弓形虫MIC8基因对弓形虫病的免疫保护性研究

目的观察弓形虫MIC8基因对弓形虫病免疫保护性的效果。方法用PCR方法扩增弓形虫MIC8基因,定向克隆到真核表达质粒pEGFP-N1中,构建重组表达载体pEGFP-MIC8;MIC8-EGFP转染293T细胞,荧光显微镜观察表达情况;然后分别用质粒pEGFP-MIC8、pEGFP-N1空载体及生理盐水肌肉注射免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,末次免疫3周后用弓形虫RH株速殖子感染免疫小鼠。结果 PCR扩增弓形虫MIC基因序列正确,构建的重组表达载体pEGFP-MIC8鉴定正确,荧光显微镜下观察到重组质粒能够在293T细胞中表达。弓形虫攻击感染后,质粒pEGFP-MIC8免疫小鼠与对照组相比,小鼠的存活时间有一定的延长。结论构建的真核表达重组质粒pEGFP-MIC8对抗击弓形虫攻击感染能够激发一定的免疫保护性。     

弓形虫MIC8基因的克隆及真核表达质粒的构建

目的构建弓形虫微线体MIC8的真核表达重组质粒。方法设计合成弓形虫MIC8引物,运用PCR方法扩增其基因片段克隆至真核表达质粒pCDNA3．1,从而构建重组表达质粒pCDNA3．1-MIC8。结果PCR扩增弓形虫MIC8基因序列正确,构建的重组表达质粒pCDNA3．1-MIC8经PCR、HindⅢ和XbaⅠ双酶切和测序鉴定正确。结论成功获得真核表达重组质粒3-pCDNA3．1－MIC8,为进一步研究弓形虫疫苗的免疫保护性奠定基础。     

超氧化物歧化酶(Val16Ala)基因的克隆及其真核表达载体的构建

目的获得锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因并进行Val16Ala(GTT→GCT)位点的定点突变,构建MnSOD(Val)及MnSOD(Ala)基因的真核表达载体。方法采用RT-PCR法从人乳腺癌细胞MCF-7中扩增MnSOD(Val)基因;PCR引物延伸法对Val16Ala进行定点突变以获得MnSOD(Ala)基因;通过EcoRⅠ+XhoⅠ双酶切PCR产物与相应质粒pEGFP-N1连接构建两基因的真核表达载体pEGFP-N1-MnSOD(Val)和pEGFP-N1-MnSOD(Ala)。结果突变位点经测序证明正确,重组质粒经双酶切及测序鉴定证明正确。结论本实验成功获得了MnSOD(Val)及MnSOD(Ala)基因并成功构建了两基因的真核表达载体。     

趋化因子BLC表达载体构建及在肿瘤细胞中的表达

目的 建立真核表达重组体pcDNA-BLC的稳定转染细胞株，为研究趋化因子BLC的抗肿瘤免疫作用机制奠定基础。方法 以小鼠脾脏组织总RNA为模板，通过RT-PCR扩增BLC全长cDNA，并将扩增的cDNA片段插入pcDNA3．1( )真核表达质粒，构建重组质粒pcDNA-BLC，重组子经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定后，用脂质体转染技术导入Colon26细胞，经G418筛选建立稳定转染细胞株。用免疫印迹法(Western Blot)鉴定转染细胞表达的蛋白质，证实BLC存在。用趋化实验证实转染细胞株表达的BLC有生物学活性。结果 真核表达重组体pcDNA-BLC构建成功，pcDNA-BLC稳定转染细胞株表达有生物学活性的BLC。结论 成功建立了BLC的稳定转染细胞株，为研究BLC的抗肿瘤免疫作用机制继而发展肿瘤疫苗奠定了基础。     

2种开发重组疫苗的原核抗原展示系统

疫苗的研究已进行了很多年,各种新的思维模式都认为需要通过激发免疫反应来避免感染性疾病和肿瘤的发生.这些反应包括细胞毒性T细胞反应(CTLs),辅助性T细胞反应和中和反应.     

激素治疗肾病综合征患儿顺从行为调查

激素治疗肾病综合征患儿顺从行为调查海南医学院附属医院儿科（５７０００５）谭光宏海南省人民医院儿科（５７００１１）黄鹦肾病综合征（ＮＳ）是儿科泌尿系常见疾病之一，肾上腺皮质激素（以下简称激素）为最基本的治疗用药，但是在激素治疗过程中由于疗程长、副作用明...     

