抗小鼠endolgin单克隆抗体杂交瘤的建立和初步应用

目的 建立能够分泌特异性抗小鼠endogun的单克隆抗体杂交瘤细胞系，为深入研究endoglin的新功能、诊断和治疗肿瘤血管生成提供物质基础。方法 利用小鼠endc，glin胞外段重组蛋白作为抗原免疫大鼠，通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠endoglin单克隆抗体的杂交瘤系。利用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型，免疫印迹方法明确筛选的单克隆抗体的特异性，免疫组化和免疫荧光初步判定获得的单克隆抗体是否可以应用于临床诊断。结果通过对90多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选，获得一株分泌特异性抗小鼠endoglin的单克隆抗体杂交瘤细胞系，分泌的单克隆抗体亚型为IgG1，轻链亚型为kappa。免疫印迹显示该研究获得的单克隆抗体可以特异识别小鼠endoglin重组蛋白，该单克隆抗体可以结合实体肿瘤组织微血管上的特异抗原并将微血管有效染色。结论本研究所获得的抗小鼠endglin单克隆抗体将有助于深入研究endoglin的新功能，为肿瘤血管生成的诊断和治疗提供了物质保障。     

抗胆汁螺杆菌单克隆抗体的制备

目的 制备抗胆汁螺杆菌单克隆抗体(McAbs).方法 用胆汁螺杆菌B2m株皮下免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行融合.以酶联免疫吸附实验(ELISA)筛选抗胆汁螺杆菌单克隆杂交瘤细胞株并初步鉴定其特异性;免疫印迹试验测定单抗所结合的抗原表位;免疫双向扩散试验确定IgG亚类;腹腔接种法、辛酸-硫酸铵盐析法大量制备、纯化单克隆抗体.结果 经过ELISA筛选获得11个阳性杂交瘤细胞株,其效价最高达1.4×105以上,并与实验动物常见的15种病原菌呈阴性反应;IgG亚类为IgC2a和IgG2b;免疫印迹试验显示,6株(A～F)与胆汁螺杆菌大约相对分子质量(17、20、21、30、52、66)×103的抗原特异结合,5株(G～K)皆与胆汁螺杆菌、幽门螺杆菌等三种螺杆菌大约相对分子质量(52、82)×103的抗原呈阳性反应,表明A～F株针对的是胆汁螺杆菌特异性抗原,G～K株可能具有属特异性.结论 筛选的单克隆抗体具有较高的特异性和敏感性,所结合的抗原为胆汁螺杆菌或螺杆菌的免疫优势抗原,为进一步的种、属生物学特性研究、菌株分型及血清学检测方法建立等奠定了基础.     

分泌抗人C_4单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤

1975年Kohler和Milstein报告的淋巴细胞杂交瘤技术,为制备抗各种抗原决定簇的单克隆抗体提供了精确的手段。1983年我们运用杂交瘤技术,用提纯的人补体第4成分(C_4)免疫BALB/c小鼠,取其脾脏淋巴细胞与小鼠SP2/0—Ag14骨髓瘤细胞融合,获得了分泌抗人C_4单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤。     

大鼠抗小鼠重组膜联蛋白A2单克隆抗体的制备与鉴定

目的 建立能够分泌特异性抗小鼠膜联蛋白A2( AnxA2)的大鼠—小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系.方法 利用重组小鼠AnxA2蛋白作为抗原免疫Wistar大鼠,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠AnxA2蛋白的大鼠—小鼠融合单抗杂交瘤细胞株.采用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型,免疫印迹和流式细胞术验证所筛选的单克隆抗体的特异性.结果 通过对30多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选,获得一株分泌特异性抗小鼠AnxA2的大鼠—小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系SZ-158,连续培养传代后染色体分析证实,Wistar大鼠脾细胞与小鼠SP2/0细胞稳定融合;免疫印迹和流式细胞术显示该单克隆抗体可以特异识别小鼠AnxA2重组蛋白.结论 该研究所获得的大鼠—小鼠融合单克隆抗体特异性针对小鼠AnxA2蛋白,可用于AnxA2转基因小鼠中AnxA2表达的检测,为深入研究AnxA2的功能提供了物质保障.     

