慢性乙型肝炎患者树突状细胞与CD4+Th细胞分化的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎患者树突状细胞(dendritic cells,DCs)与CD4+Th细胞亚群分化的关系.方法 分离慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞,以rhlL-4(50ng/mL)、rhGM-CSF(10ng/mL)和rhTNF-α(100μ/mL)诱导培养DC.以流式细胞仪检测DCs表面CD1a、CD83、CD80、CD和HLA-DR分子的表达情况.免疫磁珠分离外周血CD4+T细胞亚群,PMA+Ionomycin刺激后胞内荧光染色,流式细胞仪检测Th细胞内特征性细胞因子IFN-γ/IL-4以判断Th1/Th2分化.ELISA法检测DCs或Th细胞培养上清中IL-6、IL-12、IFN-γ和IL-4的含量.结果 慢性乙型肝炎患者的DCs表达CD1a、CD83、CD80、CD86和HLA-DR分子的水平明显低于正常人;培养至第7天.慢性乙型肝炎患者DCs分泌的IL-12水平低于正常人,而分泌的IL-6水平高于正常人.与正常人相比,慢性乙型肝炎患者外周血中Th1细胞占CD4+T细胞的百分比较低,Th细胞培养上清中IFN-γ的量也较低.患者DCs与同种异体的健康人Th细胞共培养,刺激Th1型细胞因子IFN-γ产生的能力低于正常人.结论 慢性乙肝患者体内DCs功能的异常可能导致了外周血Th1分化不足.     

CTLA-4抗体诱导原因不明复发性流产患者Th1/Th2转换的体外研究

目的:观察CTLA-4抗体在诱导原因不明复发性流产患者Th1/Th2转换中的作用.方法:用人绒毛膜癌细胞株JEG-3制备的滋养细胞抗原刺激30例复发性流产患者外周血单核细胞,实验组加CTLA-4抗体(10μg/ml组和1μg/ml组),对照组加IgG(10μg/ml组和1μg/ml组)培养,分别取24h、72h上清液,ELISIA法测其IL-2、IFN-γ和IL-4的水平.结果:①与同浓度对照组相比,实验组产生的IL-4均显著降低(P＜0.01),而产生的IFN-γ、IL-2均明显升高(P＜0.05).②与CTLA-4抗体1μg/ml组相比,CTLA-4抗体10μg/ml组产生的IL-4稍低,而IFN-γ和IL-2稍高,但无统计学差异(P＞0.05).结论:CTLA-4抗体可以上调Th1型细胞因子,下调Th2型细胞因子,提示CTLA-4抗体体外阻断CTLA-4可诱导原因不明复发性流产的Th1/Th2失衡更向Th1极化,不利于妊娠.     

gp96多肽复合物对树突状细胞成熟及功能的影响

目的探讨gp96多肽复合物对树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟及功能的影响.方法应用液相层析技术从胃癌组织中提取gp96多肽复合物,用SDS-PAGE和Western blot进行性质鉴定,将提取的gp96多肽复合物加入外周血来源的单个核细胞诱导培养DCs,采用流式细胞技术检测DCs的表型变化,用3H-TdR掺入法检测DCs诱导的混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR).结果从1 g湿重的胃癌组织中可提取gp6多肽复合物30～50μg,用gp96多肽复合物诱导培养的DCs其表面分子的表达明显增高,并具有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力.结论从胃癌组织中可以提取出gp96多肽复合物,gp96多肽复合物可促进DCs分化成熟,使其具有更强的抗原提呈能力.     

子痫前期患者外周血单个核细胞分泌Th1、Th2型细胞因子功能变化研究

目的研究子痫前期患者外周血单个核细胞分泌Th1/Th2细胞因子功能变化.方法子痫前期患者29例,正常妊娠妇女15例,分离外周血单个核细胞,体外培养72小时,ELISA方法检测培养上清液中Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ及Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平.结果子痫前期组PBMC培养上清液中,Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ水平(259.4±90.5)pg/mL,(452.0±122.6)=pg/mL与正常妊娠组(140.3±73.2)pg/mL,(307.5±106.4)pg/mL相比,显著升高,分别为P＜0.01,P＜0.05;Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平(28.8±7.7)pg/mL,(178.9±98.6)pg/mL与正常妊娠组(41.9±11.4)pg/mL,(316.1±284.6)pg/mL相比,显著下降,分别为P＜0.01,P＜0.05.结论子痫前期患者外周血单个核细胞分泌Th1型细胞因子功能增强,分泌Th2型细胞因子功能减弱.     

