人生长激素和胰岛素单克隆抗体的独特型抗体的制备及鉴定(论著摘要)

自从Jerne提出“免疫网络学说”以来,独特型(Id)─抗独特型(anti-Id)已成为免疫学中的研究热点,特异性抗体可变区中的Id决定簇可诱导anti-Id产生,激素的anti-Id在内分泌中有重要的作用。迄今,对激素anti-Id已有较深入的研究,但国内还未见有生长激素(GH)和胰岛素(Ins)anti-Id的报道。我们用人GH(hGH)和人Ins(hIns)单克隆抗体(McAb)及其F(ab)_2片段分别免疫新西兰家兔,经1次基础免疫和4次加强免疫后,独特型抗血清(anti-Id)的效价可达1:16～1:64(免疫双扩散法)。     

人血清生长激素的放射免疫测定及其临床应用

为了研究正常及各种病理情况下垂体人生长激素(hGH)的分泌及调节,提高hGH分泌异常疾病的诊治水平,我们成功地采用小剂量(100μg)抗原(hGH),多点皮下注射和微量(3.3μg)抗原静脉加强注射的联合免疫方法,制备了优质的抗hGH血清。利用这些抗血清建立了hG     

人生长激素放射免疫测定盒的质量评价

1985年12月至1986年5月间,我们参加了华西医大临床免疫中心主持的人生长激素(hGH)外质评(EQA)的协作研究,并应用于临床,现对hGH测定盒(Kit)的质量进行评价。材料和方法 1.~(125)I-hGH Kit和质控(QC)血清:华西医大临床免疫中心研制提供,共三种批号。851110:标准、标记物、QC血清均为冻干品,一、二抗、兔、马血清为冻结品,与     

抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文用呼吸道合胞病毒(RSV)作抗原免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,建立3株分泌抗RSV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。经鉴定所产生的McAb确系抗RSV的McAb。     

抗入■链单克隆抗体(McAb)的研制及临床应用

抗μ链是临床诊断及实验研究的重要试剂之一,广泛应用于肾组织 IgM 定位及各种细菌、病毒性感染早期特异性 IgM 抗体的检测。提取及纯化μ链,并免疫动物,制备抗μ链多克隆抗体。生产过程繁杂,我们从巨球蛋白血症患者血清中提纯了 IgM、免疫BAIB/C 小鼠后,成功地建立了分泌抗μ链的杂交瘤细菌株。所获抗μ链 McAb 效价高(腹水 McAb 琼脂双扩散效价可达1:28)、稳定性好(液氮中保存1年以上效价不变)、     

晚期氧化蛋白产物抗体的制备和鉴定

目的 制备和鉴定抗人晚期氧化蛋白产物(AOPPs)单克隆抗体(McAb).方法 用次氯酸(HOCl)和纯化的人血白蛋白(HSA)孵育获得AOPPs-HSA,取凝胶层析纯化后的第1峰免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗AOPPs-HSA的McAb,用间接ELISA、Western blot鉴定其特异性及亚类.结果 成功筛选出3株稳定分泌抗AOPPs,1株既抗HSA又抗AOPP的McAb杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类3株为IgGl,1株为IgG2b,间接ELISA和Western blot证明制备的抗体可以特异地和天然或体外制备的AOPPs结合.结论 获得抗人AOPPs-HSA的McAb细胞株4株,为进一步研究AOPPs生物学活性及其相关疾病的诊断和预后奠定基础.     

抗人IgE单克隆抗体的反向被动血凝法测定人血清总IgE

反向被动血凝法(RPHA)具有快速、简便、敏感等优点,国内已建立抗人IgE PcAb-RPHA测定人血清总IgE,并制成试剂供临床应用。但因多克隆抗体(PcAb)是用纯化的人IgE骨髓瘤蛋白免疫动物获得,其亲和力、特异性及抗原结合谱等随抗原纯度、不同免疫动物个体和采血次数多寡而变化,使试剂难于标准化。单克隆抗体(McAb)具有特异性高、均一、亲和力恒定及容易纯化等优点,故近年来McAb在许多免疫测定系统中得到应用。Francisco SM等用3个抗IgE McAb,采     

单克隆抗体测定人IgE和IgG、IgA、IgM诊断盒的研制

本研究属国家“七五”重大科技项关项目,采用经典的杂交瘤技术制备抗人IgG、IgA、IgM、IgE和Kappa、Lambda单克隆抗体(McAb)、并研制抗人IgE ELISA和抗人IgG、IgA、IgM免疫单扩散(SRID)诊断盒。结果证明     

胃癌单克隆抗体GL_(013)的研究Ⅰ——GL_(013)单克隆抗体的分离纯化及理化性质分析

从胃癌研究室制备的鼠抗人胃癌细胞融合细胞株培养上清液中,分离纯化了GL_(013)McAb。经组织化学染色确认其存在免疫活性。免疫双扩散证实该McAb是IgG_1。SDS—PAGE呈现一条带。纯化后的McAb用同位素~(125)I进行了标记。固相放射免疫实验确定其相关抗原存在于癌组织的细胞膜上。并用此实验方法对GL_(013)McAb的热稳定性及对酸硷的耐受性进行了考查。     