FITC标记葡聚糖粘附定量测定肿瘤组织血管密度

目的:测定肿瘤组织异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran)粘附水平是否可作为肿瘤血管密度的量化指标.方法:用endolgin疫苗免疫小鼠后,在同一只小鼠上同时建立小鼠Meth A纤维肉瘤模型和藻酸盐包被肿瘤细胞试验模型,2周后将FITC-dextran注射入小鼠体内,然后手术完整摘取肿瘤组织和藻酸盐颗粒,取部分肿瘤组织进行免疫组化检测血管密度的同时,将其他组织和藻酸盐颗粒匀桨并离心,取上清检测荧光强度,分析二者之间是否存在直线相关关系.结果:免疫组化和肉眼观察显示2种测定方法均有明显的血管生成效应,用FITC-dextran粘附测定肿瘤组织血管相对密度和藻酸盐包被试验均能较好地量化测定抗血管生成效果,直线相关分析表示二者的疫苗免疫实验组FITC-dextran的测定值之间呈明显的正性相关关系(r = 0.962,P＜0.01).结论:和藻酸盐包被试验相比,FITC-dextran测定肿瘤组织血管相对密度是一种简单有效的量化测定肿瘤组织血管生成水平的方法.     

哮喘吸入药物治疗中常见错误的观察及分析

哮喘吸入药物治疗中常见错误的观察及分析海南医学院附属医院儿科（５７０１０２）谭光宏日本国立小儿病院饭仓洋治（指导者）吸入疗法治疗哮喘的效果明确，同时又可以最大限度地减少药物的副作用，因此是目前治疗哮喘的首选方法。但有关资料表明［１，２］在实际使用中有...     

奥美沙坦酯在大鼠超负荷心肌肥大作用中的定量分析

目的 探讨新型血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂奥美沙坦酯（OLM）在压力超负荷心肌肥大反应过程中的作用.方法 选用SD大鼠21只,随机分为腹主动脉缩窄组（COA）、COA＋OLM组及对照组各7只,建立腹主动脉缩窄性高血压大鼠模型,测定大鼠平均动脉压（MAP）,测量大鼠心肌纤维的各项体视学指标,即平均自由程（入）、比表面（S/Y）、表面积密度（SV）及体积密度（VV）等参数并计算其结果.结果 COA组大鼠的MAP明显增高,心肌横断面积（a）及平均直径（d）明显增大,入、SV及VV与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;COA＋OLM组的MAP值大致恢复至正常水平,a、d、SV及VV等明显小于COA组（P＜0.05）,反映心肌细胞恢复状态的S/V及入则增大至正常水平.结论 OLM可明显改变体视学各项参数,有效逆转由压力超负荷引起的高血压和心肌肥大.     

大肠埃希菌JM109表面抗原 Ag43基因敲除与鉴定

目的：敲除大肠埃希菌JM109表面抗原43（Ag43）基因并对其进行鉴定。方法采用Sigma公司的TargeTron基因敲除系统和Ag43基因特异设计的PCR引物扩增获得突变Ⅱ组内含子RNA蛋白复合体（RNP）基因序列,然后将这段基因序插入表达RNP的质粒pACD4K‐C中,获得Ag43特异的重组RNP质粒pACD4K‐Ag43。最后将pACD4K‐Ag43转化JM109,经过IPTG诱导表达将Ⅱ组内含子插入Ag43特异的部位。结果通过软件分析发现插入Ⅱ组内含子的最佳位点位于碱基1812和1913之间,琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增的突变Ⅱ组内含子RNP基因序列分子量大小和预期值（350 bp）相一致,用NheⅠ和HindⅢ二种酶切分析重组质粒pACD4K‐Ag43结果和预期值相符,PCR扩增相应产物和基因测序显示Ⅱ组内含子特异地插入Ag43基因碱基序列的1812／1913位点。结论成功地将大肠埃希菌JM109中的基因敲除,为更进一步深入研究Ag43基因的功能和将其作为制备重组Ag43嵌合蛋白的宿主菌奠定了基础。