肝癌射频消融术对外周血Th1和Th2细胞因子的影响

目的研究射频消融治疗对原发性肝癌（HCC）患者外周血中Th1、Th2细胞因子的影响。方法采集30例HCC患者射频消融前和射频消融后3或7 d和肝癌复发时的血浆,用液相芯片检测Th1、Th2细胞因子水平的变化。结果射频消融后Th1型细胞因子干扰素-γ（IFN-γ）和白细胞介素-12p40（IL-12p40）水平较消融前明显增加[IFN-γ：（101.30±78.70）pg/ml vs.（55.70±36.20）pg/ml;IL-12p40：（57.70±31.90）pg/ml vs.（18.10±16.70）pg/ml;P均〈0.05）。但肝癌复发后IFN-γ和IL-12p40水平比消融后的水平明显下降[IFN-γ：（56.50±41.70）pg/ml vs.（101.30±78.70）pg/ml;IL-12p40：（18.90±16.460）pg/ml vs.（57.70±31.90）pg/ml;P均〈0.05）,与消融前比较无明显差异。射频消融治疗前后,Th2型细胞因子IL-4和IL-6水平未出现明显变化[IL-4：（11.33±12.70）pg/ml vs.（13.31±15.56）pg/ml;IL-6：（17.86±22.93）pg/ml vs.（24.46±28.46）pg/ml]。射频消融治疗后,Th2型细胞因子水平下降者伴随较长的复发时间间隔[（14.00±4.35）月],而Th2细胞因子水平增高的患者复发时间则相对较短[（5.06±4.26）月]。结论射频消融可短期激活Th1型免疫反应,但激活的Th1型免疫反应不能预防肝癌的复发。Th2型细胞因子水平改变与肝癌复发时间有关,监测Th2型细胞因子水平变化可能有助于预测肝癌复发。     

雌激素治疗对绝经妇女Th1/Th2平衡的影响

目的：探讨雌激素治疗对绝经妇女辅助性T细胞1（Th1）/辅助性T细胞2（Th2）平衡的影响。方法将研究对象分为生育年龄组、绝经组、雌激素治疗组共3组,每组各10例,分离、培养所有研究对象外周血T淋巴细胞,ELISA法测培养液上清液IL-4、IFN-γ质量浓度,并计算IFN-γ/IL-4比值。结果绝经组IFN-γ水平明显高于生育年龄组、IL-4水平显著低于生育年龄组、IFN-γ/IL-4比值显著高于生育年龄组,差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）;雌激素治疗组IL-4水平显著低于生育年龄组、IFN-γ/IL-4比值显著高于生育年龄组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）;雌激素治疗组IFN-γ水平明显低于绝经组、IL-4水平显著高于绝经组、IFN-γ/IL-4比值显著低于绝经组,差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）。结论绝经后发生Th1/Th2平衡变化,出现向Th1漂移现象,而雌激素治疗能改善Th1/Th2平衡的偏移。     

细胞因子诱导的人脐血CD4 T细胞Th17极化态的建立

目的建立一个合理的CD4T细胞极化的体外细胞培养方法,研究细胞因子刺激的人脐血CD4T细胞极化时产生IL-17的效应/记忆T细胞（Th17细胞）的表达。方法用TGF-β、抗IL-4、抗IFN-γ、IL-6、IL-1β活化幼稚脐血CD4T细胞,促成Th17细胞表型,IL-23具有维护功能。用流式细胞术分析在Th17极化态和Th0非极化态时CD4T细胞上IL-17和IFN-γ的表达,同时用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定细胞培养上清液中IL-17和IFN-γ的水平。结果IL-17＋IFN-γ-（Th17）细胞比例在Th17极化态时为（28±2.3）%,非极化态时为（3.2±0.4）%;培养上清液中分泌的IL-17浓度在Th17极化态时为（7350±1530）pg/ml,非极化态时为（218±32）pg/ml,两项指标在Th17极化态时都显著高于非极化态时,差异均有高度统计学意义（P〈0.001）。结论多种细胞因子刺激的CD4T细胞极化时促进了IL-17产物的表达,体外Th17极化态的建立为研究IL-17相关的免疫性疾病提供了一个平台。     

