺如病毒和轮状病毒为主,应主动加强监测和防控。     

联合分子检测法对腹泻患者粪便中致泻性大肠埃希菌的调查

  目的  采用胃肠道感染测试条（FA GI）联合实时聚合酶链式反应（PCR）直接检测法,回顾性调查山东省青岛市腹泻患者致泻性大肠埃希菌（DEC）的感染情况及菌株基因型,并与传统方法进行比较,探讨不同检测方法在腹泻监测中的应用。  方法  对2018年青岛市2家哨点医院采集的263份腹泻粪便标本,采用传统培养法分离大肠埃希菌并送至青岛市疾病预防控制中心,利用多重PCR方法鉴定DEC;同时采用FA GI联合实时PCR的方法直接检测粪便中的DEC。 将每5份粪便样标本混合为1份混合样品,用FA GI进行检测,再用实时PCR方法检测阳性混合样品中的单个样品。  结果  263份标本中,采用传统分离培养联合多重PCR法检测,15份样品阳性,阳性率为5.7%。 其中,肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）、肠致病性大肠埃希菌（EPEC）、肠集聚性大肠埃希菌（EAEC）、肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）阳性的标本分别为7、4、3、1份。 采用FA GI联合实时PCR直接检测法检测,阳性样品35 份,阳性率为13.3%。 其中ETEC、EAEC、EPEC、EIEC阳性的标本分别为12、12、9、2份。 2种方法均未检到产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）阳性的标本。 2种方法毒力基因检测结果一致。 EAEC、ETEC、EPEC携带的主要毒力基因分别为pic、estIb和eae。  结论  FA GI联合实时PCR直接检测法显著提高了粪便中DEC的检出率,敏感性和特异性高,省时省力,可以辅助DEC常规监测,准确地反映DEC的流行和分布情况,为DEC的防控提供有力的实验室依据。     

2006-2008年上海市闵行区腹泻病病原菌的流行特征

目的了解上海市闵行区腹泻病病原菌的菌群分布以及变化趋势。方法采集2006-2008年闵行区3个监测点医院中腹泻患者的肛拭标本,做沙门菌、志贺菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌及致病性大肠埃希菌、产毒性大肠埃希菌、侵袭性大肠埃希菌及出血性大肠埃希菌的检测。结果8104份肛拭标本中,病原菌的检出率为15.4%（1251/8104）,在这些病原菌中占前3位的分别为副溶血弧菌、志贺菌和沙门菌。沙门菌的优势血清型为肠炎沙门菌,志贺菌的优势血清型福氏志贺菌和宋内菌。2006-2008年每年病原菌的阳性率分别为17.1%（439/2564）、16.7%（497/2961）、11.1%（315/2849）,各病原菌的分布存在明显的季节性差异,以夏秋季阳性率较高。副溶血弧菌和沙门菌在中青年的阳性率较高,志贺菌在20～岁以下人群中阳性率较高。结论2006-2008年上海市闵行区腹泻患者中分离的病原菌以副溶血弧菌、志贺菌和沙门菌为主,初步揭示了上海市闵行区细菌性腹泻的病原谱及流行病学分布特征。     

