紫外线致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库

目的 筛选紫外线致弱尾蚴中起免疫保护作用的抗原分子，分析其主要表位，为血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原。方法 以紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库，对阳性克隆插入片段的核苷酸进行序列分析．并利用软件Antheprot对所筛基因编码的抗原分子进行表位预测。结果 经三轮筛选，共获20个阳性克隆．序列同源性分析表明其中有5种已知基因（GST、副肌球蛋白、肌球蛋白、钙离子激活蛋白和3-磷酸甘油醛脱氢酶）．6种未知基因．软件分析显示不同抗原分子分别具有多个不同的抗原表位。结论 获得的阳性克隆插入基因片段可能为潜在的日本血吸虫病疫苗分子，可能是多抗原、多表位在照射致弱尾蚴中起免疫保护作用。     

血吸虫感染抗性人血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库

目的分析血吸虫感染抗性人血清中起免疫保护作用抗体针对的日本血吸虫蛋白抗原谱,为日本血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原分子。方法采集血吸虫流行病区感染抗性人血清,免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对获得的阳性克隆核苷酸进行序列分析,并利用软件对所筛基因编码的抗原分子进行表位预测。结果共筛选出29个持续阳性克隆,对其进行测序,获得25个基因,包括5种已知基因(其中日本血吸虫肌球蛋白12个、丝氨酸蛋白酶抑制剂2个、细胞色素b1个、延伸因子1-α1个和线粒体编码区1个)和5个未知基因,软件分析显示不同抗原分别具有多个不同的抗原表位。结论获得的阳性克隆插入基因片段可能编码潜在的日本血吸虫病疫苗分子,其中日本血吸虫肌球蛋白为主要抗感染蛋白分子。     

一例听障青年听觉言语康复个案研究

目的 通过一例听障青年的康复实践,探索成年听障患者听觉言语康复的方法.方法 利用短期培训传授听觉言语康复的方法和技巧,以患者自主康复训练为主,定期进行康复指导和评估.结果 经过3年的听觉言语康复,该患者与健听人交流基本无障碍,并能使用电话.结论 听力损失为极重度聋但低频残余听力较好的成年人,通过验配合适的助听器,掌握基本的听觉言语训练方法,坚持科学系统的学习训练,也有希望得到康复;聋儿听觉言语训练的方法和技巧同样适用于成年听障患者.     

人源性抗日本血吸虫噬菌体抗体库的构建及初步鉴定

目的利用噬菌体抗体展示技术构建人源性抗日本血吸虫Fab段噬菌体抗体库并进行初步鉴定。方法RT-PCR从对血吸虫感染有一定抗性成年人外周血淋巴细胞中扩增出入IgG轻链和重链Fd段基因片段，将其克隆入PComb3中．构建人源性Fab段噬菌体抗体库。并用限制性内切酶酶切、序列分析、DOT-BLOT以及SDS-PAGE等方法对噬菌体抗体库进行初步鉴定。结果噬菌体抗体库的滴度为6．2×10^11／L。库容量为1．2×10^7。酶切鉴定结果显示噬菌体抗体库轻重链重组率达到66．6％，测序结果表明克隆入PComb3的是人免疫球蛋白轻链和重链基因,DOT-BLOT实验证明该抗体库表达了人源性的抗体，而SDS-PAGE证实了免疫球蛋白Fab段的可溶性表达。结论成功地构建了人源性抗日本血吸虫Fab段噬菌体抗体库，为筛选人源性抗日本血吸虫的抗体、研究这些抗体的特性和功能奠定了基础。     

日本血吸虫Mago nashi基因RNA干扰系统的构建及鉴定

目的构建针对日本血吸虫Magonashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体。方法设计及化学合成日本血吸虫Magonashi样蛋白基因的短发夹结构的寡核苷酸，通过退火成双链DNA片段，将其与经限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ双酶切的pSUPER质粒连接，构建表达shRNA的重组质粒。结果经酶切及测序证实针对日本血吸虫Magonashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体pSUPER构建成功。结论成功构建针对日本血吸虫Magonashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体，为进一步研究对日本血吸虫Magonashi样蛋白基因RNA干扰作用及该基因功能奠定基础。     