调节Th1／Th2平衡对脑胶质瘤细胞增殖的影响

目的研究外源性细胞因子调节Th1/Th2平衡对脑胶质瘤细胞增殖的影响.方法分别将IFN-γ+IL-4单抗或IL-4+IFN-γ单抗与脑胶质瘤细胞共同孵育,半定量RT-PCR方法观察Th1/Th2类细胞因子基因表达的变化,并用MTT方法检测其对脑胶质瘤细胞生长情况的影响.结果脑胶质瘤细胞Th2类细胞因子的表达明显强于Th1类(P＜0.01),IFN-γ+IL-4单抗可以增强IFN-γ的表达,抑制脑胶质瘤细胞的增殖并呈剂量依赖性关系(P＜0.01);IL-4+IFN-γ单抗则使Th2类细胞因子的表达有所增强,促进脑胶质瘤细胞的增殖,也呈剂量依赖性关系(P＜0.01).结论 外源性的细胞因子或细胞因子单抗可以调节Th1/Th2平衡,逆转Th2优势,影响脑胶质瘤细胞的生长.     

1型糖尿病患者Th1/Th2细胞亚群的研究

目的研究Th1/Th2细胞亚群分泌的不同细胞因子,探讨1型糖尿病患者体内Th1/Th2细胞亚群的变化。方法用放射免疫法(RIA)检测了48例1型糖尿病患者(7例合并有下肢血管病变)血清中Th1型细胞亚群分泌的细胞因子IFN-γ、TNF-α和Th2型细胞亚群分泌的细胞因子IL-4、IL-10的水平变化,19例健康志愿者做为对照。结果1型糖尿病患者血清中Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α的水平分别(63.30±14.3)ng/L和(65.03±24.98)Fmol/ml,显著高于正常对照组(29.48±11.98)ng/L和(23.66±13.51)Fmol/ml(P<0.01);Th2型细胞因子IL-4、IL-10的水平分别为(2.21±0.96)ng/L和(24.98±7.31)ng/L,明显低于正常对照组(5.37±1.10)ng/L和(62.87±5.97)ng/L(P<0.01);糖尿病并发下肢血管病患者Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α和Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平分别为(90.03±5.20)ng/L、(109.28±26.74)Fmol/ml和(0.55±0.22)ng/L、(12.12±2.39)ng/L,单纯糖尿病患者组四种细胞因子水平分别为(58.76±9.57)ng/L、(56.98±15.43)Fmol/ml和(2.49±0.72)ng/L、(27.18±5.30)ng/L,两组相比,四种细胞因子水平差异均有显著性(P<0.01)。结论1型糖尿病患者体内Th1/Th2细胞亚群发生了Th2→Th1的漂移改变,并与病情相关,为探讨该病的发病机制及病情监测提供了理论依据。     