FilmArray GⅠ Panel在腹泻病原体检测中的应用

  目的  探讨FilmArray Gastrointestinal（GⅠ）Panel在腹泻病原体检测中的应用价值。  方法  收集2016年1－9月无锡市人民医院（含儿童医院）肠道门诊就诊病例粪便标本152份,分别采用FilmArray GⅠ Panel及real-time PCR进行检测,对两种方法检测结果进行比较。  结果  FilmArray GⅠ Panel共检出19种病原体,阳性检出率为75.00%（114/152）;real-time PCR共检出17种病原体,阳性检出率为68.42%（104/152）。 两种方法检测结果符合率67.76%（103/152）。 对腺病毒F组40/41、EIEC（Enteroinvasive E. coli , EIEC）、弯曲菌和蓝氏贾第鞭毛虫,检测结果符合率100.00%;对札如病毒、肠集聚性大肠埃希菌（Enteroaggregative E.coli, EAEC）、艰难梭菌、沙门菌和霍乱弧菌,检测结果符合率为98.03%、94.08%、96.71%、94.08%和98.68%,检测结果一致性中等（Kappa值为0.563、0.546、0.651、0.610、0.744）;对诺如病毒GⅠ/GⅡ、A组轮状病毒、肠产毒性大肠埃希菌（Enterotoxigenic E. coli, ETEC）、肠致病性大肠埃希菌（Enteropathogenic E.coli, EPEC）、类志贺邻单胞菌和副溶血性弧菌,检测结果符合率为98.03%、99.34%、97.37%、92.76%、99.34%、98.68%,检测结果一致性较好（Kappa值为0.892、0.971、0.890、0.764、0.944、0.902）,经χ2检验分析,FilmArray GⅠ Panel对EAEC、ETEC、EPEC、艰难梭菌和沙门菌检出率高于real-time PCR,差异有统计学意义（P<0.05）。  结论  与real-time PCR相比,FilmArray检测具有快速、准确、高通量等特点,可用于突发公共卫生事件的快速检测及腹泻病的快速诊断。     

2013－2019年北京市顺义区腹泻病例分离致泻性大肠埃希菌耐药特征分析

  目的  对2013 — 2019年北京市顺义区2家哨点腹泻病例分离的致泻性大肠埃希菌（DEC）进行耐药特征分析。  方法  收集2013 — 2019年北京市顺义区2家哨点医院腹泻病例粪便标本,进行DEC分离培养、生化鉴定与分型鉴定,抗菌药敏感性试验使用微量肉汤法,耐药特征分析包括耐药率、非敏感率、多重耐药率和耐药谱分析。  结果  腹泻病例DEC检出率为9.53%（232/2434）、肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）占56.47%（131/232）、肠致病性大肠埃希菌（EPEC）占27.16%（63/232）、肠聚集性大肠埃希菌（EAEC）占16.38%（38/232）。 DEC多重耐药率为33.19%（77/232）,共有90种耐药谱型;ETEC多重耐药率为17.56%（23/131）,共有36种耐药谱型;EPEC多重耐药率为58.73%（37/63）,共有42种耐药谱型;EAEC多重耐药率为44.74%（17/38）,共有23种耐药谱型。 耐药率≥30%的抗菌药ETEC有萘啶酸（NAL）、氨苄西林（AMP）, EPEC有AMP、四环素（TET）、复方新诺明（SXT）、磺胺异恶唑（Sul）、NAL,EAEC有NAL、AMP、SXT、Sul、TET。 2013 — 2016年与2017 — 2019年两个时间组试验抗菌药差异性比较发现:ETEC对AMP、头孢唑啉（CFZ)、TET、头孢吡肟（FEP）、氨曲南（AZM）、氨苄西林/舒巴坦（AMS）耐药水平上升,对Sul耐药水平下降;EPEC对庆大霉素（GEN）耐药水平下降;EAEC对头孢噻肟（CTX）、GEN、多西环素（DOX）耐药水平下降。  结论  北京市顺义区腹泻病例中,DEC具有较高的流行强度,ETEC、EPEC和EAEC的流行与耐药均具有较为独立的特征,耐药形势依然严峻;值得应引起公共卫生和临床部门的广泛关注。     

