多重PCR快速检测3种食源性致病菌

目的建立一种能同时检测金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌和沙门菌3种致病菌的多重PCR检测方法。方法采用LB培养液对金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌和沙门菌标准菌株进行增菌。根据金黄色葡萄球菌的nuc基因、产单核李斯特氏菌的hlvA基因、沙门氏菌的invA基因设计引物,通过多重聚合酶链反应（PCR）对上述3种食源性致病菌的目的基因进行扩增,同时对反应体系进行优化。结果对平均浓度为5cfu／ml的金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌和沙门氏菌在LB培养液中进行8h振荡培养,可以检出阳性结果;把金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌、沙门菌、志贺菌、蜡样芽孢杆菌、大肠埃希菌0157、阪崎肠杆菌7种菌混合在一起提取混合基因组DNA进行PCR扩增,显示出很好的特异性结果。结论建立的多重PCR检测方法适用于金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌和沙门菌的快速检测,具有快速、简便、灵敏的特点,可广泛应用于食品卫生检测、食物中毒应急处理和临床检验等领域。     

肠道病毒71型景德镇分离株全基因组序列分析

目的分析2011年景德镇地区重症手足口病患儿标本肠道病毒71型(EV71)分离株2011JDZ35全基因组序列特征。方法采集重症手足口病患儿咽拭子标本,进行病毒分离和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增分离病毒的全基因组序列,并进行全基因组核苷酸序列测定,参考EV71 A、B、C各基因型的参考毒株和国内外分离毒株进行同源性分析并构建系统发生树。结果 2011JDZ35株的基因组长度为7406 bp,其中包括5’端非编码区(5’UTR)长742 bp,病毒基因组编码区(ORF)全长6582 bp及3’端非编码区(3’UTR)长82 bp。ORF编码含2193个氨基酸残基的多聚蛋白。2011JDZ35株基因组的结构与FY08-C30-P14、EV71/Ningbo.CHN/065/2010、HZ08/Hang-zhou/2008十分接近,整个基因组的核苷酸同源性分别为97.3%,97.3%,97.7%;氨基酸同源性为99.1%,99.2%,99.2%。均属于C4亚型,而与Cox.A16国际标准株G10(U05876)及EV71国际标准株BrCr(U22521)差异较大,核苷酸同源性分别仅为77.5%,80.0%;氨基酸同源性为89.8%,94.8%。结论 EV71型病毒2011JDZ35株全基因组的组成和结构符合肠道病毒特征,与其他EV71型病毒具有相同的基因组结构,2011JDZ35株与中国大陆浙江宁波株亲缘关系最近,与阜阳株和杭州株等中国大陆内陆地区分离株较近,而与马来西亚、我国台湾、厦门分离株的差异较为明显,与国际标准株则有较大差异;2011JDZ35株与浙江宁波株具有共同的进化途径,推断2011JDZ35株与浙江宁波株可能共同来源于2008年中国大陆地区流行的EV71病毒株同一种系。     

2013年-2015年景德镇市流感病原学监测分析

目的：分析景德镇市近3年流感病原学监测数据,为流感防控提供参考。方法采集哨点医院流感样病例和不明原因肺炎的咽拭子标本,通过Real-PCR方法对标本进行流感病毒核酸检测和分型,流感病毒核酸检测阳性标本接种到MDCK细胞进行病毒分离,以人红细胞凝集及凝集抑制试验对流感病毒进行鉴定分型。结果共采集标本2554份,核酸检测阳性标本265份,分离出流感病毒184株,新甲型H1N1、A（H3N2）亚型和B型毒株均有发现。2013.4-2014.3年以新甲型H1N1和A(H3N2)为流行优势株,B型毒株两个系都有出现,但新甲型H1N1从2014年3月之后就没有再次出现;2014.4-2015.9主要流行株则为A（H3N2及B（Yamagata）少量出现的特点。数核酸阳性A(H3N2)亚型流感的MDCK细胞阳性分离率从85.71%降至59.02%,病毒血凝抑制效价也从1280降低到最低的40;核酸阳性B型流感病毒的MDCK细胞阳性分离率从62.07%上升到90.91%,病毒血凝抑制效价一般都在1280及以上。结论景德镇地区2013年4月-2015年9月期间,流感流行表现为新甲型（H1N1）短暂流行后,夏季主要以A(H3N2)流感为主,冬春季以B（Yamagata）型流感高发;A(H3N2)亚型的分离率逐年降低,B型流感病毒分离率上升;A（H3N2）亚型的抗原性变异较大,而B型的抗原性较稳定。     

日常沙门菌血清分型思路于一次盲样考核中的应用

目的通过梳理日常沙门菌血清分型思路及总结积累的经验,借以探讨考核样本中沙门菌血清分型方法。方法采用GB4789.4-2010沙门菌检验位相变异试验简易平板法,作为参考方法。同时运用传代与简易平板法相结合的方法,以及血平板-滤纸条搭桥法进行鉴定。结果运用传代与简易平板法相结合的方法和血平板-滤纸条搭桥法,一次性诱导鉴定出准确的沙门菌血清型。简易平板法诱导三次得出菌型。结论经过这次考核样的检测,提高了检验人员对沙门菌血清型的鉴定水平,提升了解决位相变异试验所遇难题的能力。     

一株非A～F群沙门菌的鉴定与分析

目的对一株来源于本市饮食服务行业从业人员肛拭标本中的沙门菌,探求其鉴定方法,为非A~F群沙门菌的判定提供参考。方法采用噬菌体检验方法,在现有只涵盖A~F群沙门菌诊断血清未能分型的情况下,结合培养基生长特性、全面生化试验进行分析。结果该菌生化反应符合肠道沙门菌定义,能被沙门菌O-I噬菌体裂解,连续数代纯培养物进行血清凝集试验均为A~F多价O血清(-),Vi(-)。结论该菌是一株罕见的非A~F群旺兹沃思沙门菌。