日本血吸虫童虫文库免疫筛选及其高丰度表达膜蛋白初步鉴定

目的 获得新的可能具有诊断意义的血吸虫蛋白分子并对其鉴定。 方法 免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库，对获得的阳性克隆进行测序分析，设计引物体外扩增目的蛋白基因，将其亚克隆入原核表达载体pET28a中，并转化大肠埃希菌BL21，进行诱导表达，最后用Western blotting鉴定。 结果 获得34个阳性克隆，选择其中24个进行测序，其中13个是日本血吸虫相对分子质量（Mr）为22 600膜相关蛋白（Sj22.6）基因。Sj22.6基因在体外被成功扩增，并被亚克隆入pET28a中进行表达。Western Blotting 结果显示，菌体表达的条带可以被感染兔血清以及血吸虫患者血清识别。 结论 Sj22.6膜相关蛋白基因在童虫cDNA文库中可以被高频率筛出，融合蛋白Sj22.6成功地在BL21中表达并具有免疫反应性。     

重组人内抑素单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗重组人内抑素(ES)单克隆抗体(McAb)并进行鉴定。方法利用重组人ES为抗原,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与同源小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,间接ELISA法对细胞培养上清进行筛检,对能稳定分泌抗重组人ES的细胞株,进行扩大培养。体内诱生法制备腹水并对其初步鉴定。结果获得3B4、1D10、1G5、2D10,4株能稳定分泌抗重组人ESMcAb的杂交瘤细胞株,并对3B4和1D10两株给予鉴定,其免疫亚型为IgG2a、IgG3。腹水ELISA效价为10-6、10-5。通过蛋白免疫印迹法和免疫组化证明抗体有特异性和敏感性。结论成功制备分泌抗重组人ES的杂交瘤细胞株,为研究人ES的表达及相关领域奠定了基础。     

日本血吸虫Sj-Ts4样蛋白基因的克隆、表达和初步鉴定

目的为了寻找血吸虫病新的免疫学诊断候选分子,在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫Sj-Ts4样融合蛋白。方法提取日本血吸虫成虫RNA,设计引物,用RT-PCR法扩增出日本血吸虫Sj-Ts4样蛋白基因编码序列,T载体连接,将其亚克隆入PGEX-5X-1载体中,经酶切、测序证实正确后,转化入大肠杆菌DH5α并用IPTG对该重组菌诱导表达,SDS-PAGE和Western blot方法观察表达结果。结果RT-PCR法扩增出一条大小约为870bp的片段,表达质粒PGEX-5X-1-SjTs4经双酶切和以该重组质粒为模板进行PCR扩增,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段,诱导表达后,经SDS-PAGE可见一条约58ku大小的GST融合蛋白条带,并可与抗GST特异性抗体反应。结论本实验成功地克隆了日本血吸虫Sj-Ts4样抗原的编码基因,并在原核细胞中进行表达,为进一步验证其免疫诊断价值奠定了基础。     

日本血吸虫Tsunagi蛋白基因的获得、表达及初步鉴定

目的获得日本血吸虫Tsunagi蛋白基因的cDNA序列。克隆、表达和纯化原核蛋白并初步鉴定。方法应用筒并引物PCR和5’端、3’端锚定PCR。扩增得到日本血吸虫Tsunagi基因的完整开放阅读框（Open reading frame,ORF）。将该基因亚克隆入原核表达载体pET28a（＋）。诱导表达并纯化融合蛋白。用纯化后的蛋白免疫小鼠。制备该蛋白的多克隆抗体。分别用ELISA和Western Blotting对表达蛋白进行初步鉴定。结果获得日本血吸虫Tsunagi蛋白基因的完整ORF。序列全长为531bp。编码177个氨基酸。构建的重组质粒pET28a-SiTsunagi在大肠杆菌中获得了可溶性表达；以重组蛋白免疫小鼠获得效价为1：51200的多克隆抗体。Western Blotting证实抗体可特异性识别目的蛋白。结论成功获得日本血吸虫Tsunagi蛋白编码基因的全长ORF。在大肠杆菌中克隆表达了Tsunagi基因。并制备了特异性多克隆抗体。为进一步研究其在日本血吸虫生殖生物学中的功能奠定了基础。     

日本血吸虫29000膜外蛋白的表达和纯化及功能初步鉴定

随着血吸虫病防治工作的不断深入及血防形势的改变,血吸虫病流行的特点对本病的诊断提出了更高的要求.因表膜蛋白更易接触机体的免疫系统,刺激机体产生相对应的抗体,大多研究都支持虫体的表膜蛋白较其他蛋白有较好的诊断价值.本课题组将日本血吸虫(Schistosoma japouicam,Sj)中国大陆株29 000表膜蛋白的膜外区基因体外重组并表达,纯化后初步鉴定其免疫原性和免疫反应性,希望可用于日本血吸虫病的免疫诊断和疗效考核.