2015~2019年北京市海淀区食源性腹泻患者致泻大肠埃希氏菌型别分布和耐药性分析

目的　分析北京市海淀区食源性腹泻患者致泻大肠埃希氏菌(diarrheagenic Escherichia coli,DEC)的感染状况、型别分布和耐药情况,为致泻大肠埃希氏菌的防控和临床合理用药提供科学依据。方法　对2015~2019年海淀区食源性疾病监测哨点医院送检的1 810份腹泻患者粪便标本直接划线接种在麦康凯培养基上培养,挑取可疑菌落进行生化鉴定、毒力基因测定,对确认为致泻大肠埃希氏菌的菌株进行药敏检测。结果　1 810份粪便标本中检出致泻大肠埃希氏菌214株,检出率为11.8%,各年度的检出率差异有统计学意义（χ2=10.858,P=0.028）。检出的致泻大肠埃希氏菌共有4种型别,其中集聚性大肠埃希氏菌（EAEC）96株（44.9%）,产肠毒素大肠埃希氏菌（ETEC）89株（41.6%）,肠道致病性大肠埃希氏菌（EPEC）24株（11.2%）,肠道侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）5株（2.3%）。在12种抗生素的药敏试验中,70株（32.7%）全部敏感,144株（67.3%）耐药;氨苄西林的耐药率最高（54.7%）,其次是四环素（38.8%）和复方磺胺（36.9%）,对3种及以上抗生素的多重耐药率为46.3%。结论　北京市海淀区2015~2019年致泻大肠埃希氏菌感染以EAEC和ETEC为主,耐药菌株的多重耐药谱广。应加强对抗生素的使用管理,延缓耐药株的产生和传播。     

Identification of diarrheagenic Escherichia coli by a new multiplex PCR assay and capillary electrophoresis

Diarrheagenic Escherichia coli (DEC) is a set of the most common pathogens causing diarrhea. DEC strains are classified into five pathotypes based on the possession of different virulence genes: enteropathogenic E. coli (EPEC), enterohemorrhagic E. coli (EHEC) or Shiga toxin-producing E. coli (STEC), enteroaggregative E. coli (EAEC), enterotoxigenic E. coli (ETEC), and enteroinvasive E. coli (EIEC). The development of an easy-to-use method to detect the specific virulence genes and distinguish the pathotypes is essential for the diagnosis and surveillance of DEC infections. In this study, a multiplex PCR assay (mPCR) specific to nine virulence genes and an internal control was designed for the identification of five DEC pathotypes. A temperature switch PCR (TSP) strategy was used in the PCR amplification. The PCR products were detected by capillary electrophoresis. The limit of detection (LOD) of the 10-plex reaction was 5 × 10³ copies/reaction for stx2 and 5 × 10² copies/reaction for the other targets. The mPCR showed very high specificity, and inclusivity and exclusivity were both 100%. When the mPCR assay was used for the detection of 221 cryopreserved diarrhea specimens, DEC colonies were detected from 49 specimens, and the positive rate was 22.2%. The mPCR assay was sensitive and specific, and the amplified product could be analyzed easily. Thus, this method could be used effectively to identify the suspected colonies of DEC in the primary culture of the specimen.     

北京市朝阳区腹泻患者致泻性大肠埃希菌流行特征及毒力基因携带情况分析

目的分析北京市朝阳区感染性腹泻样本中致泻性大肠埃希菌（DEC）流行特征及毒力基因携带情况。方法收集2014 — 2017年北京市朝阳区哨点医院感染性腹泻样本,分离培养后应用real-time PCR方法检测DEC的主要毒力基因。 其中利用eae、stx1、stx2、lt、st、aggR和ipaH 7种毒力基因进行DEC的分型鉴定,此外,检测并分析bfpA、astA、escV、pic、perA、ehxA、pet和ipaBCD等重要的毒力基因分布情况。结果从1 977份腹泻样本中共分离出94株DEC,检出率为4.75%。 DEC的检出率具有随年龄增加而升高的趋势。 0 ~ 5岁年龄组肠聚集性大肠埃希菌（EAEC）和肠致病性大肠埃希菌（EPEC）构成比分别是59.62%、23.08%。 5岁以上年龄组肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）构成比是59.52%。 81.25%EPEC（13/16）未携带bfpA,为非典型EPEC（aEPEC）。 38株EAEC中astA、pic和pet的携带率分别为39.47%、68.42%和92.11%。 30株ETEC的st、lt和astA携带率分别是46.67%、56.67%和53.33%;仅1株（3.33%）ETEC同时含有st和lt。 4株EHEC全部携带 eae、escV和ehxA。 6株肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）中ipaBCD、astA携带率为16.67%和33.33%。结论北京市朝阳区流行的DEC以EAEC、ETEC和EPEC为主,其中EPEC主要为aEPEC。 婴幼儿主要感染EAEC,成年人主要感染ETEC。 DEC中存在多种毒力基因,其中astA广泛存在于多种DEC中。     