用单克隆抗体鉴定人类单核细胞上的抗原

著者用单克隆抗体鉴定出人的外周血单核细胞上存在两种抗原,一种是Mo_1,一种是Mo_2。这两种抗原是通过自制的两种1gM单克隆抗体(抗—Mo_1与抗—Mo_2)确定的。单克隆抗体是用NS_1骨髓瘤细胞和免疫的小鼠脾细胞融合之后的杂交瘤制备的,小鼠是用人的外周血单核细胞免疫过的。然     

分泌抗hCG-抗HRP双特异单克隆抗体的二次杂交瘤细胞株E_4和E_7

用分泌抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)单克隆抗体的6-巯基鸟嘌呤抗性杂交瘤突变株BAH_1-TG细胞与用辣根过氧化物酶(HRP)免疫的小鼠脾细胞进行二次杂交。二次杂交瘤细胞的培养上清用双抗原夹心放射免疫测定法和双抗原夹心酶联免疫测定法检测抗hCG-抗HRP双特异抗体。经多次克隆和筛选,获得两株分泌抗hCG-抗HRP双特异单克隆抗体的二次杂交瘤株E_4和E_7。     

抗人膀胱癌双功能抗体的制备与鉴定

目的:制备抗人膀胱癌双功能抗体(BfAb)并进行体外实验与鉴定.方法:提取膀胱癌抗原,应用膀胱癌抗原通过杂交瘤技术制备抗人膀胱癌单克隆抗体,后者经胃蛋白酶水解后制备抗人膀胱癌单克隆抗体的F(ab′)2片段.然后将该片段通过二次杂交制备杂交瘤,用其免疫新西兰白兔,血清经凝胶纯化后获抗人膀胱癌BfAb,应用ELISA和免疫组化方法进行鉴别.结果:抗人膀胱癌BfAb与抗人膀胱癌单克隆抗体呈阳性反应,与BALB/C小鼠γ球蛋白呈阴性反应;BfAb可以同时结合靶细胞的肿瘤抗原和效应细胞表面的触发分子,引发正常细胞对肿瘤细胞的防御机制.结论:BfAb既能竞争性地与膀胱移行细胞癌抗原结合,又具有激活淋巴细胞的功能,从而特异性的直接杀伤癌细胞并诱发一系列的免疫应答反应.     

抗蛋白S单克隆抗体的制备

目的 制备抗蛋白S(protein S)单克隆抗体.方法 用微量蛋白S抗原对Balb/c小鼠脾内包埋免疫,取小鼠脾细胞与SP2/O细胞融合,融合后对杂交瘤细胞进行筛选克隆化培养,建立了10株稳定分泌抗蛋白s单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结景对其中的一株2E3进行研究,其分泌的抗体为IgG1亚类.腹水效价1:106阳性,采用饱和硫酸铵盐析法纯化腹水,Western blot测定显示单克隆抗体2E3可特异性地识别分子量为69,000的抗原分子.此杂交瘤细胞株体外传代培养6个月以上,ELISA检测抗体滴度无明显降低.结论脾内包埋法成功制备抗蛋白S单克隆抗体,使蛋白S的临床深入研究和应用成为可能.     

一种制备抗复合抗原单克隆抗体的方法

目的 建立通过单次细胞融合制备抗复合抗原(多种抗原)单克隆抗体的方法。方法 用复合抗原(甲胎蛋白、癌胚抗原、乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎核心抗原、乙型肝炎e抗原)免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备单克隆抗体。通过Protein-G亲和层析纯化阳性杂交瘤细胞株腹水,并通过亚类试剂盒法和非竞争ELISA法分别测定抗体亚类和亲和常数,同时应用免疫印迹分析其特异性。结果 通过单次细胞融合共获得20株抗上述复合抗原的单克隆抗体,其中针对甲胎蛋白的单克隆抗体5株、针对癌胚抗原的单克隆抗体6株、针对乙型肝炎表面抗原的单克隆抗体3株;针对乙型肝炎核心抗原的单克隆抗体4株、针对乙型肝炎e抗原的单克隆抗体3株。已鉴定的部分阳性杂交瘤细胞株亚类均为IgG1,抗体亲和常数介于1×10⁹M^-1~2.8×10¹¹M^-1,免疫印迹分析显示,所获得的单抗都与其抗原发生特异性结合。结论 建立了通过单次细胞融合制备针对复合抗原的单克隆抗体制备技术,使单克隆抗体的产出率显著提高,制备周期明显缩短,为建立规模化单克隆抗体制备平台奠定基础。     