人心肌肌钙蛋白T单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

目的：建立抗人心肌肌钙蛋白T(cTnT)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。方法：从人心肌组织中提取纯化人cTnT，免疫BALB／C小鼠，采用杂交瘤技术，间接ELISA法选择能稳定分泌抗cTnT　McAb的杂交瘤细胞株。结果：建立了2株稳定分泌抗cTnT　McAb的杂交瘤细胞株N15C和N16D，其染色体数目为90-106，McAb Ig亚类均为IgG，，间接ELISA法测定McAb腹水效价分别为1：8000和1：32000。免疫印迹结果显示2株McAb均可识别cTnT中Mr为37000的单一区带，不识别人骨骼肌提取物。间接ELISA法测定N15C和N16DMcAb与cT—nT反应的最低浓度分别为47μg/L和23μg／L。相加试验表明2株McAb能识别不同的抗原表位。结论：获得2株能稳定分泌特异性抗人心肌cTnT McAb的杂交瘤细胞株。     

绒毛膜促性腺激素受体单克隆抗体的制备及其特性的初步研究

We reported the production of monoclonal antibodies (McAbs) against chorionic gonadotropin hormone (CG) receptor by fusing spleen cells of BALB/c mice which had been immunized by purified bacteria (Pseudomonas maltophilia) CG receptor with mouse myeloma line SP2/0. Four hybridoma cell lines secreting CG receptor McAbs were obtained (ED490 DG390, AB890 and GE590). The titers of specific antibodies of both mice ascites and culture supernatant were 10(-2)-10(-6) and 1-10(-2) respectively, by solid phase ELISA. Double-Immunodiffusion test showed that the McAb GE590 was IgG1, and the McAbs ED490, DG390 and AB890 were IgG2b Immunoprecipitation indicated that 125I-HCG could bind the HCG receptor which had reacted with McAbs ED490, AB890 and DG390, suggesting that they may recognize the receptor with different antigenic determinant. Interaction of McAb GE590 with the receptor showed that the increased concentration of GE590 was in inverse proportion to the amount of 125I-HCG binding receptor, indicating that both the McAb and 125I-HCG could recognize a common site of receptor and that increased concentration of McAb GE590 may induce some change in conformation and structure of the receptor. Our study suggested that these McAbs may be used for studying structure of CG receptor.     

绒毛膜促性腺激素受体单克隆抗体的制备及其特性的初步研究

以纯化嗜麦芽假单胞菌的绒毛膜促性腺激素(CG)受体为抗原,融合得到4株(ED490,DG390,AB890,GE590)对细菌CG受体特异的单克隆抗体杂交瘤细胞,其腹水和培养上清中的抗体滴度分别为10~(-2)～10~(-6)和1～10~(-2);亚类鉴定显示:单抗GE590为IgGl,单抗ED490、DG390和AB890为IgG2b。研究发现,ED490、AB890和DG390与细菌CG受体作用后,~(125)I-HCG仍能结合该受体,揭示其作用于受体不同位点。GE590与CG受体结合实验发现,随着单抗浓度不断增加,~(125)I-HCG与受体结合逐渐减少,推测该单抗与~(125)I-HCG结合受体同一位点。     

Characteristics of monoclonal antibodies against chorionic gonadotropin receptor]

We reported the production of monoclonal antibodies (McAb) against chorionic gonadotropin (CG) receptor by fusing spleen cells of BALB/c mice immunized with purified pseudomonas maltophilia CG receptor with mouse myeloma line (SP 2/0). Four hybridoma cell lines secreting CG receptor McAbs were obtained (ED 490, DG 390, AB 890, GE 590). GE 590 is IgG 1; ED 490, DG 390, AB 890 are IgG2b. I125-HCG and ED 490, DG 390. AB 890 recognized CG receptor different antigenic determinant. Increased concentrations of GE 590 were in inverse proportion to the amount of I125-HCG binding to human ovarian tissues showing that normal ovarian tissues and ovarian malignant tumors have different HCG receptor antigenic determinant. This study indicated that these McAbs may be useful in studying the structure of CG receptor and in providing a valuable evidence for early diagnosis and treatment of ovarian malignant tumors.     

抗羊垂体催乳素单克隆抗体性质研究

本文报道了应用淋巴细胞杂交瘤技术将羊垂体催乳素(oPRL)免疫过的BALB/c小鼠脾细胞与NS-O骨髓瘤细胞融合。制备了5株分泌抗oPRL单克隆抗体的杂交瘤细胞株。其中1种单克隆抗体属IgG1,4种属IgG2a。ELISA检测小鼠腹水抗体稀释度均在5×10~4倍以上。用固相夹心免疫放射测定法测出5种单克隆抗体可识别oPRL分子上3个不同的抗原决定簇,本文还对5种单克隆抗体与和oPRL结构相似的生长激素进行交义反应以鉴别其特异性。     