Detection of Escherichia coli, Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia enterocolitica, Vibrio cholerae, and Campylobacter spp. enteropathogens by 3-reaction multiplex polymerase chain reaction

The magnitude of bacterial diarrhea in developing countries is largely unknown because affordable detection methods are not available. We have developed a polymerase chain reaction (PCR)-based assay for use in areas with limited resources to screen for diarrheogenic strains from clinical isolates. To simplify the assay and minimize reagents, our method implemented the use of plasmids rather than bacteria as template controls and the use of bacterial suspensions or crude DNA preparations rather than purified genomic DNA as template DNA. The assay consisted of 3 PCR reactions using 3 groups of 5 to 6 primer pairs to identify the 11 most common bacterial diarrheogenic pathogens. The 3-reaction multiplex PCR amplifies DNA targets specific for each 1 of the 6 Escherichia coli diarrheogenic strains and the 5 non-E. coli diarrheogenic strains, including Salmonella spp., Shigella spp., Campylobacter spp., Yersinia enterocolitica, and Vibrio cholerae. The assay may provide an important epidemiologic tool to investigate the role of diarrheogenic bacterial pathogens in areas of the world with limited resources.     

长沙市食品从业人员致泻大肠埃希菌实时荧光多重PCR检测结果分析

目的了解长沙市食品从业人员致泻大肠埃希菌感染、分布及毒力基因携带情况。方法抽取长沙市9个单位258例食品从业人员为研究对象,采用实时荧光多重聚合酶链反应(PCR)检测致泻大肠埃希菌。结果致泻大肠埃希菌感染率为15.5%(40/258),其中肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)占10.9%(28/258),肠致病性大肠埃希菌(EPEC)占3.1%(8/258),肠出血性大肠埃希菌(EHEC)占1.6%(4/258),未检出肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)和肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)。28株EAEC携带uidA基因26株,aggR+pic基因13株,astA基因27株,携带率分别为92.9%、46.4%、96.4%;8株EPEC全部携带eae和uidA基因;4株EHEC中3株携带eae基因,且都携带stx1+stx2基因。结论建立持续监测致泻大肠埃希菌的机制和深入研究其分子流行病学理论,除了为监管部门制订和评价公共卫生措施提供基础数据,对评价食品安全状况,有效控制传染源、保护人民群众健康具有重要意义。     

弥散黏附性大肠埃希菌多重PCR检测方法的建立及其在感染性腹泻患者中的流行情况

目的 建立一种快速检测弥散黏附性大肠埃希菌（DAEC）的普通多重PCR方法,了解DAEC在腹泻患者中的流行情况。方法 根据DAEC黏附基因afaB、afaC、afaD、daaE及16S rRNA基因rrs,建立4重PCR反应体系,对PCR引物、反应体系和反应条件进行优化,评价敏感性和特异性,并应用于389份腹泻患者粪便标本的筛查。结果 4重PCR反应可以特异性扩增DAEC菌株afaB/C、afaD、daaE基因片段,除2株肠集聚性大肠埃希菌（EAEC）外,检测引物对其他致泻性大肠埃希菌及常见肠道病原菌均无特异性扩增,此多重PCR方法的检测下限可达3.20 101 CFU/反应（8.01 103 CFU/ml）。利用本研究建立的多重PCR方法对腹泻患者粪便标本进行检测,发现DAEC菌株分离率为6.2%（24/389）。结论 本研究建立的多重PCR方法可用于DAEC菌株的快速鉴别,也可用于人粪便标本DAEC的初步筛查。