抗羊垂体催乳素单克隆抗体性质研究

本文报道了应用淋巴细胞杂交瘤技术将羊垂体催乳素(oPRL)免疫过的BALB/c小鼠脾细胞与NS-O骨髓瘤细胞融合。制备了5株分泌抗oPRL单克隆抗体的杂交瘤细胞株。其中1种单克隆抗体属IgG1,4种属IgG2a。ELISA检测小鼠腹水抗体稀释度均在5×10~4倍以上。用固相夹心免疫放射测定法测出5种单克隆抗体可识别oPRL分子上3个不同的抗原决定簇,本文还对5种单克隆抗体与和oPRL结构相似的生长激素进行交义反应以鉴别其特异性。     

细粒棘球绦虫囊液McAb的制备及鉴定

McAbs were prepared by fusing SP2/0 cells with spleen cells of BALB/c mice immunized with hydatid cyst fluid (HCF) antigen. Antibodies in hybrid culture supernatant were detected by ELISA, and positive hybrids were cloned by technique of limiting dilutions. Numbers of chromosomes of five hybridoma cell lines (1D1, 1D8, 2D6, 4B10, 4F4) were demonstrated in the range of 99-108. The immunoglobulin class/subclass of McAb 4F4 was IgM and the others belonged to IgG1. IHA, ELISA and I-ELISA were used for identifying titer and specificity of five McAbs. The titers of two McAbs (1D1, 1D8) reached 1:10(6)-10(7) in IHA and ELISA. Two of these McAbs (1D1, 4F4) with other parasitic antigens revealed cross-reactions. This indicated that the McAbs 1D1 and 4F4 were against common antigen determiners of different parasitic antigens and the McAbs 1D8, 2D6, 4B10 against specific antigen determiners of HCF.     

Studies on monoclonal antibody against recombinant human granulocyte colony-stimulating factor.

Three hybridoma cell lines producing monoclonal antibodies (McAb) against recombinant human granulocyte colony-stimulating factor (rhG-CSF) have been established by fusing mouse myeloma cell line SP2/0 cells with spleen cells from a BALB/c mouse immunized with rhG-CSF. Ascites was obtained from BALB/c mice by injecting the hybridoma cells intraperitoneally. Three McAbs were purified by the caprylic acid-ammonium sulfate method. For each, the IgG subclass, valence and activity, molecular weight, specificity and affinity were determined. The applications of McAbs against rhG-CSF in the clinic and laboratory are discussed.     

抗禽流感病毒H5N1亚型单克隆抗体制备初报

为建立诱发动脉粥样硬化斑块破裂的动物模型，选用雄性新西兰兔，给予高脂饮食2周，利用球囊导管去除家兔腹主动脉内皮，继以高脂饮食至8周，正常饮食至16周即实验末，腹腔内注射鲁塞尔氏蝰蛇毒和静脉注射组胺诱发斑块破裂和血栓形成，利用图像分析法计算血栓形成面积，光镜和电镜观察腹主动脉或斑块的形态学表现，酶法测定兔血脂和血浆脂蛋白水平以及腹主动脉壁中胆固醇含量。结果表明，模型组家兔腹主动脉有大量血栓形成，显微镜下可见斑块肩部区有明显破溃和炎性细胞浸润，斑块内富含巨噬细胞和脂滴，在实验2、8和16周时的血清TC、LDL-C水平均显著升高，腹主动脉壁中胆固醇含量也远高于正常组。结果显示，这些改变符合不稳定斑块的特征，提示该模型可用于斑块破裂发生机制和筛选稳定斑块药物的研究。     

抗登革Ⅱ型病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与鉴定

采用登革Ⅱ型病毒免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞,在40％PEG1000的作用下进行融合,获得6株分泌抗登革Ⅱ型病毒单克隆抗体的杂交瘤,用间接免疫荧光法鉴定其单克隆抗体(McAb)对登革Ⅱ型病毒均有特异性。HIA和CF试验有5株McAb为CF型特异的。5株具有HIA抑制活性。     

分泌抗心脏肌凝蛋白及其轻链单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

心脏肌凝蛋白(Cardiac myosin,CM)及其轻链(CM—LC)是心肌特有的收缩蛋白质,其化学结构和免疫学性质均与其它组织来源者不同。当急性心肌梗塞(AMI)造成心肌细胞缺血坏死时,血清CM—LC水平升高。故可用于临床诊断AMI。这一诊断指标的特异性、敏感性、与梗塞灶大小     