老年非小细胞肺癌患者Th1/Th2漂移状态与T-bet/GATA3基因表达的关系

目的探讨老年非小细胞肺癌患者Th1/Th2漂移状态及其与T-bet、GATA3基因表达的关系。方法选取老年非小细胞肺癌患者及健康受试者各120例,双抗夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测各组血浆中Th1类细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)和Th2类细胞因子IL-4、IL-10的浓度;梯度离心法分离出单个核细胞(PB-MC),采用RT-PCR方法检测其T-bet、GATA3mRNA水平。结果老年非小细胞肺癌患者Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2水平与老年健康受试者比较明显下降[(10.28±0.88)pg/mL vs(16.94±1.05)pg/mL;(9.06±0.85)pg/mL vs(13.96±0.87)pg/mL)],差异均具有统计学意义;老年非小细胞肺癌患者Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平与老年健康受试者比较明显升高[(5.98±0.98)pg/mL vs(3.89±0.28)pg/mL;(47.59±2.89)pg/mL vs(40.47±1.28)pg/mL)],差异均具有统计学意义。老年非小细胞肺癌患者Th1型核转录因子T-bet mRNA的表达水平较老年健康受试者下降[(0.85±0.11)vs(1.46±0.09)];老年非小细胞肺癌患者Th2型核转录因子GATA3mRNA的表达水平较老年健康受试者明显增高[(1.51±0.12)vs(0.89±0.10)],差异均具有统计学意义。结论老年非小细胞肺癌患者存在着Th2漂移现象,该现象可能与影响Th1/Th2的极化状态的关键因子T-bet和GATA3的表达失常有关。     

遗传因素对脐血Th1/Th2平衡的影响

目的:探讨遗传影响因素(父母有无过敏性疾病(Allergic diseases,AD)史)对新生儿脐血单个核细胞Thl/Th2平衡的影响.方法:取正常足月新生儿脐血为研究对象,其中20例父母有过敏性疾病史(AD组)和20例无过敏性疾病史(对照组).收集脐血浆并分离单个核细胞(CBMC),体外经植物血凝素(PHA)刺激,MTT比色法检测细胞增殖活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养48h后细胞培养上清液中IL-2、IL-4、IFN-r、GM-CSF的水平.结果:数据显示:AD组与对照组相比:(1)脐血血浆中IL-2、IL-4、GM-CSF有显著性差异(P<0.05),IFN-r无显著性差异;(2)PHA干预培养48h后细胞培养上清夜中IL-2、IL-4、IFN-r,GM-CSF均有显著性差异(P相似文献   

流式细胞术检测人和小鼠Th细胞亚群

目的建立人和小鼠Th1和Th2细胞的检测方法,探讨两者在流式细胞仪检测方面的不同.方法采用PMA和离子霉素共同刺激外周血单个核细胞,观察在不同时间和不同剂量的PMA刺激下外周血T淋巴细胞CD3、CD4、CD8表达的变化;采用多色荧光共同标记分析技术检测外周血单个核细胞IL-4和IFN-γ的表达.结果在PMA和离子霉素共同刺激后4 h,人外周血T淋巴细胞表面CD4表达迅速下降,而小鼠T淋巴细胞表面CD4表达仅轻度下降;采用多色分析技术可以有效的检测Th1细胞和Th2细胞;采用CD3、CD8设门分析可以有效的区分人Th细胞;采用CD4设门可以有效区分小鼠Th细胞.结论人Th细胞检测宜采用4色染色分析技术,小鼠Th细胞检测采用3色染色技术即可.     

慢性乙型肝炎Th1/Th2失衡分析

目的:探讨慢性乙型肝炎发病过程中Th1/Th2细胞平衡失调的原因. 方法:用CD3和CD28 mAb, LPS分别体外刺激慢性HBV感染者和健康对照者的PBMC,ELISA法检测培养上清液中IL-10, IL-12及IFN-γ的水平. 结果:用mAb诱导刺激PBMC后,慢性HBV感染组IFN-γ和IL-10水平与健康对照组无差异;LPS诱导刺激后,慢性HBV感染组IL-12水平显著低于健康对照组(34±8 vs 77±9, P<0.05),且HBV阳性者IL-10分泌水平显著高于阴性者(975±101 vs 895±97, P<0.05). 结论:慢性HBV感染时Th1/Th2失衡并非T细胞本身缺陷所致,APC功能缺陷可能为Th1/Th2失衡的原因. APC功能缺陷可能与HBV侵犯APC有关.     