抗人交联纤维蛋白碎片D—二聚体McAb的制备及其鉴定

以纯化的纤维蛋白碎片D-二聚体为抗原,得到4株分泌抗D-二聚体McAb的杂交瘤细胞,分别命名为HID1、HID2、HID3和HID4,其中HID1、HID2及HID3能识别同一或相邻抗原决定簇,与纤维蛋白原及其碎片X、Y、D、E和血浆等无交叉反应;HID4则识别另一抗原决定簇,且与纤维蛋白原碎片X、Y、D等有交叉反应。本组McAb的成功制备,将为临床血栓性疾病的诊断和治疗监测提供新手段。     

人胰岛素原C肽单克隆抗体的研究

半抗原人胰岛素原C肽(HCP)对小鼠的免疫原性,以蛔虫蛋白作为载体远比牛或小鼠清蛋白为高。将NS-1瘤细胞与HCP-蛔虫蛋白结合物免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合,获得12种抗HCP McAb,对其中8种的Ig类和亚类,亲和力及特异性等进行了详细鉴定。不同的HCP片段置换反应结果表明,HCP McAb的抗原决定簇分别位于HCP分子的23～31.22～31及1～22氨基酸区。20例正常成人空腹血浆HCP测定值,用兔多克隆抗血清RIA(0.47±0.16pmol/ml)明显高于MCAb-1 RIA(0.29±0.13 pmol/ml).     

单克隆抗体分析单纯疱疹病毒的抗原性

用15种抗HSV型共同性McAb相2种分别抗HSV-1和HSV-2的型特异性McAb,分析了43株HSV临床株的抗原性。间接免疫荧光试验和改良ELISA的分机结果表明,从宫颈炎患者分离出的15株HSV中,1株为HSV-1,14株为HSV-2;从口唇和眼部感染病变中分离出的28株HSV均为HSV-1.用15种型共同性McAb对HSV的抗原性分析表明43株HSV分离株中,22株(51.2％)可与所有型共同性McAb反应,21株(48.8％)仅与部分McAb反应。结果表明,HSV临床分离株间及不同的HSV参考株间在抗原性上有明显差异,其原因有待进一步研究。     

旋毛虫Ts43基因克隆和序列分析

目的：构建编码旋毛虫相对分子质量43000蛋白基因(Ts43)的原核表达载体,并对其序列进行分析。方法：应用RT—PCR方法从河南省南阳猪源旋毛虫获得旋毛虫基因Ts43,克隆人pGEMEX-1载体中构建重组质粒pGEMEX—Ts43,进行测序、同源性比较及抗原性预测分析。结果：所获基因的核苷酸序列与GenBank所登录的旋毛虫Ts43蛋白基因序列的同源性为99％。抗原性预测分析结果显示,河南省南阳猪源旋毛虫相对分子质量43000的蛋白分子上存在有4个明显抗原活性的结构域,分别位于距翻译起点第26～28、101～105、185～193、275～295个氨基酸残基的肽链上。结论：成功构建了旋毛虫相对分子质量43000蛋白抗原基因的原核表达载体。     

应用人—鼠杂交瘤技术制备抗绿脓杆菌人单克隆抗体的初步研究

作者用绿脓杆菌多价菌苗免疫的人外周血淋巴细胞与SP2/0小鼠骨髓癌细胞融合,一次成功。细胞融合率为74％,抗体阳性率为19.7％。经3次克隆化后共获得2株能稳定地分泌抗绿脓杆菌人单克隆抗体的杂交瘤细胞株A_3和F_3。核型分析可见人与小鼠的染色体共存。亚类检定均属人IgG,免疫印迹实验证明它们可识别绿脓杆菌抗原分子量为43kd和36kd的特异组分。     

Identification of Target Antigens of Asexual Blood Stages of Plasmodium falciparum

Seven monoclonal antibodies (McAbs) specific for Plasmodium falciparum (Pf), humanimmune sera of three individuals, two adults and one child, living in a malaria endemic area inHainan Island of China and immune sera of BALB/c mice immunized with the erythrocytic stages ofPF were used to identify the target antigens of asexual blood stages of Pf. The ~(125)I-labeled surfaceantigens with apparent molecular weights of 125, 115, 83, 74 and 67 KDa were mainly recognizedby McAbs 93A3, 94B5, 92D4 and 93D4, but the ~(125)I-labeled surface antigens of 200 and 19 KDawere recognized by McAb 94Dl alone. In addition, the ~(35)S-methionine- labeled target antigens of183, 125, 83 and 55 KDa were also recognized by McAbs 93A3, 94B5 and 94C3. The McAb21E3 against the culture supernatant antigen of Pf only recognized the antigen of 125 KDa labeledwith ~(15)S-methionine. The human immune sera from the adulst living in a malaria endemic area andmouse immune sera not only immunoprecipitated the target antigens which were recognized by theMcAbs but also immunoprecipitated the polypeptides of 140, 100 and some lower - molecularweight. But these target antigens recognized by McAbs, adult immune sera of and mouse immunesera could not be immunoprecipitated by human immune serum of the child with a primary infec-tion. With the antigen competition assay, the unlabeled antigens of Pf could strongly inhibit the im-mune reaction between the McAbs and the ~(125)I-labeled antigens of Pf. It suggested that the antigensrecognized by McAbs and polyvalent immune sera were specific target antigens.