绒毛膜促性腺激素受体单克隆抗体的制备及其特性的初步研究

We reported the production of monoclonal antibodies (McAbs) against chorionic gonadotropin hormone (CG) receptor by fusing spleen cells of BALB/c mice which had been immunized by purified bacteria (Pseudomonas maltophilia) CG receptor with mouse myeloma line SP2/0. Four hybridoma cell lines secreting CG receptor McAbs were obtained (ED490 DG390, AB890 and GE590). The titers of specific antibodies of both mice ascites and culture supernatant were 10(-2)-10(-6) and 1-10(-2) respectively, by solid phase ELISA. Double-Immunodiffusion test showed that the McAb GE590 was IgG1, and the McAbs ED490, DG390 and AB890 were IgG2b Immunoprecipitation indicated that 125I-HCG could bind the HCG receptor which had reacted with McAbs ED490, AB890 and DG390, suggesting that they may recognize the receptor with different antigenic determinant. Interaction of McAb GE590 with the receptor showed that the increased concentration of GE590 was in inverse proportion to the amount of 125I-HCG binding receptor, indicating that both the McAb and 125I-HCG could recognize a common site of receptor and that increased concentration of McAb GE590 may induce some change in conformation and structure of the receptor. Our study suggested that these McAbs may be used for studying structure of CG receptor.     

间日疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其鉴定

目的研制间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)单克隆抗体,并对抗体特性进行了初步鉴定。方法用纯化的重组PvLDH蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,测定其免疫球蛋白亚类及效价,结合ELISA、Western blot试验分析其特异性。结果共获得5株稳定分泌抗PvLDH重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别为6D1、6D2、5A10、5C7、4A8。5株单抗培养上清的ELISA效价为1∶512～1∶1024,腹水效价为1∶12800～1∶25600,其中5C7、6D1经Western-blot鉴定能与天然的恶性疟原虫和间日疟原虫的LDH发生特异性反应。结论本研究方法成功制备并获得了针对PvLDH的单克隆抗体,为进一步研究疟疾诊断试剂奠定了基础。     

抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及筛选

目的获得稳定、高效分泌抗氯霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法以CAP-HS-BSA免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞,体内诱生腹水法大量制备单抗。捕获ELISA法测定小鼠免疫球蛋白亚型,间接ELISA法测定腹水效价;用两步硫酸铵法和G蛋白亲和层析法来纯化腹水。结果成功建立了一株分泌抗CAP单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞4D10。经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1,杂交瘤染色体数目90-110条,间接ELISA检测诱生小鼠腹水的抗体效价达1∶2.56×105,纯度达95%,该细胞连续培养生物学性状稳定。结论成功制备的抗氯霉素单克隆抗体4D10效价高、纯度高,为利用该单抗研制检测氯霉素残留试剂盒提供原材料。     

重组人内抑素单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗重组人内抑素(ES)单克隆抗体(McAb)并进行鉴定。方法利用重组人ES为抗原,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与同源小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,间接ELISA法对细胞培养上清进行筛检,对能稳定分泌抗重组人ES的细胞株,进行扩大培养。体内诱生法制备腹水并对其初步鉴定。结果获得3B4、1D10、1G5、2D10,4株能稳定分泌抗重组人ESMcAb的杂交瘤细胞株,并对3B4和1D10两株给予鉴定,其免疫亚型为IgG2a、IgG3。腹水ELISA效价为10-6、10-5。通过蛋白免疫印迹法和免疫组化证明抗体有特异性和敏感性。结论成功制备分泌抗重组人ES的杂交瘤细胞株,为研究人ES的表达及相关领域奠定了基础。     

抗人生长激素单克隆抗体的制备及特点分析

人生长激素(hGH)是垂体前叶分泌的重要激素,但有关其结构与功能的关系、抗原决定簇的数目及位置、受体结合位点以及不均一性的来源和意义等问题至今尚未解决。抗hGH单克隆抗体(McAb)不仅是研究上述问题的有用工具,而且还可用于建立更为快速、灵敏,特异和准确的GH新免疫分析法,以提高有关疾患的诊治水平。本实验用微量免疫法获得四种抗整分子hGH McAb,并对其特性进行了较详细的研究。