溃疡性结肠炎患者Th17和Th1／Th2细胞亚群的研究

目的检测溃疡性结肠炎（Ulcerativecolitis,UC）患者外周血中辅助性T细胞亚群（Th1、Th2和Th17）数量和比例的变化,探讨其在UC发病机制中的作用。方法选择40例UC患者,分离外周血单核细胞（PBMc）,采用流式细胞术（FCM）检测Th1、Th2、Th17细胞的数量及Th1／Th2比值,用ELISA测定培养上清中IFN-γIL-4、IL-17水平,与同期选择的健康对照组比较并与患儿的病情进行相关性分析。结果UC患者PBMC中IFN-γ＋Th1细胞的数量、IL--γ7＋Th17细胞的数量均高于健康对照组[（27．0±2．9）％,（23．2±1．7）％,P〈O．05;（26．61±2．6）,（11．4±1．2）,P〈0．011;Th1／Th2比值高于健康对照组[（12．8±1．6）,（8．60±1．9）,P〈0．01],Th17细胞的数量与疾病程度呈正相关（P〈0．05,r=0．42）。结论IL-17＋Th17细胞与Th1／Th2比值变化可能参与UC患者的免疫学发病机制。     

哮喘小鼠Th1/Th2细胞偏移及卡介苗干预的影响

目的研究哮喘小鼠Th1/Th2细胞偏移情况,同时观察卡介苗（BCG）对Th1/Th2偏移的影响。方法将雄性昆明小鼠随机分成哮喘组、BCG干预组和对照组。用卵清蛋白（OVA）致敏、激发建立哮喘模型。ELISA法测定肺泡灌洗液、脾细胞培养上清液中IFN-γ、IL-4的水平。结果肺泡灌洗液、脾细胞培养上清液中IFN-γ/IL-4比值在OVA致敏后均明显降低,初次激发后进一步降低,多次激发后继续降低,与对照组相比,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。BCG干预后IFN-γ/IL-4比值较哮喘组增高,但仍低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论致敏状态下Th1/Th2比例发生偏移,随着抗原激发,Th1/Th2偏移愈加明显,在哮喘气道炎症中,以Th2亢进为主,而代表全身性炎症的脾脏中,则以Th1分泌减少为主。BCG干预后可以部分纠正Th1/Th2偏移,但BCG作用有时限性。     

特应性皮炎Th1／Th2／Th17平衡的研究

目的：探讨特应性皮炎（AD ）外周血清T h1／T h2／T h17平衡的变化规律及相关细胞因子的变化规律,以进一步探讨AD发病的免疫机制。方法采用流式荧光技术测定47例AD患者（AD组）和40例健康自愿者（对照组）外周血清中的γ‐干扰素（IFN‐γ）、白细胞介素（IL ）‐4、IL‐17、IL‐21、IL‐23水平并进行统计分析,从而分析T h1／T h2／T h17／T reg平衡在AD中变化规律。结果在AD患者血清中,IL‐4水平较对照组升高（ P＜0．05）,IL‐17、IL‐23的水平显著高于对照组（ P＜0．05）;IFN‐γ／IL‐4和IFN‐γ／IL‐17较对照组明显降低（P＜0．01）;IL‐17与AD严重程度（SCORAD）评分呈正相关（P＜0．05）。结论在 AD病程中T h1／T h2、T h1／T h17降低,T h1／T h2／T h17平衡的漂移可能是AD发病的重要机制。     

人外周血树突状细胞诱导Th1/Th2细胞分化的研究

目的 :研究人外周血树突状细胞 (DC)与Th0细胞在不同比例条件下 ,诱导Th0向Th1/Th2分化的关系。方法 :健康人外周血单个核细胞经传统的方法诱导得到DC ,将DC与自体的Th0细胞以 1∶4和 1∶30 0的比例混合培养 4天 ,收集Th细胞 ,经CD3和CD2 8抗体扩增 4 8h ,ELISA法测上清中IFN γ和IL 4的浓度。　结果 :从外周血中诱导出DC高表达CD83(73.4 % )、CD86 (90 .3% )、HLA DR(6 8.5 % )和CD4 0 (73.7% ) ,DC与Th0以 1∶4混合 ,产生的IFN γ与 1∶30 0混合组比有显著差异〔(34± 4 .3) μg/Lvs(3.5± 1.2 ) μg/L〕 ,产生的IL 4亦有显著差异〔(2 5 ± 4 .3)ng/Lvs (35 0± 12 0 )ng/L〕。　 结论 :人外周血DC与Th0高比例混合时 ,诱导Th0向Th1分化 ;低比例混合时 ,诱导Th0向Th2分化。显示人外周血DC在调控T淋巴细胞免疫应答类型上具有可塑性 ,为临床移植物抗宿主病 (GVHD)免疫干预治疗奠定基础。     

特应性皮炎患儿外周血Th17、Th1/Th2细胞亚群的研究

目的检测特应性皮炎(AD)患儿外周血中辅助性T细胞亚群(Th1、Th2和Th17)数量和比例的变化,探讨其在AD发病机制中的作用。方法选择40例AD患儿,分离外周血单核细胞(PBMC),采用流式细胞术(FCM)检测Th1、Th2、Th17细胞的数量及Th1/Th2比值,用ELISA测定培养上清中IFN-γ、IL-4、IL-17水平,与同期选择的健康对照组比较并进行相关分析。结果AD患儿PBMC中CD4+IL-4(+Th2)细胞的数量、CD4+IL-17(+Th17)细胞的数量均高于健康对照组([19.56±4.9)%vs(12.91±1.7)%,P0.05;(26.61±2.6)vs(11.4±1.2),P0.05],Th1/Th2细胞的比值低于健康对照组([0.98±0.13)vs(1.84±1.6),P0.05]。结论IL-17+Th17细胞与Th1/Th2比值变化可能参与AD患儿的免疫学发病机制。     

T-bet对Th1/Th2分化调节作用与恶性肿瘤的关系

T-bet是T-box基因家族的新型转录因子,选择性地表达于Th1细胞,能诱导干扰素γ的产生,在Th1细胞的分化中起决定性的作用。在生理条件下,机体Th1和Th2细胞的免疫功能处于动态平衡态,这种平衡的偏离,对肿瘤发生、发展有重要的影响。现已发现,肿瘤宿主体内Th1/Th2向Th2漂移,Th2优势状态与肿瘤的免疫逃逸密切相关。研究表明,将T-bet基因导入肿瘤细胞,可将Th2细胞逆转为Th1细胞,这将对肿瘤的免疫治疗具有重要的意义。     

Coexistence of Th1/Th2 and Th17/Treg imbalances in patients with allergic asthma

Background  Recent recognition is that Th2 response is insufficient to fully explain the aetiology of asthma. Other CD4⁺ T cells subsets might play a role in asthma. We investigated the relative abundance and activities of Th1, Th2, Th17 and CD4⁺CD25⁺ Treg cells in patients with allergic asthma.

Methods  Twenty-two patients with mild asthma, 17 patients with moderate to severe asthma and 20 healthy donors were enrolled. All patients were allergic to house dust mites. Plasma total IgE, pulmonary function and Asthma Control Questionnaire were assessed. The proportions of peripheral blood Th1, Th2, Th17 and CD4⁺CD25⁺ Treg cells were determined by flow cytometry. The expression of cytokines in plasma and in the culture supernatant of peripheral blood mononuclear cells was determined by enzyme linked, immunosorbent assay.

Results  The frequency of blood Th2 cells and IL-4 levels in plasma and culture supernatant of peripheral blood mononuclear cells were increased in all patients with allergic asthma. The frequency of Th17 cells and the plasma and culture supernatant levels of IL-17 were increased, whereas the frequency of CD4⁺CD25⁺ Treg cells and plasma IL-10 levels were decreased in patients with moderate to severe asthma. Dermatophagoides pteronyssinus specific IgE levels were positively correlated with the percentage of blood Th2 cells and plasma IL-4 levels. Forced expiratory volume in the first second was negatively correlated with the frequency of Th17 cells and plasma IL-17 levels, and positively correlated with the frequency of Treg cells. However, mean Asthma Control Questionnaire scores were positively correlated with the frequency of Th17 cells and plasma IL-17 levels, and negatively correlated with the frequency of Treg cells.

Conclusions  Imbalances in Th1/Th2 and Th17/Treg were found in patients with allergic asthma. Furthermore, elevated Th17 cell responses, the absence of Tregs and an imbalance in Th17/Treg levels were associated with moderate to severe asthma.